Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов в продуктах животного происхождения

Методические указания МУК 4.1.3535—18

Издание официальное

Москва • 2018

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов в продуктах животного происхождения

Методические указания МУК 4.1.3535—18

МУК 4.1.3535—18

VIII. 1.10. Расчёт результатов параллельных определений при

полуколичественном методе.............................................................198

VIIIЛ Л1. Оформление результатов определений при

полуколичественном методе определения......................................198

VIII. 1Л 2. Подтверждение результата полуколичественного определения... 198 Приложение VIII. Комплектация тест-системы для определения

диметридазола...............................................................................199

VIII. 2. Определение нитроимидазолов методом подтверждающего

анализа (на основе ВЭЖХ, ВЭЖХ-МС и др.)..............................................200

VIII.2Л. Назначение и область применения................................................200

VIII.2.2. Особенности и условия применения метода ВЭЖХ-МС.............200

VIII,2.3. Критерии оценки результатов........................................................201

VIII. 2.4. Сведения о метрологической аттестации используемого метода ..202 Раздел IX. Определение остаточных количеств метаболитов

нитрофуранов в пищевой продукции животного происхождения.............203

IX. 1. Методика полуколичественного определения остаточных количеств

метаболитов нитрофуранов АМОЗ и АОЗ в пищевой продукции животного происхождения методом иммуноферментного анализа..........203

IX.    1.1. Область применения..........................................................................203

IXЛ .2. Методика измерений при полуколичественном методе

определения.......................................................................................203

IX. 1.3. Пределы полуколичественного метода определения......................204

IX. 1.4. Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда,

материалы, реактивы и тест-системы для полуколичественного

метода определения..................=.................. 205

IX. 1.5. Требования безопасности, квалификация операторов и условия

выполнения измерений при полуколичественном анализе............208

IX.1.6. Подготовка к исследованию при полуколичественном методе

определения.......................................................................................208

IX.1.7, Подготовка проб пищевых продуктов для полуколичественного

метода определения...........................................................................210

IX. 1.8. Проведение исследований при полуколичественном методе

определения.......................................................................................212

IX. 1.9. Учёт и обработка результатов при полуколичественном методе

определения.......................................................................................214

IX. 1.10. Расчёт результатов параллельных определений при

полуколичественном методе определения......................................217

IX. 1.11, Оформление результатов определений при

полуколичественном методе определения......................................217

IX. 1.12. Подтверждение результата полуколичественного определения. .217 Приложение IX. Комплектация тест-систем для определения метаболитов

нитрофурана..................................................................................218

IX.2. Определение метаболитов нитрофуранов методом

подтверждающего анализа (на основе ВЭЖХ, ВЭЖХ-МС и др.).............220

IX.2.1. Назначение и область применения...................................................220

IX.2.2. Особенности и условия применения метода ВЭЖХ-МС...............220

IX.2.3. Критерии оценки результатов...........................................................221

IX.2.4. Сведения о метрологической аттестации используемого метода.. 222 Приложение для всех разделов. Пересчёт относительного центробежного

ускорения в скорость центрифугирования.................................223

МУК 4.1.3535—18

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

23 марта 2018 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов в продуктах животного происхождения

Методические указания МУК 4.1.3535—18

I. Области применения

1.1.    Настоящие методические указания устанавливают порядок применения методики для определения остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов в продуктах животного происхождения.

1.2.    Методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, для иных организаций и учреждений, осуществляющих контроль безопасности пищевой продукции, в том числе импортируемой в Российскую Федерацию, а также для аккредитованных на проведение соответствующих исследований организаций.

1.3.    Методические указания носят рекомендательный характер.

1.4.    Подготовка образцов пищевых продуктов животного происхождения путём приготовления экстрактов и вытяжек для определения в них остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов и алгоритм выбора метода при проведении исследований определяется в соответствии с методическими указаниями по подготовке проб для проведения исследований по определению остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов.

МУК 4.1.3535—18

II. Методы исследования

Раздел I. Определение остаточных количеств хлорамфеникола (левомицетина) в пищевой продукции животного происхождения

1.1.    Определение остаточных количеств хлорамфеникола (левомицетина) в пищевой продукции животного

происхождения методом иммуноферментного анализа

1.1. А. Методика количественного определения остаточных

количеств хлорамфеникола (левомицетина) в пищевой

продукции животного происхождения

Свидетельство об аттестации № РОСС RU.0001.310430/0042.24.04.18 от 24 апреля 2018 г.

L1.A.L Область применения количественного метода определения

В настоящем разделе методических указаний установлен порядок количественного определения остаточных количеств хлорамфеникола (левомицетина) методом конкурентного твердофазного иммуноферментного анализа с фотометрической детекцией (при 450 нм) (далее ИФА) для пищевых продуктов животного происхождения, в том числе для молока (сухого, цельного), молочных смесей для детского питания (восстановленных, жидких), молочных продуктов (творог, йогурт (без наполнителя/с фруктами), пахты и сыворотки, сливок, кефира, сметаны, сыра), масла сливочного; мяса скота и птицы; рыбы, креветок; яиц (сырых, замороженных); мёда.

Определение остаточных количеств хлорамфеникола количественным методом проводят для следующих групп продуктов животного происхождения:

1.    Молоко и молочные продукты:

а)    молоко, сливки (сырые, питьевые, сухие). Пределы определения хлорамфеникола (левомицетина) по стандартному веществу: молоко -0,00003 мг/дм³; сливки - 0,00001 мг/дм³(кг);

б)    продукты переработки молока: продукты кисломолочные (йогурт, кефир, сметана, творог), сыр, масло сливочное, пахта и сыворотка. Пределы определения хлорамфеникола (левомицетина) по стандартному веществу: молочные смеси для детского питания (восстановленные, жидкие) - 0,00003 мг/кг; йогурт (без наполнителя/с фруктовыми наполнителями), кефир, пахта и сыворотка - 0,000010 мг/кг; творог, сметана -0,00003 мг/кг; масло сливочное - 0,00016 мг/кг; сыр - 0,00003 мг/кг.

2.    Мясо скота и птицы. Предел определения хлорамфеникола (левомицетина) по стандартному веществу: 0,00007 мг/кг.

3.    Рыба и продущия аквакультуры:

а) рыба и креветки. Предел определения хлорамфеникола (левомицетина) по стандартному веществу: 0,00007 мг/кг.

12

МУК 4.1.3535—18

4.    Яйца (сырые, замороженные). Предел определения хлорамфени-кола (левомицетина) по стандартному веществу: 0,00003 мг/кг.

5.    Мёд. Предел определения хлорамфеникола (левомицетина) по стандартному веществу - 0,00003 мг/кг,

I.LA.2. Методика измерений при количественном методе определения

В основе принципа действия тест-системы лежит реакция «антиген - антитело». Лунки микротитровального планшета покрыты антителами к хлорамфениколу, которые связаны иммобилизированными антителами захвата. В лунки вносят растворы стандартов или проб и конъюгат хлорамфеникола. Свободный хлорамфеникол и конъюгированный с ферментом конкурируют за места связывания с антителами (конкурентный иммуноферментный анализ). Все несвязанные молекулы конъюгата затем удаляют на этапе отмывки. Конъюгат преобразует хромоген в окрашенные в синий продукты реакции. Внесение стоп-раствора ведет к изменению окраски от синей к желтой. Измерения выполняют фотометрически при длине волны 450 нм. Оптическая плотность обратно пропорциональна концентрации хлорамфеникола в пробе.

I.LA.3, Метрологические характеристики количественного метода определения

Метрологические характеристики метода определения остаточных количеств хлорамфеникола в пищевых продуктах животного происхождения, проводимого в соответствии с приведенной процедурой твердофазного конкурентного иммуноферментного анализа с фотометрической детекцией, представлены в табл. 1.1.

Таблица 1.1

Метрологические характеристики количественного определения

остаточных количеств хлорамфеникола (левомицетина) в пищевых продуктах методом иммуноферментного анализа

Пищевые продукты Диапазон опреде ляемых концен траций, мг/кг Показатель точности (границы относительной погрешности, Р=0,95), ± 8, % Показатель повторяемости (сред-неквад-ратич-ное отклонение повторяемости), Gr, % Показатель вос-произ-води-мости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), Or. % Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), г, % Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), (Р = 0,95) Сред няя пол нота из вле чения веще ства, % 1 2 3 4 5 6 7 8

13

МУК 4.1.3535—18

Продолжение табл. 1.1

1 2 3 4 5 6 7 8 Молоко 0,00003— 0,00080 42 2,7 3,7 7 10 93 Молочная смесь для детского питания (восстановленная, жидкая) 0,00003— 0,00078 37 2,5 3,6 7 10 96 Сливки 0,00001— 0,00036 37 3,8 5,4 11 15 104 Сметана 0,00003— 0,00082 42 5,3 7,5 15 21 92 Кефир 0,00001— 0,00036 40 3,2 4,5 9 12 104 Йогурт 0,00001— 0,00036 39 3,6 5,0 10 14 104 Йогурт с фруктовыми наполнителями 0,00001— 0,00036 36 4,0 5,5 14 16 104 Творог 0,00003— 0,00082 45 6,0 8,4 17 24 92 Пахта и сыворотка 0,00001— 0,00036 37 4,0 5,6 11 16 104 Масло сливочное 0,00016— 0,00476 55 4,1 5,8 12 16 82 Сыр 0,00003— 0,00101 53 4,1 5,7 11 16 74 Мясо скота и птицы 0,00007— 0,00206 42 5,1 7,2 14 20 91 Рыба 0,00007— 0,00202 36 4,1 5,7 И 16 97 Креветки 0,00007— 0,00204 41 4,0 5,6 11 16 92 Мёд 0,00003— 0,00071 38 4,4 6,i 12 17 106 Яйца (сырые, замороженные) 0,00003— 0,00090 51 3,6 5,0 10 14 98 Примечание. При введении (при необходимости) дополнительного разведения подготовленного экстракта (например, в 33 раза) максимальная граница диапазона определяемого содержания хлорамфеникола (левомицетина) может быть увеличена с учетом фактора разведения и полноты извлечения для каждого вида анализируемого образца (например, при дополнительном разведении в 33 раза диапазон определяемого содержания будет включать значение 0,01 мг/кг)

14

МУК 4.1.3535—18

L1.A.4. Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда, материалы, реактивы и тест-системы для количественного метода определения

I.1.A.4.L Средства измерений Автоматические пипеточные дозаторы с переменным объемом от 0,02 до 0,2 см³ и от 0,1 до 5 см³, с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ±1 %, с одноразовыми наконечниками Автоматические пипеточные дозаторы многоканальные с переменным объемом 0,03—0,3 см³ с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ± 1,0 %, с одноразовыми наконечниками Весы лабораторные общего назначения 2-го и 4-го класса точности, погрешность взвешивания 0,01 г

Фотометр вертикального типа - планшетный

иммуноферментный анализатор с диапазоном

линейности измерения оптической плотности

0—2,5 и длиной волны 450 нм

Компьютер с программным обеспечением для

обработки результатов ИФА

pH-метр или анализатор потенциометрический,

погрешность измерений pH ±0,01, не более

Цилиндры мерные, стаканы химические и колбы

мерные вместимостью 25, 50, 100, 200, 250,

500 см³

Колбы мерные 2-го класса точности 2-100-2 вместимостью 50 и 100 см³

Градуированные пипетки 2-го класса точности ГОСТ 29227-91 вместимостью 1, 2, 5 и 10 см³    (ИСО 835-1—81)

Примечание. Допускается использование других средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

I.LA.4.2. Вспомогательные устройства, посуда и материалы Баня водяная лабораторная с терморегулятором, обеспечивающая нагрев не менее (50 ± 1) °С Бумага фильтровальная    ГОСТ 12026

Гомогенизатор для восстановления жидких продуктов или миксер

15

МУК 4.1.3535—18

Измельчитель-гомогенизатор или фарфоровые ступки с пестиками

Конические колбы на 50 и 100 см³ с плотно

закрывающимися пробками    ГОСТ 23932-90

Магнитная мешалка

Пробирки полипропиленовые центрифужные с завинчивающимися крышками вместимостью 15 см³

Пробирки полипропиленовые центрифужные с завинчивающимися крышками вместимостью 50 см³

Пробирки типа «Эппендорф» вместимостью 1,5—2,0 см³

Пробирки стеклянные объёмом не менее 15 см³ с притертыми пробками Устройство для испарения экстрактов или роторный испаритель со встроенным мембранновакуумным насосом и рабочим диапазоном температур до 60 °С Холодильник бытовой электрический Центрифуга настольная с устанавливаемым относительным центробежным ускорением (ОЦУ/RFS)¹ до 4 000 g и возможностью охлаждения или без охлаждения Центрифуга настольная с устанавливаемым относительным центробежным ускорением (ОЦУ/RFS)¹ до 20 000 g

Цилиндры 1 (2,3)-100(250)-1    ГОСТ 1770

Шейкер для пробирок вортексного типа с

вставкой для одной пробирки и диапазоном

скорости от 150 до 2 500 об./мин

Шейкер переворачивающего вертикального

вращения на 360° в одной плоскости с адаптером

для пробирок и диапазоном скорости от 20 до

100 об./мин

Шкаф (стол) лабораторный

Примечание. Допускается использование других вспомогательных устройств, посуды и материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.

Пересчет относительного центробежного ускорения (в единицах g) (ОЦУ/ RFS) в скорость центрифугирования (об./мин) приведен в Приложении для всех разделов.

16

МУК 4.1.3535—18

L1 ЛАЗ. Реактивы

Вода дистиллированная Калий железистосинеродистый 3-водный (желтая кровяная соль), чда Метанол, хч

Натрий фосфорнокислый двузамещенный

12-водный (Na₂HP0₄ х 12Н₂0), хч

Натрий фосфорнокислый однозамещенный

2-водный (NaH₂P0₄ х 2Н₂0), хч

Натрий хлористый (НС1), хч

Натрия гидроокись (NaOH), хч

Цинк сернокислый 7-водный (ZnS0₄ х 7Н₂0), хч

Этилацетат, сорт высший

н-Гексан с содержанием основного вещества не

менее 99,85 %, для ВЭЖХ

Примечание. Допускается применение других химических реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

I.LAAA. Тест-система для иммуноферментного анализа

Набор для количественного определения левомицетина (хлорамфе-никола) по технологии ИФА на 96 определений с внутренним стандартом (RIDASCREEN® Chloramphenicol, арт. R1511), включающий следующие компоненты:

1.    Микротитровальный планшет на 96 лунок (12 стрипов с 8 отделяемыми лунками каждый), сенсибилизированных антителами «захвата», в упаковке из фольги в комплекте с влагопоглотителем.

2.    Комплект стандартных растворов левомицетина со следующими концентрациями: 0,25,50, 100, 250, 750 нг/дм³ в воде по 1,3 см³ - 6 шт.

3.    Конъюгат левомицетина с пероксидазой, готовый к употреблению, - 7,5 см³.

4.    Готовая смесь субстрата с хромогеном, содержащая пероксид карбамида и тетраметилбензидин, - 10 см³.

5.    Стоп-реагент, содержащий раствор 1 н серной кислоты, - 14 см³.

6.    Моющий буфер в виде сухой соли для приготовления 10 мМ фосфатного буфера, pH 7,4, содержащей 0,05 % твина, - 1 пакет.

Набор рассчитан на проведение анализа в 2 повторностях 42 исследуемых образцов и 6 калибровочных проб (всего 96 определений на один планшет).

17

МУК 4.1.3535—18

L1.A.5. Требования безопасности, квалификация операторов и условия выполнения измерений при количественном методе определения

1.    Исследования пищевых продуктов с использованием методики ИФА проводят с соблюдением требований техники безопасности, установленных для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007), а также в инструкции по использованию тест-систем.

2.    При выполнении измерений с использованием планшетного им-муноферментного анализатора и работе с электроустановками необходимо соблюдать правила электробезопасности в соответствии ГОСТ Р 12.1.019—09 и инструкцию по эксплуатации прибора.

3.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

4.    К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области имму-ноферментного анализа. К проведению анализа допускается только персонал, ознакомленный с руководством по эксплуатации планшетного анализатора.

5.    При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    температура окружающего воздуха: от 20 до 30 °С;

-    относительная влажность воздуха: от 40 до 80 %.

L1.A.6. Подготовка к исследованию при количественном методе определения

I.LA.6.1. Подготовка стеклянной посуды

При подготовке к проведению исследований лабораторную стеклянную посуду моют смесью водного раствора бихромата калия с концентрированной серной кислотой, многократно промывают водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу.

I.LA.6.2. Подготовка оборудования

Подготовку и проверку фотометра и pH-метра проводят в соответствии с руководством по эксплуатации приборов.

/. 1.А.6.3. Хранение и использование тест-систем и реагентов

Тест-системы для ИФА хранят при температуре 2—8 °С, не допуская подмораживания компонентов. Использовать набор допускается только в пределах срока годности.

18

МУК 4.1 *3535—18

I.LA.6.4. Приготовление 10 мМмоющего буферного раствора с pH 7,4 (PBS-буфер с теином)

Для приготовления буферного раствора используют входящий в комплект набора пакет с сухой солью для PBS-буфера.

Способ L Растворяют содержимое целого пакетика в 1 дм³ дистиллированной воды. Готовый 10 мМ моющий буфер может храниться при температуре 2—8 °С в течение 4—6 недель.

Способ 2. Растворяют содержимое пакетика в 100 см³ дистиллированной воды, чтобы получить 10-кратный концентрат моющего буфера. Раствор может храниться около 8—12 недель при комнатной температуре (20—25 °С).

Для приготовления готового к употреблению 10 мМ моющего буфера растворите одну часть 10-кратного концентрата в 9 частях дистиллированной воды. Готовый 10 мМ моющий буфер может храниться при температуре 2—8 °С в течение 4—6 недель.

LLA.6.5. Приготовление 20 мМ буферного раствора (PBS-буфер)

Навески натрия фосфорнокислого однозамещенного 2-водного 1,10 г, натрия фосфорнокислого двузамещённого 12-водного 3,22 г и натрия хлористого 8,77 г растворяют в объеме 800—900 см³ дистиллированной воды, доводят pH до 7,4 0,5 н раствором гидроокиси натрия, далее доводят объем раствора дистиллированной водой в мерной колбе до метки 1 000 см³, тщательно перемешивают.

L1.A.6.6. Приготовление осадителей (Каррезы)

Осадитель 1 (Каррез I): навеску 15,21 г калия железистосинеродистого 3-водного разводят в мерной колбе объемом 100 см³ дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают.

Осадитель 2 (Каррез II): навеску 29,90 г сульфата цинка 7-водного разводят в мерной колбе объемом 100 см³ дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают.

LI.A.6.7. Приготовление 0,5 нраствора гидроокиси натрия

Навеску 20 г гидроокиси натрия, разводят в мерной колбе объемом 1 000 см³ дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают.

L1.A.6.8. Приготовление 10%-го раствора метанола

Для получения 10%-го раствора метанола отбирают 10 см³ метанола в мерную колбу объемом 100 см³ и разводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают.

19

ББК51.23

062

062 Определение остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов в продуктах животного происхождения: Методические указания.—М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2018.—224 с.

ISBN 978-5-7508-1625-5

1.    Методические указания разработаны Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (В. А. Тутельян, С. А. Хо-тимченко, С. А. Шевелева, Л. П. Минаева, Н. Р. Ефимочкина, В. В. Бессонов, А. Д. Малинкин, А. И. Алёшкина, М. А. Макаренко), ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве» Роспотребнадзора (Л. И. Иванова, А. Ю. Полторацкий) при участии А. В. Галкина.

2.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 23 марта 2018 г.

3.    Введены впервые.

ББК 51.23

Редактор Л. С. Кучурова Компьютерная верстка Е. В. Ломановой

Подписано в печать 23.04.18 Формат 60x90/16    Псч.    л.    14,0

Тираж 130 экз.    Заказ

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д. 18, стр. 5, 7

Оригинал-макет подготовлен к печати ФБУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Реализация печатных изданий, тсл./факс: 8 (495) 952-50-89

О Роспотребнадзор, 2018

I.LA.6.9. Приготовление 20%-го растворов метанола

Для получения 20%-го раствора метанола отбирают 20 см³ метанола в мерную колбу объемом 100 см⁵ и разводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают.

L LA. 7. Подготовка проб пищевых продуктов для количественного метода определения

1.    Отбор проб осуществляют в соответствии МУК 4.1.3534—18 «Подготовка проб для проведения исследований по определению остаточных количеств антибиотиков и антимикробных препаратов».

2.    Хранение и транспортирование экстрактов, подготовленных для ИФА.

Готовые экстракты допускается хранить до начала анализа в пределах одной лаборатории при температуре от 2 до 8 °С не более 1 суток. Допускается транспортирование материала при температуре от 2 до 8 °С в течение 1 суток. Доставленные в лабораторию образцы в виде экстрактов хранению не подлежат и сразу направляются на анализ.

11.А. 7.1. Подготовка проб молока (сырое, питьевое, сухое), молочных смесей для детского питания (сухие, жидкие)

Образцы продуктов в сухом виде предварительно восстанавливают в воде в соответствии с указанием на этикетке (нормативно-технической документации на продукт) при отсутствии информации 1,0 г сухого продукта суспендируют в 9,0 см³ дистиллированной воды. Пробы нейтрализуют с помощью 0,5 н раствора натрия гидроокиси (п. 1.1.А.6.7), доводя уровень pH до 7,0 ± 0,5.

Способ 1. Жидкий или восстановленный продукт центрифугируют в течение 5 мин при 2 000 g и температуре не выше 4 °С (при отсутствии центрифуги с охлаждением допускается проводить центрифугирование при комнатной температуре с предварительным охлаждением проб в холодильнике до температуры не выше 4 °С).

Образовавшийся верхний слой жира удаляют с помощью шпателя или стеклянной палочки, обезжиренный супернатант отбирают в пустую пробирку и используют для дальнейшего анализа.

Непосредственно перед анализом подготовленную пробу перемешивают с помощью вортекса. Далее вносят по 0,05 см³ пробы в лунку планшета. При расчете конечного результата учитывают фактор разбавления - 1.

Чтобы добиться наилучшей чувствительности, в качестве альтернативы может быть выполнена пробоподготовка (экстракция) согласно способам 2 и 3.

МУК 4.1.3535—18

Содержание

I.    Области применения.............................................................................................11

II.    Методы исследования..........................................................................................12

Раздел I. Определение остаточных количеств хлорамфеникола

(левомицетина) в пищевой продукции животного происхождения............12

1.1.    Определение остаточных количеств хлорамфеникола

(левомицетина) в пищевой продукции животного происхождения методом иммуноферментного анализа...........................................................12

1.1. А. Методика количественного определения остаточных количеств хлорамфеникола (левомицетина) в пищевой продукции животного

происхождения.................................................................................................12

1Л.А.1. Область применения количественного метода определения..........12

L1.A.2. Методика измерений при    количественном методе определения.... 13

1.1    .А.З. Метрологические характеристики количественного метода

определения.........................................................................................13

1.1. А.4. Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда,

материалы, реактивы и тест-системы для количественного метода определения.............................................................................15

1.1. А.5. Требования безопасности, квалификация операторов и условия

выполнения измерений при количественном методе определения... 18

1.1. А.6. Подготовка к исследованию при количественном методе

определения.........................................................................................18

1.1. А.7. Подготовка проб пищевых продуктов для количественного

метода определения.............................................................................20

1.1. А.8. Проведение исследований при количественном методе

определения.........................................................................................28

1.1    .А.9. Учёт и обработка результатов при количественном методе

определения.........................................................................................29

1.1. А. 10. Проверка приемлемости результатов параллельных

определений при количественном методе определения..................32

1.1. А. 11. Оформление результатов определений при количественном

методе определения.............................................................................32

1.1. А. 12. Контроль точности результатов измерения при

количественном методе определения................................................33

1.1. Б. Методика полуколичественного определения остаточных

количеств хлорамфеникола (левомицетина) в пищевой продукции животного происхождения..............................................................................33

1.1. Б.1. Область применения полуколичественного метода

определения.........................................................................................33

1.1. Б.2. Методика измерений при полуколичественном методе

определения.........................................................................................34

1.1. Б.З. Пределы полуколичественного метода определения.......................35

1.1. Б.4. Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда,

материалы, реактивы и тест-системы для полуколичественного метода определения.............................................................................36

1.1. Б.5. Требования безопасности, квалификация операторов и условия

выполнения измерений при полуколичественном методе определения.........................................................................................36

1.1. Б.6. Подготовка к исследованию полуколичественным методом

определения.........................................................................................36

1.1. Б.7. Подготовка проб пищевых продуктов для полуколичественного

метода определения.............................................................................36

3

МУК 4.1.3535—18

1.1. Б.8. Проведение исследований при полуколичественном методе

определения.........................................................................................40

1.1. Б.9. Учёт и обработка результатов при полуколичественном

методе определения.............................................................................40

1.1    .Б. 10. Расчёт результатов параллельных определений при

полуколичественном методе    определения........................................41

1.1    .Б.11. Оформление результатов определений при

полуколичественном методе    определения........................................41

1.1. Б. 12. Подтверждение результата полуколичественного

определения.........................................................................................41

Приложение I. Комплектация тест-системы для определения

хлорамфеникола .................................... 42

I. 2. Определение хлорамфеникола (левомицетина) методами

подтверждающего анализа (на основе ВЭЖХ, ВЭЖХ-МС)........................43

1.2.1.    Назначение и область применения........................................................43

1.2.2.    Особенности и условия применения метода ВЭЖХ-МС....................43

1.2.3.    Критерии оценки результатов................................................................44

1.2.4.    Сведения о метрологической аттестации используемого метода.......45

Раздел II. Определение остаточных количеств антибиотиков

тетрациклиновой группы в пищевой продукции животного происхождения.................................................................................................46

II.    1. Определение остаточных количеств антибиотиков

тетрациклиновой группы в пищевой продукции животного

происхождения методом иммуноферментного анализа...............................46

II. 1 .А. Методика количественного определения остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы в пищевой продукции животного происхождения............................... 46

11.1. А. 1. Область применения количественного метода определения.........46

11.1. A.2. Методика измерений при количественном методе определения ..47

11.1. A.3. Метрологические характеристики количественного метода

определения.........................................................................................47

11.1. A.4. Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда,

материалы, реактивы и тест-системы для количественного метода определения.............................................................................49

11.1. A.5. Требования безопасности, квалификация операторов и

условия выполнения измерений при количественном методе определения.........................................................................................52

11.1. A.6. Подготовка к исследованию при количественном методе

определения.........................................................................................53

II. 1 .А.7. Подготовка проб пищевых продуктов для количественного

метода определения.............................................................................54

11.1. A.8. Проведение исследований при количественном методе

определения.........................................................................................60

II. 1.А.9. Учёт и обработка результатов при количественном методе

определения.........................................................................................63

II. 1.А. 10, Проверка приемлемости результатов параллельных

определений при количественном методе определения..................65

11.1. A.11. Оформление результатов при количественном методе

определения.........................................................................................65

II. 1.А. 12. Контроль точности результатов измерения при

количественном методе определения................................................66

4

МУК 4,1.3535—18

II. 1 .Б. Методика полуколичественного определения остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы в пищевой

продукции животного происхождения..........................................................66

II. 1 .Б. 1. Область применения полуколичественного метода

определения.........................................................................................66

П.1.Б.2. Методика измерений при полуколичественном методе

определения.........................................................................................68

П.1.Б.З. Пределы полуколичественного метода определения......................68

П.1.Б.4. Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда,

материалы, реактивы и тест-системы для полуколичественного

метода определения.............................................................................69

П.1.Б.5. Требования безопасности, квалификация операторов и условия выполнения измерений при полуколичественном методе

определения.........................................................................................69

II. 1 .Б.6. Подготовка к исследованию при полуколичественном методе

определения.........................................................................................69

П.1.Б.7. Подготовка проб пищевых продуктов для полуколичественного

метода определения.............................................................................69

П.1.Б.8. Проведение исследований при полуколичественном методе

определения.........................................................................................72

П.1.Б.9. Учёт и обработка результатов при полуколичественном методе

определения.........................................................................................72

II. 1.Б. 10. Расчёт результатов параллельных определений при

полуколичественном методе определения........................................73

Н.1.Б.11, Оформление результатов определений при

полуколичественном методе определения........................................73

11.1. Б.12. Подтверждение результата полуколичественного определения ....73 Приложение II. Комплектация тест-системы для определения

антибиотиков тетрациклиновой группы.......................................74

II. 2. Определение антибиотиков тетрациклиновой группы методами

подтверждающего анализа на основе ВЭЖХ-МС.........................................76

11.2.1.    Назначение и область применения.......................................................76

11.2.2.    Особенности и условия применения метода ВЭЖХ-МС...................76

11.2.3.    Критерии оценки результатов..............................................................77

Н.2.4. Сведения о метрологической аттестации используемого метода.....78

Раздел III. Определение остаточных количеств бацитрацина в пищевой

продукции животного происхождения..........................................................79

III.    1. Определение остаточных количеств бацитрацина в пищевой

продукции животного происхождения методом иммуноферментного анализа..............................................................................................................79

III. 1 .А. Методика количественного определения остаточных количеств

бацитрацина в пищевой продукции животного происхождения.................79

Ш.1.А. 1. Область применения количественного метода определения........79

III. 1 .А.2. Методика измерений при количественном методе определения.... 79

III. 1.А.З. Метрологические характеристики количественного метода

определения.........................................................................................80

III. 1.А.4. Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда, материалы, реактивы и тест-системы для количественного

метода определения.............................................................................81

III. 1.А.5. Требования безопасности, квалификация операторов и условия

выполнения измерений при количественном методе определения... 83

III. 1.А.6. Подготовка к исследованию для количественного метода

определения.........................................................................................84

5

МУК 4.1.3535—18

111.1. A.7. Подготовка проб пищевых продуктов для количественного

метода определения.............................................................................85

111.1. A.8. Проведение исследований при количественном методе

определения.........................................................................................87

III. 1.А.9. Учёт и обработка результатов при количественном методе

определения.........................................................................................88

III. 1.А. 10. Проверка приемлемости результатов параллельных

определений при количественном методе определения..................90

111.1. A.11. Оформление результатов при количественном методе

определения.........................................................................................91

III. 1 .А. 12. Контроль точности результатов измерения при

количественном методе определения................................................91

III. 1 .Б. Методика полуколичественного определения остаточных количеств

бацитрацина в пищевой продукции животного происхождения.................91

III. 1 .Б. 1. Область применения полуколичественного метода определения... 91 Ш.1.Б.2. Методика измерений при полуколичественном методе

определения.........................................................................................92

Ш.1.Б.З. Пределы полуколичественного метода определения.....................92

Ш.1.Б.4. Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда,

материалы, реактивы и тест-системы для полуколичественного

метода определения.............................................................................93

III. 1.Б.5. Требования безопасности, квалификация операторов и условия

выполнения измерений при количественном методе определения....94

III. 1 .Б.6. Подготовка к исследованию для полуколичественного метода

определения......................................................................... 94

Ш.1.Б.7. Подготовка проб для полуколичественного метода определения... 94 Ш.1.Б.8. Проведение исследований при полуколичественном методе

определения.........................................................................................95

III. 1.Б.9. Учёт и обработка результатов при полуколичественном

методе определения.............................................................................95

III. 1.Б. 10. Расчёт результатов параллельных определений при

полуколичественном методе определения........................................96

III. 1 .Б, 11. Оформление результатов определений при

полуколичественном методе определения........................................96

III. 1 .Б. 12. Подтверждение результата полуколичественного определения... 96 Приложение III. Комплектация тест-системы для определения

бацитрацина....................................................................................97

III. 2, Определение бацитрацина методами подтверждающего анализа на

основе ВЭЖХ-МС............................................................................................98

Ш.2.1. Назначение и область применения.....................................................98

111.2.2.    Особенности и условия применения метода ВЭЖХ-МС..................98

111.2.3.    Критерии оценки результатов.............................................................99

111.2.4.    Сведения о метрологической аттестации используемого метода.. 100 Раздел IV. Определение остаточных количеств аминогликозидов

(стрептомицин) в пищевой продукции животного происхождения..........101

IV.    1. Методика полуколичественного определения остаточных количеств аминогликозидов (стрептомицин) в пищевой продукции

животного происхождения методом иммуноферментного анализа..........101

IV. 1.1. Область применения полуколичественного метода определения .101

IV. 1.2. Методика измерений при полуколичественном методе

определения.......................................................................................102

IV. 1.3. Пределы полуколичественного метода определения......................102

МУК 4.1.3535—18

IV.1.4. Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда,

материалы, реактивы и тест-системы для полуколичественного

метода определения...........................................................................103

IV.1.5. Требования безопасности, квалификация операторов и условия выполнения измерений при полуколичественном методе

определения.......................................................................................106

ГУЛ .6. Подготовка к исследованию при полуколичественном методе

определения.......................................................................................107

ГУЛ.7. Подготовка проб пищевых продуктов для полуколичественного

метода определения...........................................................................108

ГУЛ .8. Проведение исследований при полуколичественном методе

определения.......................................................................................113

IV. 1.9. Учёт и обработка результатов при полуколичественном методе

определения.......................................................................................115

IV.1 Л 0. Расчёт результатов параллельных определений при

полуколичественном методе определения......................................118

IV.1 Л1. Оформление результатов определений при

полуколичественном методе определения......................................118

IV. 1.12. Подтверждение результатов полуколичественного определения ..118 Приложение IV. Комплектация тест-системы для определения

стрептомицина..............................................................................119

IV. 2. Определение аминогликозидов (стрептомицин) методами

подтверждающего анализа на основе ВЭЖХ-МС.......................................120

IV.2.1. Назначение и область применения...................................................120

IV.2.2. Особенности и условия применения метода ВЭЖХ-МС...............120

IV.2.3. Критерии оценки результатов...........................................................122

IV. 2.4, Сведения о метрологической аттестации используемого метода.. 122 Раздел V. Определение остаточных количеств пенициллинов в пищевой

продукции животного происхождения........................................................123

V.    1. Методика полуколичественного определения остаточных количеств

пенициллинов в пищевой продукции животного происхождения методом иммуноферментного анализа.........................................................123

V.    1.1. Область применения полуколичественного метода определения... 123

V.I.2. Методика измерений при полуколичественном методе

определения.......................................................................................124

V.I.3. Пределы полуколичественного метода определения.......................124

V.I.4. Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда,

материалы, реактивы и тест-системы при полуколичественном

методе определения...........................................................................125

V. 1.5. Требования безопасности, квалификация операторов и условия выполнения измерений при полуколичественном методе

определения.......................................................................................127

У. 1.6. Подготовка к исследованию при полуколичественном методе

определения.......................................................................................128

У. 1.7. Подготовка проб пищевых продуктов для полуколичественного

метода определения...........................................................................129

У. 1.8. Проведение исследований при полуколичественном методе

определения.......................................................................................134

V. 1.9. Учёт и обработка результатов при полуколичественном методе

определения.......................................................................................137

У. 1.10. Расчет результатов параллельных определений при

полуколичественном методе определения......................................139

7

МУК 4.1.3535—18

V.1.1 1. Оформление результатов определений при

полуколичественном методе определения......................................139

V. 1.12. Подтверждение результата полуколичественного метода

определения.......................................................................................140

Приложение V. Комплектация тест-системы для определения

пенициллинов ..............................................................................141

V. 2. Определение пенициллинов методами подтверждающего анализа

(на основе ВЭЖХ, ВЭЖХ-МС).....................................................................142

У.2.1. Назначение и область применения....................................................142

V.2.2. Особенности и условия применения метода ВЭЖХ-МС.................142

V.2.3. Критерии оценки результатов............................................................143

V. 2.4. Сведения о метрологической аттестации используемого метода... 144 Раздел VI. Определения остаточных количеств хинолонов

(фторхинолонов) в пищевой продукции животного происхождения........145

VI.    1. Методика полуколичественного определения остаточных количеств хинолонов (фторхинолонов) в пищевой продукции

животного происхождения методом иммуноферментного анализа..........145

VIЛ Л. Область применения полуколичественного метода определения,.,. 145

VI. 1.2. Методика измерений при полуколичественном методе определения 145

VI. 1.3. Пределы полуколичественного метода определения......................146

VIЛ .4. Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда,

материалы, реактивы и тест-системы для

полуколичественного метода определения.....................................146

VI, 1.5. Требования безопасности, квалификация операторов и условия выполнения измерений при полуколичественном методе

определения.......................................................................................149

VI. 1.6. Подготовка к исследованию при полуколичественном методе

определения.......................................................................................150

VI.1.7. Подготовка проб пищевых продуктов для полуколичественного

метода определения...........................................................................151

VI. 1.8. Проведение исследований при полуколичественном методе

определения.......................................................................................155

VI. 1.9, Учёт и обработка результатов при полуколичественном методе

определения.......................................................................................157

VI. 1.10. Расчёт результатов параллельных определений при

полуколичественном методе определения......................................159

VI. 1.11. Оформление результатов определений при

полуколичественном методе определения......................................159

VI.1.12. Подтверждение результата полуколичественного определения.... 159 Приложение VI. Комплектация тест-системы для определения хинолонов.......160

VI. 2. Определение хинолонов (фторхинолонов) методами

подтверждающего анализа (на основе ВЭЖХ, ВЭЖХ-МС и др.).............161

VI.2.1. Назначение и область применения...................................................161

VI.2.2. Особенности и условия применения метода ВЭЖХ-МС...............161

VI.2.3. Критерии оценки результатов...........................................................162

VI. 2.4, Сведения о метрологической аттестации используемого метода,. 163 Раздел VII, Определение остаточных количеств сульфаниламидов в

пищевой продукции животного происхождения........................................164

VII.    1. Методика полуколичественного определения остаточных

количеств сульфаниламидов в пищевой продукции животного происхождения методом иммуноферментного анализа.............................164

VII.    1.1. Область применения полуколичественного метода определения ..164

8

МУК 4.1.3535—18

VII. 1.2. Методика измерений при полуколичественном методе

определения................................................. 164

VII. 1.3. Пределы полуколичественного метода определения....................165

VII. 1.4. Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда, материалы, реактивы и тест-системы для

полуколичественного метода определения.....................................165

VII. 1.5. Требования безопасности, квалификация операторов и

условия выполнения измерений при полуколичественном

методе определения...........................................................................168

VII. 1.6. Подготовка к исследованию при полуколичественном методе

определения.......................................................................................169

VII. 1.7. Подготовка проб пищевых продуктов для

полуколичественного метода определения.....................................171

VII. 1.8. Проведение исследований при полуколичественном методе

определения.......................................................................................175

VII. 1.9. Учёт и обработка результатов при полуколичественном

методе определения...........................................................................177

VII. 1.10. Расчёт результатов параллельных определений при

полуколичественном методе определения......................................180

VII. 1.11. Оформление результатов определений при

полуколичественном методе определения......................................180

VII. 1.12. Подтверждение результата полуколичественного определения... 180 Приложение VII. Комплектация тест-систем для определения

сульфаниламидов..........................................................................181

VII. 2. Определение сульфаниламидов методами подтверждающего

анализа (на основе ВЭЖХ, ВЭЖХ-МС и др.)..............................................183

VII.2.1. Назначение и область применения..................................................183

VII.2.2. Особенности и условия применения метода ВЭЖХ-МС..............183

VII.2.3. Критерии оценки результатов.........................................................184

VII. 2.4. Сведения о метрологической аттестации используемого метода... 185 Раздел VIII. Определение остаточных количеств нитроимидазолов в

пищевой продукции животного происхождения........................................186

VIII.    1, Методика полуколичественного определения остаточных

количеств диметридазола в пищевой продукции животного происхождения методом иммуноферментного анализа.............................186

VIII.    1.1. Область применения полуколичественного метода определения ..186 VIIIЛ.2. Методика измерений при полуколичественном методе

определения.......................................................................................186

VIII. 1.3. Пределы полуколичественного метода определения...................187

VIII. 1.4. Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда, материалы, реактивы и тест-системы для

полуколичественного метода определения.....................................187

VIII. 1.5. Требования безопасности, квалификация операторов и условия выполнения измерений при полуколичественном

методе определения...........................................................................189

VIII. 1.6. Подготовка к исследованию при полуколичественном методе

определения.......................................................................................190

VIII. 1.7. Подготовка проб пищевых продуктов для

полуколичественного метода определения.....................................192

VIII. 1,8. Проведение исследований при полуколичественном методе

определения.......................................................................................193

VIII. 1.9. Учёт и обработка результатов при полуколичественном

методе определения...........................................................................195

9