Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

16 страниц

304.00 ₽

Купить ГОСТ 9225-84 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на молоко и молочные продукты (кроме детских) и устанавливает методы микробиологического анализа

  Скачать PDF

Заменяет ГОСТ 9225-68 кроме части примечания к п. 1.5

Ограничение срока действия снято: Постановление Госстандарта № 2330 от 29.12.91

Переиздание (август 2009 г.) с изменениями № 1, 2, 3, 4

Действие завершено 01.01.2011

Оглавление

1 Методы отбора проб

2 Аппаратура, материалы и реактивы

3 Подготовка к анализу

4 Методы анализа

Приложение (обязательное) Цветовая шкала для определения класса молока по редуктазной пробе с резазурином

Показать даты введения Admin

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ

МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2009

УДК 637.12.04/.07:576.8:006.354    Группа    HI9

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ

ГОСТ

9225-84

Методы микробиологического анализа

Milk and milk products.

Methods of microbiological analysis

МКС 07.100.30 67.100.10 ОКСТУ 9209

Дата введения 0I.0I.X6

Настоящий стандарт распространяется на молоко и молочные продукты (кроме детских) и устанавливает методы микробиологического анализа.

(Измененная редакция, Изм. № 2).

I. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

1.1.    Правила приемки и общие правила отбора проб — но ГОСТ 26809. ГОСТ 3622 и ГОСТ 13928.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

1.2.    Пробы пастеризованного молока и молочных продуктов для микробиологических анализов отбирают до отбора проб для физико-химических и органолептических анализов.

1.3.    Пробы для микробиологических анализов отбирают в стерильную посуду с помощью стерильных приспособлений.

1.4.    Отбор проб и перемешивание продукта перед отбором производят отборником, черпаком, ложкой, металлической трубкой, щупом, шпателем или другим соответствующим приспособлением, которые каждый раз перед использованием должны быть простерилизоааны фламбированием или в автоклаве.

При отборе проб сырого молока для определении редуктазы допускается обработка металличес-кой трубки или пробника пропариванием, кипячением или хлорированием с последующим ополаскиванием питьевой водой.

(Измененная редакция. Изм. № 2).

1.5.    Отбор проб продуктов для микробиологического анали за

1.5.1 Молоко заготовляемое

Объединенную пробу объемом 500 см1 составляют из точечных проб, отобранных из каждой фляги или цистерны посте органолептической оценки молока и рассортировки его по кислотности предельным методом по ГОСТ 3624. Дли проведения редуктазной пробы и пробы на наличие ингибирующих веществ из объединенной пробы молока выделяют пробу объемом 50—60 см'.

(Измененная редакция, Изм. № 2).

1.5.2.    Молоко и сливки пастеризованные, сметана в транспортной таре

От продукции, попавшей в выборку nocie тщательного перемешивания стерильной мутовкой или черпаком, отбирают 50—60 см' продукта в стерильную посуду и закрывают стерильной пробкой.

1.5.3.    Мороженое в транспортной таре

Издание официальное ★

Oi продукции, попавшей в выборку, стерильной ложкой снимают верхний слой толщиной не менее 2.5 см. после чего стерильным щупом или ложкой отбирают пробу массой 40—50 г в стерильную посуду и закрывают стерильной пробкой.

Перепеча гна воспрещена

О Издательство стандартов. 1984 © СТАНДАРТИНФОРМ. 2009

ГОСТ 9225-84 С. 2

1.5.4.    Творог и творожные изделия

Ог продукции, попавшей в выборку в потребительской таре, отбирают для анализа 15—20 г (включая и поверхностный стой). Отобранную пробу помещают в стерильную посуду, которую закрывают стертыьной пробкой.

В продукции, попавшей в выборку в транспортной таре, перед отбором пробы верхний слой продукта зачищают. Пробу отбирают стерильным щупом на расстоянии 3—5 см от края, направляя щуп наклонно к противоположной стороне и опуская на )/4 его длины. Из столбика продукта на щупе отбирают стерильным шпателем 15—20 г творога или творожных изделий и помещают в стерильную посуду, которую закрывают стерильной пробкой.

1.5.5.    Масло

От продукции, попавшей в выборку в потребительской таре, отбирают для анализа стерильным шпателем 15—20 г (включая поверхностный сюй). Отобранную пробу помещают в стерильную посуду, которую закрывают стерты ьной пробкой.

Ог продукции, попавшей в выборку в транспортной таре, пробу отбирают стерильным щупом на расстоянии 3—5 см от края, направляя щуп к противоположной стороне и опу ская на 3/4 его длины.

Из столбика масла на щупе отбирают стерильным шпателем 15—20 г масла и помещают в стерильную посуду. Оставшийся посте отбора пробы столбик масла на щупе возвращают на прежнее место, а поверхность маета аккуратно заделывают.

1.5.6.    Сыр

В продукции, попавшей в выборку, в намеченном месте отбора пробы поверхность сыра прижигают нагретым ножом или шпателем. Стерильный щуп вводят наклонно в середину головки на 3/4 сто длины. Из столбика сыра на щупе отбирают стерильным шпателем 15—20 г сыра и помещают в стерильную посуду с притертой или ватной пробкой или стерильную чашку Петри с крышкой. Верхнюю часть столбика сыра на щупе возвращают на прежнее место, поверхность сыра заливают подогретым до (1 !0±10) *С парафином или оплавляют нагретой металлической пластиной.

1.5.7.    Сыр плавленый

Ог продукции, попавшей в выборку, из разных мест сыра (включая поверхностный стой) профламбнрованным ланцетом отбирают на анализ 15—20 г продукта и помешают в стерильную посуду.

1.5.8.    Сгущенные молочные консервы в транспортной таре

От продукции, попавшей в выборку, стерильной трубкой или черпаком отбирают на анализ

40—50 г продукта в стерильную посуду.

1.5.9.    Сухие молочные продукты в транспортной таре

От продукции, попавшей в выборку, отбирают на анализ 40— 50 г продукта в стерильную посуду с плотно закрывающейся крышкой или пробкой.

1.5.10.    Молоко сгущенное стерилизованное

В продукции, попавшей в выборку, анализы проводят отдельно в каждой банке.

1.5.11.    От молока и сливок пастеризованных, сметаны, мороженого, сгущенных маточных консервов. сухих молочных продуктов, попавших в выборку в потребительской таре, используют в качестве пробы для анализа по одной единице потребительской тары с продукцией.

(Введен дополнительно, Изм. № 1).

1.6.    Посуду с пробой или пробу в потребительской таре снабжают этикеткой, на которой указывают:

номер пробы;

наименование и сорт продукта (при наличии);

номер и объем партии;

день и час отбора пробы;

должность и подпись лица, отобравшего пробу;

обозначение нормативного документа, по которому вырабатывался продукт.

1.7.    Пробу, отправляемую в лабораторию вне данного предприятия, пломбируют или опечатывают и снабжают этикеткой, на которой указывают:

номер пробы;

наименование предприятия-изготовителя;

наименование и сорт продукта (при наличии);

номер и объем партии;

С. 3 ГОСТ 9225-84

дату и час выработки продукта с момента окончания технологического процесса; дату и час отбора проб;

должность и подпись лица, отобравшего пробу; объем необходимых анализов;

обозначение нормативного документа, по которому вырабатывался продукт.

1.8.    Микробиологические анализы продукта проводят не более чем через 4 ч с момента отбора

проб.

1.9.    Пробы должны храниться и транспортироваться до начала исследования в условиях, обеспечивающих температуру продуктов нс выше 6 ’С. не допуская подмораживания, а для мороженого — не выше минус 2 ’С.

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

Весы лабораторные 2-го класса точности поверочная цена деления не более 0.001 г для взвешивания реактивов по ГОСТ 24104.

Весы лабораторные 4-го класса точности поверочная цена доения не более 0.05 г для приготовления навесок исследуемых образцов но ГОСТ 241041.

Термометры стеклянные жидкостные (нертугные). диапазон измерения 0—100 °С. цена деления шкалы I °С по ГОСТ 28498.

Термостат, позволяющий поддерживать температуру 15—55 °С с отклонением от заданной температуры ±1 1С.

Стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 195692 ты и автоклав горизонтальный.

Шкаф сушильный, позволяющий поддерживать температуру (160±5) 1С.

Анализатор потенциометрический для контроля pH. диапазон измерения pH 3—8. пофешносгъ измерения pH ±0.05 по ГОСТ 19881.

Редуктазник. позволяющий поддерживать температуру 25—55 'С.

Баня водяная.

Прибор для счета колоний бактерий.

Микроскоп световой биологический по нормативному документу или других аналогичных марок. Плитка электрическая по ГОСТ 14919.

Спиртовка по ГОСТ 23932.

11етля бактериолоптческая.

Лупа складная карманная по ГОСТ 25706.

Пробки резиновые конусные но нормативному документу.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

Пергамент по ГОСТ 1341.

Вата медицинская гигроскопическая но ГОСТ 5556.

Кастрюли разные по ГОСТ 17151.

Пробойник.

Чашки Петри по ГОСТ 25336.

Стекла предметные для микропрепаратов по ГОСТ 9284.

Бюретки исполнения 1. 2. 3-го классов точности, вместимостью 5. 10.50 см3, цена деления 0.1 см3.

Пипетка исполнения 1.4. 5. 6. 7; 1 и 2-го классов точности, вместимостью 1. 2. 5 и 10 см3. Стаканчики для взвешивания (бюксы) типов СВ и СИ по ГОСТ 25336.

Колбы исполнения 2. вместимостью 50. 100. 200. 500, 1000 см3 2-го класса точности но ГОСТ 1770.

Цилиндры исполнения 1 и 2, вместимостью 50, 100 см3 по ГОСТ 1770.

Поплавки стеклянные.

11робирки типов ПI. И2. диаметром 16 мм. высотой 150 мм и диаметром 21 мм. высотой 200 мм по ГОСТ 25336.

Сгупки лабораторные фарфоровые по ГОСТ 9147.

Ланцет.

ГОСТ 9225-84 С. 4

Натрий лимоннокислый 5.5-водный но ГОСТ 22280.

Натрий хлористый но ГОСТ 4233.

Натрия тидроокись но ГОСТ 4328.

Калия пироокись по ГОСТ 24363. раствор с массовой концентрацией 10 г/дм3.

Натрий двууглекислый по ГОСТ 2156, растворе массовой концентрацией 100 г/дм1.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 59623 и спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300. 96%-ный раствор.

Масло иммерсионное для микроскопии но ГОСТ 13739.

Калий фосфорнокислый однозамещенный но ГОСТ 4198.

Кислота соляная но ГОСТ 3118.

Магний сернокислый по ГОСТ 4523.

Кристаллический фиолетовый по нормативному документу, растворе массовой концентрацией 10 г/дм3.

Метиленовый голубой, индикатор по нормативному документу или аналогичный производства Индии.

Резазурино-натриевая соль по нормативному документу или резазурнн в таблетках производства

ГДР.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Вода питьевая по ГОСТ 28744.

Агар микробиологический по ГОСТ 17206.

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805.

Желчь бычья и других сельскохозяйственных животных (нативная) но нормативному документу.

Среда сухая Кесслер по нормативному документу.

Среда агаровая модифицированная для определения общего количества бактерий в молоке и молочных продуктах по нормативному документу.

Лактоза по нормативному документу.

Порошок сычужный по нормативному документу.

Бумажки индикаторные по нормативному документу или зарубежного производства.

Индикатор универсальный.

(Измененная редакция, Изм. № I, 2, 3, 4).

3. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

3.1.    Подготовка посуды и материалов

3.1.1.    Всю новую посуду, предназначенную для бактериологических работ, кипятят в подкисленной воде (раствор соля ной кислоты с объемной долей 1—2%) в течение 15 мин и затем ополаскивают дисль l I и ро ва и ной водой.

Вымытую посуду стерилизуют в сушильном шкафу при (160±5) 3С в течение 2 ч или в автоклаве при (121 ±2) 3С в течение (30±1) мин с последующим подсушиванием.

Чашки 11етри. пинетки стерилизуют завернутыми в бумагу или в металлических пеналах. В конец пипетки предварительно вкладывают кусочек ваты. Резиновые пробки стерилизуют в автоклаве завернутыми в бумагу. При отсутствии аппаратуры для стерилизации (дли определения редуктазы, бродильной и сычужно-бродильной проб) посуду, пипетки и пробы непосредственно перед испытанием кипятят в дистиллированной воде или конденсате не менее 30 мин. Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками.

3.2. Приготовление питательных сред и реактивов

3.2.1.    Приготовление раствора хлористого натрия

Состав:

хлористый натрий — 8,5 г;

питьевая вода —1000 см3.

В 1000 см3 питьевой воды растворяют 8.5 г хлористого натрия, разливают раствор в чистые пробирки диаметром 21 мм но 10 см3, а в колбы — по 93 см3 и стерилизуют при (121 ±2) 3С в течение (20±1) мин. Посте стерилизации в пробирках должно остаться 9 см3 раствора хлористого

С. 5 ГОСТ 9225-84

натрия, а в колбах 90 см' (количество, которое необходимо для приготовления разведений из посевного материала).

3.2.2.    Приготовление концентрированного раствора ф о с ф а т-ного буфера

Состав:

однозамещенный фосфорнокислый калий — 34 г;

дистыированная вода    —    1000    см'.

В 500 см’ дистиллированной воды растворяют 34 г однозамешенного фосфорнокислого калия. Устанавливают pH 7.2 раствором гидроокиси натрия и добавляют дистиллированной воды в мерную колбу до 1000 см-'.

3.2.3.    Приготовление разбавленного раствора фосфатного буфера

1.25 см' концентрированного раствора фосфатного буфера вносят в мерную колбу вместимостью 1000 см', доводят объем до метки дистиллированной водой, разливают в пробирки по 10 см' и колбы по 93 см' и стерилизуют при (121 ±2) *С в течение (15± 1) мин и используют для приготовления разведений.

3.2.4.    Приготовление раствора лимоннокислого натрия для приготовления разведений сыра

Состав:

лимоннокислый натрий — 20 г;

диспылированная вода — 1000 см’.

В 1000 см' дистиллированной воды растворяют 20 г лимоннокислого натрия, рахтивают в пробирки по 10 см' и колбы по 93 см’ и стерилизуют при (121 ±2) ‘С в течение (15±1) мин.

3.2.5.    Приготовление раствора двууглекислого натрия для нейтрализации проб кисломолочных продуктов и закваски

В 100 см' дистиллированной воды растворяют 10 г двууглекислого натрия, рахтивают по 10—20 см' в пробирки и стерилизуют при (121 ±2) 'С в течение 15 мин.

3.2.6.    Приготовление питательной среды для определения количества м е з о ф ильных аэробных и факультатнвн о-a н а э р о б-н ы х микроорганизмов

Состав:

гидролизованное молоко — 25 г;

агар    — 15 г;

питьевая вода    — до 1000 см'.

40 г сухой питательной среды помешают в колбу и доливают питьевой водой до 1000 см'. Смесь перемешивают, нагревают до полного растворения агара (при наличии осадка профильтровывают), устанавливают pH 6.8—7.0. Рахтивают в пробирки или колбы и стерилизуют при (121 ±2) ‘С в течение (15± 1) мин.

(Измененная редакция. Изм. № 3).

Состав:

пептон    — 10 г;

стерильная желчь    — 50 см-';

лактоза    — 2.5 г;

раствор кристаллического фиолетового с массовой концентрацией 10 г/дм’    — 2 см';

диспылированная вода    — до 1000 см-'.


3.2.7.    Приготовление среды К е с с л е р (мод и ф и ц и р о в а н н о й)

16 г сухой среды Кесслер помешают в колбу и доливают питьевой водой до 1000 см'. Смесь размешивают и кипятят при помешивании (25±5) мин. Объем доводят питьевой водой до 1000 см' и фильтруют через вату. Разливают в пробирки с поплавками по 5 см-' или колбочки с поплавками по 40—50 см' и стерилизуют при (121 ±2) *С в течение (10±1) мин.

Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.

Допускается приготовление среды Кесслер из отдельных ингредиентов.

Для этого к 1000 см' питьевой воды прибавляют 10 г пептона и 50 см’ стерильной желчи (желчь бычья или других сельскохозяйственных животных), кипятят смесь при помешивании (25±5) мин и

ГОСТ 9225-84 С. 6

фильтруют ее через нату. В полученном фильтрате растворяют 2.5 г лактозы и доводят объем питьевой водой до 1000 см3. устанавливают реакцию среды (pH 7.4—7.6). после чего добавляют 2 см ' раствора кристаллического фиолетового с массовой концентрацией 10 г/дм3, разливают в пробирки с поплавками по 5 см3 или колбочки с поплавками по 40—50 см3 и стерилизуют при (121±2) *С в течение (I0± I) мин. Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.

3.2.8—3.2.12. (Исключены, Изм. № 3).

3.2.13.    Приготовление раствора сычужного фермента

0.5 г сычужного порошка растворяют в 100 см3 воды, нагретой до (30±2) ’С.

3.2.14.    П р и г о т о в л е н и е р с а к т и в о в из метиленового голубого

3.2.14.1.    Приготолхение спиртового раствора метшепового голубого для окраски препаратов

10 г метиленового голубого смешивают со 100 см3 %%-ного раствора этилового спирта. Расгвор ставят в термостат при температуре (37±1) *С на 24 ч. а затем фильтруют в термостате при той же температуре.

Срок хранения распюра метиленового голубого в термостате при температуре (37± 1) *С не более 3 мес.

(Измененная редакция. Изм. № 2).

3.2.14.2.    (Исключен. Изм. № 2).

3.2.14.3.    Приготсниение краски для препаратов

К 30 см3 спиртового распюра метиленового голубого прибавляют 100 см3 диспилнрованной воды и 1 см3 распюра гидроокиси калия с массовой концентрацией 10 г/дм3.

(Измененная редакция. Изм. № 2).

3.2.14.3а. Для проведения рсдуктазной пробы с мел неновым голубым готовят водный растворе массовой концентрацией метиленового голубого 0.005 г/см3. Для этого 0.5 г метиленового голубого переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят до метки прокипяченной и охлажденной до (25±2) *С дистиллированной водой. Смесь тщательно перемешивают до полного растворения. Срок хранения приготовленного раствора нс более 12 мес в банках, защищенных от света.

Для приготовления раствора метиленового голубого с массовой концентрацией метиленового голубого 0.00015 г/см3 берут 6 см3 раствора с массовой концентрацией 0.005 г/см3 и смешивают со 194 см3 дистиллированной воды. Срок хранения приготовленного распюра не более 30 сут в холодильнике.

(Измененная редакция, Изм. № 3).

3.2.15.    Приготовление раствора резазурина

Основной расгвор резазурина-натриевой соли для редуктазной пробы готовят следующим образом: 100 мг резазурина-натриевой соли переносят в мерную колбу вместимостью 200 см3 и доводят до метки прокипяченной и охлажденной до (25±2) *С дистиллированной водой. Смесь тщательно перемешивают.

Срок хранения основного раствора резазурина-натриевой соли не более 30 сут при температуре 8-10 *С.

Рабочий раствор резазурина-натриевой соли готовят разбавлением основного раствора прокипяченной и охлажденной до(25±2)‘С дистиллированной водой в соотношении 1:2.5 (например, к 10 см3 основного раствора прибавляют 25 см3 воды). Массовая доля резазурина в рабочем распюре 0.014%.

При использовании резазурина в таблетках (производства ГДР) для приготовления рабочего раствора I таблетку растворяют в 50 см3 прокипяченной и охлажденной до (25±2) *С дистиллированной воды. Массовая доля резазурина в этом распюре 0.01 %.

Срок хранения рабочего распюра резазурина не более 3 сут при температуре 0—5 *С.

Основной и рабочий раствор хранят в банках, зашишенных от света.

3.2.16.    Определение pH среды

Определение pH питательной среды проводят с помощью pH-метра по прилагаемым к ним инструкциям.

Ориентировочное определение pH питательных сред может проводиться с помощью индикаторных бумажек или готового универсального индикатора.

3.3.    Подготовка проб к анализу

3.3.1. Молоко, сливки, сметана

Огобранные пробы перед исследованием тщательно перемешивают.

С. 7 ГОСТ 9225-84

3.3.2.    Кисломолочные напитки и продукты, закваски

Отобранные пробы перед исследованием перемешивают и нейтрализуют. Для этого отбирают

стерильной пинеткой 10 см ' исследуемого продукта или закваски в стерильную пробирку или колбочку и добавляют I см' стерильного раствора двууглекислого натрия с массовой концентрацией 100 г/дм3, содержимое перемешивают.

3.3.3.    Мороженое

Отобранные пробы фасованного мороженою развертывают и помешают в стерильную посуду с притертой тип ватной пробкой.

Перед исследованием посуду с пробой нагревают в поляной бане при температуре 40—45 *С до расплавления пробы.

3.3.4.    Сыр, творог, творожные изделия

10 г сыра, творога или творожных изделий взвешивают на стертыьном часовом стекле, чашке Петри, в бюксс. переносят в стерильную тын профламбированную ступку, прикрытую крышкой от чашки Петри, и тщательно растирают.

3.3.5.    Масло

Перед исследованием пробу расплавляют на водяной бане при температуре 40—45 ‘С и перемешивают до получения однородной эмульсии.

3.3.6.    Стушенные молочные консервы

Банки с продуктом тщательно промывают щеткой в чистой теплой тюле и вытирают.

Перед вскрытием крышку банки, пробку бочки и часть днища вокруг пробки фламбируют.

Открывают банки стерильным консервным ножом, а пробку бочки пробойником. После вскрытия отверстия банки и бочки немедленно закрываюг стертыьным пергаментом, профламбированной жестяной крышкой или крышкой чашки Петри. Содержимое банки тщательно перемешивают стерильной ложкой. Затем взвешивают стерильную сухую колбу и в нес помещают 10 г продукта.

3.3.7.    Сухие молочные продукты

Отобранную пробу тщательно перемешивают стерильной ложкой, взвешивают 10 г продукта на кусочке стерильного пергамента, на чашке Петри, в бюксе. затем взвешенную пробу помещают в стерильную колбу или другую посуду.

3.4. При готов. iciiMc разведении продуктов для посева

3.4.1.    Перед посевом готовит десятикратные разведения продукта в стерильных растворах хлористого натрия, лимоннокислого натрия (для сыров) или фосфатного буфера. Для приготовления разведений готовят все необходимые стерильные материалы и посуду в соответствии со спецификой анализа исследуемого продукта: пробирки с 9 см' или колбы с 90 см’ растворов хлористого натрия или фосфатного буфера.

3.4.2.    Из проб молока, сливок, сметаны, кисло-молочных напитков и продуктов, мороженого, маета отбирают стерильной пипеткой 10 см3 и вносят в 90 см3 стерильных растворов хлористого натрия или фосфатного буфера. Получают разведение 1:10.

Масло и мороженое вносят в растворы хлористого натрия или фосфатного буфера, подогретые до 40-45 *С.

3.4.3.    К приготовленным навескам по 10 г творога, творожных изделий; сгущенных молочных консервов и сухих молочных продуктов добавляют 90 см3 стерильных растворов хлористого натрия или фосфатного буфера, подогретых до 40—45 'С. и взбалтывают в течение 3—5 мин до возможно более полного эмульгирования. Получают разведение 1:10.

К навеске сыра 10 г постепенно добавляют 90 см3 стерильных растворов хлористого натрия или лимоннокислого натрия или фосфатного буфера, подогретых до 40—45 'С. и тщательно перемешивают до полного эмульгирования. Получают разведение 1:10.

Из первого разведения 1:10 готовят последующие 1:100 и т. д.

Для приготовления каждого разведения берут новую стерильную пипетку. При посеве на чашки Петри посевной материал вносят от большего разведения к меньшему. В этом случае пользуются одной пипеткой.

4. МЕТОДЫ АНАЛИЗА

4.1.    Метод определения редуктазы с метиленовым голубым

4.1.1.    Сущность метода

Метод основан на восстаноатении метиленового голубого окислительно-восстановительными ферментами. выделяемыми в.молоко микроорганизмами. По продолжительности обесцвечивания метиленового голубого оценивают бактериальную обсемененность сырого молока.

ГОСТ 9225-84 С. 8

4.1.2.    Проведение анализа

В пробирки наливают по I см3 рабочего раствора метиленового голубого и по 20 см3 исследуемого молока, закрывают резиновыми пробками и смешивают путем медленного трехкратного переворачивания пробирок.

Пробирки помешают в редукгазник с температурой воды (37±1) ’С.

При отсутствии редуктазника можно пользоваться водяной баней, помещаемой в термостат с температурой (37±1) *С.

Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше. Температуру воды поддерживают в течение всего времени определения (37±1) *С. Для предотвращения влияния на реакцию света редукгазник должен быть плотно закрыт крышкой. Момент погружения пробирок в редукгазник считают началом анализа. Наблюдение за изменением окраски ведут через 40 мин. 2.5 и 3.5 ч с начала проведения анализа. Окончанием анализа считают момент обесцвечивания окраски молока. При этом остающийся небольшой кольцеобразный окрашенный слой вверху (шириной не более I см) или небольшая окрашенная часть внизу пробирки (шириной не более 1 см) в расчет не принимаются. Появление окрашивания молока в этих пробирках при встряхивании не учитывают.

4.1.3.    Обработка результатов

В зависимости от продолжительности обесцвечивания молоко относят к одному из четырех классов. указанных в табл. 1.

Таблица 1

Класс молока

П рОЛОЛЖ ИТСЛЬКОСТЬ обесцвечивании. ч

Ориентировочное количество бактерий в 1 см* молока. КОЕ

Высший

Болес 3.5

До 300 тыс.

1

3.5

От 300 тыс. до 500 тыс.

II

2.5

От 500 тыс. до 4 млн.

III

40 мин

От 4 млн. до 20 млн.

4.1.2,    4.1.3. (Измененная редакция. Изч. № 2).

4.2.    Метод определения редуктазы с резатурином

4.2.1.    Сущность метода

Метод основан на восстановлении резазурнна окислительно-восстановительными ферментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности изменения окраски резазурина оценивают бактернатьную обсемененность сырого молока.

4.2.2.    Проведение анализа

Пробу с резазурином следует проводить нс ранее чем через 2 ч после доения.

В пробирки нативают по 1 см3 рабочего раствора резазурнна и по 10 см3 исследуемого молока, закрывают резиновыми пробками и смешивают путем медлеиного трехкратного перевертывания пробирок. Пробирки помешают в редуктазнике температурой воды (37± 1) ‘С.

При отсутствии редуктазника можно использовать водяную баню, помешенную в термостат с температурой (37±1) *С.

Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше, ее поддерживают в течение всего времени определения (37±1) *С.

Пробирки с молоком и резазурином на протяжении анализа должны быть защищены от света прямых солнечных лучей (редукгазник должен быть плотно закрыт крышкой).

Время погружения пробирок в редуктазник считают началом анализа.

Показания снимают через 1 и 1.5 ч.

Появление окрашивания молока в этих пробирках при встряхивании нс учитывают.

По истечении 1 ч пробирки вынимают из редуктазника. Пробирки с молоком, имеющие серосиреневую окраску до сиреневой со слабым серым оттенком, остаатяют в редуктазнике еше на 30 мин.

4.2.3.    Обработка результатов

В зависимости от продолжительности обесцвечивания или изменения цвета молоко относят к одному из четырех классов, указанных в табл. 2 и приложении.

С. 9 ГОСТ 9225-84

Таблица 2

Класс

молока

П родолж итсл ьностъ обесцвечивания или изменения циста, ч

Окраска молока

Ориентировочное количество бактерий в 1 см* молока. КОЕ

Высший

1.5

Ссро-сирснснаи до сиреневой со слабым серым оттенком

До 300 тыс.

1

1

Серо-сиреневая до сиреневой со слабым серым оттенком

От 300 тыс. до 500 тыс.

II

1

Сиреневая с розовым оттенком или ярко-розовая

От 500 тыс. до 4 млн.

III

1

Бледно-розовая дли белая

От 4 млн. до 20 млн.

Молоко, имеющее через 1.5 ч окраску. соопзетстауюшую 1-му классу (согласно приложению), относит к высшему классу.

4.2.2. 4.2.3. (Измененная редакция, Изм. № 2).

4.3. Проба на брожение

4.3.1. Сущность метода

Метод основан на способности некоторых микроорганизмов, присутствующих в молоке, свертывать ею. В зависимости от времени свертывании и характера образовавшегося аустка оценивают состав микрофлоры молока и пригодности его дли производства сыра.

Проба применяется при определении пригодности молока для производства сыра.

4.3.2.    Проведение анализа

В чисто вымытые широкие пробирки, хорошо просушенные и ополоснутые два-три раза тем же молоком, из которого отбирают пробу, наливают окаю 20 см3 молока. Пробирки закрывают ватными пробками и ставят в термостат при температуре (38± 1) *С на 24 ч.

4.3.3.    Обработка результатов

Через 12 ч после помещения пробирок в термостат или водяную баню производят первичный осмотр проб.

Если молоко не свернулось или лишь начинает свертываться, оно считается хорошим. Если свернулось и сгусток вспученный — плохое.

Вторично пробы просматривают спустя еше 12 ч и на основании этого просмотра относят молоко к одному из четырех классов, указанных в табл. 3.

Таблица 3

Класс

Оценка качества молока

Характеристика сгустка

1

Хорошее

Начало свертывания без выделения сыворотки и пузырьков газа; незначительные полоски на сгустке

II

Удовлетворительное

CiycroK с полосками и пустотами, заполненными сывороткой: сгусток стягивается со слабым выделением сыворотки, структура сгустка мелкозернистая

III

Плохое

Сгусток с обильным выделением зеленоватой или беловатой сыворотки: сгусток крупнозернистый: наблюдают пузырьки газа в сгустке иди сливочном слое

IV

Очень плохое

Сгусток разорван и пронизан пузырьками газа; вспучен, как губка

4.4. Сычужно-бродильная проба

4.4.1. Сущность метода

Метод основан на способности некоторых микроорганизмов и сычужного фермента свертывать молоко. По характеру образовавшегося сгустка оценивают качество молока на его пригодность для производства сыра.

1

С 1 июля 2002 г. действует ГОСТ 24104-2001.

2

На территории Российской Федерации действует Р 51935—2002 (ЕН 285—%).

3

Па территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.

4

На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51232-98.