Стр. 1
 

8 страниц

244.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод определения в них дрожжей и плесневых грибов.

Допускается использование хромогенных сред для предварительного выявления дрожжей и плесневых грибов в масложировой продукции

Данные о замене опубликованы в ИУС 11-2014

Действие завершено 01.07.2016

Оглавление

1 Отбор и подготовка проб

2 Аппаратура, материалы и реактивы

3 Подготовка к испытанию

4 Проведение испытания

5 Обработка результатов

Приложение (справочное) Характеристика дрожжей и плесневых грибов

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ 10444.12-88

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДРОЖЖЕЙ И ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ

Издание официальное

Страница 3

УДК 664:543.06:006.354    Группа    1109

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Метод определения дрожжей и плесневых грибов

ГОСТ

10444.12-88

Food products.

Method for determination of yeast and mould

MKC 07.100.30 ОКСТУ 9109

Дата введения 01.01.90

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод определения

0    них дрожжей и плесневых грибов.

Метод основан на высеве продукта или гомогената продукта и (или) их разведений в питательные среды, определении принадлежности выделенных микроорганизмов к плесневым грибах» и дрожжам по характерному росгу на питательных средах и по морфологии клеток.

Допускается использование хромогенных сред для предварительного выявления дрожжей и плесневых грибов в масложировой продукции.

Метод предназначен для:

установления соответствия микробиологических показателей качества пищевого продукта требованиям нормативно-технической документации;

установления промышленной стерильности консервов: выяснения причин возникновения дефектов продуктов.

(Поправка)1.

1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

1.1.    Отбор проб пищевых продуктов по ГОСТ 26668. ГОСТ 26809 и ГОСТ 92252.

1.2.    Подготовка проб пищевых продуктов к испытанию по ГОСТ 26669, ГОСТ 9225.

Консервы проверяют на герметичность по ГОСТ 8756.18.

Полные консервы, нормальные по внешнему виду, перед испытанием термостатируют при 30 — 37 “С в таре вместимостью до 1 дм’ включительно не меиее5сут, в таре вместимостью свыше

1    дм3 - не менее 7 сут.

Пищевые продукты, в которых нормируется допустимое количество дрожжей и плесневых грибов. термостатнрованию не подлежат.

Масса (объем) навески, предназначенной для приготовления гомогената продукта ми исходного разведения - не менее (10,()±0.1) г (см3).

Исходные разведения продуктов с массовой долей NaCI более 5% готовят с использованием пептонной воды; исходные разведения мясных продуктов готовят с использованием физиологического раствора. Для приготовления последующих десятикратных разведений используют пептон но-солевой раствор. Пептонную воду и пептоиио-солевой раствор готовят по ГОСТ 26669. физиологический раствор - по ГОСТ 10444.1.

Из пробы пищевого продукга, в котором нормируется количество дрожжей и (или) плесневых грибов, или из исходного разведения пищевого продукта готовят ряд разведений в соответствии с допустимым количеством дрожжей и (или) плесневых грибов, указанным в нормативно-технической документации на конкретный вид пищевого продукта.

* Действует только на территории Российской Федерации.

** На территории Российской Федерации дейсгвует ГОСТ Р 53430-2009.

297

1

2

© Издательство стандартов. 1988 © СТАНДАРТИНФОРМ. 2010

Страница 4

С. 2 ГОСТ 10444.12-88

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

2.1.    Для проведения испытаний применяют аппаратуру, материалы, реактивы по ГОСТ 10444.1. а также аппаратуру, материалы и реактивы, указанные ниже:

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 241041. с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и поверочной ценой деления не более 2 мг (для взвешивания реактивов);

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104*. с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и поверочной ценой деления не более 20 мг (для взвешивания продукта);

термостат, позволяющий поддерживать температуру (24±1) ”С;

микроскоп световой биологический или других аналогичных марок;

масло иммерсионное для микроскопии по ГОСТ 13739;

стекла предметные по ГОСТ 9284;

стекла покровные по ГОСТ 6672,

вату медицинскую гигроскопическую по ГОСТ 5556;

агар сывороточный БФ;

бромфеноловый синий, водорастворимый, индикатор;

гентаминина сульфат во флаконах по 0.08 г или в ампулах по 1 или 2 см’ водный раствор массовой долей 4%;

окситетрапиклина дегидрат в таблетках по 0,25 г (250000 ЕД);

неомицина сульфат во флаконах по 0,5 г (50000 ЕД) или в таблетках по 0,10 и 0,25 г; препараты фуппы левомицетина:

левомицетин сукцииат растворимый (для инъекций) во флаконах по 0.5 и 1,0 г; левомицетин в таблетках по 0,25 и 0,5 г; препараты группы пенициллина:

бензилпенициллииа натриевая соль или калиевая соль во флаконах по 250000. 500000 или 1000000 ЕД;

бензилпенициллииа новоканновая соль во флаконах по 300000, 600000 или 1200000 ЕД; новоцин во флаконах по 400000. 800000. 1200000 ЕД; препараты группы стрептомицина:

стрептомицина сульфат во флаконах по 0.25 г (250000 ЕД). 0,5 г (500000 ЕД), 1 г (1000000 ЕД); стрептосульмицина сульфат во флаконах по 0,25, 0,5 или I г; стрептомицина-хлоркальниевый коматекс во флаконах по 0,1, 0,2. 0,5 г; днгидрострептомицина сульфат во флаконах по 0.25, 0,5 или 1 г;

дигидрострептомицина пантотенат во флаконах по 0.25 г (250000 ЕД), 0.5 г (500000 ЕД). 1 г (1000000 ЕД).

3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

3.1.    Приготовление растворов ангнбиотиков

3.1.1.    Растворы антибиотиков готовят непосредственно перед использованием. Антибиотики в таблетках используют для приготоатения растворов при отсутствии антибиотиков для инъекций. При приготовлении растворов антибиотиков из таблеток не допускается проводить взвешивание, так как в таблетках может содержаться разное количество наполнителя. В этом случае приготовление растворов основано на использовании целых таблеток с точно известным содержанием антибиотиков.

Допускается при анализе пищевых продуктов (кроме консервов) проводить приготовление растворов антибиотиков из таблеток с соблюдением правил асептики на стерильной дистиллированной воде.

3.1.2.    Раствор массовой концентрацией гентамицина сульфата 10 г/дм3:

во флакон с 80 мг гентамицина сульфата (для инъекций) вносят 8 см' стерильной дистиллированной воды, содержимое флакона растворяют. Раствор добавляют к готовой основе среды.

При использовании раствора гентамицина сульфата в ампулах исходят из того, что ампула с 1 см’ раствора содержит 40 мг гентамицина, а с 2 см3 — 80 мг.

298

1

С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действуп ГОСТ Р 53228-2008.

Страница 5

ГОСТ 10444.12-88 С. 3

3.1.3.    Раствор массовой концентрацией левомицетина сукцината растворимого 50 и 100 г/дм1: во флакон с 0.5 или 1.0 г левомицетина (для инъекции) вносят 10 см ’ стерильной дистиллированной волы, содержимое флакона растворяют. Раствор добавляют к готовой основе среды.

При использовании левомицетина в таблетках по 0.25 и 0.5 г готовят растворы массовой концентрацией левомицетина 5 г/дм3. Для этого 2 таблетки по 0,25 г или I таблетку по 0,5 г растирают в ступке, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см’, смывая дистиллированной водой, стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670. Допускается раствор левомицетина стерилизовать вместе с основой среды.

3.1.4.    Раствор массовой концентрацией окснтетрациклина дигидрата I г/дм’: 1 таблетку по 0.25 г растирают в ступке, переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3, смывая дистиллированной водой. Раствор доводят до метки дистиллированной водой, стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670.

3.1.5.    Растворы препаратов группы пенициллина готовят из расчета содержания антибиотика 50000 или 100000 ЕД в I см’ раствора:

во флаконы с 250000, 300000, 500000 ЕД вносят соответственно 5, 6. 10 см' стерильной дистиллированной воды, содержимое флакона растворяют, получая растворы, содержащие в 1 см3 50000 ЕД антибиотика:

во флаконы с 1000000, 1200000 ЕД вносят соответственно 10, 12 см ’ стерильной дистиллированной воды, получая растворы, содержащие в I см3 100000 ЕД антибиотика.

3.1.6.    Растворы препаратов группы стрептомицина массовой концентрацией антибиотика 100 г/дм3: во флаконы с 0.10; 0.25; 0.50 и 1 г антибиотика вносят соответственно I; 2,5; 5; 10 см' стерильной дистиллированной воды, содержимое флакона растворяют.

3.1.7.    Раствор массовой концентрацией неомицииа сульфата 50 г/дм3: во флакон с 0,5 г неомици-на сульфата (для инъекций) вносят 10 см' стерильной дистиллированной воды.

При приготовлении раствора массовой концентрацией неомицииа сульфата 10 г/дм' из таблеток: 2 таблетки по 0,25 г или 5 таблеток по 0,1 г растирают в ступке, порошок переносят в мерную колбу на 50 см3, смывая дистиллированной водой, объем доводят до метки. Раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670.

3.2. Приготовление питательных сред

3.2.1.    Питательные среды с антибиотиками готовят непосредственно перед использованием.

При приготовлении сред с антибиотиками вначале готовят основы сред. К расплавленной и

охлажденной до температуры (46±1) ‘С основе среды добавляют растворы антибиотиков.

3.2.2.    Для приготовления питательных сред с антибиотиками используют следующие основы.

3.2.2.1.    Основу среды (среду Сабуро) готовят следующим образом: 40.0 глюкозы. 10.0 г пептона.

18,0 г агара добавляют к I дм' дистиллированной воды. Смесь подогревают, периодически помешивая, до расплавления составных частей, охлаждают до 45—55 *С. устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он состаалял при 25 *С 6.5±0.1. разливают в мерные колбы и стерилизуют 15 мин при температуре (121±1) ‘С. Основу среды хранят при температуре (4±2) *С не более 14 сут.

Основу среды (среду Сабуро) допускается использовать без добавления антибиотиков при анализе консервов на промышленную стерильность.

3.2.2.2.    Основ;» среды из сухого сывороточного агара БФ.

В состав среды входят, г:

сухая гиярогшзованная смесь............................37,0

кашй фосфорнокислый одноэамещенный...................0,8

натрий <|хкч|м>рнокислын олнозамсщснный    . .................0.04

бромфснолоный синий, нодорасгворимый. индикатор.............0,16

агар..............................................22,0.

60.0 г сухого сывороточного агара БФ прибааляют к 1 дм3 дистиллированной воды, нагревают до полного растворения (при наличии осадка фильтруют). Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации при 25 'С он состаалял 4,2±0,2. Определенный объем среды разливают в колбы и стерилизуют при температуре (121 ±1) *С в течение 15 мин.

Основу среды используют при анализе молока и молочных продуктов.

3.2.3. Для определения дрожжей и плесневых грибов используют среды, указанные в пп. 3.2.3.1—3.2.3.7.

3.2.3.1. Среда агаризованнаяслевомицетином: к 1 дм3 основы добавляют 2 см' раствора левоми-цетина сукцината растворимого (для инъекций) массовой концентрацией 50 г/дм:‘ или 1 см1 раствора

299

Страница 6

С. 4 ГОСТ 10444.12-88

массовой концентрацией ИХ) г/дм3. При использовании раствора левомнцетина массовой концентрации 5 г/дм3 к 980 см' основы добавляют 20 см' раствора.

3.2.3.2.    Средаагаризованная сокситетрациклином: к 900см3 основы добавляют 100см' растпо|>а окситетрациклипа дигидрата массовой концентраиией 1 г/дм3.

3.2.3.3.    Среда агаризованная с окситетрациклином и гентамицином: к 895 см3 основы добавляют 100 см3 раствора окситетрациклииа дигидрата массовой концентрацией I г/дм3 и 5 см5 раствора гента-мицина массовой концентрацией 10 г/дм’.

3.2.3.4.    Среда агаризованная с антибиотиками группы пенициллина и стрептомицина: к 1 дм3 основы добавляют I или 0,5 см5 раствора антибиотика группы пенициллина, содержащего соответственно 50000 или 100000 ЕД, затем к среде добавляют 0,4 см3 раствора антибиотика группы стрептомицина массовой концентрацией 100 г/дм3.

3.2.3.5.    Среда агаризованная с неоминином сульфатом: к I дм3 основы добавляют 7 см' раствора неомицина сульфата массовой концентрацией 50 г/дм3.

При использовании раствора неомицина сульфата массовой концентрацией 10 г/дм1 к 965 см3 основы добавляют 35 см3 раствора.

3.2.3.6.    Солодовое сусло готовят по ГОСТ 10444.1.

Применяют для выявления дрожжей и плесневых грибов в консервах.

Допускается использование готового неохмеленного пивного сусла вместо осахаренного сусла, получаемого из молотого ячменного солода.

3.2.3.7.    Солодовое агаризованное сусло готовят по ГОСТ 10444.1.

Для определения дрожжей и плесневых грибов в продуктах, сильно обсемененных микроорганизмами, сусло при приготовлении подкисляют стерильным раствором лимонной кислоты массовой концентрацией 200 г/дм3 или стерильным раствором молочной кислоты с объемной долей молочной кислоты 40 % до pH 3,6±0,1, при этом при приготовлении среды увеличивают количество агара до 30 г на 1 дм3.

4. ПРОВЕЛЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

4.1.    Из подготоаленной пробы продукта и (или) его разведения отбирают навеску объемом (1±0,1) см3.

4.2.    Продукт и (или) его разведения высевают по ГОСТ 26670 параллельно в две чашки Петри. Посевы заливают расплавленной и охлажденной до температуры (45±1) "С средой (см. пп. 3.2.2.1; 3.2.3.1 —3.2.3.5; 3.2.3.7). Параллельно с этим заливают чашку Л Петри 15—20 см3 среды для проверки ее стерильности.

Допускается при установлении промышленной стерильности консервов и при выявлении возбудителей порчи в продуктах по 2,0 см’ исследуемого материала высевать параллельно в две пробирки с 5 см3 жидкого солодового сусла (см. п. 3.2.3.6).

4.3.    Посевы термостатируют при температуре (24±1) *С в течение 5 сут. посевы на чашках Петри терм ос тати руюг дном вверх.

Через 3 сут термостатнрования проводят предварительный учет типичных колоний или пояале-ния характерных признаков роста на жидких питательных средах.

Если в посевах на агаризованных средах присутствуют мукоровые, очень быстро растущие грибы, то снятие предварительных результатов необходимо провод»ггъ очень осторожно, не допуская того, чтобы споры этих грибов осыпались и дали рост вторичных колоний. Через 5 сут проводят окончательный учет результатов термостатнрования посевов. Колонии дрожжей и плесневых грибов разделяют визуально.

Рост дрожжей на агаризованных средах сопровождается образованием крупных, выпуклых, блестящих. серовато-белых колоний с гладкой поверхностью и ровным краем. Развитие дрожжей в жидкой среде сопровождается появлением муги, запаха брожения и газа.

Развитие плесневых грибов на питательных средах сопровождается появлением мицелия различной окраски.

4.4.    Для количественного подсчета отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 колоний дрожжей и (или) от 5 до 50 колоний плесневых грибов.

4.5.    При необходимости для разделения колоний дрожжей и плесневых грибов проводят микроскопические исследования. Для этого из отдельных колоний или из посевов на жидкую среду готовят

300

Страница 7

ГОСТ 10444.12-88 С. 5

препараты методом раздавленной капли. На предметное стекло наносят каплю стерильной водопроводной воды. Затем в эту каплю прокаленной мглой вносится часть колонии или петлей наносят каплю культуральной жидкости. Полученная суспензия покрывается покровным стеклом.

Результаты микроскопирования оценивают пользуясь характеристикой дрожжей и плесневых грибов, указанной в приложении.

5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

5.1.    Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.

5.2.    Если при испытании продукта на питательных средах обнаружен рост дрожжей и плесневых грибов и их присутствие подтверждено микроскопированием, то дают заключение о присутствии этих микроорганизмов в продукте.

5.3.    Результаты обрабатывают и пересчитывают отдельно для дрожжей и плесневых грибов.

5.4.    Количество дрожжей и плесневых грибов в I г или в I см3 продукта (X) вычисляют по формуле

X --££-7гг • Ю"

п | + rtj ДМ ’

где 1C - сумма всех подсчитанных колоний на чашках Петри в двух последовательных десятикратных разведениях при условии, что на каждой чашке число колоний отвечает требованиям п. 4.4;

л, - количество чашек Петри, подсчитанное для меньшего разведения, т. е. для более концентрированного разведения продукта; п, — количество чашек Петри, подсчитанное для большего разведения; п - степень разведения продукта (для меньшего разведения).

5.5.    Результаты испытания записывают в соответствии с требованиями ГОСТ 26670.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Справочное

ХАРАКТЕРИСТИКА ДРОЖЖЕЙ И ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ

Группа ммкроорганшмои

Характеристика

Дрожжи

Плесневые грибы

Одноклеточные микроорганизмы, клетки круглой, овальной или продолговатой формы, длиной от 2.5 до 30 мкм и шириной ог 2.5 до 10 мкм. часто почкующиеся

Состоят из нитей-гифов, без перегородок или септирован-ных на клетки. Гифы образуют боковые выросты и разветвления, от вегетативных гифов поднимаются гифы, несущие плодовые тела

301

Страница 8

С. 6 ГОСТ 10444.12-88

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Государственным агропромышленным комитетом СССР

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 21.09.88 № 3208

3.    В стандарт введен международный стандарт ИСО 7954—87

4.    ВЗАМЕН ГОСТ 10444.12-75, ГОСТ 10444.13-75. ГОСТ 26888-86

5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обожпчснис НТД. ил который дана ссылка

Помер пункта

ГОСТ 5556-81

2.1

ГОСТ 6672-75

2.1

ГОСТ 8756.18-70

1.2

ГОСТ 9225-84

1.1, 1.2

ГОСТ 9284-75

2.1

ГОСТ 10444.1-84

1.2. 2.1. 3.2.3.6. 3.2.3.7

ГОСТ 13739-78

2.1

ГОСТ 24104-88

2.1

ГОСТ 26668-85

1.1

ГОСТ 26669-85

1.2

ГОСТ 26670-91

3.1.3. 3.1.4. 3.1.7. 4.2. 5.5

ГОСТ 26809-86

1.1

6.    Ограничение срока действия снято но протоколу № 4—93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 4—94)

7.    ИЗДАНИЕ. (Апрель 2010 г.) с Поправкой (ИУС 8-2009).

302

Заменяет ГОСТ 10444.12-75 ГОСТ 10444.13-75 ГОСТ 26888-86