Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Подготовка проб для проведения исследований по определению остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов

Методические указания МУК 4.1.3534—18

Издание официальное

Москва * 2018

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Подготовка проб для проведения исследований по определению остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов

Методические указания МУК 4.1.3534—18

МУК 4.1.3534—18

Пробирки типа «Эппендорф» вместимостью 1,5—2,0 см³

Пробирки стеклянные объемом не менее 15 см³ с притертыми пробками

Стеклянные палочки

Стеклянный флакон с винтовой крышкой вместимостью не менее 80 см³

Устройство для испарения экстрактов или центрифужный испаритель со встроенным мембранно-вакуумным насосом и рабочим диапазоном температур до 60 °С Холодильник бытовой электрический

Низкотемпературные морозильники для хранения проб

Центрифуга настольная с устанавливаемым относительным центробежным ускорением (ОЦУ/RFS)¹ до 4 ООО g и возможностью охлаждения или без охлаждения

Центрифуга настольная с устанавливаемым относительным центробежным ускорением (ОЦУ/RFS)¹ до 20 ООО g

Шейкер для пробирок вортексного типа с вставкой для одной пробирки и диапазоном скорости от 150 до 2 500 об./мин

Шейкер переворачивающего вертикального вращения на 360° в одной плоскости с адаптером для пробирок и диапазоном скорости от 20 до 100 об./мин

Шкаф (стол) лабораторный

Наконечники одноразовые для автоматических пипеточных дозаторов 0,05—5,00 см³

Ультразвуковая ванна с эффективной мощностью ультразвука 60 Вт (дополнительно, для сухого молока).

Примечание. Допускается использование других вспомогательных устройств, посуды, материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.

Пересчет относительного центробежного ускорения (в единицах g) (ОЦУ/RFS) в скорость центрифугирования (об./мин) приведен в Приложении 3.

МУК 4.1.3534—18

5.5. Реактивы, тест-системы

Вода дистиллированная

Калий железистосинеродистый 3-водный (желтая кровяная соль) чда

Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный

Кислота соляная стандарт-титр с молярной концентрацией НС1 1 моль/дм³

Метанол, хч

Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный (Na₂HP0₄ х 12Н₂0), хч Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный (NaH₂P0₄ х 2Н₂0), хч

Натрий фосфорнокислый трехзамещенный 12-водный (трисодиумфосфат), чда

Натрия гидроокись стандарт-титр с молярной концентрацией NaOH 1 моль/дм³

Натрия гидроокись, хч

Натрий хлористый, хч

Цинк сернокислый 7-водный, хч

Этилацетат, сорт высший

н-Гексан, с содержанием основного вещества

не менее 99,85 %, для ВЭЖХ

Диметилсульфоксид (ДМСО), хч

2-нитробензальдегид, с содержанием основного вещества не менее 99 %

Тест-системы² для определения хлорамфеникола (левомицетина), тетрациклинов, бацитрацина, аминогликозидов (стрептомицина), пенициллинов, фторхинолонов (ципрофлоксацина), сульфаниламидов (сульфадимезина), нитроимидазолов (диметридазола), метаболитов нитрофуранов по технологии непрямого твердофазного конкурентного ИФА с внутренним стандартом Стандарты антибиотиков типа ГСО, РСО или препаратов с известной активностью

Тест-системы для иммуноферментного анализа в соответствии с МУК 4.1.3535—18 «Определение остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов в продуктах животного происхождения».

11

МУК 4.1.3534—18

Гептансульфоновой кислоты натриевая соль для ВЭЖХ

Ортофосфорная кислота (Н₃Р0₄) 85 %, чда

Примечание. Допускается использование других реактивов и тест-систем с аналогичными или лучшими характеристиками.

Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы при подготовке проб к определению антибиотиков и антимикробных веществ методами ВЭЖХ приведены в:

-    ГОСТ 54904-14 «Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором»;

-    ГОСТ 31694-12 «Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания антибиотиков тетра-циклиновой группы с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором»;

-    ГОСТ 33934-16 «Мясо и мясные продукты. Определение цинк-бацитрацина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором»;

-    ГОСТ 32798-14 «Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания аминогликозидов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором»;

-    ГОСТ 32797-14 «Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания хинолонов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором»;

-    ГОСТ 32014-12 «Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания метаболитов нитрофу-ранов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором».

4. Требования безопасности и квалификация операторов и условия выполнения измерений

4.1. Исследования с использованием методики подготовки образцов пищевых продуктов путем приготовления экстрактов для определения в них остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов проводят с соблюдением требований техники безопасности, установленных для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007), а также инструкций по использованию тест-наборов для конкретных антибиотиков и антимикробных препаратов.

МУК 4.1.3534—18

4.2.    При выполнении методики и работе с электроустановками необходимо соблюдать правила электробезопасности в соответствии ГОСТ Р 12.1.019-09 и инструкцию по эксплуатации приборов для гомогенизации, центрифугирования, испарителей, шейкеров-диспергаторов.

4.3.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83.

4.4.    К выполнению методики допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области химического, в том числе иммуноферментного, анализа. К проведению анализа допускается только персонал, освоивший данную методику.

4.5.    При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    температура окружающего воздуха: от 20 до 30 °С;

—    относительная влажность воздуха:    от    40 до 80 %.

5. Подготовка к исследованию

5.7. Хранение и использование реагентов из наборов для пробоподготовки к ИФЛ

Наборы хранят при температуре 2—8 °С, не допуская подмораживания компонентов. Не допускается заменять реагенты в составе одного комплекта реагентами из другого комплекта с другим номером партии. Не допускается перекрестное использование реагентов из комплектов с разными номерами партий.

Следует использовать наборы в пределах срока годности.

Перед использованием реагентов из тест-набора доводят температуру всех реагентов до комнатной (20—25 °С) в течение 1,5—2 ч. Если в концентратах буфера образовались кристаллы, необходимо растворить их путем встряхивания при комнатной температуре перед разведением этого реагента.

5.2. Приготовление растворов, необходимых для проведения пробоподготовки к ИФЛ

5.2. /. Приготовление 10 мМ буферного раствора с pH 7,4 (PBS-буфер с теином) (моющего и для разведения проб)

Для приготовления буферного раствора используют входящий в комплект тест-системы пакет с сухой солью для PBS-буфера.

Способ 1. Растворяют содержимое целого пакетика в 1 дм³ дистиллированной воды. Готовый 10 мМ моющий буфер может храниться при температуре 2—8 °С в течение А—6 недель.

13

МУК 4.1.3534—18

Способ 2. Растворяют содержимое пакетика в 100 см³ дистиллированной воды, чтобы получить 10-кратный концентрат моющего буфера. Раствор может храниться около 8—12 недель при комнатной температуре (20—25 °С).

Для приготовления готового к употреблению 10 мМ моющего буфера растворяют одну часть 10-кратного концентрата в 9 частях дистиллированной воды. Готовый 10 мМ моющий буфер может храниться при температуре 2—8 °С в течение 4—6 недель.

5.2.2. Приготовление 20 мМ буферного раствора (PBS-буфер)

Навески натрия фосфорнокислого однозамещенного 2-водный 1,10 г, натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водный 3,22 г и натрия хлористого 8,77 г растворяют в объеме 800—900 см³ дистиллированной воды, доводят pH до 7,4 0,5 н раствором гидроокиси натрия, далее доводят объем раствора дистиллированной водой в мерной колбе до метки 1 000 см³, тщательно перемешивают.

5.2.3. Приготовление 0,5 н раствора гидроокиси натрия

Навеску 5,0 г гидроокиси натрия разводят в мерной колбе объемом 250 см³ дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают.

5.2.4.    Приготовление 10%-го раствора метанола

Для получения 10%-го раствора метанола отбирают 10 см³ метанола в мерную колбу объемом 100 см³ и разводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают.

5.2.5.    Приготовление 20%-го раствора метанола

Для получения 20%-го раствора метанола отбирают 20 см³ метанола в мерную колбу объемом 100 см³ и разводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают.

5.2.6. Приготовление 80%-го раствора метанола в буфере для экстракции бацитрацина

Для приготовления 80%-го раствора метанола в буфере для разбавления проб (входит в комплект набора) в количестве, необходимом для экстракции, смешивают метанол и буфер в соотношении 4 + 1 (например, к 8 см³ метанола прибавляют 2 см³ буфера для разбавления проб, данный объем достаточен для экстракции 5 проб). Раствор тщательно перемешивают.

5.2.7. Приготовление 50 мМ буферного раствора янтарной кислоты

Навеску 5,9 г янтарной кислоты растворяют в 500 см³ дистиллированной воды, устанавливают pH 4,0 с помощью 1 н NaOH, доводят до 1 000 см³ дистиллированной водой.

14

МУК 4.1.3534—18

5.2.8. Приготовление осадителей (каррезы)

Осадитель 1 (Каррез I): навеску 15,21 г калия железистосинеродистого 3-водного разводят в мерной колбе объемом 100 см³ дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают.

Осадитель 2 (Каррез II): навеску 29,90 г сульфата цинка 7-водного разводят в мерной колбе объемом 100 см³ дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают.

5.2.9. Приготовление раствора для экстракции бацитрацина

В колбу вместимостью 25 см³ приливают 9,4 см³ метанола, 9,4 см³ ацетонитрила и 6,2 см³ буферного раствора для разбавления проб. Раствор тщательно перемешивают.

5.2.10. Приготовление моющего буферного раствора для определения бацитрацина

Для приготовления буфера для промывки разбавляют исходный концентрированный раствор буфера в 20 раз деминерализованной водой в соотношении 1 + 19 (например, к 2 см³ концентрата прибавляют 38 см³ деминерализованной воды). Раствор тщательно перемешивают.

Поскольку разбавленный буфер для промывки хранению не подлежит, его готовят непосредственно перед использованием, рассчитывая необходимое его количество для проведения анализа. Например, 40 см³ разведенного раствора буфера для промывки достаточно для 4 микро-титровальных стрипов по 8 лунок в каждом.

5.2.11. Приготовление буферного раствора PBS для разбавления проб (PBS-буфер) для определения стрептомицина

Навески 0,63 г натрия фосфорнокислого однозамещенного 2-водного; 5,7 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного и 9 г NaCl; довести до 1 000 см³ дистиллированной водой в мерной колбе, тщательно перемешать.

5.2.12. Приготовление буфера для разбавления проб для определения пенициллина

Разбавить концентрат буфера для разбавления стандартных растворов, конъюгата, антител, проб, имеющийся в комплекте, в соотношении 1 :4 (1+3) деминерализованной водой (например, 10 см³ концентрата + 30 см³ деминерализованной воды). Готовый буфер для разбавления стандартов, проб, антител и конъюгата может храниться при 2—8 °С до истечения срока годности, указанного на концентрате.

5.2.13. Приготовление раствора для экстракции пенициллинов

В колбу вместимостью 25 см³ приливают 9,4 см³ метанола, 9,4 см³ ацетонитрила и 6,2 см³ буферного раствора для разбавления проб (п. 5.2.12). Раствор тщательно перемешивают.

15

МУК 4.1.3534—18

5.2.14. Приготовление моющего буфера для определения пенициллина

Разбавить концентрат моющего буфера в соотношении 1 :20 (1 + 19) деминерализованной водой (например, 2 см³ концентрата + 38 см³ деминерализованной воды, этого количества достаточно для 4 микротитровальных стрипов, т. е. 32 лунок). Разбавленный буфер может храниться при 2—8 °С до конца срока годности, указанного на концентрате.

5.2.15.    Приготовление 70%-го раствора метанола

Для приготовления 70%-го раствора метанола вносят 70 см³ чистого метанола в мерную колбу объемом 100 см³, добавляют дистиллированной воды до метки и тщательно перемешивают.

5.2.16.    Приготовление 35%-го раствора метанола

Для приготовления 35%-го раствора метанола вносят 35 см³ чистого метанола в мерную колбу объемом 100 см³, добавляют дистиллированной воды до метки и тщательно перемешивают, либо разбавляют готовый 70%-й раствор метанола дистиллированной водой в 2 раза.

5.2.17. Приготовление экстрагирующего буфера для креветок для определения хинолонов

70%-й раствор метанола (п. 5.2.15) разбавляют готовым моющим буфером (по п. 5.2.1) в соотношении 1 : 2 (например, 1 часть раствора метанола + 1 часть готового моющего буфера).

5.2.18. Приготовление 84%-го раствора ацетонитрила для определения сульфаниламидов

Готовят раствор ацетонитрила в воде в соотношении 84 : 16 (по объему). Для этого смешивают, например, 8,4 см³ ацетонитрила и 1,6 см³ дистиллированной воды.

5.2.19. Приготовление 2Мраствора хлорида натрия для определения сульфаниламидов (тест-система 1)

Растворяют навеску хлорида натрия 115 г в 900 см³ дистиллированной воды и доводят в мерной колбе до метки 1 000 см³.

5.2.20. Приготовление 50 мМраствора ацетатного буфера для определения сульфаниламидов (тест-система 1)

Растворяют 4,1 г ацетата натрия в 900 см³ дистиллированной воды, устанавливают pH - 5 ± 0,1 с помощью 1 н раствора соляной кислоты и доводят в мерной колбе до метки 1 000 см³ дистиллированной водой.

5.2.21. Приготовление буфера для разбавления проб для определения сульфаметазина (тест-система 2) из концентрата

Для приготовления готового к использованию буфера для разбавления проб разбавляют 20-кратный концентрат (в комплекте тест-

МУК 4.1.3534—18

системы 2) 1 : 20 (1 + 19) дистиллированной водой. Рекомендуется выполнять разведение буфера для разбавления в один этап (50 см³ буфера для разбавления доливают в мерной колбе дистиллированной водой до метки 1 ООО см³).

Срок годности буфера для разбавления, соответствующий указанному на этикетке к концентрату, выдерживается при хранении при температуре не выше 4 °С.

5.2.22. Приготовление буфера для разбавления для определения диметридазола

Буфер для разбавления проб поставляется в виде 10-кратного концентрата. Перед разбавлением (10 см³ буфера + 90 см³ дистиллированной воды) концентрированный буфер должен дойти до комнатной температуры и быть тщательно перемешанным. Концентрированный буфер может содержать осадок. Перемешайте тщательно перед разбавлением дистиллированной водой. Разбавленный буфер может храниться в холодильнике (2...8 °С) до истечения срока годности, указанного на этикетке тест-системы.

5.2.23. Приготовление 75%-го раствора метанола

Готовят 75%-й раствор метанола, смешивая метанол с водой в соотношении 3 : 1 (об/об), тщательно перемешивают.

5.2.24. Приготовление 1Мраствора соляной кислоты (НС1)

Для приготовления 1 М раствора соляной кислоты из стандарт-титра мерную колбу емкостью 1 дм³ наполняют дистиллированной водой - 500—600 см³ и затем количественно переносят в нее содержимое ампулы с соляной кислотой, тщательно ополаскивая стенки ампулы дистиллированной водой, интенсивно перемешивают, после чего доводят объем раствора до метки. Тщательно перемешивают.

5.2.25. Приготовление 1Мраствора натрия гидроокись (NaOH)

Для приготовления 1 М раствора натрия гидроокиси из стандарт-титра мерную колбу емкостью 1 дм³ наполняют дистиллированной водой - 500—600 см³ и затем количественно переносят в нее содержимое ампулы натрия гидроокиси, тщательно ополаскивая стенки ампулы дистиллированной водой, интенсивно перемешивают, после чего доводят объем раствора до метки. Тщательно перемешивают.

Для пробоподготовки к экстракции пенициллина допускается использовать 0,5 н раствор гидроокиси натрия, для чего навеску 5 г гидроокиси натрия разводят в мерной колбе объемом 250 см³ дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают.

17

МУК 4.1.3534—18

5.2.26. Приготовление 0J Мраствора калия фосфорнокислого

Навеску 88,0 г калия фосфорнокислого дву замещенного 3-водного (К₂НР0₄ х ЗН₂0) разводят в мерной колбе объемом 100 см³ дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают.

5.2.27. Приготовление экстракционного буфера (раствор 50 мМ натриевой соли гептансулъфоновой кислоты с 25 мМ трисодиумфосфат с pH 2,0)

Навески 2,0 г натриевой соли гептан-сульфоновой кислоты и 1,9 г трисодиумфосфата растворить в 170—190 см³ дистиллированной воды, установить pH ортофосфорной кислотой до 2,0 ±0,1 и довести до конечного объема 200 см³.

5.3. Хранение и использование тест-систем и реагентов

Хранение и использование тест-систем и реагентов, приготовление растворов, питательных сред, экстрагентов, необходимых для проведения пробоподготовки к анализу неселективными методами скрининга или методами ВЭЖХ и ВЭЖХ/МС, осуществляют в соответствии с утвержденными в установленном порядке методиками.

5.4. Подготовка стеклянной посуды

При подготовке к проведению исследований лабораторную стеклянную посуду моют смесью водного раствора бихромата калия с концентрированной серной кислотой, многократно промывают водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу.

6. Отбор проб пищевых продуктов

6.1.    Отбор проб пищевой продукции проводят с учетом требований нормативно-технической документации на конкретный вид пищевого продукта.

6.2.    Прослеживаемость исследуемых пищевых продуктов.

Необходимо принять меры для обеспечения прослеживаемости и

истории происхождения образцов на протяжении всей цепи отбора, хранения, доставки в лабораторию, подготовки к анализу, анализа и выдачи окончательных результатов.

6.2.1. Каждый образец должен быть четко промаркирован, предпочтительно с использованием штрих-кодирования, для идентифицирования производителя, страны, области, края, города производства, организации и местоположения отбора образца, даты отбора и дополнительной информации, необходимой для последующих действий, если это

МУК 4.1.3534—18

необходимо (номера партии, в случае продуктов смешанного состава обозначений изготовителя о применяемых компонентах).

6.3.    Объем выборки должен быть достаточен, чтобы можно было провести анализ методом неселективного скрининга (при необходимости) и/или методом ИФА, а также сохранить оставшиеся необработанные образцы для обеспечения подтверждения результатов или иных целей.

6.4.    Во время отбора и подготовки проб к анализу необходимо соблюдать осторожность, чтобы предотвратить загрязнение или другие изменения в образцах в результате неправильного обращения, которые могли бы изменить искомый антибиотик или антимикробный остаток и повлиять на результат аналитического определения.

6.5.    Общие указания по отбору образцов:

а)    каждый первичный образец должен быть отобран от одной единицы из партии выработки и отбираться случайным образом;

б)    если требует размер отбираемого образца для адекватного размера лабораторного образца (например, печень птицы), образцы должны собираться последовательно после первоначального случайного отбора;

в)    замороженные продукты не следует оттаивать перед отбором проб;

г)    консервированные или упакованные продукты не следует вскрывать для отбора проб, если размер упаковки не превышает вдвое необходимого для лабораторного образца. Лабораторный образец должен содержать репрезентативную часть бульона, жидкой части, окружающей продукт;

д)    невскрытые банки или упаковки, которые составляют лабораторный образец, должны быть отправлены в лабораторию невскрытыми и неповрежденными;

е)    большие мясокостные единицы продукта следует отбирать путем сбора съедобной части продукта в качестве первичного образца;

ж)    если части одной единицы продукта меньше, чем описано в качестве первичного образца, необходимо использовать дополнительные единицы выборки;

з)    до начала анализа пробы хранят в холодильнике. Части, оставшиеся от лабораторных образцов, должны быть заморожены и сохраняться в условиях, которые сохранят целостность образца.

6.6.    Масса (объем) лабораторных образцов для анализа, если иные требования не регламентированы действующей нормативной документацией, должна составлять количества, приведенные в табл. 1, гармонизированные с рекомендациями, включенными в Руководство по разработке и применению национальной регулирующей программы контроля безопасности пищевых продуктов, разработанной в связи с применени-

ББК 51.23 П44

П44 Подготовка проб для проведения исследований по определению остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов: Методические указания.—М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2018.—99 с.

ISBN 978-5-7508-1627-9

1.    Методические указания разработаны Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (В. А. Тутельян, С. А. Хо-тимченко, С. А. Шевелёва, Л. П. Минаева, Н. Р. Ефимочкина, В. В. Бессонов, А. Д. Малинкин, А. И. Алёшкина, М. А. Макаренко), ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве» Роспотребнадзора (Л. И. Иванова, А. Ю. Полторацкий) при участии А. В. Галкина.

2.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 23 марта 2018 г.

3.    Введены впервые.

ББК 51.23

ISBN 978-5-7508-1627-9

© Роспотребнадзор, 2018

МУК 4.1.3534—18

ем ветеринарных лекарственных препаратов для животных, производящих пищевые продукты [1]. Таблица 1 Рекомендуемые нормы отбора проб пищевых продуктов для исследований

Наименование продукта Размер отбираемой пробы, не менее 1 2 Молочные и молокосодержащие продукты Сметана и продукты, сквашенные на ее основе; творог, творожные изделия и продукты молокосодержащие на их основе, в том числе для детского питания 500 г (см3) Молоко, кисломолочные и сквашенные молокосодержащие продукты жидкие, в том числе для детского питания 500 г (см3) Сгущенное и концентрированное молоко, сливки 500 г (см3) Сухие молочные продукты, в том числе для детского питания 500 г Масло и паста масляная из коровьего молока, молочный жир, еливочно-растительные спреды 200 г Сыр, сырный продукт, в том числе для детского питания 200 г Мясо- и птицепродукты Колбасы и колбасные изделия, мясопродукты из мяса и птицы, включая консервы, в том числе для детского питания 500 г, если содержание жира менее 5 % по массе; 1 000 г, если содержание жира более 5 % Мясо Субпродукты Жир всех видов скота, в том числе для детского питания 500 г после удаления костей 250—500 г 50—100 г Мясо птицы и полуфабрикаты Субпродукты птичьи Жир птичий, в том числе для детского питания 500 г после удаления костей 250—500 г 50—100 г Рыба и рыбная продукция аквакультуры Рыба, нерыбные объекты и продукция из них, включая консервы, в том числе для детского питания 250—500 г Масложировые продукты Спреды растительно-сливочные 50—100 г Яйца и яичные продукты Яйца всех видов птицы в скорлупе Продукты яичные сухие, жидкие, в том числе замороженные 10 штук 500 г

МУК 4.1.3534—18

Содержание

Перечень сокращений................................................................................................4

1.    Общие положения и области применения............................................................5

2.    Принцип подхода к пробоподготовке...................................................................7

3.    Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и

реактивы..................................................................................................................8

3.1.    Средства измерений........................................................................................8

3.2.    Вспомогательные устройства, материалы.....................................................9

3.3.    Реактивы.........................................................................................................11

4.    Требования безопасности и квалификации операторов и условия

выполнения измерений........................................................................................12

5.    Подготовка к исследованию................................................................................13

5.1.    Хранение и использование реагентов из наборов для

пробоподготовки к ИФА..............................................................................13

5.2.    Приготовление растворов, необходимых для проведения

пробоподготовки к ИФА..............................................................................13

5.3.    Хранение и использование наборов и реагентов........................................18

5.4.    Подготовка стеклянной посуды...................................................................18

6.    Отбор проб пищевых продуктов.........................................................................18

7.    Алгоритм выбора метода при проведении исследований.................................21

8.    Подготовка проб к определению остаточных количеств антибиотиков

и антимикробных веществ методом ИФА..........................................................23

8.1.    Подготовка проб при определении хлорамфеникола (левомицетина)......23

8.2.    Подготовка проб при определении антибиотиков тетрациклиновой

группы............................................................................................................34

8.3.    Подготовка проб при определении бацитрацина........................................41

8.4.    Подготовка проб при определении аминогликозидов (стрептомицина)......43

8.5.    Подготовка проб при определении пенициллинов.....................................48

8.6.    Подготовка проб при определении хинолонов (фгорхинолонов)................52

8.7.    Подготовка проб при определении сульфаниламидов...............................56

8.8.    Подготовка проб при определении нитроимидазолов (диметридазола) ....61

8.9.    Подготовка проб при определении метаболитов нитрофуранов АМОЗ и

АОЗ................................................................................................................62

9.    Хранение и транспортировка экстрактов для ИФА...........................................64

10.    Подготовка проб к определению остаточных количеств антибиотиков

и антимикробных веществ методами скрининга и методами подтверждающего анализа ВЭЖХ и/или ВЭЖХ/МС.......................................64

11.    Библиографические ссылки...............................................................................65

Приложение /. Перечень методик для определения максимально

допустимых уровней остатков (МДУ) антимикробных ветеринарных лекарственных средств (АВЛС) в

нормируемой пищевой продукции животного происхождения........66

Приложение 2. Методы неселективного скрининга и группового селективного скрининга антибиотиков в пищевых

продуктах........................................................................................94

Приложение 3. Пересчет относительного центробежного ускорения

в скорость центрифугирования.....................................................98

3

МУК 4.1.3534—18

Перечень сокращений

ИФА - иммуноферментный анализ ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография ВЭЖХ/МС - высокоэффективная жидкостная хроматография с масс-спектрометрическим детектированием НД - нормативная документация

4

МУК 4.1.3534—18

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

23 марта 2018 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Подготовка проб для проведения исследований по определению остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов

Методические указания МУК 4.1.3534—18

1. Общие положения и области применения

1.1.    Настоящие методические указания устанавливают порядок применения методики подготовки образцов пищевых продуктов животного происхождения путем приготовления экстрактов и вытяжек для определения в них остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов и алгоритм выбора метода при проведении исследований.

1.2.    Методические указания распространяются на пищевые продукты животного происхождения, подлежащие исследованиям на наличие остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов, используемых при производстве сельскохозяйственной продукции и продовольственного сырья, для целей оценки ее соответствия установленным требованиям безопасности (в том числе в форме санитарно-эпидемиологического надзора (контроля)), а также для целей мониторинга остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов в продовольственном сырье и пищевых продуктах животного происхождения и оценки эффективности проводимых санитарно-профилактических мероприятий.

1.3.    Методика применяется для пробоподготовки следующих пищевых продуктов:

1.3.1. Молоко и молочные продукты:

а) молоко, сливки, продукты из сыворотки и пахты (сырые, питьевые, сухие, концентрированные (сгущенные);

5

МУК 4.1.3534—18

б)    продукты переработки молока: продукты кисломолочные, сквашенные (с наполнителями и без), сметана, творог, сыр, масло из коровьего молока;

в)    молочные смеси, в том числе для детского питания сухие и жидкие, молочные напитки, в том числе для детского питания сухие и жидкие, молочные каши с содержанием молочных компонентов более 50% сухие и жидкие, в том числе для детского питания, продукты кисломолочные и творог для детского питания;

г)    молокосодержащие продукты (спреды сливочно-растительные).

1.3.2.    Мясо и мясопродукты, в том числе птица и птицепродукты:

а)    мясо и субпродукты всех видов скота и птицы сырые;

б)    продукты из мяса и субпродуктов, в том числе птичьих, с содержанием мясных ингредиентов более 50 % (колбасные изделия, консервы мясные);

в)    продукты из мяса и субпродуктов, в том числе птичьих, с содержанием мясных ингредиентов более 50 % для детского питания (колбасные изделия, консервы мясные).

1.3.3.    Рыба и рыбная продукция, продукция аквакультуры:

а)    рыба и рыбная продукция, продукция аквакультуры (рыба, креветки) сырые;

б)    продукты переработки рыбы и аквакультуры (консервы рыбные натуральные и с добавлением масла);

в)    продукты переработки рыбы и аквакультуры для детского питания (консервированные продукты из рыбы с содержанием рыбных ингредиентов более 50 %, кулинарная продукция из рыбы с молочным компонентом).

1.3.4.    Яйца и яйцепродукты:

а)    яйца всех видов птицы (сырые);

б)    яичные продукты сухие и жидкие, в том числе замороженные (яичный порошок, меланж, яичный белок).

1.3.5.    Масложировая продукция (спреды растительно-сливочные).

1.3.6.    Мёд и продукты пчеловодства (маточное молочко пчел).

1.3.7.    Биологически активные добавки к пище на основе переработки мясо-молочного сырья (при необходимости контроля, также на основе рыбы), не включающие в рецептуру веществ и соединений с антимикробными свойствами (соли йода, лизоцим и т. п.) (с содержанием ингредиентов животного происхождения более 90 %).

Биологически активные добавки к пище на основе мясо-молочного, рыбного сырья, аквакультуры с содержанием ингредиентов животного происхождения менее 90 %, контролируемые методами ВЭЖХ, подлежат пробоподготовке согласно пункту 10 настоящих методических указаний.

МУК 4.1.3534—18

1.4.    Методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, для иных организаций и учреждений, занимающихся вопросами оценки качества и безопасности пищевых продуктов и связанных с требованиями к пищевым продуктам процессов производства (изготовления), хранения, перевозки (транспортирования), реализации и утилизации, а также для аккредитованных на проведение соответствующих исследований организаций.

1.5.    Методические указания носят рекомендательный характер.

1.6.    Определение остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов в подготовленных пробах (экстрактах) проводится в соответствии с методическими указаниями по определению остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов в продуктах животного происхождения.

2. Принцип подхода к пробоподготовке

2.1.    Метод представляет собой стандартизованные алгоритмы подготовки проб пищевых продуктов к проведению фотометрической детекции результатов иммуноферментного анализа (ИФА) для определения в них остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов хлорамфеникола (левомицетина), тетрациклинов, бацитрацина, аминогликозидов (стрептомицин), пенициллинов, фторхинолонов (ци-профлоксацин), сульфаниламидов, нитроимидазолов, нитрофуранов, а также порядка действий при подготовке проб при необходимости проведения скринингового анализа и анализа по физико-химической идентификации индикаторной молекулы вещества и подтверждению результатов методами ВЭЖХ и/или ВЭЖХ/МС.

2.1.1.    Алгоритм подготовки для количественной оценки остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов методом фотометрической детекции ИФА включает последовательное выполнение операций по экстрагированию антибиотиков и антимикробных веществ из пищевых матриц-носителей различного вида и физического состояния: измельчение твердых продуктов, регидратация порошкообразных продуктов, гомогенизация жидких продуктов; нейтрализация до уровня pH 7,0 ± 0,5 при необходимости; осаждение с использованием каррезов и/или центрифугирование для удаления ингредиентов и/или нецелевых фракций пищевой матрицы; экстракция антибиотика/антимикробного вещества с использованием неорганических или органических растворителей с последующей концентрацией пробы путем упаривания; обезжиривание смесью моющего буфера и органического растворителя (при необходимости) с повторным упариванием экстракта; растворение сухо-

МУК 4.1.3534—18

го экстракта в моющем буфере; диспергирование для получения экстракта, очистке и концентрированию путем сорбци/десорбции с использованием колонок для твердофазной экстракции.

2.1.2.    Алгоритм подготовки для полуколичественной оценки остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов - скрининговый анализ включает последовательное выполнение операций по измельчению твердых продуктов, регидратации порошкообразных продуктов, гомогенизации жидких продуктов; нейтрализации до уровня pH 7,0 ± 0,5 при необходимости; прогреванию на водяной бане (при необходимости ингибирования нецелевых веществ с антимикробной активностью), извлечению антибиотиков и антимикробных веществ из пищевых матриц-носителей буферными растворами, очистке и концентрированию путем сорбци/десорбции с использованием колонок для твердофазной экстракции, способом получения тканевого сока в соответствии с утвержденными в установленном порядке методиками определения.

2.1.3.    Алгоритм подготовки к проведению ВЭЖХ и/или ВЭЖХ/МС включает последовательное выполнение операций по извлечению и концентрированию антибиотиков и антимикробных веществ из пищевых матриц-носителей различного вида и физического состояния: измельчение твердых продуктов, регидратация порошкообразных продуктов, гомогенизация жидких продуктов; доведение pH до установленного аналитического уровня; экстракцию искомых веществ органическими растворителями, промывку экстрактов и элюцию веществ элюирующими растворами либо сорбцию на колонках с соответствующими сорбентами для получения экстракта в соответствии с утвержденными в установленном порядке методиками определения.

3, Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда, материалы, тест-системы и реактивы

3. L Средства измерений

Автоматические пипеточные дозаторы с переменным объемом от 0,02 до 0,2 см³ и от 0,1 до 5 см³, с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ± I %, с одноразовыми наконечниками

Автоматические пипеточные дозаторы многоканальные с переменным объемом 0,03—0,3 см³, с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ± 1,0 %, с одноразовыми наконечниками

МУК 4.1.3534—18

Весы лабораторные общего назначения 2-го и 4-го класса точности, погрешность взвешивания 0,01 г

pH-метр или анализатор потенциометрический, погрешность измерений pH ±0,01, не более

Цилиндры мерные, стаканы химические и колбы мерные вместимостью 25, 50, 100, 200, 250,

500 см³

Колбы мерные 2-го класса точности 2-100-2, вместимостью 50, 100, 250, 500, 1 000 см³

Градуированные пипетки (с делениями) 2-го    ГОСТ 29227-91

класса точности объемом 1,2, 5 и 10 см³    (ИСО 835-1—81)

Примечание. Допускается использование других средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Вспомогательные устройства, посуда, материалы

Баня водяная лабораторная с терморегулятором, обеспечивающая нагрев не менее (90 ± 1) °С

Бумага фильтровальная    ГОСТ    12026—76

Вакуумная установка (манифолд) для твердофазной экстракции с использованием колонок для твердофазной экстракции (или набор приспособлений (цилиндры, адаптеры, шприцы с пробками)

Гомогенизатор для восстановления жидких продуктов или миксер

Измельчитель-гомогенизатор или фарфоровые ступки с пестиками

Колонки для твердофазной экстракции RIDA® С18 (арт. R2002)

Компьютер с программным обеспечением для внесения подготовленных образцов в базу данных

Конические колбы на 50 и 100 см³ с плотно

закрывающимися пробками    ГОСТ 23932-90

Магнитная мешалка

Микрошпатели

Пробирки полипропиленовые центрифужные с завинчивающимися крышками вместимостью 15 см³

Пробирки полипропиленовые центрифужные с завинчивающимися крышками вместимостью 50 см³

9