МУК 4.1.2063-06
Методические указания по определению остаточных количеств триасульфурона в зерне хлебных злаков методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ, СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОМ СЫРЬЕ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Сборник методических указаний МУК 4.1.2062—4.1.2074—06

Издание официальное

Москва. 2009

ББК51.21

037

037 Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды: Сборник методических указаний.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009 —147с.

1.    Сборник подготовлен Федеральным научным центром гигиены им. Ф. Ф. Эрисмаиа (академик РЛМН, проф. В. Н. РакитскиЙ, проф. Т. В. Юдина); при участии специалистов Федеральной службы по надзору п сфере защиты прап потребителей и благополучия человека. Разработчики методов указаны в каждом из них.

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере заинггы прав потребителей и благополучия человека.

3.    Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г. Г. Онищенко.

4.    Введены впервые.

ББК 51.21

Формат 60x88/16

Тиране 100 экз.

Печ. л. 9.25

Тиражировано отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора N7105, Москва. Варшавское ш., 19а Огделсние реализации, тслУфакс 952-50-89

Содержание

1.    Методические указания по определению остаточных количеств пиридабена в воде,

почве и яблоках методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2062*06..................4

2.    Методические указания по определению остаточных количеств триасульфурона в зерне хлебных злаков методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2063-06.............................................................................................15

3.    Методические указания по определению остаточных количеств хизалофоп-п-этила

в зерне гороха, семенах и масле подсолнечника по основному метаболиту хизалофоп-п кислоте методом капиллярной газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2064-06..........22

4.    Методические указания по определению остаточных количеств Калиевой соли

сульфомстурон-метала по сульфометурон-метилу в воде и почве методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2065-06..................................................33

5.    Методические указания по определению остаточных количеств тебуконазола в семенах, масле и зеленой массе рапса методом газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2067-06.............................................................................................45

6.    Методические указания по определению остаточных количеств клетодима и его

основных метаболитов клетодим сульфона и клетодим сульфоксида в масле сои методом газохсидкостной хроматографии. МУК 4.1.2066-06......................................52

7.    Методические указания по определению остаточных количеств Пендиметалина в зерне зерновых колосовых культур, риса, кукурузы, растительных маслах, зеленой массе кукурузы, рисовой соломке методом газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2068-06............................................................................................63

8.    Методические указать по определению остаточных количеств дитианона в

винограде, виноградном соке, персиках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2069-06........................................................................77

9.    Методические указания по определению остаточных количеств Диквата в клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2070-06.............................................................................................88

10.    Методические указания по определению остаточных количеств Трифорина

в яблоках, винограде, яблочном и виноградном соках методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2071-06.......................................................................99

11.    Методические указания по определению остаточных количеств бифентрина в

воде, огурцах, томатах и бифентрина и малатиона в зерне пшеницы и риса методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2072-06.................................................109

12.    Методические указания по измерению концентраций дккамбы в атмосферном воздухе населенных мест методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2073-06... 125

13.    Методические указания по измерению концентраций Бромадиолона в воздухе

рабочей зоны и атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2074-06.....................................................136

3

чсловс

caiurrapi

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человс    [арственный

mrrapi    ой Федерации

Г.Г. Онищенко

« t> » мая 200бТ

МУК ААЛШ-91 Дата введения: i I илсл

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТРИАСУЛЬФУРОНА В ЗЕРНЕ ХЛЕБНЫХ ЗЛАКОВ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

1. Вводная часть

Торговое наименование: Дукат.

Фирма регистрант: ООО НПП «Агрусхим».

Действующее вещество: триасульфурон.

Структурная формула:

1- {2- (2-хлсрзггокси)фез пихульфси    133'Тршкн-2-ил>гочевина (IUPAQ.

2- (2-хлорзтоксиН1 (б^йтил-4-метокси-13>'фиазшь2-ил)ам}ога]к2рбс^    (СА>

Мол. масса: 401,8

Брутто формула: CuHieCINjOsS

Химически чистый триасульфурон представляет собой белый порошок с температурой плавления 178,1°С, давлением паров <2х10’^{1 2 3} мРа (25°С).

Коэффициент распределения в системе н-октанол*вода K<,_w IgP=l.l (pH 5), -0.59 (pH 7), -1.8 (pH 9) (25°C).

Растворимость (г/дм³): в воде 0,032 (pH 5), 0.815 (pH 7), 13,5 (pH 8,4) при 25°C; дихлорметанс - 36, ацетоне - 14, этилацетате - 4.3, этаноле - 0.42, толуоле - 0.3, н-октаноле -0.13, гексане -0.00004 (25°С).

Стабилен на воздухе до 140°С, в нейтральных и щелочных растворах при 25°С.

Группа токсичности по ЕПА - IV, ВОЗ-U; Острая пероральная токсичность LDjo для крыс и мышей >5000 мг/кг. Дермальная токсичность для крыс >2000 мг/кг.

СН₃

Область применения: селективный гербицид, адсорбируется листьями, корнями и быстро попадает в меристему. Используется для контроля широколиственных сорняков на зерновых. Гигиенические нормативы для триасульфурона в России: МДУ в зерне хлебных злахов - 0.1 мг/кг.

2. Методика определения триасульфурона в зерне хлебных злаков методом ВЭЖХ

2.1.    Основные положения

2.1.1.    Область применения и принцип метода

Настоящий документ устанавливает методику определения остаточных количссп»-триасульфурона в пробах зерна хлебных злаков в диапазоне концентраций 0.01 • 0.1 мг/кг. Методика основана на определении триасульфурона методом ВЭЖХ с использованием УФ детектора после его извлечения из образцов водно-ацетоновой смесью с последующей очисткой перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями и на колонке с силикагелем.

2.1.2.    Метрологическая характеристика метода

Диапазон определяемых концентраций 0.01 «0.1 мг/кг.

Нижний предел определения триасульфурона в зерне 0.01 мг/кг.

Полнота определения 80 % (коэффициент извлечения К-Ф.в),

Границы суммарной относительной погрешности результата измерений Д ±12% при доверительной вероятности Р=0.95 (п " 20).

Полнота определения триасульфурона в зерне зерновых колосовых культур (N » 5 для каждой концентрации):

Среда

Внесено, мг/кг

Найдено, мг/кг

Стандартное отклонение, ±

Полнота определения, % j

1

2

3

4

5 ij

Зерно

0.01

0.0079

0.00069

79.0 :

0.025

0.0202

0.0017

80.7 |j

0.05

0.0396

0.0033

79.2 i

0.10

0.0828

0.0075

82.8 ,^!

Среднее

80.4

2.13. Избирательность метода

Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения определению не мешает.

22. Рсаетнвы и материалы

Ацетон, осч, ТУ 6-09-3513-86.

Ацетонитрил для ВЭЖХ, "В-230НМ" или х.ч., ТУ 6-09-3534-87.

Бумажные фильтры "красная лента", ТУ 6.091678-86.

Вода бидисталлированная, деионизированная, ГОСТ 6709-79.

Калий углекислый, х.ч., ГОСТ 4221-76.

/6

Калий фосфорнокислый 2-замещенныЙ, З-водный, чда, ГОСТ 2493-75.

Калия перманганат, ГОСТ 20490-75.

Кальция хлорид, х.ч., ГОСТ 4161-77.

Кислота ортофосфорная, имп. (Ferak, Германия) иля хч, ГОСТ 6552-80; 2М и 0.005М водные растворы.

Кислота серная, х.ч., ГОСТ 4204-77.

Трибенурон-метил, аналитический стандарт с содержанием д.в. 98,2% (Sigma-Aldrich).

Натрий двууглекислый, ГОСТ 83-79.

Натрий сернокислый безводный, ч., ГОСТ 4166-76, свежепрокаленный.

Натрия гидроксид, хч.. ГОСТ 4328-77.

н-Гексан, х.ч., ТУ 2631-003-05807999-98, свежеперегнанный.

Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил - 0,01 М HjPO* (35:65, по обьему).

Силикагель для колоночной хроматографии 60 (0.040-0.063 mm) (Merck, Германия). Стекловата.

Фосфора пентокенд, ч., МРТУ 6-09-5759-69.

ЭлюентШ для колоночпой хроматографии: смесь гексан - этилацетат (50:50, по объему). Элюент №2 для колоночной хроматографии: смесь гексан - этилацетат (10:90, по объему). Этиловый эфир уксусной кислоты, чд. а., ГОСТ 22300-76.

2.3.    Приборы и посуда

Жидкостный хроматограф LC-10A фирмы Shimadzu с УФ детектором (SPD-10A) или другой с аналогичными характеристиками.

Аналитическая колонка Supelcosil С-18 (150 х 4.6) мм, 5 мкм (Sigma-Aldrich).

Предколонка Supelcosil С-18.

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 24104-2001 или аналогичные.

Установка ультразвуковая «Серьга», ТУ 3.836.008.

Мельница лабораторная зерновая ЛМЗ, ТУ 1-01-0593-79.

Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74 или аналогичный. Бидистиллятор.

PH-метр универсальный ЭВ-74, ГОСТ 22261-76.

Насос водоструйный, МРТУ 42 861-64.

Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС, ГОСТ 10384-72.

Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29/32 ТС, ГОСТ 10384-72.

Воронки лабораторные В-75-110, ГОСТ 25 336-82.

Воронки делительные ВД-3-500, ГОСТ 8613-75.

Цилиндры мерные на 100,250 и 1000 см³, ГОСТ 1774-74.

Колбы мерные на 25,50,100 и 1000 см³, ГОСТ 1770-74.

Пипетки на 1,2,5,10 см³, ГОСТ 22292-74.

Колонки стеклянные (25x1) см.

Допускается применять другие вспомогательное оборудование, материалы и реактивы с техническими и метрологическими характеристиками не хуже указанных.

2.4.    Отбор и хранение проб

Огбор проб производится в соответствии с ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) «Зерновые. Отбор проб зерна». Пробы зерна для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Перед анализом зерно доводят до стандартной влажности и измельчают на лабораторной мельнице.

&

2.5. Подготовка к определению

2.5.1.    Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 см³ растворителя упаривают в ротационном испарителе при температуре 40°С до объема 1,0 см³ и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания свежей порции кислоты, затем промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют. Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 дм³ ацетона 10 г КМпО« и 2 г К2СО3). Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием. Этилацетат промывают равным объемом 5%-ного раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.

2.5.2.    Коыдициовыроваяяе колония

Перед началом анализа колонку (Supelcosil С-18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 cmVmhh) до стабилизации нулевой линии в течение 1-2 часов.

2.5.3.    Приготовление растворов

Для приготовления 2М раствора ортофосфорпой кислоты 200 г 98% (или 225 г 87%) кристаллической Н3РО4 помещают в мерную колбу объемом 1 дм³, растворяют в 600 см³ дистиллированной воды и доводят объем до метхи дистиллированной водой.

Для приготовления 0.01 М раствора ортофосфорпой кислоты 5.0 см³ 2М раствора HjPO« вносят в мерпую колбу на 1 дм³ и доводят до метки деионизированным бидислишятом.

Для приготовления 0.2М раствора К2НРО4 45.6 г кристаллического калия фосфорнокислого двузамещенного трехводного помещают в мерную колбу на I дм³, растворяют при перемешивании в 600 см³ дистиллированной воды и доводят объем раствора до метки.

Для получения 50%-го водного ацетона в колбе емкостью 1 дм³ смешивают 500 см³ ацетона с 500 см³ дистиллированной воды, используя мерные цилиндры.

Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0.01М раствором ортофосфорпой кислоты в соотношении 35:65 по объему, используя мерные цилиндры.

Для приготовления элюента №1 в колбе на 1000 см³ смешивают 500 см³ н-гексана и 500 см³ этил ацетата. Для приготовления элюента Ns2 в колбе на 1000 см³ смешивают 100 см³ н-гехсана н 900 см³ этил ацетата.

Приготовление стандартного и градуировочных растворов:

Берут точную навеску трнасульфуропа (50 мг), переносят в мерную колбу на 100 см³, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до метки. (Стандартный раствор с концентрацией 0.5 мг/ см³). Градуировочные растворы с концентрациями 0.2, 0.5, 1.0 и 2.0 мкг/см³ готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы - смесь апетонитрил - 0.01 М ортофосфорная кислота (35:65, по объему). Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0-4°С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.

При изучении полноты определения триасульфурона используют ацетонитрильные растворы вещества. Растворы внесения с концентрациями 0.2 и 2.0 мкг/см³ готовят из стандартного раствора с концентрацией 0.5 мг/см³ методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.

/£

2.5.4. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация триасульфурона в растворе) в хроматограф вводят по 20 мм³ градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации триасульфурона в градуировочном растворе (мкг/см^э).

2.5.5.    Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 30 см³ смеси гексан - этил ацетат (50: 50, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают 50 см³ элюента №2 и 50 см³ элюента №1 со скоростью 1-2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.5.6.    Проверка хроматографического поведения триасульфурона на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 см³ отбирают 0,1 см³ стандартного раствора триасульфурона с концентрацией 10 мкг/см³. Отдувают растворитель током теплого воздуха (температура не выше 40°С), остаток растворяют в 5 etc элюепта №1 я наносят па холопку. Колбу обмывают еще 5 см³ элюента Ха1 и также вносят на колонку. Промывают колонку 50 см³ элюс1гта №1, затем 100 см³ элюента №2 со скоростью 1-2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 см³ каждая, упаривают, остаток растворяют в 1 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.3.) и анализируют на содержание триасульфурона по п. 2.6.3.

Фракции, содержащие триасульфурон, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по п. 2.6.3. Рассчитывают содержание триасульфурона в элюатс, определяя полноту вымывания вещества из колонки я необходимый для этого объем элюента.

Примечание: параметры удерживания триасульфурона и сопутствующих коэкстрахтивных веществ могут меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.6.    Проведение определения

2.6.1. Определение триасульфурона в зерне

Навеску размолотого на лабораторной мельнице зерна массой 20 г помещают в коническую колбу емкостью 250 см³ и экстрагируют триасульфурон 50 см³ смеси ацетон-вода (1:1, по объему) на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют дважды порциями по 50 см³, выдерживая в ультразвуковой ванне каждый раз в течение 15 мин. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40°С до полного удаления ацетона. Объем водного остатка доводят до 100 см³ дистиллированной водой, добавляют к нему 50 см³ 0.2М раствора К2НРО4.

Внимание! Отделение водного слоя следует производить только после полного расслоения жидкостей в делительной воронке.

Объединенный водный экстракт промывают в делительной воронке объемом 500 см³ дважды гексаном порциями по 50 см³ (верхний органический слой отбрасывают) и дважды этил ацетатом порциями по 50 см³ (верхний органический слой отбрасывают), встряхивая

каждый раз делительную воронку в течение 2-3 мин. Водную фазу подкисляют 2М ортофосфорной кислотой до pH 3 н триасу льфурон экстрагируют этил ацетатом трижды по 30 см³, встряхивая воронку каждый раз по 2-3 мин*. Нижний водный слой отбрасывают. Объединенную органическую фазу фильтруют через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10-15 см³ этилацетата. Полученный раствор выпаривают досуха на роторном испарителе при температуре нс выше 40°С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пункту 2.6.2**.

* В случае образования сравнительно стойких эмульсий для сокращения времени расслоения можно добавить в делительную воронку; на стадии промывки экстрактов гексаном -небольшое количество (до 10 см³) этилового спирта.

** В случаях, когда очистка экстрактов контрольных проб (п.2.6.1.) дает удовлетворительные результаты дополнительную очистку на колонке с силикагелем можно исключить.

2.6.2.    Очистка на колонке с силикагелем

Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п.п. 2.6.1. экстрактов зерна, количественно переносят двумя порциями по 5 см³ смеси гексан - этил ацетат (50:50, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п.2.5.5.). Промывают колонку 50 см³ элюента №1, которые отбрасывают. Триасульфурон элюируют 80 см³ элюента №2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 250 см³. Раствор выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40°С. Сухой остаток растворяют в 1 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ и 20 мм³ раствора вводят в жидкостный хроматограф.

2.6.3.    Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф LC-10A фирмы Shimadzu с УФ детектором (SPD-10A) или другой с аналогичными характеристиками.

Рабочая длина волны 223 нм.

Колонка Supelcosil С-18 (150 х 4.6) мм, 5 мхм (Sigma-Aldrich).

Предколопка Waters Symmetry С-18 для защиты аналитической колонки.

Температура колонки 30±ГС.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 0.01М раствор Н3Ю4 в соотношении 35:65 (по объему). Скорость потока элюента: 1 см³/мин.

Время удерживания триасульфурона 8.3 ±0.1 мин.

2.6.4.    Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание триасульфурона в образце зерна (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

Sj-c-v

X--,

Si-P-K

где Si- площадь пика триасульфурона в стандартном растворе, мм;

S_r площадь пика триасульфурона в анализируемой пробе, мм;

V - объбм пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см³; Р - навеска анализируемого образца, г,

С - концентрация стандартного раствора триасульфурона, мкг/ см³;

К - коэффициент извлечения, определяемый в эксперименте по внесению стандартного раствора триасульфурона в контрольный образец зерна.

Содержание остаточных количеств триасульфурона в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор триасульфурона 2 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

3.    Оформление результатов измерений

Результаты измерений содержания триасульфурона в образцах зерна представляют в виде:

(X ± Д) мг/кг,

где Д - показатель точности результатов анализа (границы, в которых погрешность любого из совокупности результатов анализа, полученных при реализации методики, находится с принятой вероятностью Р=0.95).

4.    Требования техники безопасности

При проведетш работы необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1005-88).

При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила элсктробсзопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

5.    Требования к квалификации оператора

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации жидкостного хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п.б.

6.    Контроль погрешности измерений.

Оперативный контроль погреши оста и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6. 2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

7.    Разработчики

Долженко В.И., Цибульская И.А., Юзихин О.С. (ВНИИ защиты растений, Санкт-Петербург).