Г осу дарственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской Федерации_
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств циантранилипрола в цитрусовых (апельсины, грейпфруты), в плодовых семечковых (яблоки, груши), в плодовых косточковых (нектарины, персики, абрикосы, вишня, черешня, слива), в плодовых овощных (арбуз, дыня, перец, кабачки, баклажаны), в стеблевых овощных (лук-порей, сельдерей), в листовых овощных культурах (салат листовой, шпинат, цикорий салатный, горчица салатная), в клубнеплодах (картофель), в орехах (грецкий орех, миндаль, арахис, пекан), в зерновых культурах и продуктах переработки зерна (зерно риса, кукуруза зерновая лопающаяся и сахарная), в винограде и кофе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием
Методические указания МУК 4.1.3418—17
Издание официальное
Москва • 2017
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей н благополучия человека
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств циантранилипрола в цитрусовых (апельсины, грейпфруты), в плодовых семечковых (яблоки, груши), в плодовых косточковых (нектарины, персики, абрикосы, вишня, черешня, слива), в плодовых овощных (арбуз, дыня, перец, кабачки, баклажаны), в стеблевых овощных (лук-порей, сельдерей), в листовых овощных культурах (салат листовой, шпинат, цикорий салатный, горчица салатная), в клубнеплодах (картофель), в орехах (грецкий орех, миндаль, арахис, пекан), в зерновых культурах и продуктах переработки зерна (зерно риса, кукуруза зерновая лопающаяся и сахарная), в винограде и кофе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием
Методические указания МУК 4Л.3418—17
Ванна ультразвуковая с потребляемой мощностью 140 Вт, рабочей частотой 50 Гц, рабочим объемом 4,5 дм3
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная
Впалы объемом 2 см3, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, прокалываемой микрошприцем для автоматического дозатора проб Воронки делительные на 250 см3 Воронки лабораторные стеклянные Испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, с диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3 ООО см', с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об./мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 дм3 и с диапазоном температу р от 20 до Ю0°С
Колбы конические плоскодонные на 100,250 и 1 000 см3
Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 250 и 4 000 см3 ТС Колонка хроматографическая стальная длиной 100 мм. с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 3,5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18 Миксер ручной погружной, мощностью 260 Вт и с максимальной скоростью вращения от 2 000 до 12 500 об./мин Насос диафрагменный, химически стойкий на 100 %, с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс. с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм3/мин
Предколонка хроматографическая стальная, длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18
Стаканы стеклянные, термостойкие объемом
100—500 см3 ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с
круглодонной колбой объемом 4 ООО см3 и
приемной конической колбой объемом
1 ООО см3
Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро
фильтрующие диаметром 11 см, зольность
одного фильтра 0,00072 г ТУ-6-09-1678—95
Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требовании безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТу 12.1.007—76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТу 12.1.004—91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТу 12.4.009—83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГЫ 2.2.5.1313—03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТу 12.0.004—91.
5. Требования к квалификации операторов
Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе с тандемным масс-спектрометрическим детектированием, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С, относительной влажности не более 80 % и нормальном атмосферном давлении; выполнение измерений на жидкостном хроматографе с тандемным масс-спектромет-
рическим детектором проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению определений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.
7. /. /. Очистка ацетонитрила Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5—6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 ООО см3 аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81.5 °С, отбрасывают.
7.1.2. Очистка ацетона Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм . Выдерживают его над осушителем в течение 5—6 ч. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 ООО см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм . Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °С, отбрасывают.
7.1.3. Приготовление бидистиллированной воды Дистиллированную воду помешают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм и кипятят в течение 6 ч.
Собирают фракции, отогнанные при температуре 100.0 °С, а фракции. отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С. отбрасывают.
7. /. 4. Очистка хлористого метилена Хлористый метилен промывают равным объемом 5%-го раствора натрия углекислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 12—24 ч. Затем хлористый
метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 ООО см3 аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре 40,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 40,0 °С, отбрасывают.
7.1.5. Очистка гексана
Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальцин из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5—6 ч. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Гексан перегоняют при температуре 68,7 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 68,7 °С, отбрасывают.
7.2. Приготовление растворов для проведения ашии ш
7.2.1. Приготовление рабочих растворов
7.2.1.1. Приготовление 0,1%-го водного раствора муравьиной кислоты. В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 бидистиллиро-ваннои воды, прибавляют 1,0 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки бидистиллированной водой. Раствор используется как компонент подвижной фазы.
7.2.2. Приготовление градуировочных растворов
7.2.2.1. Стандартный раствор N9 1 с концентрацией циантрани-липрола 1,0мг/см3. Взвешивают 50 мг циантранилипрола в мерной колбе объемом 50 см3. Навеску' растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией циантранилипрола 10,0мкг/сАГ. Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помешают в мерну ю колбу объемом 100 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике не более 2 месяцев.
7.2.2.3. Стандартный раствор Лг9 3 с концентрацией циантранилипрола 1,0 мкг/см3. Из стандартного раствора №2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до
метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор хранят в холодильнике не более 2 месяцев.
7.2.2.4. Стандартный раствор Ns 4 с концентрацией циаитрани-липрола О, I мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой
1 см\ помешают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 4 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор №4 хранят в холодильнике не более 7 суток.
7.2.2.5. Стандартный раствор Ns 5 с концентрацией циантрани-липрола 0,05 мкг/см . Из стандартного раствора №4 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор №5 используется для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор №5 хранят в холодильнике не более 7 суток.
7.2.2.6. Стандартный раствор Ns 6 с концентрацией циантрани-липрола 0,02 мкг/см. Из стандартного раствора №4 отбирают пипеткой
2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор №6 хранят в холодильнике не более 7 суток.
7.2.2.7. Стандартный раствор Ns 7 с концентрацией циантрани-липрола 0,01 мкг/см . Из стандартного раствора №4 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 7 используется для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор №7 хранят в холодильнике не более 7 суток.
7.2.2.8. Стандартные растворы циантраншиирола в ацетонит-рше с концентрациями 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 для внесения в образцы. Из стандартного раствора № 2 методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы. Стандартные растворы для внесения хранят в холодильнике не более 2 месяцев.
7.3. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую отклик целевого иона (Response) от концентрации циантранилипрола в растворе
(мкг/см’), устанавливают путем определения соотношения интенсивности (площади) пиков, отвечающих характеристичным ионам идентифицируемого компонента и аналитического стандарта на регистрируемых ионных масс-хроматограммах по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,1; 0.05; 0,02 и 0,01 мкг/см3.
В инжектор хроматографа вводят по 5 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
7.4. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии
Хроматографическую колонку с лредколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 30 °С и скорости потока подвижной фазы 0,3 см /мин 3—4 ч.
8. Отбор проб и хранение
Отбор проб проводится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», №2051—79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТами: цитрусовые культуры: ГОСТ Р 53596-09 «Плоды цитрусовых культур для употребления в свежем виде. Технические условия». ГОСТ 4427-82 «Апельсины. Технические условия»; плодовые семечковые культуры: ГОСТ 16270-70 «Яблоки свежие ранних сроков созревания. Технические условия», ГОСТ 27572-87 «Яблоки свежие для промышленной переработки», ГОСТ 21713-76 «Груши свежие поздних сроков созревания. Технические условия», ГОСТ 21714-76 «Груши свежие ранних сроков созревания. Технические условия»; плодовые косточковые культуры: ГОСТ 32787-14 «Абрикосы свежие. Технические условия», ГОСТ Р 54702-11 «Персики и нектарины свежие. Технические условия», ГОСТ Р 55643-13 «Вишня свежая. Технические условия», ГОСТ 21922-76 «Черешня свежая. Технические условия», ГОСТ 32286-16 «Слива и алыча крупноплодная свежие. Технические условия»; плодовые овощные культуры: ГОСТ 7177-80 «Арбузы продовольственные свежие. Технические условия», ГОСТ 7178-85 «Дыни свежие. Технические условия», ГОСТ Р 55885—13 «Перец сладкий свежий. Технические условия». ГОСТ 31822-12 «Кабачки свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия», ГОСТ 31821—12 «Баклажаны свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия»; стеблевые овощные культуры: ГОСТ 31854-12
«Лук порей свежий, реализуемый в розничной торговле. Технические условия», ГОСТ Р 55644-13 «Сельдерей свежий, реализуемый в розничной торговле. Технические условия»; листовые овощные культуры: ГОСТ Р 55650-13 «Овоши листовые свежие. Технические условия», ГОСТ 32883-14 «Зеленные культуры овощные свежие для промышленной переработки. Технические условия»; клубнеплоды: ГОСТ 7176—85 «Картофель свежий продовольственный, заготовляемый и поставляемый. Технические условия», ГОСТ Р 51808-13 «Картофель продовольственный. Технические условия», ГОСТ 26832-86 «Картофель свежий для переработки на продукты питания. ТУ»; орехи ГОСТ 32857—14 «Ядра миндаля сладкого. Технические условия», ГОСТ 31784—12 «Арахис. Технические условия», ГОСТ 16832-71 «Орехи грецкие. Технические условия»; зерновые культуры и продукты переработки зерна: ГОСТ 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ Р ИСО 24333-11 «Зерно и продукты его переработки. Отбор проб»; ГОСТ 32786-14 «Виноград свежий столовый. Технические условия»; ГОСТ Р 52088-03 «Кофе натуральный жареный. Общие технические условия».
Отобранные пробы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при температуре 0—4 °С в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С.
9. Выполнение определения
9. /. Я Споки, мякоть апельсинов, нектарины, черешня, абрикосы, баклажаны, кабачки, перец, сельдереи и шпинат
9. /. /. Экстракция и очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей Образец измельченных яблок, мякоти апельсинов, нектаринов, черешни, абрикосов, баклажан, кабачков, перца, сельдерея или шпината массой 10 г помешают в стеклянный стакан объемом 500 см\ прибавляют 100 см3 ацетонитрила и перемешивают 1 мин с помощью погружного миксера. Экстракт фильтруют в коническую колбу объемом 250 см3 с 5 г хлорида натрия через фильтр низкой плотности, перемешивают и выдерживают 5 мин.
Затем объединенный экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 см' (нерастворившуюся соль оставляют в колбе) и после разделения фаз нижний водный слой отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт в делительной воронке промывают двумя порциями гексана
объемом по 50 см3, каждый раз интенсивно встряхивая воронку по 2 мин. После полного разделения фаз отбрасывают выделившийся нижний водный слой и верхний гексановый слой. Ацетонитрильный экстракт переносят в концентратор объемом 250 см3 через слой безводного сульфата натрия, осушитель в колбе промывают 10 см3 ацетонитрила, объединяют с основным экстрактом и упаривают досуха при температуре не выше 40 °С.
9.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.1, прибавляют 3 см ацетона, обмывают стенки концентратора, затем прибавляют 50 см3 дистиллированной воды и 10 см3 насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см3. Экстракт в делительной воронке промывают двумя порциями гексана объемом по 30 см3, интенсивно встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз отбрасывают верхний гексановый слой, нижний водный слой возвращают в делительную воронку.
Циантранилипрол экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 30 см3, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают через слои безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 см3 и выпаривают досуха при температуре не выше 40 °С.
Сухой остаток растворяют в 10 см ацетонитрила и 5 мм' пробы вводят в хроматограф.
9.2. Клубни картофеля 9.2.1. Экстракция Образец измельченных клубней картофеля массой 10 г помещают в стеклянный стакан объемом 500 см3, прибавляют 100 см3 ацетона и перемешивают 1 мин с помощью погружного миксера. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см3 через фильтр низкой плотности, перемешивают и выпаривают досуха при температуре не выше 40 °С.
Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 9.1.2 «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешиваюипгхся растворителей».
Сухой остаток, полученный после очистки, растворяют в 10 см3 ацетонитрила и 5 мм3 пробы вводят в хроматограф.
9.3. Ягоды винограда, {ерно риса и ядра миндаля
9.3.1. Экстракция
Образец измельченных ягод винограда, зерна риса или миндаля массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 мин в ультразвуковую ванну. Ацетонитрильный экстракт фильтруют через фильтр низкой плотности в плоскодонную колбу объемом 250 см3 с 10 г сухого хлористого натрия. Экстракцию повторяют двумя порциями ацетонитрила объемом по 50 см3 в тех же условиях. Ацетонитрильные экстракты объединяют в колбе объемом 250 см3 с 10 г сухого хлористого натрия, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 5 мин.
Затем объединенный экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 см3 (нерастворившуюся соль оставляют в колбе) и после разделения фаз нижний водный слой отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт в делительной воронке промывают двумя порциями гексана объемом по 50 см3, каждый раз интенсивно встряхивая воронку' по 2 мин. После полного разделения фаз отбрасывают выделившийся нижний водный слой и верхний гексановый слой. Ацетонитрильный экстракт переносят в концентратор объемом 250 см3 через слой безводного сульфата натрия, осушитель в колбе промывают 10 см3 ацетонитрила, объединяют с основным экстрактом и упаривают досуха при температуре не выше 40 °С.
Далее проводят очистку эксгракга как указано в п. 9.1.2 «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешиваюшихся растворителей».
Сухой остаток, полученный после очистки, растворяют в 10 см’ ацетонитрила и 5 мм3 пробы вводят в хроматограф.
9.4. Кофе
9.4.1. Экстракция
Образец измельченных зерен кофе массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см\ прибавляют 50 см' ацетонитрила и помещают на 5 мин в ультразвуковую ванну. Ацетонитрильный экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в концентратор объемом 250 см3. Экстракцию повторяют двумя порциями ацетонитрила объемом по 50 см3 в тех же условиях. Ацетонитрильные экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 см3 и упаривают досуха при температу ре не выше 40 °С.
Сухой остаток растворяют в 50 см3 ацетонитрила (методом последовательного разведения) и 5 мм3 пробы вводят в хроматограф.
9.5. Условия хроматографирования и масс-спектрометрирования
Система высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектором, включающая:
- модульный жидкостный хроматограф, состоящий из градиентного насоса на два растворителя, позволяющий регулировать поток элю-ента от 0,001 до 5,0 см3/мин и создавать давление от 0 до 600 бар;
- вакуумный дегазатор;
-термостат колонок с двумя независимо нагреваемыми зонами с диапазоном температу р от 10 до 80 °С;
- автоматический дозатор проб с использованием виал на 2 см3.
ВЭЖХ-система соединена с тандемным масс-спектрометрическим
детектором типа тройной квадруполь с двумя высокопроизводительными турбомолекулярными насосами, позволяющим регистрировать отдельные ноны с заданными массами от 5 до 3 000 а.е.м.
Система оснащена компьютерной системой обработки данных, контролирующей работу всего прибора, обеспечивающей сбор и хранение всех масс-хроматограмм в процессе проведения хромато-масс-спек-трометрического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет масс-хроматограмм и количественный анализ.
Режим хроматографа
Колонка хроматографическая стальная длиной 100 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 3,5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18.
Предколонка хроматографическая стальная длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18.
Температура колонки: 30 °С.
Подвижная фаза: ацетонитрил-0,1%-й водный раствор муравьиной кислоты (% по объему) в градиентном режиме.
Градиент потока элюента: до I мин - 5 : 95: к 2-й мин - 30 : 70; к 3-й мин - 95 : 5; к 8-й мин - 95 :5; к 12-й мин - 5 :95; к 15-й мин -5 :95.
Скорость потока элюента: 0,3 см3/ммн.
Длина волны: 265 нм.
Объем вводимой пробы: 5 мм3.
Режим масс-спектрометра
Газ-осушитель - азот с температурой 320 °С, расход 10 м3/мин.
ББК 51.23 0-62
0-62 Определение остаточных количеств циантранилипрола в цитрусовых (апельсины, грейпфруты), в плодовых семечковых (яблоки, груши), в плодовых косточковых (нектарины, персики, абрикосы, вишня, черешня, слива), в плодовых овощных (арбуз, дыня, перец, кабачки, баклажаны), в стеблевых овощных (лук-порей, сельдерей), в листовых овощных культурах (салат листовой, шпинат, цикорий салатный, горчица салатная), в клубнеплодах (картофель), в орехах (грецкий орех, миндаль, арахис, пекан), в зерновых культурах и продуктах переработки зерна (зерно риса, кукуруза зерновая лопающаяся и сахарная), в винограде и кофе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектромет-рическнм детектированием: Методические указания.—М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2017.—26 с.
1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К. А. Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов п агрохимикатов» Минсельхоза России (А. В. Довгилевич. Е. В. Довгилевич. Е. Н. Тестова. Ю. Н. Са-вушкин, И. В. Устименко).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и блашполучия человека (протокол от 22 декабря 2016 г. № 2).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 14 февраля 2017 г.
4. Введены впервые.
ББК 51.23
С Роспотребнадзор, 2017
Расход газа периферийного слоя 11 м3/мин с температурой 250 °С.
Давление в распылителе 30 psi.
Напряжение ионизации 3 500 В.
Метод ионизации - электроспрей.
Режим ионизации - положительная.
Режим сканирования - мониторинг множественных реакций (MRM) с двумя MRM-переходам и: 475—*286 - переход количественного определения, энергия соударения 15 В; 475—*444 - подтверждающий переход, энергия соударения 10 В. Энергия фрагментации 100 В, время сканирования 50 мс.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор циан-транилипрола с концентрацией 0,1 мкг/см3, соответственно разбавляют.
10. Обработка результатов
Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание циантранилипрола в пробах рассчитывают по формуле, без учета полноты извлечения вещества из проб:
-V - содержание циантранилипрола в пробе, мг/кг;
5СЯ| - высота (площадь) пика стандарта, мм;
Snp - высота (площадь) пика образца, мм;
А - концентрация стандартного раствора, мкг/см3;
V-объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3; т - масса анализируемого образца, г (см3);
Р - содержание циантранилипрола в аналитическом стандарте, %.
11. Проверка приемлемости результатов н а рал л ел ь н ы х о и ред ел еи и й
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:
Ц^-хг\ *, + -v2
(и
Xj. X: - результаты параллельных определений, мг/кг;
УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации
А. Ю. Попова
14 февраля 2017 г.
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств циантранилинрола в цитрусовых (апельсины, грейпфруты), в плодовых семечковых (яблоки, груши), в плодовых косточковых (нектарины, персики, абрикосы, вишня, черешня, слива), в плодовых овощных (арбуз, дыня, перец, кабачки, баклажаны), в стеблевых овощных (лук-порей, сельдерей), в листовых овощных культурах (салат листовой, шпинат, цикорий салатный, горчица салатная), в клубнеплодах (картофель), в орехах (грецкий орех, миндаль, арахис, пекан), в зерновых культурах и продуктах переработки зерна (зерно риса, кукуруза зерновая лопающаяся и сахарная), в винограде и кофе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием
Методические указания _МУК 4,1.3418—17_
Свидетельство о метрологической аттестации МВИ № РОСС RU. ООО 1.310430/0254.12.02.2016 от 12.02.2016.
Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием для определения уровня остаточных количеств циантранилипрола в цитрусовых (апельсины, грейпфруты), в плодовых семечковых (яблоки, груши), в плодовых косточко-
вых (нектарины, персики, абрикосы, вишня, черешня, слива), в плодовых овощных (арбуз, дыня, перец, кабачки, баклажаны), в стеблевых овошных (лук-порей, сельдерей), в листовых овощных культурах (салат листовой, шпинат, цикорий салатный, горчица салатная), в клубнеплодах (картофель), в орехах (грецкий орех, миндаль, арахис, пекан), в зерновых культурах и продуктах переработки зерна (зерно риса, кукуруза зерновая лопающаяся и сахарная), в винограде в диапазоне 0,0!— 0,1 мг/кг, а также в кофе в диапазоне 0,05—0,5 мг/кг.
Методические указания носят рекомендательный характер.
Циантранилппрол
3-бромо-1 -(3-хлоро-2-пиридил)-4'-циано-2'-метил-6Чметилкарбо-моил)пиразол-5-карбоксанилид (IUPAC)
Эмпирическая формула: C^H^BrClN^.
Молекулярная масса: 473,72.
Агрегатное состояние: порошок.
Цвет, запах: белое кристаллическое вещество без запаха.
Давление паров: 5,13 х 10“,5Па (при 20 °С).
Коэффициент распределения октанол-вода (20 °С): KowlogP = 1,97 (при pH 4), 2,02 (при pH 7) и 1,74 (при pH 9).
Температура плавления: 22Л °С.
Растворимость в воде, мг/дм' (20 °С): 17,43 при pH 4, 12,33 при pH 7 и 5,94 при pH 9.
Растворимость в органических растворителях (г/дм', 20 °С): ацетон - 6,54; ацетонитрил - 2,45; н-гексан - 6,7 х 10~5; дихлорметан -5,05; метанол - 4,73; н-октанол - 0,79; этилацетат - 1,96.
В водных растворах период полураспада циантранилипрола (DT50) при 25 °С составляет 212 дней (pH 4), 30,3 дня (pH 7) и 0,85 дня (pH 9).
Краткая токсикологическая характеристика. Циантранилипрол относится к мало опасным веществам по острой пероральной (ЛД50 для крыс и мышей составляет более 5 ООО мг/кг) и дермальной (ЛДз0 для крыс и мышей составляет более 2 ООО мг/кг) токсичности, но к умеренно опасным по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 ч) - более 5 200 мг/м3 воздуха). Не вызывает раздражения кожи и глаз у кроликов. Не является мутагеном и канцерогеном. Не является тератогеном и эмбриотоксином для крыс и кроликов, не обладает репродуктивной токсичностью.
Область применения. Циантранилипрол - инсектицид системноконтактного действия, воздействующий на нервную систему насекомых. Усиливает высвобождение кальция из арсеналов путем активации ринидиновых рецепторов. Исчерпание кальциевых арсеналов приводит к ингибированию сокращения мышц. Рекомендуется к применению для борьбы с грызущими и сосущими насекомыми на капусте, луке, томатах.
В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД
- 2,0 мг/кг массы тела человека; ОДК в почве - 0,4 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,1 мг/дм3; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 1,3 мг/м3; ОБУВ в атмосферном воздухе - 0,002 мг/м5; МДУ в продукции (мг/кг): томаты
- 0,5; лук - 0,2; капуста - 0,3.
МДУ в импортируемой продукции (мг/кг): кукуруза (зерно) - 0,01, цитрусовые - 0,9; кофе - 0,5; огурцы - 0,3; кабачки - 0,4; баклажаны, перец - 0,5; сельдерей, шпинат - 15,0; рапс (зерно, масло), подсолнечник (семена, масло) - 1,5; плодовые семечковые - 0.8; рис - 0,03; картофель - 0,05; плодовые косточковые (абрикос, нектарин, слива и др.) -1,5; миндаль - 0,03; виноград - 1,5.
1. Погрешность измерений
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Г = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (п = 20) приведены в табл. 2.
Таблица 1
Метрологические параметры для циантранилппрола |
Анализируемый
объект |
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг |
Показатель точности (ipa-ii и ца относительной по-фешности) ±6. %. Р = 0.95 |
Стандартное отклонение повторяемости, Ofs % |
I (редел повторяемости.
г,% |
Предел
воспро
изводи
мости.
R.% |
Цитрусовые культуры (апельсины) |
0.01—0.1
вкл. |
50 |
9 |
24 |
34 |
[ Тлодовьи вые культу |
; семечко-ры (яблоки) |
0.01—0,1
вкл. |
50 |
4 |
11 |
15 |
11лодовыс КОСТ04ко-
вые культуры |
11сктаринм |
0,01—0,1
вкл. |
50 |
6 |
17 |
24 |
Абрикосы |
7 |
20 |
29 |
Черешня |
7 |
21 |
29 |
11лодовые овощные культуры |
I (ерец |
0.01—0.1
вкл. |
50 |
5 |
13 |
19 |
Кабачки |
4 |
10 |
14 |
Баклажаны |
5 |
13 |
19 |
Стеблевые овощные культуры (сельдерей) |
0,01—0,1
вкл. |
50 |
8 |
22 |
31 |
Листовые овощные культу ры (шпинат) |
0,01—0.1
вкл. |
50 |
4 |
10 |
14 |
Клубнеплоды (картофель) |
001—0,1
вкл. |
50 |
5 |
15 |
21 |
Орехи (миндаль) |
0,01—0,1
вкл. |
50 |
5 |
15 |
21 |
Зерновые культуры и продукты переработки зерна (зерно риса) |
001—0,1
вкл. |
50 |
4 |
10 |
14 |
Виноград |
0,01—0.1
вкл. |
50 |
6 |
15 |
21 |
Кофе |
005—0,1
вкл. |
50 |
4 |
10 |
14 |
0.2—0.5 вкл. |
25 |
3 |
8 |
11 |
|
Таблица 2
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для ииантранилипрола |
Анализируемый
объект |
Метрологические параметры, Р = 0.95, п — 20 |
предел
обна
руже
ния.
мг/кг |
диапазон определяемых концентраций, мг/кг |
среднее значение определения. % |
стандартное отклонение, S, % |
доверительный интервал среднег о результата,
±, % |
Цитру совыс ку л ьту р ы (апельсины) |
0.01 |
0.01—0,1 |
84,49 |
8.32 |
3,29 |
Плодовые семечковые культуры (яблоки) |
0,01 |
0.01—0.1 |
87,87 |
3.45 |
1.42 |
Плодовые косточко-вые культуры |
1 (ектарины |
0,01 |
о
0
1
© |
87,02 |
5.29 |
2,16 |
Абрикосы |
85,96 |
5.04 |
2,03 |
Черешня |
79.34 |
6,22 |
2,31 |
11.толовые овощные культуры |
Иереи |
0.01 |
0.01-0,1 |
78.11 |
7,44 |
2.72 |
Кабачки |
74.20 |
3,41 |
1.18 |
Баклажаны |
91.76 |
4,91 |
2.11 |
Стеблевые овощные культуры (сельдерей) |
0.01 |
0.01—0,1 |
81,85 |
7.53 |
2,89 |
Листовые овощные культуры (шпинат) |
0,01 |
0.01—0.1 |
76,00 |
5.05 |
1.80 |
Клубнеплоды
(картофель) |
0,01 |
0,01—0.1 |
87.05 |
5,83 |
2.37 |
Орехи (миндаль) |
0.01 |
0.01—0.1 |
88,28 |
5.54 |
2,29 |
Зерновые культуры и продукты переработки зерна (зерно риса) |
0,01 |
0.01—0.1 |
88,85 |
6.67 |
2,77 |
Виноград |
0,01 |
о
0
1
р |
73.71 |
3,66 |
1.26 |
Кофе |
0,05 |
0,05—0,5 |
74.27 |
5.31 |
1.84 |
|
2. Метод измерений
Метод основан на определении ииантранилипрола с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием тандемного масс-спектрометрического детектора (ВЭЖХ-МС-МС) после его экстракции из образцов с органическим растворителем и очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами.
Идентификация ииантранилипрола проводится по времени удерживания, наличию характеристичных ионов в масс-спектрах хромато-
графически выделенного вещества и соотношению интенсивности (площади) пиков, отвечающих характеристичным ионам идентифицируемого компонента и аналитического стандарта на регистрируемых ионных масс-хроматограммах. Концентрацию циантранилипрола определяют по площадям соответствующих хроматографических пиков на ионных масс-хроматограммах по методу абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность метода достигается за счет использования масс-спектрометричес-кого детектора по ионам, характеризующим вещество.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Весы аналитические класса точности - специальный (I) с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г Весы лабораторные общего назначения класса точности - средний (III) с наибольшим пределом взвешивания до 400 г и пределом допустимой погрешности ±0,038 г Колбы мерные на 10,25,50, 100,500 и 1 000 см3 Пипетки мерные на 1,0; 2.0; 5,0 и 10,0 см3 Система высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектро-метрическим детектором, включающая:
- модульный жидкостный хроматограф, состоящий из градиентного насоса на два растворителя, позволяющий регулировать поток элюента от 0,001 до 5,0 см’/мин и создавать давление от 0 до 600 бар;
- вакуумный дегазатор;
- термостат колонок с двумя независимо нагреваемыми зонами с диапазоном температур от 10 до 80 °С;
- автоматический дозатор проб с использование виал на 2 см3.
ВЭЖХ-система соединена с тандемным масс-спектрометрическим детектором типа тройной квадруполь с двумя высокопроизводительными турбомолекулярными насосами.
позволяющим регистрировать отдельные ионы с заданными массами от 5 до 3 ООО а.е.м.
Система оснащена компьютерной системой обработки данных, контролирующей работу всего прибора, обеспечивающей сбор и хранение всех масс-хроматограмм в процессе проведения хромато-масс-спектрометричес-кого анализа, обеспечивающей обработку результатов измерений, вывод и расчет масс-хроматограмм и количественный анализ Цилиндры мерные на 10, 25. 50, 100 и 500 см3 ГОСТ 1770-74
Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
CAS 736994-63-1 ГОСТ 9293-74 ТУ 6-09-3513—86 ТУ 6-09-2167—84
Циантранилипрол, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,2 %
Азот, осч Ацетон, осч
Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм Вода дистиллированная и (или) бпдистилли-рованная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости) n-Гексан, хч
Калий марганцовокислый, чда Кальций хлористый, ч Кислота муравьиная, чда Метилен хлористый, хч Натрий сернокислый, безводный, хч Натрий углекислый, кислый, хч Натрий хлористый, хч
Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы Банки полипропиленовые с крышками для экстракции вместимостью 250 см