МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ОСМОТОЛЕРАПТНЫХ ДРОЖЖЕЙ И ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ
Издание официальное
Москва
Стандартмнформ
2010
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
Методы выявления и определения количества осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов
Food products. Methods for detection and determination of osmololeranlic yeast and mould quantity
МКС 07.100.30 ОКСТУ 9109
Дата введения 01.01.93
Настоящий стандарт распространяется на нишевые продукты и устанавливает методы определения количества осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов посевом нишевого продукта или его разведения в авизованную среду, определения наиболее вероятного числа (НВЧ) и выявления присутствия (отсутствия) осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов в определенной навеске продукта.
Методы основаны на высеве определенного количества продукта и (или) ею разведений в селективную питательную среду, культивировании посевов в оптимальных условиях, подсчете количества или определении присутствия (отсутствия) осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов.
Метод определения количества посевом в агарпзованную среду предназначен для нишевых продуктов. содержащих в 1 г более 150 или в 1 см3 более 15 осмотолерантных дрожжей и (или) содержащих it I I более 50 или в I см3 более 5 осмотолерантных плесневых грибов.
Метод НВЧ предназначен для нишевых продуктов, содержащих в 1 г менее 150. но в 10 г более 3 или в I см3 менее 15. но в 100 см' более 3 осмотолерантных дрожжей и (или) содержащие в 1 г менее 50. но в 10 г более 3 или в I см3 менее 5. но в 100 см* более 3 осмотолерантных плесневых грибов.
1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ
Отбор и подготовка проб пищевых продуктов — по ГОСТ 26668. ГОСТ 26669. Ot6op и подготовка проб сгущенных молочных консервов с сахаром — по ГОСТ 9225*.
2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:
весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104** с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и пределом допускаемой погрешности ± 2 мг (для взвешивания реактивов);
весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания до 1 кг и пределом допускаемой погрешности ± 10 мг (для взвешивания продукта); микроскоп световой биологический, обеспечивающий увеличение 90—900*: стекла предметные по ГОСТ 9284; стекла покровные по ГОСТ 6672;
• На территории Российской Фслсрапии действует ГОСТ Р 53430-2009.
•• С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104 — 2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.
Перепечатка воспрещена
1 И uaie.ibctBo стандартов. 1991 © СТАНДАРТИНФОРМ, 2010
термостат с диапазоном рабочих температур 28—55 ‘С. позволяющий поддерживать заданную температуру с погрешностью ± 1 1С:
менисковый синий;
сахар-рафинад по ГОСТ 221.
3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ
3.1. Приготовление растворов
3.1.1. Приготовление раствора метиленового синего концентрацией 10 г/дм3: I г метиленового синего переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 см' и доливаю! до метки.
Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
3.1.2. Растворы антибиотиков готовят по ГОСТ 10444.12.
3.2. Приготовление питательных сред
3.2.1. Среда жидкая: 610.0 г сахара-рафинада. 20.0 г глюкозы и 25 см' дрожжевого экстракта постепенно при нагревании на водяной бане добавляют к 345 см' дистиллированной воды. После рааыавления сахаров смесь охлаждают до (50 ± 5) 1С. Устанавливают pH среды таким образом, чтобы он составлял 5.8 ± 0.1 (в пересчете на (25 ± 1) ‘С). Питательную среду разливают в колбы и (тын) пробирки и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.
3.2.2. Сред;» авизованная: 15.0 г агара добавляют к 345 см' дистихшрованной воды и оставляют на 30 мин для набухания агара.
Затем расплавляют при нагревании и добавляют 20.0 г глюкозы. 25 см' дрожжевого экстракта. В полученной смеси при нагревании на водяной бане постепенно растворяют 610.0 г сахара-рафинада.
После расплавления сахар;» смесь охлаждают до (50 ± 5) 1С.
Устанавливают pi 1 среды таким образом, чтобы он составлял 5.8 ± 0.1 (в пересчете на (25 ± 1) 1С). Питательную среду рахшвают в колбы и стерилнзируют текучим паром в течение 30 мин.
3.3. Приготовлсч»ие питательных сред, применяемых для испытания сгу щенных маточных консервов с сахаром
3.3.1. Солодовое агаризованное сусло с сахарозой
Приготовление сусла с сахарозой: к 500 см' солодового сусла, приготовленного по ГОСТ 10444.1, добавляют 420.0 г сахара-рафинада, нагревая перемешивают до полного его растворения, фильтруют, охлаждают до (50 ± 5) "С. Устанавливают с помощью маточной кислоты pH таким образом, чтобы он составлял 3.6 ±0.1 (в пересчете на (25 ± 1) 1С). Сусло с сахарозой рахшвают по 60 см' в колбы и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.
Приготовление агаризованного суета: к 500 см' саюдового суета с pH 3.6 ± 0.1 добавляют 30.0 г агара, нагревают, при перемешивании расчыавляют агар. Среду фильтруют и разливают по 40 см' в колбы, затем стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.
Непосредственно перед посевом агаризо ванное сует о рааыавляют на водяной бане, а сусло с сахарозой нагревают до температуры (50 ± 5) ‘С и две эти части смешивают.
3.3.2. Питательные среды с антибиотиками и сахарозой: к 1 дм' дистиллированной воды добавляют 20.0 г агара и оставляют на 30 мин для набухания агара, затем добаатяюг 10.0 г пептона и. постоянно перемешивая, нагревают до патного расплавления агара, добавляют 40.0 г мальтозы или глюкозы и 450,0 г сахара-рафинада, перемешивают до полного растворения составных частей, при наличии осадка фильтруют. Устанавливают с помощью молочной кислоты pH таким образом, чтобы он составлял 6.5 ± 0.1 (в пересчете на (25 ± 1) °С).
Питательную среду рахшвают по 100 см' в колбы и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.
Непосредственно перед испатьзованием к среде добавляют в соответствии с ГОСТ 10444.12 растворы антибиотиков.
4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
4.1. Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений по ГОСТ 26669 так. чтобы можно было определить в 1 г (см3) предпатагаемое количество осмотатерантных дрожжей
ГОСТ 28805-90 С. 3
и плесневых грибов или количество, указанное в нормативно-технической документации на конкретный продукт.
4.2. При определении количества осмотолерантных дрожжей и плесневых фибов по методу 11ВЧ высевают в трехкратной повторности фи последовательных навески продукта и (или) разведения продукта, отличающиеся по количеству продукта в 10 раз. Каждую навеску продукта и (или) разведение продукта высевают в колбу или пробирку с питательной средой, приготовленной по п. 3.2.1.
Соотношение количества высеваемого продукта или его разведения и питательной среды 1:9.
4.3. При определении количества осмотолерантных дрожжей и плесневых фибов методом посева в агаризованные среды по I см’ навески продукта или его разведения вносят одновременно в две чашки Петри. Посевы заливают но ГОСТ 26670 агариэованной питательной средой, приготовленной но н. 3.2.2.
4.4. При определении присутствия (отсутствия) осмотолерантных дрожжей и плесневых фибов в определенной навеске продукта или его эквивалентном разведении, эту навеску или разведение вносят в жидкую питательную среду по п. 3.2.1 (в соотношении 1:9) или высевают по п. 4.3 в агаризо-ванную среду.
При испытании сгущенных молочных консервов с сахаром навеску продукта массой (10,010.1) г тщательно перемешивают со 100 см3 охлажденной до (45 ± 2)*С агариэованной питательной средой по п. 3.3.1 или п. 3.3.2. Смесь разливают в 6—7 чашек Г1ефи.
4.5. Посевы инкубируют в течение 7 сут при температуре (30 ± 1) ’С.
4.6. Через 3 сут проводят предварительную оценку результатов инкубирования посевов, а через 7 сут — окончательную.
Колонии осмотолерантных дрожжей и плесневых фибов разделяют визуально.
Рост осмотолерантных дрожжей на агаризованных питательных средах сопровождается образованием выпуклых, блестящих, серовато-белых колоний с гладкой поверхностью и ровным краем. Рост осмотолерантных дрожжей на жидких питательных средах сопровождается появлением мути, запаха брожения и газа.
Рост осмотолерантных плесневых фибов на ниппельных средах сопровождается появлением мицелия различной окраски.
4.7. Для подсчета количества отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 колоний дрожжей и (или) от 5 до 50 колоний плесневых фибов.
4.8. При необходимости для разделения дрожжей и плесневых фибов проводят микроскопические исследования. Для этою из культуральной жидкости или отдельных колоний готовят мазки и окрашивают их раствором метиленового синего. На подсушенный мазок наносят раствор метиленового синего, приготовленного по п. 3.1.1. выдерживают 5 мин. сливают краску, высушивают на воздухе и микро-скопируютдля определения дрожжевых клеток или гифов плесневых фибов.
Допускается проводить микробиологические исследования но ГОСТ 10444.12.
4.9. Колбы (пробирки), в которых обнаружен рост осмотолерантных дрожжей и (или) плесневых грибов, считают положительными.
5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
5.1. Результаты испытания оценивают на каждой пробе отдельно.
5.2. Пересчет количества осмотолерантных дрожжей и плесневых фибов на 1 г (см3) продукта проводят но ГОСТ 10444.12.
5.3. Наиболее вероятное число (НВЧ) осмотолерантных дрожжей и плесневых фибов в 1 г (см3) продукта определяют по количеству положительных колб (пробирок), пользуясь таблицей, приведенной в ГОСТ 30425.
5.4. Результаты определения количества осмотолерантных дрожжей и плесневых фибов записывают по ГОСТ 26670.
5.5. Результаты выявления присутствия (отсутствия) осмотолерантных дрожжей и плесневых фибов с указанием навески продукта записывают следующим образом:
осмотолерантные дрожжи и (или) плесневые фибы обнаружены или не обнаружены.
ИНФОРМАЦИОННЫ К ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом консервной и овощееушильной промышленности (ВНИИКОП), Сибирским филиалом Всесоюзного научно-исследовательского и конструкторского института молочной промышленности, Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 «Продукты переработки плодов и овощей»
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 21.12.90 № 3230
3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
5. Ограничение срока действия снято по протоколу № 7—95 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 11—95)
6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2010 г.
88
1
На территории Российской Федерации с 1 июля 2011 г. будет действовать ГОСТ Р 533%- 2009.
86
