ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ. БУЛЬОН МЯСО-ПЕПТОННЫЙ (ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНЫХ ЦЕЛЕЙ)

ГОСТ 20730-75

Издание официальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СТАНДАРТОВ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР

Москва

РАЗРАБОТАН Всесоюзным Государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов

Директор Бойко А. А.

Руководитель темы: Простяков А. П.

Исполнители темы: Агапова 3. А., Цыганкова С. И., Голикова Г. А.

ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

Член коллегии Третьяков А. Д.

ПОДГОТОВЛЕН К УТВЕРЖДЕНИЮ Всесоюзным научно-исследовательским институтом стандартизации (ВНИИС)

Директор Гличев А. В.

УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 апреля 1975 г. № 899

ГОСТ 20730-75 Стр. 9

доводят в мерной колбе до 1 л, фильтруют через бумажный фильтр и хранят в темной склянке с притертой пробкой в темном месте. Реактив Д должен быть соломенно-желтого цвета без зеленого оттенка, затем в реактиве определяют концентрацию кислоты. Для этого приготовленный реактив разводят дистиллированной водой 1 : 10 (1 мл реактива и 9 мл воды) и титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия по фенолфталеину (3—4 капли). Кислотность рассчитывают делением количества миллилитров 0,1 н. щелочи, израсходованного на титрование 1 мл реактива Д, на 10. Реактив Д имеет кислотность 1,6—2,3 Н.

Приготовление реактива Е

Реактив Е является реактивом Д, разведенным до 1 н. раствора. Например, если реактив Д является 2,3 н. раствором кислоты, то для приготовления 1 н. раствора Е надо брать 10 мл реактива Д и 13 мл дистиллированной воды

Построение градуировочного графика для определения белка

Готовят ряд растворов с определенным содержанием белка нисходящей концентрации от 0,10 до 0,01%, с которыми ставят цветную реакцию по п. 3.8.3. Для приготовления растворов можно использовать альбумин, миозин, нативную сыворотку. Содержание белка в растворах определяют по Кьельдалю. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре против воды Из оптической плотности растворов белка вычитают оптическую плотность контроля на реактивы и полученную величину откладывают по оси ординат. По оси абсцисс откладывают концентрацию белка в растворе (в процентах или в миллиграммах).

Разведение исследуемого образца для постановки цветной реакции выбирают такое, чтобы основное количество замеров по ве личине оптической плотности лежало в пределах 0,2—0,8, где точность измерения наиболее высокая.

3.8 3. Проведение испытания

В пробирку наливают 1 мл разведенного 1 : 10 мясо-пептонного бульона, добавляют 5 мл реактива С, перемешивают и через 10 мин добавляют 0,5 мл реактива Е. Одновременно ставят конт роль на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона берут 1 мл дистиллированной вэды и добавляют те же реактивы, что и в пробирку с мясо-пептонным бульоном. Смесь хорошо перемешивают и ставят в темное место на 30—40 мин.

Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре с красным фильтром (630—640 нм) против воды в 5-миллиметро-вых кюветах. Из величин оптической плотности испытуемого образца вычитают величину оптической плотности контроля на реактивы. По полученным значениям оптической плотности растворов с помошью градуировочного графика определяют содержание бел-

Стр. 10 ГОСТ 20730-75

ка в пробах. При расчете содержания белка в пробе учитывают кратность разведения перед постановкой цветной реакции.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,05%.

3.9. О п р е д е л е н и е содержания хлорида натрия

3.9.1.    Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют: весы аналитические;

элемент нагрева (горелку, плитку); пипетки по ГОСТ 1770-64; бюретки по ГОСТ 1770-64; стаканы лабораторные по ГОСТ 10394-63; квасцы железоаммонийные по ГОСТ 4205-68, насыщенный ра~ створ;

калий роданистый по ГОСТ 4139-55 или аммоний роданистый по ГОСТ 3768-64, 0,1 н. раствор;

кислоту азотную по ГОСТ 4461-67, концентрированную; серебро азотнокислое по ГОСТ 1277-63, 0,1 н. раствор; воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

3.9.2.    Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон в количестве 20 мл помещают в стакан и добавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты и 10 мл 0,1 н. раствора азотнокислого серебра.

Полученную смесь нагревают до начала кипения и быстро охлаждают путем погружения стакана в сосуд с водой комнатной температуры. После охлаждения к смеси добавляют 2 мл насыщенного раствора железоаммонийных квасцов и титруют 0,1 н. раствором роданистого калия (или роданистого аммония) до появления желтовато-розового окрашивания.

3.9.3.    Обработка результатов

Содержание хлорида натрия в мясо-пептонном бульоне (Х₃) в процентах вычисляют по формуле

(У_к—У_гК_х) 0,005844-100

где V — количество 0,1 н. раствора азотнокислого серебра, взя* тое в стакан с пробой, мл;

К — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора азотнокислого серебра;

Vi — количество 0,1 н. раствора роданистого калия (или роданистого аммония), израсходованное на титрование испытуемой пробы, мл;

ГОСТ 20730-75 Стр. 11

К\ — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора роданистого калия (или роданистого аммэния);

0,005844 — количество хлэрида натрия, соответствующее 1 мл 0,1 н. раствора азотнокислого серебра;

V₂ — количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, мл.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,01%.

3.10.    Определение концентрации водородных ионов (pH)

3.10.1.    Аппаратура и материалы

Для проведения испытания применяют: рН-метр;

стаканы лабораторные по ГОСТ 10394-63; воронки стеклянные; фильтры бумажные.

3.10.2.    Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон фильтруют через бумажный фильтр и в прозрачном фильтрате определяют pH по инструкции, приложенной к рН-метру.

3.11.    Определение стерильности

3.11.1.    Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют: термостат с температурой нагрева 37—38°С; автоклав;

флаконы вместимостью 200 мл;

пипетки по ГОСТ 1770-64;

пробирки стеклянные по ГОСТ 10515-63;

воронки стеклянные;

пробки ватномарлевые;

фильтры бумажные;

пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-68; агар микробиологический по ГОСТ 17206-71.

3.11.2.    Подготовка к испытанию

Готовят в соответствии с действующей рецептурой, мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА) и мясо-пептон-ный-печеночный бульон (МППБ) под маслом (среда Кип-Тар оц-ци). Среды разливают по 8—10 мл в проблрки, закрывают ватномарлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/см².

3.11.3.    Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон (всю серию) в реакторе или в бутылях выдерживают в течение трех дней при комнатной температуре.

Взятую стерильно пробу мясо-пептонного бульона расфасовывают по 100 мл в четыре флакона вместимостью 200 мл. Затем высевают мясо-пептонный бульон в пробирки с МПБ, МПА и МППБ. Посевы производят в 6—8 пробирок с каждой средой. Посев производят добавлением в каждую пробирку по 0,2 мл испытываемого мясо-пептонного бульона. Пробирки и флаконы выдерживают в течение трех дней в термостате при температуре 37—38°С. Среды в пробирках и мясо-пептонный бульон во флаконах должны оставаться стерильными.

3.11.4. Обработка результатов

При наличии роста микрофлоры в реакторе или бутылях серия мясо-пептонного бульона бракуется. При наличии роста микрофлоры во всех флаконах и пробирках серия мясо-пептонного бульона также бракуется.

При наличии роста микрофлоры в одном флаконе или в одной-двух пробирках контроль на стерильность повторяют на удвоенном количестве флаконов а пробирок. При повторном росте микрофлоры серию мясо-пептонного бульона бракуют.

3.12. Определение способности поддерживать рост микробов

3.12.1.    Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют: весы технические;

термостат;

автоклав;

рН-метр;

пипетки по ГОСТ 1770-64;

бюретки по ГОСТ 1770-64;

пробирки стеклянные по ГОСТ 10515-63;

воронки стеклянные;

пробки ватномарлевые;

фильтры бумажные;

пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-68; агар микробиологический по ГОСТ 17206-71.

3.12.2.    Подготовка к испытанию

Готовят согласно действующей рецептуре на основе испытуемого мясо-пептонного бульона мясо-пептонный агар, добавляя к бульону 2% микробиологического агара, и устанавливают pH среды 7,4.

Испытуемый мясо-пептонный бульон и приготовленный мясо-пептонный агар разливают по 8—10 мл в пробирки, закрывают ватномарлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/см².

ГОСТ 20730-75 Стр. 13

3.12.3.    Проведение испытания

Стерильный мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный агар засевают суточными культурами: Staphylococcus aureus «Лассма-нов», Esherichia coli, штамм 675, Streptococcus faccalis, штамм 6783, полученными из Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских препаратов им. Л. А. Тарасевича. Посев каждой культуры производят пастеровской петлей в три пробирки с МПБ и в три пробирки с МПА. Инкубацию проводят в течение 24 ч в термостате при 37—38°С.

Рост культуры должен быть типичным и обильным.

3.12.4.    Обработка результатов

Типичность роста суточных культур определяют визуально и под микроскопом.

Интенсивность роста на МПА оценивают визуально, в МПБ — визуально и на фотоэлектроколориметре при длине волны 620— 640 нм в кюветах с рабочей длиной 5 мм.

4. РАСФАСОВКА, УПАКОВКА, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

4.1.    Мясо-пептонный бульон стерильно расфасовывают в стеклянные бутыли (баллоны) вместимостью 10±0,5 и 20±1 л. Допускается более мелкая расфасовка — флаконы вместимостью 200 и 500 мл.

4.2.    Бутыли закрывают стерильными резиновыми пробками по ГОСТ 7852-65, которые сверху завязывают пергаментной бумагой. Флаконы закрывают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками.

4.3.    На бутыли и флаконы наклеивают бумажные этикетки с указанием:

наименования препарата;

количества препарата в л;

номера серии препарата;

даты изготовления;

срока годности;

условий хранения;

обозначения настоящего стандарта.

4.4.    Мясо-пептонный бульон хранят в реакторе или в бутылях в чистом, сухом и темном помещении при температуре 4—10°С.

4.5.    Мясо-пептонный бульон транспортируют всеми видами транспорта при соблюдении условий хранения, указанных в п. 4.4. Допускается транспортирование при более высокой температуре, но не выше 18°С, при этом срок транспортирования должен быть не более пяти суток.

Стр. 14 ГОСТ 20730-75

4.6. Срок годности мясо-пептонного бульона 6 месяцев со дня изготовления. По истечении указанного срока мясо-пептонный бульон подвергают испытанию и в случае соответствия требованиям, установленным настоящим стандартом, срок годности может быть продлен еще на 3 месяца.

Редактор Я. Е. Шестакова Технический редактор В. Ю. Смирнова Корректор И. Л, Хиниц

Сдано в наб. 18 04 75 Подп. в печ. 25 05 75    1,0    п.    л.    Тир.    6000    Цена    5    коп.

Издательство стандартов. Москва, Д-22, Новопресненский пер., 3 Тип. «Московский печатник». Москва, Лялин пер.. 6. Зак. 683

(Продолжение изменения к ГОСТ 20730—75)

Пункты 3.4.1, 35.1, 3.6 1, 3.7.1, 38 1, 3.9 1, 3.11.1, 3 12 1. Заменить ссылку ГОСТ 1770-64 на ГОСТ 1770-74.

Пунмы 3 1 I, 3.5.1, 3.9.1, 3 10.1. Заменить ссылку: ГОСТ 10394-63 на ГОСТ 25336_82

Пункт 3.4.1. Заменить ссылки. ГОСТ 4204-66 на ГОСТ 4204-77, ГОСТ 10929-64 на ГОСТ 10929-76; исключить ссылки: ГОСТ 5853-61, ГОСТ 10816— —64.

Пункты 3.4.1, 3.5.1, 3.6.1, 3.8.1. Заменить ссылку: ГОСТ 4328-66 на ГОСТ 4328-77.

Пункт 3.5.1. Заменить ссылку: ГОСТ 1625-61 на ГОСТ 1625-75; исключить ссылку: ГОСТ 5850-72.

Пункты 3.6.1, 3.8.1, 3.11.1, 3.12.1. Заменить ссылку: ГОСТ 10515-75 на ГОСТ 25336_82

Пункты 3.6.1, 3.8.1. Заменить ссылку: ГОСТ 4165-68 на ГОСТ 4165-78*

Пункт 3.6.1. Исключить слова: «фильтры бумажные», «воронки стеклянные по ГОСТ 8613-64»;

дополнить абзацем: «центрифуги настольные типа ОПН-8—14,2».

Пункт 3.6.3. Третий абзац. Заменить слова: «Через 2 мин смесь фильтруют через бумажные фильтры» на «Через 2 мин смесь центрифугируют 10 мин с частотой вращения 3000 —4000-¹».

Пункт 3.7.1. Заменить ссылки: ГОСТ 6371-64 на ГОСТ 25336-82, ГОСТ 7148-70 на ГОСТ 25336-82; исключить ссылку: ГОСТ 7365-55.

Пункт 3.8.1. Заменить ссылки: ГОСТ 84-66 на ГОСТ 84-76, ГОСТ 18289— —72 на ГОСТ 18289-78, ГОСТ 10931-64 на ГОСТ 10931-74, ГОСТ 4109-64 на ГОСТ 4109-79; исключить ссылки: ГОСТ 10563-63; ГОСТ 656-73, ГОСТ 3655—71.

Пункт 3.9.1. Заменить ссылки: ГОСТ 4205-68 на ГОСТ 4205-77, ГОСТ 4139-65 на ГОСТ 4139-75, ГОСТ 4461-67 на ГОСТ 4461-77, ГОСТ 1277-63 на ГОСТ 1277-75; исключить ссылку: ГОСТ 3768-64.

Пункт 3.9.2. Второй абзац изложить в новой редакции: «2 см³ мясопептон-ного бульона помещают в стакан, добавляют 20 см* воды, 1 см³ концентрированной азотной кислоты и 10 см³ 0,1 н. раствора азотнокислого серебра».

Пункт 3.9.3. Формулу изложить в новой редакции:

(VK—V_XK_X) • 0,005844 • 100 Х₃-    _Vt

Пункты 3.11.1, 3.12.1. Заменить ссылки: ГОСТ 13805-68 на ГОСТ 13805-76, ГОСТ 17206-71 на ГОСТ 17206-84.

Раздел 4. Наименование. Исключить слово: «расфасовка».

Пункт 4.2. Исключить ссылку: ГОСТ 7852-65.

(ИУС № 11 1989 г.)

УДК 576.8.093.1(083.74)    Группа    Р35

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ. БУЛЬОН МЯСО-ПЕПТОННЫЙ (ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНЫХ ЦЕЛЕЙ)

Nutrient media.

Meat-pep ton broth (for veterinary)

Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 апреля 1975 г. Нй 899 срок действия установлен

с 01.01 1976 г. до 01.01 1981 г.

Несоблюдение стандарта преследуется по закону

Настоящий стандарт распространяется на мясо-пептонный бульон, представляющий собой питательный раствор, предназначенный для выращивания микроорганизмов.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1.    Мясо-пептонный бульон должен изготавливаться в соответствии с действующими правилами по ведению технологического процесса, утвержденными в установленном порядке.

1.2.    Мясо-пептонный бульон по физико-химическим, биохимическим и биологическим показателям должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл. 1.

Таблица I

Наименования показателей Характеристика и норм я Внешний вид Прозрачная жидкость Цвет Желтый Запах Специфический, свежего мясного экстракта и пептона Наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка Содержание общего азота, %, не менее Не допускается 0,40

Издание официальное ★ Перепечатка воспрещена ©Издательство стандартов, 1975

Crp. 2 ГОСТ 20730-75

Продолжение

2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ

2.1.    Мясо-пептонный бульон сдают и принимают сериями.

2.2.    Каждая серия мясо-пептонного бульона на предприятиях биологической промышленности Министерства сельского хозяйства СССР должна быть принята государственным контролером Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.

2.3.    Под серией следует понимать любое количество мясо-пептонного бульона, изготовленное за один технологический цикл, в одной емкости (реакторе) и оформленное одним документом о качестве.

2.4.    Для проверки качества препарата от каждой серии мясо-пептонного бульона более 50 л отбирают 2 л, при объеме менее 50 л — 0,6 л.

Если вся серия мясо-пептонного бульона расфасована в бутыли, делают выборку в количестве одной бутыли. Если мясо-пептонный бульон расфасован во флаконы, составляют выборку такого количества флаконов, чтобы объем мясо-пептонного бульона в отобранных флаконах соответствовал указанной выше норме, которая установлена в зависимости от общего объема серии мясо-пептонного бульона.

2.5.    При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей серию мясо-пептонного

ГОСТ 20730-75 Стр. ЗГ

бульона считают не соответствующей требованиям настоящего стандарта.

2.6. Контрольную проверку образцов по требованию потребителя проводит Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.

3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИИ

3.1.    Методы отбора проб

3.1.1.    Пробу мясо-пептонного бульона в количестве 2 или 0,6 л (в зависимости от объема серии препарата) отбирают из реактора или бутыли стерильно.

Пробу объемом 2 л расфасовывают в 10 флаконов по 200 мл. Пять флаконов используют для анализа, а пять — оставляют в архиве государственного контролера.

Пробу, отобранную от серии мясо-пептонного бульона объемом менее 50 л, в архиве не оставляют.

3.2.    Внешний вид, цвет, наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка устанавливают, просматривая флаконы и бутыли с мясо-пептонным бульоном в проходящем свете, для чего флаконы встряхивают, переворачивая вниз пробками, а бутыли покачивают.

3.3.    Запах мясо-пептонного бульона определяют в пробе органолептически

3.4.    Определение содержания общего азота

3.4.1.    Аппаратура и реактивы

Для проведения испытания применяют: весы аналитические;

колбу Кьельдаля вместимостью 50—100мл по ГОСТ 10394-63; аппарат микро-Кьельцаль; элемент нагрева (плитку, горелку); пипетки на 1, 2, 5 мл по ГОСТ 1770-64; бюретки по ГОСТ 1770-64; воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72; кислоту серную по ГОСТ 4204-66, концентрированную и 0,1 н. раствор;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-66, 30—33%-ный и 0,1 н. растворы, приготовленные на предварительно прокипяченной дистиллированной воде;

перекись водорода по ГОСТ 10929-64; метиловый красный по ГОСТ 5853-51; метиленовую синь;

спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67; метиловый оранжевый по ГОСТ 10816-64, 0,1%-ный раствор

3.4.2.    Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон в количестве 1 мл помещают в колбу Кьельдаля и прибавляют 2 мл концентрированной серной кислоты. В горло колбы вставляют стеклянный грушевидный баллончик или небольшую воронку с запаянным кончиком и минерализуют пробу сначала на слабом огне, затем степень нагрева усиливают, не допуская выбрасывания кипящей смеси в узкую часть колбы. Минерализацию проводят в присутствии катализатора — перекиси водорода. Катализатор добавляют после начала кипения по 0,5 мл через каждые 15—20 мин до полного обесцвечивания раствора.

После охлаждения содержимое колбы переносят в колбу для отгона, добавляя 10—12 мл дистиллированной воды. Полноту переноса проверяют по индикатору метиловому оранжевому. Последняя порция смывных вод должна остаться желтой.

В приемную колбу аппарата Кьельдаля наливают 20 мл 0,1 н. раствора серной кислоты и 2 капли индикатора Таширо. Индикатор Таширо готовят, растворяя 0,4 г метилового красного и 0,2 г метиленовой сини в 200 мл 96%-ного этилового спирта.

Отгонную колбу присоединяют к холодильнику и парообразователю. Содержимое отгонной колбы нейтрализуют 30—33%-ным раствором гидрата окиси натрия по индикатору метиловому оранжевому. Отгон производят до тех пор, пока в приемной колбе соберется около 70 мл раствора.

Содержимое приемной колбы титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия до перехода окраски раствора от лилового к зеленому.

Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона в колбу для минерализации беруг 1 мл дистиллированной воды.

3.4.3.    Обработка результатов

Содержание общего азота в мясо-пептонном бульоне (X) в процентах вычисляют по формуле

_х _ (//С—УЛО'0,0014-100

где V— количество 0,1 н. раствора серной кислоты, налитое в приемную колбу, мл;

К — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. серной кислоты;

V\ — количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, или в контрольном опыте, мл;

К\ — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия;

V₂ — количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, мл; 0,0014 — количество азота, соответствующее 1 мл 0,1 н, раствора серной кислоты, г.

ГОСТ 20730-75 Стр. 5

За окончательный результат испытания принимают разность между средними арифметическими двух параллельных определений в опытных и контрольных пробах. Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений не должны превышать ±0,5%.

3.5. О п р е д е л е н и е содержания азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов

3.5.1.    Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют: рН-метр;

стаканы лабораторные по ГОСТ 10394-63;

пипетки, бюретки по ГОСТ 1770-64;

формалин технический по ГОСТ 1625-61;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-66, 0,1 н. раствор;

фенолфталеин по ГОСТ 5850-72, 1%-ный спиртовой раствор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

3.5.2.    Подготовка к испытанию

Непосредственно перед проведением анализа готовят формоль-ную смесь. Для этого к 50 мл формалина добавляют 1 мл 1%-ного раствора фенолфталеина и 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия доводят смесь до слаборозового цвета.

3.5.3.    Проведение испытания

К 2 мл мясо-пептонного бульона приливают 18 мл дистиллированной воды и доводят 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия pH смеси до 7,0. Затем приливают 2 мл формольной смеси и при постоянном перемешивании потенциометрически титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия до pH 9,2.

Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 2 мл мясо-пептонного бульона берут 2 мл дистиллированной воды.

3.5.4.    Обработка результатов

Содержание азота аминогрупп аминокислот и низших пепти-дов в мясо-пептонном бульоне (Х_{) в процентах вычисляют по формуле

_v    (V—V\) * К • 0,0014.100

^А1" 2 ’

где V — количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, мл;

Vj — количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование в контрольном опыте, мл;

К — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия;

0,0014 — количество азота, соответствующее 1 мл 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, г;

2 — количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, мл.

Стр. 6 ГОСТ 20730-75

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,2%.

3.6. Определение содержания пептонов

3.6.1.    Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют: фотоэлектроколориметр или спектрофотометр; пипетки по ГОСТ 1770-64;

пробирки по ГОСТ 10515-63;

фильтры бумажные;

воронки стеклянные по ГОСТ 8613-64;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-66, 10%-ный раствор;

медь сернокислую по ГОСТ 4165-68, 2%-ный раствор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

3.6.2.    Подготовка к испытанию

3.6.2.1. При построении градуировочного графика по оси абсцисс откладывают концентрацию истинного пептона в процентах, по оси ординат — оптическую плотность (Е) согласно данным, приведенным в табл. 2.

Таблица 2

Концентрация истинного пептона, % Оптическая плотность Е 0 50 0 550 0 25 0 280 0,17 0,190

3.6.3.    Проведение испытания

В пробирку наливают 10 мл мясо-пептонного бульона в разведении 1 : 10, прибавляют по 1 мл 10%-ного раствора гидрата окиси натрия и 2%-ного раствора сернокислой меди. Смесь после добавления каждого реактива хорошо встряхивают.

Одновременно проводят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 10 мл разведенного мясо-пептонного бульона берут 10 мл дистиллированной воды.

Через 2 мин смесь фильтруют через бумажные фильтры. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волн 540—560 нм или спектрофотометре при 540 нм в кюветах с рабочей длиной 10 мм.

3.6.4.    Обработка результатов

Концентрацию истинного пептона в мясо-пептонном бульоне определяют по градуировочному графику.

Оптическая плотность (Е) мясо-пептонного бульона равна разности оптических плотностей в опыте с испытуемой пробой и в

ГОСТ 20730-75 Стр. 7

контрольном опыте. Полученную по графику концентрацию истинного пептона умножают на 10 (т. е. на разведение мясо-пептонного бульона).

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±5%.

3.7.    О п р е д е л е н и е содержания сухого вещества

3.7.1.    Аппаратура

Для прозедения испытания применяют:

весы аналитические;

шкаф сушильный лабораторный по ГОСТ 7365-55;

эксикаторы по ГОСТ 6371-64;

стаканчики для взвешивания (бюксы) по ГОСТ 7148-70;

пипетки по ГОСТ 1770-64.

3.7.2.    Проведение испытания

В предварительно высушенную до постоянной массы бюксу взвешивают с погрешностью не более 0,0002 г мясо-пептонный бульон в количестве 1,0—1,2 г. Затем бюксу с мясо-пептонным бульоном высушивают в сушильном шкафу при температуре 100—105°С до постоянной массы. Высушивание продолжают до тех пор, пока разность между двумя последующими взвешиваниями будет не более 0,0002 г.

Примечание. Увеличение массы при одном из взвешиваний в процессе высушивания при расчете не учитывают.

3.7.3.    Обработка результатов

Содержание сухого вещества в мясо-пептонном бульоне (Х₂) в. процентах вычисляют по формуле

уг _ (т₂ — т) • 100

^л 2—- —:--:— *

\Ш\ — т)

где т — масса пустой бюксы с крышкой, г;

Ш\ — масса бюксы с крышкой и с мясо-пептонным бульоном до высушивания, г;

т₂ — масса бюксы с крышкой и с мясо-пептонным бульоном после высушивания, г.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. До'-пускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 0,2%.

3.8.    О п р е д е л е н и е содержания белка (по методу Лоури)

3.8.1. Аппаратура и реактивы

Для проведения испытания применяют:

фотоэлектроколориметр; пробирки стеклянные по ГОСТ 10515-63; пипетки по ГОСТ 1770-64; фильтры бумажные;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-66, 0,1 н. раствор; натрий углекислый по ГОСТ 84-66;

натрий виннокислый по ГОСТ 656-73 или калий виннокислый двузамещенный по ГОСТ 3655-71, 1%-ный раствор; медь сернокислую по ГОСТ 4165-68; натрий вольфрамовокислый по ГОСТ 18289-72; натрий молибденовокислый по ГОСТ 10931-64; кислоту ортофосфорную 85%-ную; кислоту соляную по ГОСТ 3118-67; литий сернокислый по ГОСТ 10563-63; бром по ГОСТ 4109-64; воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

3.8.2. Подготовка к испытанию Приготовление реактива А

Навеску углекислого натрия массой 2 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, растворяют в 100 мл 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия. Если раствор мутный, то перед определением его надо профильтровать.

Приготовление реактива В

Навеску сернокислой меди массой 0,5 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, растворяют в 100 мл 1%-ного раствора дву-замещенного виннокислого натрия или калия. Если раствор мутный, то перед определением его надо профильтровать. Приготовление реактива С

Реактив С готовят непосредственно перед определением путем смешивания 50 частей реактива А и 1 части реактива В. Приготовление реактива Д

Реактив Д (реактив Фолина) готовят в круглодонной на 1 л колбе из огнеупорного стекла с обратным холодильником.

В колбу помещают 100 г вольфрамовокислого натрия, 25 г молибденовокислого натрия и 700 мл дистиллированной воды. После полного растворения солей в колбу добавляют 50 мл 85%-ной ортофосфорной кислоты и 100 мл концентрированной соляной кислоты. Содержимое колбы сстсрожно, но хорошо перемешивают. К колбе присоединяют обратный холодильник и смесь кипятят (не слишком сильно) в течение 10 ч. Кипячение можно вести с перерывом, но учитывают лишь период кипения.

После окончания кипячения в смесь добавляют 150 г сернокислого лития, 50 мл дистиллированной воды и 5 капель брома (осторожно). Для удаления излишка брома раствор кипятят 15мин без холодильника под тягой. После охлаждения готовый раствор