МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

Методы	КОРМА определения каротина
	Издание официальное

"1    Москва

Ста ндартин форм

WT* I    2011

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН МТК 4. Центральным институтом научного агрохимического обстукивания сельской) хозяйства. Всероссийским научно-исследовательским институтом кормов. Всероссийским научно-исстедовательским институтом комбикормовой промышленности

ВНЕСЕН Госстандартом России

2    ПРИНЯТ Межгосударственным советом но стандартизации, метрологии и сертификации (протокат № 8 от 12 октября 1995 г.)

Наименование государства	Наименование национальною органа но стандартизации
Республика Казахстан Киргизская Республика Республика Молдова Российская Федерация Республика Таджикистан Туркменистан Украина	Госстандарт Республики Казахстан Киргизстандарт Молдовастандарг Госстандарт России Таджикгоссгандарт Главная государственная инспекция Туркменистана Госстандарт Украины

3    Постановлением Комитета Российской Федерации но стандартизации, метрологии и сертификации от 29 февраля 1996 г. N? 139 межгосударственный стандарт ГОСТ 13496.17-95 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 января 1997 г.

4    ВЗАМЕН ГОСТ 13496.17-84

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ. Март 2011 г.

© ИПК Издательство стандартов. 1995 © СТАНДАРТИНФОРМ. 2011

Настоящий стандарт не может быть назносгъю или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Содержание

1    Фотометрический метод определения каротина.......................1

1.1    Озбор проб......................................1

1.2    Аппаратура, материалы и реактивы..........................1

1.3    Требования безопасности...............................1

1.4    Подготовка к испытанию...............................2

1.5    Подготовка проб...................................2

1.6    Проведение испытания................................2

1.7    Обработка результатов.................................3

2    Метод определения каротина с использованием пробирочной шкалы............4

2.1    Озбор проб......................................4

2.2    Аппаратура, материалы и реактивы..........................4

2.3    Требования безопасности...............................4

2.4    Подготовка к испытанию...............................4

2.5    Подготовка проб...................................4

2.6    Приготовление пробирочной шкалы..........................4

2.7    Проведение испытания................................4

2.8    Обработка результатов.................................5

125

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

КОРМА Методы определения каротина

Forage.

Methods Гог determining carotin

Дата введения 1997—01—01

Настоящий стандарт распространяется на корма растительного происхождения: сено, силос, сенаж, искусстненно высушенные травяные корма, муку из древесной зелени, зеленую массу травянистых культур и устанавливает методы определения каротина.

1. Фотометрический метод определения каротина

Сущность метода состоит в растворении каротина в петролейном эфире или бензине и ^юто-метрическом измерении окраски, интенсивность которой зависит от содержания каротина.

Отбор проб - по^РГОСТ 13496.0. ГОСТ 13586.3. ГОСТ 13979.0. ГОСТ 27262.

1.2.    Аппаратура, м атериалы и рсакт и в ы Измельчитель проб растений ИПР-2 или других аналогичных марок.

Мельница лабораторная марки МРП-2 или других аналогичных марок. Фотоэлектроколориметр с синим светофильтром и максимумом светопроиускания 440—450 нм

или снектрофотоколориметр.

Весы лабораторные 2-го класса точности с пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104*. Весы лабораторные 3 и 4-го классов точности с пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104. Термостат воздушный или водяной, обеспечивающий поддержание температуры (35г3) *С. Ступка фарфоровая с пестиком по ГОСТ 9147.

Колбы мерные 1(2)—2—100( 1000) по ГОСТ 1770.

Бюретки 1(2.3,5)—2—50 но ГОСТ 29251.

Цилиндр мерный 1(2.3.4)—2—100 по ГОСТ 1770.

Карандаш восковой для стекла.

Банки бытовые вместимостью 200 см³ по ГОСТ 5717.1 —ГОСТ 5717.2 или Колбы вместимостью 150—200 см³ по ГОСТ 23932.

Крышки полиэтиленовые для банок или пробки для колб.

Кальция окись безводная по ГОСТ 8677. ч.. ч.д.а.

Алюминия окись безводная.

Натрий сернокислый безводный но ГОСТ 4166. ч., ч.д.а.

Натрий двууглекислый по ГОСТ 4201. х.ч., ч.д.а.

Калий двухромовокислый по ГОСТ 4220. х.ч.. ч.д.а.

Эфир иетролейный. фракция температурой кипения 40—70 или 70—100 °С. бензин авиационный марки Б-70. или нефрас- С 50/170 по ГОСТ 8505.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применение импортной лабораторной посуды по классу точности и реактивов по качеству не ниже отечественных.

1.3.    Требования безопасности

Все работы с петролейным эфиром и бензином проводят в вытяжном шкафу. При хранении эфира или бензина и проведении анализов необходимо соблюдать требования техники безопасности работы с легковоспламеняющимися и взрывоопасными веществами.

* С 1 июля 2002 г. висло и в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008 (здесь и далее).

И *данис официальное

ГОСТ 13496.17-95

1.4. Подготовка к испытанию

1.4.1.    Приготовление окиси ахюминия Ю %-ной влажности

К 900 г безводной окиси алюминия добавляют 100 см³ дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Реактив хранят в герметически закрытом сосуде с притертой пробкой и используют для анализа на следующий день.

1.4.2.    Приготовление окиси ка.1ьция безводной

Готовят путем растирания окиси кальция в фарфоровой ступке до порошкообразного состояния. Реактив хранят в герметически закрытой банке.

1.4.3.    Калибровка бытовых банок

Во все банки вносят 5 г чистого кварцевого песка или измельченного стекла (при использовании гомогенизатор;» их добавлять не нужно). 15 г сернокислою натрия. 10 г окиси алюминия. 0.5 г окиси кальция и 100 см³ бензина и наносят метку.

1.4.4.    Приготовление основного (стандартного) раствора двухромовокислого ка.хия

0,720 г двухромовокислого калия, взвешенного с тмрешностью не более 0.001 г, растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1000 см³ и затем объем раствора доводят до метки и тщательно перемешивают. Оптическая плотность полученного раствора равна оптической плотности раствора каротина концентрации 0.00416 мг/см³. Раствор хранят в течение одного года посте его приготовления.

1.4.5.    Приготов. хение растворов сравнения

В мерные колбы вместимостью 100 см³ из бюретки приливают каждый раз от нуля 10. 20. 30. 40. 50 см³ основного раствора двухромовокисюго калия и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают. Срок хранения растворов сравнения — не более 3 мес.

Фотометрирование растворов сравнения проводят в кювете с толщиной просвечиваемого слоя 5. 10 или 20 мм при длине волны 450 нм. Оптическую плотность растворов бихромата калия измеряют относительно дистиллированной воды.

Для построения !радуировочного графика на миллиметровой бумаге но горизонтальной оси наносят значения объемов основного раствора бихромата калия, взятых для приготовления растворов сравнения. на вертикальной оси — соответствующую оптическую плотность растворов. Градуировочный график строят для каждой кюветы.

Проверку градуировочного (рафика выполняют в день проведения испытаний но второму и пятому растворам сравнения. При нестабильной работе прибора фотометрируют все растворы сравнения и строят график.

1.5.    Подготовка проб

1.5.1.    Пробу зеленой массы травянистых культур, силоса, сенажа измельчают на ИПР-2 или ножницами до отрезков длиной 1—3 см. Измельченную пробу корма тщательно перемешивают на полиэтиленовой пленке и методом квартования выделяют часть пробы массой 100—200 г. которую размалывают на мельнице в течение 2—4 мин.

Кормовые корнеплоды измельчают на мезгообразователе или растирают на терке.

1.5.2.    Пробу сена (измельчена на ИПР-2 или ножницами до отрезков длиной 1—3 см), травяной муки или витаминной муки из древесной зелени, гранул или брикетов тщательно перемешивают на полиэтиленовой пленке и методом квартования выделяют часть пробы массой 100—200 г. которую размалывают на мельнице. Травяную муку размером частиц 1—2 мм анализируют без предварительного размола.

1.6.    Проведение испытания

1.6.1. Из подготовленной по и. 1.5.1 пробы травянистых культур, силоса, сенажа, после тщательного ее перемешивания, из разных мест берут навеску корма массой 1 —5 г с погрешностью не более 0,05 г. Размер навески определяют в зависимости от ожидаемого содержания каротина. Навеску зеленой массы, силоса или сенажа переносят в фарфоровую ступку, добавляют 5 г песка или мелко измельченного стекла. 15 г сернокислого натрия (при навеске 4—5 г добавляют 20—25 г). В навеску силоса и сенажа, кроме того, добавляют на кончике ножа двууглекислый натрий. Смесь тщательно растирают не менее 3—4 мин. Хорошо растертый и обезвоженный корм без потерь переносят в бытовую банку или колбу вместимостью 200 см³, приливают 100 см³ иегролейного эфира или бензина, обмыв ступку и пестик его минимальным количеством. Добавляют в банку 10 г окиси алюминия 10 %-ной влажности и 0.5 г растертой до порошкообразного состояния окиси кальция, перемешивают стеклянной палочкой, плотно закрывают банку полиэтиленовой крышкой, а колбу пробкой.

2

1.6.2.    Из подготовленной но и. 1.5.2 и хорошо перемешанной пробы сена, травяной или витаминной муки, брикетов или гранул из разных мест берут навеску массой около 1—3 г, для сена до 5 г и переносят в бытовую банку или колбу вместимостью 200 см³. Добавляют 5 г безводного сернокислого натрия, тщательно перемешивают стеклянной палочкой, вносят 10 г окиси алюминия 10 %-ной влажности. 0.5 г окиси кальция и 100 см³ иетролейного эфира или бензина и снова перемешивают.

1.6.3.    Измельчение анализируемой пробы можно проводить и на гомогенизаторе. В этом случае после измельчения пробы сена, силоса, сенажа или зеленой массы травянистых культур на ИГ1Р-2 или ножницами ее тщательно перемешивают и из разных мест берут навеску массой 1—5 г. переносят в стакан гомогенизатора, на дно которого насыпано 15 г сернокислого нагрия (в навеску силоса и сенажа добавляют двууглекислый натрий), приливают 50—60 см³ экстрагента и гомогенизируют 2 мин с частотой вращения 5000 мин^-1. Затем навеску переносят в бытовую банку (колбу), тщательно обмывая стакан гомогенизатора минимальным количеством экстрагента. Добавляют в банки 10 г окиси алюминия 10 %-ной влажности и 0,5 г окиси кальция, доводят экстрагентом до метки и перемешивают.

1.6.4.    Плотно закрытые банки или колбы оставляют в темном месте на 14 18 ч. При проведении экспресс-испытания единичных образцов допускается заменять настаивание термостатирова-нием. Для этого плотно закрытые банки или колбы помешают на 2 ч в предварительно нагретый до 35 *С термостат. Затем пробы охлаждают до комнатной температуры. В целях безопасности работы следует следить за строгим соблюдением температуры во время термостатирования. Перед работой необходимо убедиться в исправности термостата и правильности показаний термометра.

После настаивания или термостатирования. не взмучивая, отбирают шприцом прозрачный отстоявшийся раствор и переносят в кювету фотоэлектроколориметра. Фотометрирование экстрактов каротина проводят относительно иетролейного эфира или бензина, используя кювету на 5. 10, 20 мм.

При оптической плотности раствора более 0.7 в мерную колбу вместимостью 50 см³ вносят 25 см³ анализируемой вытяжки, доводят до метки иетролейным эфиром (или бензином) и перемешивают. При этом полученные результаты определения каротина удваивают.

1.7. Обработка результатов

1.7.1. Содержание каротина (Л), мг/кг. в корме натуральной влажности вычисляют но <|юрмуле

У _ V ■ 0.00416 1000 т

где V — объем основного раствора, найденный по графику, см³;

т — масса навески, г;

0,00416 — коэффициент перевода основного раствора двухромовокислого калия в эквивалентное количество миллиграммов каротина;

1000 — коэффициент пересчета на 1 кг корма.

За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое результатов двух параллельных определений.

Результаты вычисляют до первого десятичного знака и округляют до целого числа.

Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений U/_aflc) и между двумя результатами, полученными в разных условиях (D^c), при доверительной вероятности Р- 0.87 не должны превышать следующих значений:

</*с. = 0,07 X + 0.86;

Дабе = 0.25 X + 5,35,

где X— среднеарифметическое результатов двух параллельных определений, мг/кг;

X — среднеарифметическое результатов двух определений, выполненных в разных условиях, мг/кг.

Предельную погрешность результата анализа (A_lj<v ) при односторонней доверительной вероятности Р = 0.87 вычисляют по формуле

^д£*с.⁼ 0,13* + 2.87. 128

ГОСТ 13496.17-95

1.7.2. Содержание каротина н сухом веществе (ЛГ,). мг/кг, вычисляют но формуле

X - *^1QQ 1 ~100 -w '

где X— содержание каротина в 1 кг корма натуральной влажности, мг;

W — влажность корма. %.

2. Метод определения каротина с использованием пробирочной шкалы

Сущность метода заключается в сравнении интенсивности окраски испытуемого раствора со шкалой стандартных растворов двухромовокислого калия.

2.1.    Огбор проб — по и. 1.1.

2.2.    А н и а р а т у р а. м а т е р и а л ы и реактивы

Д,1Я проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п. 1.2. а также указанные ниже.

Пробирки стеклянные одинакового диаметра и цвета, вместимостью 20—40 см³.

Штатив для пробирок.

Пробки для пробирок.

2.3.    Требования безопасности — но п. 1.3.

2.4.    Подготовка к испытанию — но п. 1.4.

2.5.    Подготовка проб — но и. 1.5.

2.6.    Приготовление пробирочной шкалы

Для приготовления пробирочной шкалы в 14 мерных колб вместимостью 100 см³ вносят основной раствор двухромовокислого калия в количестве, указанном в таблице 1. При этом используют бюретку вместимостью 50 см³. Растворы в колбах доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают и разливают в пронумерованные пробирки, которые плотно закрывают пробками. Номер пробирки должен соответствовать номеру колбы. Пробирочную шкалу хранят в темном месте в течение года. Для шкалы подбирают пробирки одинакового диаметра и цвета.

Таблица 1

Номер пробирки Ос НОННОЙ расгнор бихромата калия, см1 Масса нансски анлппируемой пробы, г 1 2 3 4 5 Содержание каротина, мг/кг 1 1,2 5 2,5 1.7 1,3 1 2 3.6 15 7.5 5 3.8 3 3 6.0 25 12.5 8 6.3 5 4 9.6 40 20 13 10 8 5 14.4 60 30 20 15 12 6 19.2 80 40 27 20 16 7 24.0 100 50 33 25 20 8 28.8 120 60 40 30 24 9 33.6 140 70 47 35 28 10 36.0 150 75 50 37.5 30 11 40.9 170 85 57 42.5 34 12 42.2 180 90 60 45 36 13 48.1 200 100 67 50 40 14 55.3 230 115 77 57.5 46

2.7. Проведение испытания — по и. 1.6

Прозрачный раствор, полученный после двухчасового выдерживания в термостате или настаивания в течение 14—18 ч. не взмучивая, переносят в пробирку и сравнивают со шкалой на фоне бе-

4

лой бумаги. Из шкалы выбирают пробирку, наиболее соответствующую по цвету испытуемому раствору.

2.8. Обработка результатов

Содержание каротина находят по таблице 1. Если испытуемый раствор по окраске интенсивнее раствора пробирки № 14. его разбавляют 1:1 бензином (или петролейным эфиром, или нефра-сом) и снова сравнивают с пробирочной шкалой. При этом полученный результат удваивают.

Если для анализа испытуемой пробы взята навеска 1,5 или 2.5 г. то результат, найденный для навески 1 г, делят соответственно на 1,5 или на 2,5.

Содержание каротина в сухом веществе вычисляют по и. 1.7.2.

ИНФОРМА11ИОННЫЕ ДАННЫЕ

ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД. на который дана ссылка Номер пункта Обозначение НТД. на который дана ссылка Номер пункта ГОСТ 1770-74 1.2 ГОСТ 9147-80 1.2 ГОСТ 4166-76 1.2 ГОСТ 13496.0-80 1.1 ГОСТ 4201-79 1.2 ГОСТ 13586.3-83 1.1 ГОСТ 4220-75 1.2 ГОСТ 13979.0-86 1.1 ГОСТ 5717.1-2003 1.2 ГОСТ 23932-90 1.2 ГОСТ 5717.2-2003 1.2 ГОСТ 24104-88 1.2 ГОСТ 6709-72 1.2 ГОСТ 27262-87 1.1 ГОСТ 8505-80 1.2 ГОСТ 29251-91 1.2 ГОСТ 8677-76 1.2

УДК 636.085:547.979.8.86:006.354    МКС    65.120    С    19    ОКСТУ    9209

Ключевые слова: корма, отбор проб, аппаратура, материалы, реактивы, безопасность, подготовка к испытанию, подготовка проб, проведение испытаний, обработка результатов

130