Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение массовой концентрации акролеина в крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3158—14

Издание официальное

Москва • 2014

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение массовой концентрации акролеина в крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3158—14

ББК 51.20 И37

И37 Измерение массовой концентрации акролеина в крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2014.—18 с.

ISBN 978—5—7508—1358—2

1.    Разработаны: ФБУН «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения»

(Т. С. Уланова, Н. В. Зайцева, Т. Д. Карнажицкая, Е. О. Пшеничникова).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией но государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 26 декабря 2013 г. № 4).

3.    Утверждены врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А. Ю. Поповой 24 февраля 2014 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.20

ISBN 978—5—7508—1358—2

€> Роспотребнадзор, 2014 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2014

МУК 4.1.3158—14

УТВЕРЖДАЮ Врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главного государственного санитарного врача Российской Федерации

А. Ю. Попова

24 февраля 2014 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение массовой концентрации акролеина в крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3158—14

Т™, °С    -87,7

Т™, °С    52,7

Плотность при 20 °С, г/см³    0,8389

Растворимость в воде при 20 °С, %    20,85

Растворим    в этаноле, ацетонитриле,

ацетоне, диэтиловом эфире Давление насыщенных паров при 20 °С, кПа 29 ПДК, мг/дм³    отсутствует

Класс опасности    2

Краткая токсикологическая характеристика. Обладает выраженным раздражающим, общетоксическим, аллергенным, мутагенным действием. Угнетает синтез ДНК и клеточное деление, ингибирует ДНК-полимеразу. Оказывает цитотоксическое действие.

3. Метрологические характеристики методики выполнения измерений

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значения погрешности (и её составляющих) результатов измерений не превышают значений, приведенных в табл. 1.

Таблица 1

Диапазон измерений, значения точности (правильности и прецизионности)

методики

Объект изме рения Диапазон измерений массовой концен трации акролеина, мг/дм3 Показатель точности (границы относительной погрешности), ± 8, % при Р = 0,95 Показатель повторяемости (относительное сред-нсквадрати-ческое отклонение повторяемости), ог, % Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), Or, % Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории), г, % (при Р = 0,95 л = 2) Кровь 0,1—5 30 11 15 31

4

МУК 4.1.3158—14

Значения показателя точности используют при:

•    оформлении результатов измерений, выдаваемых лабораторией;

•    оценке деятельности лабораторий на качество проведения измерений;

•    оценке возможности использования результатов измерений при реализации методики измерений в конкретной лаборатории.

4. Метод измерения

Измерение массовой концентрации акролеина в крови основано на взаимодействии акролеина с 3-аминофенолом с образованием производного 7-гидроксихинолина и его анализе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на обращенной фазе и флуориметрическом детектировании.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 2 нг. Средняя полнота извлечения свободного акролеина из крови - 84 %.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

5.7. Средства измерений Жидкостный хроматограф с флуориметричес-ким детектором и градиентным насосом, смешивающим два компонента Весы лабораторные равноплечие второго класса точности; наибольший предел взвешивания 200 г, диапазон взвешивания по шкале мг от 0 до 100 мг, цена деления делительного устройства - 0,05 мг, погрешность взвешивания по шкале мг ± 0,15 мг Гири Г₂-210

Пипетки мерные градуированные 1-2-1-1,

1-2-1-5, 1-2-1-10

Шприц хроматографический жидкостный емкостью 10 и 50 мм³ с ценой деления 5 мм³ и погрешностью измерения 1 %

Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2 Пробирки стеклянные мерные П-2-10-14/23 ХС ¹

Цилиндры мерные 2-100-1 с пришлифованной

пробкой    ГОСТ    1770—74

Микро дозаторы, с переменным объемом 100—

1 000 мм³, 1 000—5 000 мм³ и пределом допускаемой погрешности измерения не более ± 2 % pH-метр лабораторный (основная погрешность измерения не более ± 0,05 единиц pH)

Секундомер механический    ГОСТ 5072-72

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

5.2. Реактивы

Акролеин, аналитический стандарт с содержанием основного компонента не менее 99,0 % Вода дистиллированная Ацетонитрил для хроматографии, хч Метанол (метиловый спирт), хч Этанол (этиловый спирт) ректификованный Кислота хлористоводородная, ампулы для приготовления 0,1 н раствора. Стандарт-титр Кислота ортофосфорная, хч Кислота серная, осч

З-Аминофенол для синтеза (имп.), чистота не менее 99,0 %

Железа (III) сульфат (9-водныЙ), (имп.), содержание иона железа (III) 21—23 % Гидроксиламина гидрохлорид, чистый 7-гидроксихинолин, чистота не менее 99,0 % Магний серно-кислый 7-водный, хч Раствор гепарина в ампулах (5 000 ед. в 1 см³)

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией

5.3. Вспомогательные устройства и материалы Хроматографическая колонка металлическая, длиной 150 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с ²

МУК 4.1.3158—14

привитыми полярными группами С^, зернение 5 мкм

Предколонка, длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми полярными группами C|g, зернение 5 мкм Сорбент для хроматографии Cjg Шкаф сушильный электрический с диапазоном рабочих температур от 50 до 200 °С ТУ 16.531.743—83 Центрифуга лабораторная с частотой вращения ротора от 500 до 2 700 об./мин для пробирок вместимостью 2 см³

Устройство очистки воды, позволяющее получать воду чистоты «для жидкостной хроматографии»

Баня водяная лабораторная от 15 до 100 °С

Стаканы В-1-50-ТС, В-1-600-ТС вместимостью

50 и 600 см³    ГОСТ 25336-82

Мешалка магнитная от 120 до 1 500 об./мин

Пробирки из полипропилена конические

градуированные вместимостью 15 см³

Шприц медицинский одноразовый типа Люэр

вместимостью 5 см³    ГОСТ    Р    ИСО    7886—2009

Фильтр мембранный целлюлозно-ацетатный с размером пор 0,45 мкм

Примечание. Допускается использование других вспомогательных устройств и материалов аналогичного назначения, технические характеристики которых не уступают указанным.

6. Требования безопасности

6.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на эксплуатацию жидкостного хроматографа.

6.2.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией и соответствовать требованиям пожарной безо- ³

МУК 4.1.3158—14

пасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83.

6.3. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и 2.2.5.2308—07.

7. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц, имеющих квалификацию не ниже инженера-химик а с опытом работы на жидкостном хроматографе, освоивших метод измерений и получивших удовлетворительные результаты оперативного контроля процедуры измерений.

8. Условия измерений

При приготовлении градуировочных растворов и подготовке проб к анализу соблюдают следующие условия:

-    температура окружающего воздуха (22 ± 2) °С;

-    атмосферное давление    от 84 до 106 кПа;

-    относительная влажность воздуха от 30 до 80 %.

Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в

условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды, приготовление растворов, подготовка хроматографической колонки, установление 1радуировочной характеристики.

9.1. Подготовка посуды

Используемую посуду вымыть мыльным раствором, промыть проточной водопроводной водой, многократно ополоснуть дистиллированной водой и высушить при температуре 50 °С.

9.2. Приготовление растворов

9.2.1. Раствор для элюирования А. В стакан вместимостью 600 см³ вносят 500 см³ дистиллированной воды, устанавливают на магнитную мешалку, помещают в раствор электроды pH-метра, небольшими порциями с помощью стеклянной пипетки вносят концентрированную фос- ⁴

МУК 4.1.3158—14

форную кислоту при перемешивании до установления pH 2,5. Срок хранения раствора 5 дней.

9.2.2.    Раствор для элюирования В. В мерный цилиндр 2-100-1 помещают 25 см³ метанола, доводят до 100 см³ ацетонитрилом, закрывают пришлифованной стеклянной пробкой, тщательно перемешивают. Срок хранения раствора 5 дней.

9.2.3.    Элюент для хроматографии. Состав элюента задают на двух каналах насоса: смешивают раствор для элюирования А и раствор для элюирования В в соотношении 94 : 6 % (объемная доля).

9.2.4.    Раствор 3-аминофенола, молярная концентрация 0,023 моль/дм³. В мерную колбу вместимостью 50 см³ помешают навеску 0,1255 г 3-ами-нофенола, растворяют в 40—45 см³ дистиллированной воды при температуре 40—50 °С, остужают до комнатной температуры, доводят дистиллированной водой до метки. Срок хранения раствора 30 дней в холодильнике при температуре А—6 °С.

9.2.5.    Раствор гидроксиламина соляно-кислого, молярная концентрация 0,043 моль/дм³. В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают навеску 0,1494 г гидроксиламина соляно-кислого, растворяют в 40— 45 см³ дистиллированной воды, доводят дистиллированной водой до метки. Срок хранения раствора 30 дней в холодильнике при температуре 4—6 °С.

9.2.6.    Раствор железа (III) сульфата, массовая концентрация 2,8мг/см³. В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают навеску 0,28 г железа (III) сульфата, девятиводного, растворяют в 50—60 см³ дистиллированной воды, добавляют 1 см³ серной кислоты концентрированной, доводят до метки дистиллировашюй водой. Срок хранения раствора не ограничен.

9.2.7.    Раствор серной кислоты в дистиллированной воде, 16% (объемная доля). В термостойкий стакан вместимостью 50 см³ помещают 10 см³ дистиллированной воды и 2 см³ серной кислоты концентрированной. Осторожно перемешивают, остужают до комнатной температуры. Срок хранения раствора не ограничен.

9.2.8.    Исходный раствор акролеина (раствор 1). В мерную колбу вместимостью 50 см* помещают 40—45 см³ спирта этилового, 50 мм³ чистого акролеина (с учетом плотности 42 мг) и доводят этиловым спиртом до метки. Массовая концентрация акролеина в исходном рас- ⁵

1

2

3

4

5