Государственное санитарно-эпндсмно.кн ичсское нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение вредных веществ в биологических средах

Сборник методических указаний МУК 4.1.2102—4.1.2116—06

Издание официальное

Москва • 2008

Федеральная сдужба по напору в сфере защиты нрав ноз ребшедей н G.iaioiio.ivmiih че.ювека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение вредных веществ в биологических средах

Сборник методических указаний МУК 4.1.2102—4.1.21*16—06

МУК 4.1.2116—06

2 500 об /мин в течение 45 с. После расслоения жидкостей переносят гексановый экстракт в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой и центрифугируют в течение 5 мин при скорости 1 500 об./мнн. Аликвотную часть экстракта в количестве 10 мм³ вводят в колонку хроматографа и анализируют в рабочем режиме хроматографа, указанном в п. 7.4.4.

Идентификация хроматографического пика стирола проводится путем сопоставления времен удерживания хроматографических пиков в стандартном растворе стирола и в анализируемой пробе.

9. Вычисление результатов измерения

Концентрацию стирола в крови (мг/дм³) вычисляют по формуле: X=S_rK. где

X- концентрация стирола в анализируемой пробе, мг/дм³;

Si- площадь пика стирола на хроматограмме, мм² или е.о.п:

К - градуировочный коэффициент.

За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух параллельных определений Х_тах. Л_т,„. расхождение между которыми нс должно превышать значения предела повторяемости г_п (табл. 2). Результат измерения представляют в виде (х ± д) мг/дм³, где

_    _ X + X

X - средний результат анализа, мг/дм³. X = ———

Д- характеристика погрешности, мг/дм³. при Р - 0.95 равная:

SX

100

д - относительное значение характеристики погрешности. %.

10. Внутренний контроль качества результатов измерений

Внутренний контроль качества (ВКК) результатов измерений - повторяемость. внутрилабораторная прецизионность (воспроизводимость), точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве результатов измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335—2003 «ГСОЕИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».

Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с нормативами, не превышающими значений, приведенных в табл. 2 и 3.

180

МУК 4.1.2116—06

Таблица 2 Значения пределов повторяемости и воспроизводимое i и при доверительной вероятности /,= 0,95

11аименованис определяемого KOMnoiicirra и диапазон измерений, мг/дм3 11рсдел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных определений). гт% Предел внугрилаборалорной вос-I фоизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории. но в разных условиях), Rxr% Стирол, от 0,1 до 5,0 вкл. 26,5 21,6

Таблица 3 Диапазон измерении, значения показателен точности, повторяемое in, воспроизводимости

Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мг/дм3 (мкг/см3) Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), <7Г, % Показатель воспроизводимости (относительное среднеквалра-тическое отклонение BOCI фоизводимости) <7r, % Показатель точности (границы относительной Hoi репшосш при вероятности Р = 0,95), ± б, % Стирол, от 0,1 до 5,0 вкл. 10,0 13,5 23,0

10.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Определяют содержание исследуемого соединения в градуировочных растворах, которые соответствует началу, середине и концу диапазона измерений. Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданным и измеренным значением концентраций не превышает 5 %.

10.2. Контроль повторяемости Относительное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении образцов одной и той же рабочей пробы, с использованием одних и тех же средств измерений и реактивов в течение возможно минимального интервала времени, не должно превышать значения предела повторяемости г_п (табл. 2).

181

МУК 4.1.2116—06

Повторяемость результатов параллельных определений признают удовлетворительной, если выполняется условие:

.. Y ₊ V

v    v    »    шах    пн    п

2 ^д

г„ - значение предела повторяемости. %:

X_mat. Х_тт - максимальный и минимальный результаты двух параллельных измерений содержания /-го вещества, мг/дм³.

Если условие нс выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

10.3. Контроль воспроизводимости Внутренний контроль качества воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы. Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой, максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разное время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и т. д.). Воспроизводимость результатов контрольных измерений признают удовлетворительной. если выполняется условие:

\х, -Х₂\ <

Х_х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных измерений, мг/дм³;

Х₂ - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных измерений, полученный в других условиях, мг/дм³;

R^₍ - значение предела внутрилабораторной воспроизводимости. % (табл. 2).

Расхождение между результатами измерений Х_х и Х₂. полученных в разных условиях, нс должно превышать значений показателя воспроизводимости Rg при доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в табл. 2.

Если условие нс выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

10.4. Контроль точности Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении результата контрольной процедуры, равного разности между

182

МУК 4.1.2116—06

результатом контрольного измерения содержания определяемого компонента в пробе с известной добавкой (X'). в рабочей пробе без добавки (X )и величиной добавки С_д (добавка должна составлять нс менее 40% от содержания анализируемого компонента в рабочей пробе) с нормативом точности К. Результаты контроля признаются удовлетворительными. если выполняется условие:

Л"- А'-С_й\ = К_к. где

X' - средний результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе с известной добавкой из 2-.\ параллельных измерений, мг/дм³;

Л' - средний результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений. мг/дм³;

С_д - величина добавки к пробе, мг/дм³.

Качество контрольной процедуры признают удовлетворительной при выполнении условия: А.'* < К.

При превышении норматива контроля точности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

Периодичность контроля воспроизводимости и точности регламентируется в руководстве по качеству лаборатории.

Литература

1.    Химическая энциклопедия /Под. рсд. Н. С. Зсфирова. М.: «Большая российская энциклопедия». 1995. Т. 4.

2.    Лазарев Н. В. Вредные вещества в промышленности. Органические вещества: Справочник. М.: «Химия». 1976. Т. 1. С. 113—117.

Методические указания разработаны Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т. С. Уланова. Т. Д. Карнажицкая).

Определение вредных веществ в биологических средах: Сборник методических указаний.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2008.—183 с.

1.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 11.07.06 №2).

2.    Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 9 августа 2006 г.

3.    Введены впервые.

ЬКК 28.072

<    Роспотребнадзор, 2008

<    Федеральный центр iтн ненм и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2008

МУК 4.1.2102-4.1.2116—06

Содержание

Измерение массовой концешрации селена в моче методом атомко-

абсорбционной спектрометрии: МУК 4.1.2102—06............................................4

Определение массовой концентрации ванадия в пробах крови методом атомно-абсорбционной спектрометрии с электротермической

атомизацией: МУК 4.1.2103—06........................................................................14

Определение массовой концентрации меди, магния, кадмия в пробах мочи

методом атомно-абсорбционной спектрометрии: МУК 4.1.2104—06..................25

Определение массовой концентрации марганца, свинца, магния в пробах

волос методом атомно-абсорбционной спектрометрии: МУК 4.1.2105—06 37

Определение массовой концентрации марганца, свинца, магния в пробах крови методом атомно-абсорбционной спектрометрии:

МУК 4.1.2106—06................................................................................................50

Определение массовой концентрации фенола в биосредах (моча)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2107—06....................................63

Определение массовой концентрации фенола в биосредах (кровь)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2108—06....................................74

Определение массовой концентрации 2-хлорфенола в биосредах (моча)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2109—06....................................85

Определение массовой концентрации формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в пробах мочи методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2110—06................................................................................................96

Измерение массовой концентрации формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в пробах крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2111—06..............................................................................................ПО

Определение массовой концентрации хлороформа, 1,2-дихлорэтана, гетрахлормешна. хлорбензола в биосредах (кровь)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2112—06..................................125

Определение массовой концентрации хлороформа, 1,2-дихлорэтана, тетрахлорметана в биосредах (моча) методом газохроматографического

анализа равновесного пара: МУК 4.1.2113—06...............................................137

Определение массовой концентрации хлороформа. 1,2-дихлорэтана, тетрахлорметана, хлорбензола в биосредах (моча)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2114—06..................................149

Определение массовой концепграции хлороформа, 1,2-дихлорэтана,

тетрахлорметана в биосредах (кровь) методом газохромато1рафического

анализа равновесного пара: МУК 4.1.2115—06...............................................162

Определение массовой концентрации стирола в пробах крови методом

высокоэффективной жидкостной хромаго1рафии: МУК 4.1.2116—06.........174

МУК 4.1.2116—06

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в с(|юрс защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

9 августа 2006 г.

Дата введения: 1 сентября 2006 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение массовой концентрации стирола в пробах крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания _МУК    4.1.2116—06_

1. Область применения

Методические указания по определению концентрации стирола в крови предназначены хля использования Федеральной службой по надзору в с(|)срс защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, работающими в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами. занимающимися вопросами гигиены окружающей среды.

Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием стирола в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 «ГСОЕИ. Методики выполнения измерений». ГОСТ Р 1.5-92 «ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов». Методика выполнения измерений обеспечивает определение стирола в диапазоне концентраций 0.1— 5.0 мкг/см³ с погрешностью, не превышающей 23 %. при доверительной вероятности Р - 0.95.

СбН₅СНСН₂

МУК 4.1.2116—06

Стирол (винилбенэол, фенилэтилен) - бесцветная жидкость с редким запахом. Температура кипения: 145 °С. плотность 0.9059. Растворяется в большинстве органических растворителей, растворимость в воде 0.032 % по объему (20 °С) [1]. Стирол оказывает общстоксичсскос. сенсибилизирующее. эмбрнотропнос. раздражающее действия, отрицательно влияет на ЦНС. обладает кумулятивным эффектом [2].

2. Сущность метода

Методика основана на извлечении стирола из крови экстракцией гексаном и анализе экстракта на жидкостном хроматографе.

Измерение концентрации стирола выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием УФ-детектора.

Нижний предел измерения - 0.001 мкг.

Определению не мешают фенол, бензол, толуол, этилбензол, ксилолы. карбоновые кислоты.

Длительность анализа, включая пробоподготовку - 20 мин.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реаьггивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений. вспомогательные устройства, материалы и реактивы.

3.1. Средства измерений

Жидкостный хроматограф с насосом высокого давления и ультрафиолетовым детектором Весы лабораторные ВЛР-2(Х) аналитические Гири Г₂-210 Мнкрошприцы МШ-10 Колбы мерные, вместимостью 50 см³ Пипетки градуированные, вместимостью 1.5.10 см³ Редуктор кислородный

Аттестованная смесь стирола в этиловом спирте с концентрацией 1.00 мг/см³

3.2. Вспомогательные устройства Колонка стеклянная длиной 150 мм и внутренним диаметром 3.3 мм. заполненная сорбентом Separon SGX Cis зернением 7 мкм

Центрифуга ЦЛМН-Р10-01-«Элекон»    ТУ 9443-001-245.23530—97

Экстрактор ПЭ-8    ТУ    3614-001-23050963—97

МУК 4.1.2116—06

Дистиллятор    ТУ 61-1-721 —79

Сушильный шкаф LUCC-80    ТУ 16.531.743—83

Воронки делительные, вместимостью 250 см³    ГОСТ 23932-90

Воронка Шотта (пор 16)    ГОСТ 25336-82

Бюксы СВ 19/9    ТУ    92-891.029—91

Пробирки центрифужные пропиленовые с завинчивающейся крышкой, производство «Sar-stedt». Германия

3.3. Реактивы Гсксан для хроматографии, осч Ацетонитрил язя жидкостной хроматографии, осч Вода дисти.ътированная Гндроксид натрия, хч Спирт этиловый Серная кислота Калия дихромат, хч

Раствор гепарина в ампулах (5 ООО ед. в 1 см³)

3.4. Матершиы

Гелий газообразный

3.5. Растворы

Элюент для хроматографии Раствор гидроксида натрия. 10 %-й Раствор дихромата калия в серной кислоте. 3 %-й

Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования, химрсактивов и материалов, по метрологическим и техническим характеристикам нс уступающих перечисленным.

4. Требования к безопасности

4.1.    При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76 и ГОСТ 12.1.005-88.

4.2.    При выполнении измерений с использованием жидкостного

хроматографа соблюдают правила элсктробсзопасности в соответствии с ГОСТ    12.1.019—79. противопожарной безопасности по ГОСТ

12.1.004—91 и меры безопасности, указанные в «Руководстве по правилам эксплуатации прибора».

МУК 4.1.2116—06

5. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и владеющие техникой жидкостно-хроматографического анализа.

6. Условия измерений

6.1.    При подготовке проб к анализу и приготовлении растворов соблюдают следующие условия:

•    температу ра воздуха 15—25 °С.

•    атмосферное давление 630—800 мм рт. ст.;

•    влажность воздуха нс более 80 % при температу ре 25 °С.

6.2.    Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерении

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды, приготовление растворов, подготовка хромаю графической колонки, установление градуировочной характеристики.

7.1. Подготовка посуды

Используемую посуду замочить на 1 ч в свежеприготовленном 3 %-м растворе двухромовокислого калия в серной кислоте, отмыть в проточной водопроводной воде, ополоснуть дистиллированной водой и просушить при температу ре 120 °С.

7.2. Приготовление растворов

7.2.1.    Элюеит для хроматографии. Смешивают 60 см³ ацетонитрила с 40 см³ дистиллированной воды. Подвижную фазу фильтруют через воронку Шотта (пор 16) и дегазируют барботированисм гелия в течение 3—5 мин со скоростью 50—60 см ³/мин.

7.2.2.    Раствор гидроксида натрия 10 %-й. Вносят в мерный стакан с меткой на НЮ см³ 10 г гидроксида натрия, прибавляют 90 см³ дистиллированной воды и перемешивают содержимое стакана до полного растворения гидроксида натрия. Срок хранения раствора - 30 дней при 4 °С.

7.2.3.    Раствор двухромовокислого катя в серной кислоте 3 %-й. Растворяют 3.0 г двухромовокислого калия в 53 см³ концентрированной серной кислоты (плотность 1.84). Использовать свежеприготовленный раствор.

177

МУК 4.1.2116—06

7.3. Подготовка хроматографической колонки

Колонку устанавливают в хроматограф и подают элюирующую жидкость, подготовленную в соответствии с п. 7.2.1. со скоростью 0.6 cmVmhh до установления равновесия колонки, которое определяют по стабильности н> лсвой линии детектора.

7.4. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика на хроматограмме от концентрации стирола в крови, устанавливают по шести сериям растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из трех растворов, готовят разбавлением аттестованной смеси стирола в этиловом спирте (растворы А. Б).

7.4.1.    Приготовление раствора А : 1 см³ аттестованной смеси стирола в этиловом спирте с концентрацией 1.0 мг/см³ вносят в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят дистиллированной водой до метки. Используют свежеприготовленный раствор.

7.4.2.    Приготовление раствора Б: 10 см³ аттестованной смеси стирола в этиловом спирте с концентрацией 1.0 мг/см³ вносят в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят дистиллированной водой до метки. Используют свежеприготовленный раствор.

7.4.3.    В соответствии с п. 8 проводят анализ образца крови на отсутствие стирола. Объем образца крови для приготовления градуировочных смесей должен быть не менее 12 см³. Образец крови с гепарином (из расчета 0,05 см³ гепарина на 2 см³ крови) может храниться 2 дня при температуре 4 °С.

7.4.4.    Для установления градуировочной характеристики в 2 см³ крови добавляют 0.05 см³ раствора гепарина, вносят раствор А или Б в соответствии с табл. 1 и помещают в делительную воронку, в которую добавляют 40 см³ дистиллированной воды. 0.2 см³ К) %-го раствора щелочи NaOH и 2 см³ гексана. Содержимое воронки перемешивают экстрактором со скоростью 2 500 об./мин в течение 45 с. После расслоения жидкостей переносят гексановый экстракт в центрифужную пробирку с крышкой и центрифугируют в течение 5 мин при скорости 1 500 об./мин. Аликвотную часть экстракта в количестве К) мм³ вводят в колонку хроматографа и анализируют в рабочем режиме прибора.

МУК 4.1.2116—06

Таблица 1 Растворы для установления градуировочной характеристики при определении концентрации айрола в крови

11омер раствора 1 2 3 4 5 6 Объем раствора Л, мм3 (С = 0,01 мг/см3) 20,0 40,0 100,0 - - - Объем раствора Б. мм4 (С = 0,Ю мг/см3) - - - 20,0 50,0 100,0 Массовая концентрация стирола в крови, мг/дм3 0,1 0,2 0,5 1,0 2,5 5,0

Режим работы хроматографа:

колонка стеклянная длиной 150 мм и внутренним диаметром 3.3 мм. заполненная сорбентом Separon SGX Cjg;

подвижная фаза - ацетонитрнл/вода в соотношении 60 : 40; скорость подвижной фазы - 0.6 см³/мин: длина волны УФ-дстсктора 254 нм; время выхода стирола в тайных условиях - 6 мин. Градуировочную характеристику устанавливают с помощью градуировочного коэффициента, который рассчитывают по формуле:

п

Y.CJS,

К = —-, где

п

С_у- заданная концентрация стирола в градуировочной смеси, мг/дм³; Si - среднее значение трех измерений площади пика, мм² или единицы оптической плотности (е.о.п);

п - количество градуировочных смесей (п = 6).

Градуировку проверяют 1 раз в квартал и при смене партии реактивов.

7.5. Отбор проб

Отбор проб венозной крови в объеме 4 см³ производят в тщательно вымытую стеклянную пробирку с притертой пробкой, в которую предварительно вносят 0.1 см³ раствора гепарина. Срок хранения проб в холодильнике не более 2-х суток.

8. Выполнение измерений

Проводят два параллельных измерения образца крови: 2 см³ крови помещают в делительную воронку, в которую добавляют 40 см³ дистиллированной воды. 0.2 см³ 10 %-го раствора щелочи NaOH и 2 см³ гексана. Перемешивают содержимое воронки экстрактором со скоростью

179