Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

18 страниц

396.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на все виды сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птицу и устанавливает методы лабораторной диагностики клостридиозов

Показать даты введения Admin

Страница 1

/gm-ss

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ КЛОСТРИДИОЗОВ

ГОСТ 26503-85

Издание официальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ Москва

Страница 2

РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР ИСПОЛНИТЕЛИ

Л. В. Кириллов, Л И. Сторэжев, Н. В. Звйцеа ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

Член Коллегии А. Д. Третъяков

УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 29 марта 1985 г. № 945.

Страница 3

УДК 636:576.1.07:004.354    Групп*    С79

Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ Методы лабораторной диагностики клострмдиоюа

ГОСТ

26503—85

Agricultural animals. Methods (or laboratory diagnostics of Clostridium

|СТ СЭВ 3456—81)

ОКСТУ 9809

Постановленном Государственного комитета СССР по стандартам от 2* марта 1905 г. N? 945 срок дометят установлен

с 0I.01.S6 до 01.01.91

Несоблюдение стандарта преследуется по *акоиу

Настоящий стандарт распространяется на все виды сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птицу и устанавливает методы лабораторной диагностики клостридиозов.

Стандарт обязателен для республиканских, областных (краевых) ветеринарных лабораторий н ветеринарных научно-исследовательских учреждений.

Методы биохимической идентификации клостриднй к определение типов токсинов Cl. botulinum проводят в научно-исследовательских учреждениях.

Стандарт соответствует СТ СЭВ 3456—81, кроме теста нмму-нофлуоресценцни и лицетнн-вятеллннового метода описания антигенной структуры клостриднй н питательных сред, не применяемых в нашей стране.

1. МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР КЛОСТРИДНЙ

Сущность метода заключается в выделении возбудителей клостридиозов животных путем посева проб патологического материала в жидкие питательные среды и постановке биологической пробы.

1.1.Метод    отбора проб

1.1.1.    Для диагностических исследований при подозрении на инфекционные болезни клострндиальной этиологии направляют в

Hiданне официальное ★

Перепечатка воспрещена

© Издательство стандартов, 1985


Страница 4

Стр. 2 ГОСТ 16503—8S

лабораторию свежие трупы ягнят, поросят, птиц и пушных зверей в целом виде. От трупов телят и взрослых животных отбирают кусочки паренхиматозных органов (печень, селезенка, почки), кровь из сердца, неоткрытую трубчатую кость.

При подозрении на инфекционную энтеротоксемню животных н анаэробную дизентерию ягнят дополнительно берут отрезок тонкого отдела кишечника с содержимым, концы которого перевязывают шпагатом; при подозрении на ботулизм отбирают пробы кормов, содержимого желудка и кровь от больных животных, при подозрении на столбняк — раневой экссудат и кусочки ткани из глубины раны; прн подозрении на эмфизематозный карбункул — кусочки пораженных мышц и отечный экссудат; при подозрении на некротический гепатит — кусочки печени с некротическими участками; при подозрении на брадзот — измененные участки сычуга и инфильтрат подкожной клетчатки; при подозрении на злокачественный отек — тканевой экссудат, кусочки пораженных мышц, и тканей, а прн поражении половых органов — истечение из влагалища н кусочки органов.

1.1.2.    Содержимое желудка и кишечника направляют в лабораторию после консервирования хлороформом (одна капля на 10 см* патологического материала). Допускается пересылать неконсервированный патологический материал, а также консервированный в стерильном 30—40%-ном растворе глицерина.

1.1.3.    Отобранные пробы должны быть доставлены в лабораторию не позднее 4 ч с момента гибели животного, а консервированные — в течение 1—2 сут.

1.2. Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения исследования применяют: микроскоп биологический; микроскоп стереоскопический; термостат с температурой нагрева 37—38 °С; мнкроанаэростат; холодильник бытовой; насос вакуумный; потенциометр или рН-метр; центрифугу с частотой вращения 5 тыс. об/мин; пипетки стеклянные мерные вместимостью от 1 до 10 см* по ГОСТ 20292-74;

чашки Петри по ГОСТ 23932-79;

пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

раствор генциан-виолета или кристалл-виолета карболовый;

раствор Люголя;

лакмус 1 %-иый раствор;

фуксин карболовый Циля;

кислоту карболовую (фенол) кристаллическую по ГОСТ 6417-72;

Страница 5

ГОСТ ЦЩ—Ц Стр. 3

агар микробиологический по ГОСТ 17206-84 или

агар пищевой по ГОСТ 16280-70;

пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-76;

спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67;

зелень малахитовую 1 %-ный раствор;

кровь барана стерильную;

желатин пищевой по ГОСТ 11293-78;

глицерин по ГОСТ 6259-75;

Д-глюкозу по ГОСТ 6038-79;

сахарозу по ГОСТ 5833-75;

маннит;

салицин;

мальтозу;

галактозу;

среды питательные для культивирования анаэробов: бульон мясо-пептонный печеночный под вазелиновым маслом (среда Китта-Тароцци);

агар мясо-пептонный печеночный с добавлением 0,5% глюкозы и 5 % дефнбриннрованной стерильной крови барана; среды питательные для культивирования аэробов: бульон мясо-пептонный по ГОСТ 20730-75; агар мясо-пептонный;

воду 2%-ную пептонную с добавлением одного из используемых углеводов или многоатомных спиртов.

1.3. П р о в еде н не исследования

1.3.1.    Из отобранных проб патологического материала делают мазки-отпечатки, которые окрашивают по Граму. Присутствие многочисленных грамположительных палочек и спор позволяет предположить наличие возбудителей клострнднозов (см. табл. 1).

1.3.2.    Из отобранных проб патологического материала делают посевы в жидкую питательную среду, используемую для культивирования анаэробных микроорганизмов, а также в МПБ и на МПА. Перед иосегом пробирки и флаконы с МППБ выдерживают в кипящей водяной бане в течение 15—20 мин для удаления растворенного в среде воздуха, а затем охлаждают их путем постепенного добавления холодной воды в водяную баню. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37—38°С в течение 24—48 ч, а при подозрении на столбняк и ботулизм посевы делают в два флакона, один из которых прогревают при 80°С в течение 1 ч и инкубируют в течение 2—5 сут.

При появлении характерных признаков роста (помутнение среды, газообразование) делают дробный посев полученных культур на 3—5 чашках Петри с мясо-пептонным печеночным агаром, в который добавляют 0,5 % глюкозы и 5 % стерильной дефибри-ннрованной крови барана к объему среды. Чашки помешают, не переворачивая, в микроанаэростат или эксикатор, из которого

Страница 6

Таблица 1

Культурально-морфологические свойства возбудителей клостридйодов

Назм«и<

воЛудитсл»

Окраска IlO I piny

Морфоло.яп

микробов

•3*орыа спор и кх расположение

Оптимум разрнме-нив воздуха. мм

рТ. С7.

X а Интернет*** роста и а среде К»гга Тароиин

Харачт*рнст*ка колочии на ixKiKOx» Kpw.j«HOM агаре ЦсДсслсрл

1. Cl. chauvoei

+

Неравномерно окрашенные изолированные ПАЛОЧКИ. иногда соединенные по три, четыре вместе

От продолговатой до Круглой, расположены центрально или субтер-минально нлн лежат свободно

5—10

Равномернее слабое помутнение и газообразование, через 24 ч бульон просветляется

Круглые плоские приподнятые с роннимн краями, напоминающие перламутровую пуговицу или форму виноградного листа, окру-жены узкой зоной прозрачного гемолиза (IV форма)

2. Cl. scpticum

+

Изолированные палочки с закругленными концами, и мааках-отпечзт-ках с серозных оболочек—нити

Опальные, расположены субтермина-лъио или центрально

8-15

Интенсивное помутнение, обильное газообразование

Нежный бесцветный, вуэлеобразный налет с микроскопически изрезанными краями и часто с 1*ежиыми отростками, колонии окружены зоной гемолиза (III форма)

3. Cl. perfrln-genn

-r

Толстые полочки со слегка закругленными концами, расположены одиночно

Овальные, расположены субтермнналь-ио или центрально. В маьквх из свежего тру-п и молодых культур спор не обнаруживают

40

Раннее помутнение и бурное интенсивное газообразование

Окрутлыс, гладкие, выпуклые серовато-зеленые колонии. Гемолиз сильный, грязно-хорнч-невого ць*та, имеет две зоны. Среда бурокорич-неэого цвета (1 форма)

Страница 7

ьохбудстьлч

Окрлс-КО no Граму

M0p4C.1i>rHt

кикробо»

Форм* спор II ях расположение

4. Cl. ое(1еп)л-tien$

h

Крупные полиморфные палочки с закругленными или обрубленными конца-ми, расположены одиночно, редко попарно иди цепочками нл 3—4 члеников

Овальные, расположенные субтерминально или центрально

5. Cl. sorddlii

+

Крупные полиморфные палочки с закругленными концами, расположены чаше цепочками по 2—4 членика

Овальные, расположены субтерминально НЛП центрально

6. Cl. hLstoly-tkum

+

Стройные тонкие палочки с закругленными концами, расположены одиночно. попарно, редко цепочками

Овальные,

расположены

субтерми-

нальио

(«Игольное

ушко»)

Продолжение табл. !

Оптямум разряде-ллц *>*■

духе. MV

рт. ст.

Хярдктеристск* росте не средс КвттвТарэазм

XaptKTftplClWC* КОЛОвна

на гл«:-*озо-кроямчом

аг#р« ЦгЛслсра

3-5

Росг более интенсивный внизу, через 18— —24 ч бульон просветляете, ■а дне выпадает хлопьевидный осадох. газообразование слабое

Шероховатые, корневидные» складчатые с изрезанными краями и выпуклый темным центром. гемолиз сильный, прозрачный, по может отсутствовать (11 форма)

8—15

Помутнение более интенсивное внизу, умеренное газообразование; при ста рении культур — слизистый осадок

Неправильной формы, корневидные, складчатые, с сероватой шероховатой поверхностью н изрезанными краями, гемолиз сильный, но может отсутствовать (II форма)

8-15

Интенсивнее помутнение без газообразования

Мелкие, круглы#, гладкие колонии с ровными краями, гемолиз отсутствует, иногда незначительный (VIII форма)

ГОСТ 26503—«5 Стр.

Страница 8

ооИудмтсля

Окрлс ка по Грлну

Морфологи*

ммхробоа

Форм! спор И MX расположен и«

7. Cl. sporo-genes

+

Палочки с закругленными концами, расположены одиночно, иногда цепочками

Овальные, расположены субтсрминально или центрально. Образование спор происходит очень быстро, п мазка* «з культур почти у всех палочек обнаруживают споры

8. Cl. botull-num

+

Толсти с палочки с закругленными конца* мн. расположены попарно, иногда в аиле цепочек

Овальные, круглые, расположены субтермнналь-но, редко центрально

9. Cl. tetani

+

Тонкая палочка со слегка округленными концами

Круглые шарообразные, расположены субтермнналъ-но, напоминают барабанные палочки

Прсдо.гжение табл. /

Л

*

Характерястмка рост* ка среда КяттаТарюцця

Опте X ум ра>ря*с ним воздух*. мм

рт. ст.

Характеристика кодом я а ка глк«ою кропяком агаре ЦеАссдера


Рост обильный, кусочки печени обволакивают слизистым осадком, верх среды прозрачный, газообразование слабое. Культура издает неприятный ГНИЛОСТНЫЙ запал

15-20

Рост медленный. через 36— —48 ч появляется интенсивная муть, которая постепенно оседает на дно. после чего бульон просветляется

3-5

Равномерная

3—15

муть с незначительным газообразованием, через 4&—72 ч столбик просветляется, издает запах жженого рога

Вязкие с изрезанными краями, напоминающие корневище, погружены в агар, поверхность млтоиам с желтоватым центром, зона гемолиза интенсивная резко    ограниченная

st—costs

(VI форма)

Круглые. шероховатые или корневидные нежно-серые колонии, гемолиз прозрачный (II форма)

Нежные колонии, центр слегка приподнят, от краев отходят неправильные отростки, гемолиз прозрачный (II или III форма)


Страница 9

ГОСТ 26503—(5 Стр. 7

удаляют воздух при помощи вакуум-насоса и выдерживают в термостате при температуре 37—38 °С в течение 12—48 ч. Полученные отдельные колонии, которые по структуре напоминают колонии клостридий, определяют по формам роста по Цсйсслеру и отвивают в жидкие питательные среды, которые инкубируют при температуре 37—38 °С в течение 24—48 ч.

При получении второй генерации посев делают также и на среды, предназначенные для культивирования аэробной микрофлоры (МПБ, МПЛ). Для дальнейшей работы отбирают культуры, которые не дают роста в контрольных посевах (МПБ, МПА).

Для ускорения работы допускается посев проб патологического материала па твердые питательные среды в чашках Петри. Дальнейший отбор выросших колоний делают так же, как и при пересеве с жидкой питательной среды.

1.3.3. Патологический материал очищают путем пассажа через морскую свинку. Для этого измельченный в ступке материал или первичный посев материала в жидкой питательной среде вводят подкожно в области брюшных мышц или внутримышечно морской свинке массой 350—450 г в объеме 0,5—1,0 см*.

Животных, павших в течение 72 ч, вскрывают, учитывают па-тологоанатомнческую картину (см. табл. 2), а из места введения крови, взятой из сердца и печени, делают посевы в жидкие и на твердые питательные среды, а также мазки-отпечатки с мест посева и диафрагмальной поверхности печени.

Таблица 2

Патололзаиатомическая картина у морских свинок

Нагывч? (тип) иоэбудатеда ■д острид«о»о»

Патологоаиатомачсскне iijue-eun.

Cl. perfrlngens

тип Л — возбудитель злокачественного отека, редко энтероток-семпи

тип Д — возбудитель энтеротоксемии

Cl. perfringens

тип В — возбудитель дизентерия ягият

тип С — возбудитель эитероток-семии

Cl. ehauvoel возбудитель карбункула

эмфизематозного

Кожа на месте инъекции часто отслаивается от мускулатуры, образуя мешок. .Мышцы имеют вид вареного мяса, серовато-грязного цвета (более выражено при заражении типом А). Кишечник лздут. сосуды инъецированы

Кожа на месте инъекции легко отделяется, ио не отслаивается. Мускулатура сухая. красного цвета различных оттенков. Кишечник вздут, геморрагически воспален. иногда образуются язвы (тип В)

На коже наблюдают серозно-геморрэги-ческнА выпот. Кожа с тоудом отделяется от измененных мыши. Мышцы грудн н брюшного пресса влажны, темно-красного цвета. Кишечник остается неизмененным


Страница 10

Стр. 8 ГОСТ 2(103—IS

Продолжение табл. 2

Название (тип) xco6ysim.it клее тр« диодов

Гитолоюанатоыхчссхкс взысгеявя

Cl. septicuni

возбудитель бра дзота, злокачественного отска

Cl. oedcmatiens

возбудитель некротического гепатита, злокачественного отека

Cl. histolytlcum

возбудитель злокачественного отека

Cl. sordellii возбудители го отека

Cl. sporogencs

злокачественно-

Cl. botulinum возбудитель ботулизма

Cl. tetani

возбудитель столбияка

Кожа легко отделяется от мышц. Мышцы и подкожная клетчатка светло-красного или розового цвета, в подкожной клетчатке большое количество пузырьков газа. Кншечннк вздут, наполнен разжиженными массами, содержащими пузырьки газа, сосуды инъецированы. В грудной полости и сердечной сорочке обнаруживают значительное количество транссудата

На месте инъекции наблюдается желатинозный, студенистый отек от желтоватого до слабо-розового цвета. Мышцы бледные.

При заражении в мышцу бедра кожа красно-фиолетовая, напряжена, иногда лопается. Мышцы теряют свою структуру, расплавляются и превращаются в кашицеобразную массу с примесью сгустков крови. Мягкие ткани отделяются от костей и сосудов. Газ не образуется, гнилостного распада нет

На месте инъекции наблюдается желатинозный студенистый отек от желтоватого до слабо-розового цвета. Мышцы бледные

Патогенен в ассоциации с другой микрофлорой

Плтологоаиатомические изменения не

характерны

Патологоанатомнческис изменения не характерны


1.3.4. В качестве дополнительных тестов для идентификации культур Cl. chauvoei и Cl. septicum используют результаты исследования мазков-отпечатков с диафрагмальной поверхности печени морских свинок: при наличии С!, septicum обнаруживают удлиненные формы в виде нитей, Cl. chauvoei — одиночные короткие палочки; заражение кроликов культурой Cl. chauvoei не вызывает их гибели.

J. МЕТОД БИОХИМИЧЕСКОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ

Сущность метода заключается в определнии вида клостридий на основе изучения их ферментативных свойств.

2.1. Метод отбора проб

Страница 11

ГОСТ 26503—«5 Стр. 9

2.1.1.    Для проведения исследования используют чистые культуры анаэробных микроорганизмов, выделенные из патологического материала путем отбора характерных колоний, по п. 1.3.

2.2.    Аппаратура, материалы и реактивы

2.2.1.    Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы н реактивы, приведенные в п. 1.2 с дополнением:

цельное молоко;

набор полужидких питательных сред с добавлением соответствующих углеводов или многоатомных спиртов.

2.3.    Проведение исследования

2.3.1.    Культуры 12—24 ч роста засевают в пробирки с желатином, мясо-пептонным бульоном, молоком, с набором питательных сред с добавлением углеводов или многоатомных спиртов.

2.3.2.    Результаты исследования оценивают ежедневно в течение 7 сут в соответствии с требованиями, приведенными в табл. 3.

J. МЕТОД БИОЛОГИЧЕСКОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ

Сущность метода заключается в обнаружении возбудителей и их токсинов в патологическом материале. Данный метод используется так же для определения токсигенных и вирулентных свойств выделенных культур клостриднй.

3.1.Метод    отбора проб

3.1.1.    Отбор н подготовка проб проводится в соответствии с пп. 1.1.1; 1.1.2; 1.1.3.

3.2.    Аппаратура, материалы и реактивы

3.2.1.    Для проведения исследований применяют аппаратуру, материалы и реактивы, приведенные в п. 1.2 с дополнением:

сыворотки Cl. perfringens антитоксические типов А, С, D, Е;

сыворотки Cl. botulinum антитоксические типов А, В, С, Е и F.

3.3.    П р о в е д с н и е исследований

3.3.1.    Обнаружение токсина С/, perfringens в содержимом кишечника

3.3.1.1.    В зависимости от консистенции материала содержимое кишечника разводят физиологическим раствором 1:1 или 1:2. Смесь выдерживают нрн комнатной температуре в течение 1 ч. Затем фильтруют через ватно-марлевый фильтр и центрифугируют 20 мин при 3—5 тыс. об/мин. Полученную надосадочную жидкость проверяют на токсичность путем внутри венного или внутрибрюшин-ного введения двум белым мышам массой 16—18 г в дозе 0,5 см5 или внутривенного введения кролику массой 1,8—2,0 кг в дозе 1,0—1,5 см*. При наличии токсина животные погибают в течение 12 ч, а в случае гибели в более поздние сроки (до 24 ч) проводят бактериологическое исследование с целью исключения сопутствующих инфекций.

Страница 12

Таблица 3

Фериеитатнвныс свойства патогенных к.кхтридмн

Питательные среды

в«д

М4КрООрГ4И*3«вО»

Жматм

Сероводород

Молоко

Гаю-

ком

Саха.

рол

Маиикт

Гди чер*м

Салацци

Мальто>а

Гадактоаа

Ка перфрин-

Разжижа

Не выдс-

Быстро

+

+

+/-

__

ь

+

геис

ет на 3—5

ляет

свертывает

Cl. perfringens

сут

К л ч атиен<*

Нр ППГТЛ.

Свертывает

4-

'

4./_

-

■\/|. Wvwaiwviiv

Cl. oedematiens

г aJiXMma-

Т

***'

т /

п на 2—4 сут

ЯННО

Кл. ссотнкум

Разжижа

Не посто

Свертывает

+

+

+

Cl. seplicum

ет на

2—4 сут

янно

Кл. Шово

Разжижа

Не выде

Медленно

+

+

+

+

Cl. chauvoei

ет на

ляет

свертывает

2—6 сут

Кл. тегаин

Разжижа

Выделяет

Пептони-

4 /-

Cl. (etani

ет на

2—4 сут

зацня

Кл. ботулннн-

Разжижа

Выделяет

Пептони-

+

+Л-

+/-

+/-

У*

ет на

зацня

Cl. botulinum

2—4 сут

Кл. хистолиги-

Разжижа

Не посто

Псптони-

кум

ет

янно

зацня

Cl. IiSstoIytl-

cum

Кл. сордедлин Cl. sordellii

Разжижа

ет

hfe постоянно

Свертыва

ет

+

Кл. спорогенес

Разжижа

Выделяет

Пептоннза-

-

• -

Cl. sporogenes

ет

цня

Стр. 10 ГОСТ 24МЗ—М

полная ферментация:

непостоянная или частичная ферментация; ферментация отсутствует.

Страница 13

ГОСТ Ю01—«5 Стр. 11

3.3.2.    Определение токсичности выделенных культур

При определении токсичности Cl. perfringens используют популяции микроорганизмов, выращенных в течение 8—16 ч в МППБ с добавлением 0,5 % глюкозы к объему среды.

При определении токсичности культур типов D и Е их подвергают активации добавлением 0,5 % панкреатина или 0,25 % трипсина при pH 8,0—8.2, который устанавливают путем подщелачи-вания 10 %-ным раствором NaOH. Смесь культуры с ферментом выдерживают при температуре 37—38°С в течение 1—2 ч. После активации токсичность культур типов D и Е значительно увеличивается, а токсичность культур типа С резко снижается. Токсичность культур типа В может сохраниться на прежнем уровне за счет активации эпсилон-токсина. Определение токсичности проводят на белых мышах в соответствии с п. 3.3.1.

3.3.3.    Обнаружение токсина Cl. botulinume патологическом материале

Пробы корма, содержимое желудка, кусочки печени и дру-rr.fi материал исследуют раздельно. Для этого пробу массой 25— 30 г растирают в ступке со стерильным песком и заливают равным или двойным количеством физиологического раствора. Полученную взвесь выдерживают 2 ч при температуре 20—22 °С, после чего центрифугируют 30 мни при 3 тыс. об/мин. Надосадоч-ную жидкость делят на две части и одну прогревают в кипящей водяной бане в течение 30 мин. Каждым фильтратом (гретым и негретым) заражают по две белых мыши массой 16—18 г каждая или двух морских свинок массой 300—350 г каждая. Белых мышей заражают внутривенно или внутрнбрюшинно в дозе 0,5—0,8 см\ морских свинок подкожно в дозе 3—5 см5 (одной свинке гретый фильтрат, другой — негретый). Кровь больных животных вводят сразу после взятия внутрнбрюшинно двум белым мышам или подкожно морской свинке в дозах, указанных выше.

При наличии ботулинического токсина животные, зараженные некипяченым материалом, погибают через 2—5 сут с характерной клиникой ботулизма (шаткая походка, учащенное дыхание, расслабление мускулатуры, западание брюшной стенки — «осиная талия»). Животные, которым вводили кипяченый материал, остаются здоровыми.

3.3.4.    Определение токсичности выделенных культур Cl.botu-linum

При определении токсичности культур Cl.botulinum используют популяции микроорганизмов, выращенные на МППБ с добавлением 0,5% глюкозы, в течение 5—7 сут. Микробные клетки отделяют фильтрованием или центрифугированием, Фильтрат или иентрифугат вводят внутрнбрюшинно двум белым мышам в дозе 0,5—1,0 см* или морской свинке в дозе 3,0—5,0 см*. При наличии

Страница 14

Стр. 12 ГОСТ 24503—tS

токсина животные погибают на 2—6 сут с характерной клиникой ботулизма.

3.3.5.    Обнаружение токсина Cl.tetanl в патологическом материале

Суспензию материала вводят подкожно в лапку двум белым мышам или двум морским свинкам в дозе 0,5—1,0 см*. При наличии токсина у животных в течение 3—5 сут развивается характерная клиника столбняка.

3.3.6.    Определение токсичности Cl. tetani

Токсичность штампов Cl. tetani устанавливают на белых мышах массой 16—18 г каждая или на морских свинках. Фильтрат 10— 12-суточной культуральной жидкости вводят в лапку подкожно двум белым мышам или двум морским свинкам’ в дозе 0.5—1,0 см*. При наличии токсина у животных в течение 3—5 сут развивается характерная клиника столбняка.

3.3.7.    Обнаружение токсина Cl.oedematiens в патологическое материале при подозрении на некротический гепатит

Кусочки печени с некротическими очагами в количестве 25—30 г измельчают в ступке и заливают равным количеством физиологического раствора. Полученную взвесь выдерживают 2 ч при температуре 20—22 вС, после чего центрифугируют 20 ми» при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость вводят внутрибрюшин-но или подкожно двум белым мышам в дозе 0.5—1,0 см*. При наличии токсина животные погибают в течение 24—72 ч.

3.3.8.    Определение токсичности выделенных культур Cl.oedematiens

Токсичность культур устанавливают па двух белых мышах,, которым внутривенно или внутрнбрюшинно вводят фильтрат двухсуточных исследуемых культур. При наличии токсина гибель белых мышей наступает через 24—72 ч.

3.3.9.    Обнаружение Cl.chauvoei в патологическом материале

Кусочки пораженных мышц измельчают и растирают в ступке

с песком и небольшим количеством мясо-пептонного бульона, в равномерную взвесь. Полученную взвесь в разведении 1:5—1:10-вводят подкожно в области брюшных мышц двум морским свинкам массой 350—400 г в дозе 0,5—1,0 см*. При наличии Cl.chau-voei животные погибают в течение 24—96 ч.

Мышечный экссудат вводят таким же способом в дозе 0,5— 1,0 см*. У павших свинок отмечают характерную для эмфизематозного карбункула патологоанатомическую картину (см. п. 1.3.3)..

3.3.10.    Определение патогенности культур Cl.chauvoei

Патогенность культур Cl.chauvoei устанавливают путем подкожного заражения двух морских евпнок массой 350—400 г каждая, которым вводят 18—24 ч культуру возбудителя эмкара в дозе 0,5—1,0 см‘. Животные погибают в течение 24—48 ч с характер--

Страница 15

ГОСТ 26WJ—Ы Стр. 13

нон для эмфизематозного карбункула патологоанатомической картиной (см. п. 1.3.3).

3.3.11.    Обнаружение Cl. septicum и других возбудителей злокачественного отека и брадзота в патологическом материале

Кусочки пораженных тканей или другой патологический материал (паренхиматозные органы, часть стенки сычуга и др.) измельчают н растирают в ступке с песком и небольшим количеством мясо-пептонного бульона. Полученную гомогенную взвесь вводят подкожно в область брюшных мышц двум морским свинкам в дозе 0,5—1.0 с*!1. При наличии в материале Cl. septicum и других возбудителей животные погибают через 18—36 ч с характерной патологоанатомической картиной (см. п. 1.3.3).

3.3.12.    Определение патогенности культур С/. septicum

Патогенность культур Cl. septicum устанавливают путем заражения двух морских свинок массой 350—400 г каждая, которым культуру суточного инкубирования в среде Китта-Тароццн вводят подкожно в область брюшных мышц в дозе 0,5—1,0 см‘. Животные погибают через 18—24 ч с характерной патологоанатомн-чсской картиной (см. п. 1.3.3).

4. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ТИПОВ ЛЕТАЛЬНЫХ ТОКСИНОВ

Cl. perfringens и Cl. botulinum

4.1.    Типы основных летальных токсинов Cl. perfringens н Cl. Ьо-lulimim устанавливают в реакции нейтрализации их типовыми антитоксическими сыворотками.

4.2.    Постановка реакции нейтрализации с диагностическими антитоксическими сыворотками Cl. perfringens типов А, С, D, и Е.

Реакцию нейтрализации используют для определения типа основных летальных токсинов Cl. perfringens в содержимом кишеч-инка павших животных и в фильтратах или центрифугатах культур микроорганизмов указанного вида типов А, В, С, D, Е и F.

Реакцию ставят на белых мышах или морских свинках, нлн кроликах. При постановке реакции на мышах результаты оцениваются по гибели или выживанию животных, обработанных смесью сывороток и токсина. При использовании морских свинок или кроликов определяют наличие или отсутствие дерманскротического действия смесей сывороток и токсина на месте их внутрикожного введения. Для этого у животных удаляют шерсть на боку (ближе к сагитальной линии) и на следующий день в это место вводят смеси сывороток и токсина.

4.2.1. Для определения типа основного токсина исследуемый материал разливают по 1,0 см1 в пять пробирок и добавляют по 1,0 см* сыворотки каждого типа: в первую пробирку сыворотку типа А, во вторую — типа С, в третью — типа D, в четвертую — типа Е (активность сывороток каждого тнпа предварительно дово-

Страница 16

Стр. 14 ГОСТ 34W)—IS

дят стерильным физиологическим раствором до 10 АЕ), в пятую добавляют 1 см* физиологического раствора (контроль). Смесь сывороток и исследуемого материала после выдерживания при 37—38°С в течение 30 мин вводят по 0,5 см* внутривенно или внутрибрюшинно двум белым мышам или внутрикожно по 0,2 см* морской свинке или кролику. Одновременно в тех же дозах вводят испытуемую культуру без сыворотки (контроль). Для каждой смеси используют отдельный шприц. Наблюдение за животными ведут в течение 48 ч.

4.2.2. Результаты реакции нейтрализации учитывают при гибели контрольных белых мышей или образовании некроза в контроле у морской свинки (кролика).

Животные, получившие смесь токсина с гомологичной сывороткой. остаются живыми, а у морских свинок и кроликов некроз не развивается. Опенку результатов проводят в соответствии с табл. 4.

Таблица 4

Определение типа основного токсина Cl. perfrlngens

Тип культур Cl. perlrlageeai

ОсмоааоА

токсин

Антитоксические смюротяи

тип*

Коигро ь

А

С

D

е

А

Альфа

Н

н

н

+

С(В. F)

Бета

+

+

+

+

D

Эпсилон

+

+

+

Е

Йота

4-

+

+

+

+ — белые мыши пали, у морских свинок и кроликов некрозы на месте введения.

— — белые мыши живы, у морских свинок и кроликов некрозы отсутствуют.

Н — результаты не учитывают.

4.3. Тип летального токсина Cl.botulinum определяют в реакции нейтрализации антитоксическими сыворотками типов А, В, С, Е и F.

Реакцию ставят по схеме: исследуемый материал по 2,4 см* разливают в шесть пробирок, в пять из которых добавляют по 0,6 см* типовых сывороток: в первую — типа А, во вторую — типа — Вит. д., в шестую пробирку такой же объем физиологического раствора. Смесь сывороток с исследуемым материалом выдерживают в течение 30 мни при температуре 35—37°С и по

Страница 17

ГОСТ 2(М3—IS Стр. 15

0,8—1,0 см4 вводят подкожно двум белым мышам. Результаты реакции нейтрализации учитывают в течение 4 сут. Животные, которым исследуемый материал ввели в смеси с гомологичной сывороткой, остаются живыми, а остальные погибают с клиническими признаками ботулизма.

Страница 18

Редактор И. В. БоЛкова Технический редактор В. И. Прусакова Корректор Е. И. Евтеева

■Сдан» в 11£бор 17.04 36 Поли, к пе«. 26 04» 1.0 уел. п. я. 1.25 уел. хр.отт. 1.0» уя.-им. я.

Тираж 13000 Цеиа S кол

Ордена «Знак Поч*Т*» Издательство стоял и ртов. 123840. Москва, ГСП. Hcaoapccneacuft пер.. 3.

Калужская типография стандартов, у*. Московская. *56. Зав. 1260