t>tk л Л** *;'*•V * 7Г'

X X § МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ б -_й И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ к__ \ г — -— В ДВУХ ТОМАХ Том 1 ф

МОСКВА. ВО «КОЛОС», 1992

гируют трижды дихлормстаном порциями по 100; 50 и 50 мл. Нижнюю органическую фазу фильтруют через 30 г безводного Na₂S0₄, промывают сульфат натрия 30 мл дихлорметана. Объединенный экстракт упаривают до 3-5 мл на ротационном испарителе. Добавляют в колбу 10 мл ацетона и испаряют до 2-3 мл. Эту операцию повторяют еще два раза, сконцентрированный остаток количественно переносят в мерную пробирку и доводят объем до 5 мл ацетоном. Полное удаление дихлорметана необходимо, так как его присутствие мешает дальнейшему определению методом ГЖХ.

Из 5 мл раствора отбирают пипеткой 1 мл для газовой хроматографии. Оставшиеся 4 мл упаривают до объема 1 мл и используют для ТСХ. Прибавляют 1 мл бензола к ацетоновому раствору и испаряют до 0,5-0,8 мл, затем доводят бензолом до 4 мл. Вычисляют полное количество экстракта, используемого для ТСХ, и этим количеством корректируют количество пробы, соответствующее бензольному раствору. Бензольный раствор очищают колоночной хроматографией либо на смешанном сорбенте, либо на оксиде алюминия, либо на силикагеле, как описано ниже.

Взвешивают 50 г измельченной в порошок исследуемой пробы сухих продуктов с низким содержанием масла и жира - хлебных культур, кукурузы, муки, сухих кормов, чая, прибавляют 200 мл дихлорметана, закрывают и встряхивают 30 мин. Декантируют растворитель и повторяют экстракцию 30 мл дихлорметана. Фильтруют пробу через воронку Бюхнера, промывают посуду и фильтр 20 мл дихлорметана. Фильтрат переносят в делительную воронку на 1000 мл и промывают смесью воды с ацетоном (5:2) трижды порциями по 50 мл. Сушат дихлормстановую фазу над безводным сульфатом натрия и в дальнейшем поступают так же, как при экстракции из сухофруктов.

При очистке экстракта в системе ацетонитрил - гексан сухой остаток растворяют в 10 мл /«-гексана, раствор переносят в делительную воронку и встряхивают с 10 мл ацетонитрила, насыщенного гексаном, в течение 2 мин. После разделения фаз отделяют ацетонитрильный слой. Гексановый слой экстрагируют еще два раза ацетонитрилом порциями 5-10 мл. Объединенную ацетонитрильную фазу промывают без встряхивания 5 мл гексана, гексановый слой отбрасывают. К ацетонитрилу прибавляют 2%-ный раствор сульфата натрия, чтобы содержание ацетонитрила составляло нс бэлее 20% (200-250 мл раствора сульфата натрия). ФОП экстрагируют из водно-ацетонитрильного раствора гексаном трижды порциями по 30 мл.

Гексановый слой сушат над безводным сульфатом натрия, отгоняют растворитель досуха. Сухой остаток растворяют в 2-5 мл гексана и аликвотную часть хроматографируют. Если в пробе содержится большое количество пигментов, мешающих дальнейшему определению, рекомендуют проводить дополнительную очистку на колонке с активированным углем.

При очистке на колонке с углем для подготовки адсорбента 150 г активированного угля нагревают в 500 мл кипящей 1 н. соляной кислоты в течение 4 ч. Затем промывают его водой до исчезновения ионов хлора и сушат при 95-100 °С до постоянной массы. Температура нс должна превышать 100 °С.

Стеклянную колонку длиной 300 мм с внутренним диаметром 18 мм заполняют 2 г угля и 1 г безводного сульфата натрия. Промывают ко-

70

лонку 20 мл ацетона. Затем на сорбент наносят пробу. Из колонки ФОП элюируют 100 мл ацетона. Ацетон упаривают с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 1-2 мл. Остаток количественно переносят в пробирку. На нагретой до 40-45 °С водяной бане удаляют растворитель. Следы ацетона отдувают слабым током воздуха. Сухой остаток растворяют в 2-5 мл ацетона и аликвотную часть хроматографируют.

При очистке па колонке со смешанным сорбентом для подготовки компонентов для смешанного адсорбента уголь обрабатывают описанным выше способом. Оксид магния (400 г) промывают 1000 мл абсолютного этилового спирта, фильтруют, сушат и активируют при 140 °С в течение 4 ч.

Закрывают нижнее отверстие стеклянной колонки (300 х 18 мм) стекловатой, промывают 1 н. раствором хлороводородной кислоты. Суспензируют 7 г смеси адсорбентов (активированный уголь, оксид магния и диатомит в соотношении 1:2:4) в 40 мл бензола. Заполняют колонку суспензией, промывают воронку и стакан бензолом, переносят смывы на колонку и дают бензолу стечь до поверхности адсорбента. Пипеткой наносят на колонку экстракт в количестве, соответствующем 20-50 г пробы, и элюируют 150 мл дихлорметана.

Очистка микрос^лимацией в вакууме используется для термически стабильных ФОП (фосмст, мстил па ратион, фенитротион, диметоат, изо-фос-3 и др.).

Сконцентрированный до 1-2 мл экстракт количественно с помощью ацетона переносят в патрон сублиматора (см. рис. 1). Удаляют растворитель на водяной бане, нагретой до 40 °С, с применением вакуума. Следы растворителя отдувают слабым током воздуха.

В патрон сублиматора помещают «палец», подсоединяют охлаждение водой, а затем присоединяют сублиматор к вакуумному насосу. Проводят сублимацию при температуре бани 90-95 °С и разрежении 13,3-26,7 Па (0,1-0,2 мм рт. ст.) в течение 40 мин. По окончании сублимации сублиматор вынимают из водяной бани, отсоединяют вакуум и холодную воду. ФОП смывают с «пальца» сублиматора 10 мл ацетона в пробирку. Ацетон из пробирки отгоняют на водяной бане. Следы растворителя отдувают слабым током воздуха. Сухой остаток растворяют в 2-5 мл ацетона. Далее проводят определение методом ГЖХ и ТСХ.

Пробу растительного материала, содержащего воск, массой 25-50 г помещают в коническую колбу и заливают 50 мл смеси ацетона с водой (1:1). Экстрагируют ФОП два раза по 30 мин при механическом встряхивании. Экстракт фильтруют и помещают в холодильник или в смесь льда с хлоридом натрия на 1 ч. Раствор после охлаждения фильтруют через стекловату (воронка и стекловата охлаждены). Из водноацетонового раствора пестициды экстрагируют хлороформом (хлористым метиленом) три раза порциями по 50 мл. Растворители перед экстракцией насыщают водой. Объединенный хлороформный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют до объема 5-7 мл, после чего очищают хроматографией на колонке (пестициды, растворимые в н-гсксанс, могут быть очищены перераспределением в системе н-гсксан - ацетонитрил, см. с. 70). Колонку заполняют 2 г активированного угля, 2 г оксида алюминия, 1 г безводного сульфата натрия; ФОП элюируют с колонки 100 мл ацетона. Элюат упаривают

71

досуха. К сухому остатку в пробирке пипеткой добавляют 2-5 мл ацетона. Содержание ФОП определяют методом ГЖХ или ТСХ.

Пробу пищевых продуктов животного происхождения (например молока) нагревают до 40 °С, гомогенизируют, переносят 20 г в колбу на 250 мл, добавляют 70 мл ацетонитрила и 10 мин встряхивают на аппарате для встряхивания. Содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу на 100 мл. Фильтр промывают ацетонитрилом, доводят объем жидкости до 100 мл. Фильтрат <50 мл) переносят в делительную воронку на 500 мл и прибавляют 250 мл 2,5%-ного водного раствора сульфата натрия.

Экстрагируют ФОП хлористым метиленом порциями 50; 50 и 20 мл. Растворители перед экстракцией насыщают водой. Экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия, промытого хлористым метиленом, в колбу на 250 мл и концентрируют при 45 °С на ротационном вакуумном испарителе до объема 2-3 мл. При помощи хлористого метилена переносят в коническую пробирку со шлифом и осторожно испаряют на водяной бане при температуре 40 °С под вакуумом досуха. Сухой остаток растворяют в 0,2-0,5 мл бензола для ТСХ и в 1-5 мл ацетона для ГЖХ.

Пробу масла сливочного, жира свиного, растительных масел массой 50 г вносят в стакан вместимостью 200 мл, расплавляют при 40 °С и растворяют в 100 мл л-гсксана, насыщенного ацетонитрилом. Содержимое стакана фильтруют через бумажный фильтр со слоем безводного сульфата натрия, промытого //-гексаном, в мерную колбу на 250 мл. Слой сульфата натрия несколько раз промывают //-гексаном. Экстракт в мерной колбе доводят //-гексаном до объема 250 мл. Для анализа отбирают 20 мл //-гексанового фильтрата, что соответствует 4 г пробы, переносят в делительную воронку на 100 мл, встряхивают трижды с 20 мл ацетонитрила, насыщенного //-гексаном. Объединенные ацетонитрильные экстракты разбавляют в 500-миллилитровой делительной воронке 300 мл 2,5%-ного водного раствора сульфата натрия. ФОП экстрагируют порциями по 50; 50 и 20 мл хлористым метиленом и далее поступают так же, как при экстракции пестицидов из пробы молока.

Гомогенизированную пробу мышечной ткани и внутренних органов (10 г) смешивают с силоксидом до однородной порошкообразной массы и переносят в колбу со шлифом на 300 мл. Добавляют 50 мл ацетонитрила и встряхивают 10 мин на аппарате. Ацетонитрильную фазу декантируют через воронку с бумажным фильтром в мерную колбу на 100 мл и остаток встряхивают еще 5 мин с 50 мл ацетонитрила. Затем содержимое колбы фильтруют под вакуумом через воронку Бюхнера. Фильтр промывают ацетонитрилом, фильтрат переносят в мерную колбу и доводят до объема 100 мл тем же растворителем. Далее анализ продолжают так же, как анализ молока. Если проба содержит более 5% жира, перед ГЖХ проводят ацетонитрильную очистку (см. с. 70).

Экстракцию необходимо проводить с охлажденными до +5-0 °С растворителями, чтобы достигнуть хорошего разделения фаз.

Методы    аналитического    определе

ния. При использовании метода ГЖХ применяют хроматограф с ДЭЗ, ТИД или ПФД. Хроматографическая колонка стеклянная длиной 1,5 м с внутренним диаметром 3,5 мм. Колонка заполнена хроматоном N-AW-HMDS (0,16-0,20 мм) с 5% SE-30 (основная).

72

Альтернативные колонки: 5% ХЕ-60, 2% ПДЭГС; 1,5% OV-17 + 2% QF-1, 3% OV-17; 5% ДС-200 на тех же носителях.

Температура колонки в зависимости от фазы и исследуемого пестицида \ SV230 °С.

Конкретные параметры работы зависят от применяемого прибора.

Подготовленную колонку перед работой кондиционируют при скорости азота 40 мл/мин первоначально в режиме программирования температуры от 50 до 250 °С при скорости нагрева 4 °С в 1 мин, а затем в изотермическом режиме в течение 48 ч. Для насыщения вновь подготовленной колонки целесообразно в испаритель вводить в трех повторностях поочередно по 1 мкл стандартных растворов ФОП и по 1 мкл контрольной пробы. В таблице 21 в качестве примера приведено относительное время удерживания ФОП.

21. Относительное время удерживания (по метафосу) фосфорорганических пестицидов и алчл-триазиновых гербицидов (хроматограф «Цвет-106» с ТИД, скорость потока азота 20 мл/мин, длина колонки 1 м)

		Неподвижная фаза
Пестицид	5 % SE-30,	3 % OV-17,	1 % рсоплскс.	2 % ПДЭГС.
	темпера ту-	температу-	температура	температура
	ра колонки 190 °С	ра колонки 180 °С	колонки 190 °С	коле 210 °С	>нки 175 °С
Мстафос	1 (4,6)4	1 (16,6)*	1 (3,8)*	1.0 (3 мин 10 с)	1.0 (13 мин 11 с)
Актеллик	1,36	1,05	-	0,3	0,28
Базудин	0,71	0,53	-	0,1	0,1
Гардона	0,58	-	-		—
Гстсро- фос	0,81 «♦	—	—	0,25	0,22
ДДВФ	Р	0,07	—	—	(2 32 с)
Дурсбан	-	-	0,57	—	—
Карбофос	1,47	1,38	0,87	0,65	0,78
Корал	1,62	-	-	-	-
Мстил- нитрофос	1,45	—	1,07	0,37	0,28
Релдан	1,0	-	0,47	-	-
Рицид-П	1,04	-	-	0,25	0,20
Трихлор- мста- фос-3	1,36	1,04		0,3	0,28
Фозалон	5.5	—	—	_	_
Фосфамид	0,84	0,72	-	1,16	—
Фталофос	5,2	-	-	-	—
Хлорофос	Р**	0,07	-	-	-

73

Продолжение

Неподвижная фаза Пестицид 5 % SE-30, 3 % OV-17, 1 % реоплскс, 2 % ПДЭГС, температу- температу- температура температура ра колонки 190 °С ра колонки 180 °С колонки 190 °С кол< 210 °С ЭНКИ 175 °С Хоста к-ВИК 0,38 0.27 - - - Этафос 2,30 - - 0,55 0,57 Симазик 0,83 0,75 - 0,72 - Атразин 0,85 - 0,67 0,55 - Пропазин 0,88 - - 0,42 0,43 Промс- трин — — 0,73 0,54 0,56 Me зо pail ил 0,99 — — 1,36 Ссмсрон 1*21 - - 0,76 -

В скобках - время удерживания мстафоса, мин.

*♦* Р “ пик выходит с растворителем.

При определении ДДВФ колонка длиной 210 см, /*_од *= 120 °С. В этих условиях метафос нс хроматографируется.

Количественное определение проводят методом соотношения со стандартом по высоте пиков или методом внутреннего стандарта, используя в качестве последнего один из ФОП, нс применяемых в стране.

Ориентировочное время проведения анализа методом ГЖХ для 5 проб (10 определений) животного происхождения 8 ч, для проб растительного происхождения и почвы - 10 ч, воды - 4 ч.

Ошибка двух параллельных определений одной пробы ±8%.

Расчет результатов определения методом ГЖХ. Содержание пестицида в пробе (X, мг/кг, мг/л) определяют по формуле

c_crnv₂

X--,

HcrVf

где Сет - количество пестицида в стандарте, нг; Я - высота пика пробы, введенной в хроматограф, мм; Н„ - высота пика стандартного раствора, введенного в хроматограф, мм; К, - объем экстракта пробы, введенный в хроматограф, мкл; V₂ - общий объем упаренного экстракта, мл; Р - масса (или объем) пробы, взятой для анализа, г (мл).

Метод ТСХ. Пробу, сконцентрированную до 0,1-0,2 мл, с помощью микропипстки (капилляра) переносят количественно на хроматографическую пластинку. На эту же пластинку наносят 0,01; 0,05 и 0,1 мл основного стандартного раствора.

74

Хроматограмму развивают в одной из приведенных систем подвижных растворителей (табл. 22). После развития хроматограмму сушат на воздухе, а затем обрабатывают одним из следующих проявителей.

22. Величины R_f и R_t фосфорорганических пестицидов на стандартных пластинках «Силуфол* в различных подвижных фазах

Пестицид Хлороформ Смесь растворителей Соотношение растворителей в смеси *♦ К' к, ♦ *s Метами- 0,04 0,05 Гексан - ацетон 1:1 0,18 дофос То же 2:1 0,39 Ацефат 0,05 0,06 ь 1:1 0,25 » 1:2 0,53 Хлорофос 0,09 0,10 р 1:1 0,60 р 2:1 0,32 Фосфамид 0,15 0,17 р 1:1 0,72 Антио 0,30 0,34 р 1:1 0,95 Циодрин 0,32 0,37 р 1:1 0.78 р 2:1 0,40 р 3:1 0.20 ДДВФ 0,30 0,34 р 2:1 0,50 Дибром 0,36 0,41 р 2:1 0,52 р 3:1 0,45 Хоста к- 0,33 0,38 р 2:1 0,50 вик Базудин 0,32 0,38 р 10:1 0,30 р 6:1 0,60 Гстсро- 0,33 0,38 р 3:1 0,37 фос Сслскрон 0,34 0,39 р 3:1 0,43 Этафос 0,38 0,44 р 3:1 0,45 Афуган 0,38 0,44 р 1:1 0,96 Карбофос 0,43 0,49 р 9:1 0,22 Фталофос 0,48 0,55 р 1:1 0,89 Гардона 0,54 0,62 » 1:1 0,86 » 3:1 0,41 Актеллик 0,58 0,67 » 3:1 0,74 А фос 0,60 0,70 » 9:1 0,25 р 3:1 0,56 Корал 0,63 0,72 р 9:1 0,28 Четыреххлористый — 0,0 углерод Фозалон 0,69 0,79 Гексан - ацетон 9:1 0,48 Абат 0,79 0,91 То же 9:1 0,30 Рицид-П 0,81 0,93 » 9:1 0,37 Мета фос 0,87 1 » 9:1 0,35 Р-О-Мс- 0,26 0,30 - - -

тафос

75

Г л а в a 2. ОРГАНИЧЕСКИЕ СОЕДИНЕНИЯ ФОСФОРА

Утверждено 11.03.85 N° 3222-85

УНИФИЦИРОВАННАЯ МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ РАСТИТЕЛЬНОГО И ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ, ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЯХ, КОРМАХ, ВОДЕ, ПОЧВЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ

В методических указаниях обобщены сведения о физико-химических свойствах ФОП, об основных растворителях и реактивах, применяемых для экстракции пестицидов и анализа их методами ТСХ и ГЖХ. Дана информация о способах очистки экстрактов в зависимости от свойств анализируемого материала, приведены сведения об основных приемах аналитического определения ФОП методами ТСХ и ГЖХ. Детально изложена методика хроматоферментного определения ФОП. Приведен перечень методик, утвержденных Министерством здравоохранения СССР, положенных в основу Унифицированной методики.

В разработке методики принимали участие специалисты многих стран.

В основу унифицированных методических указаний положены следующие методические указания, утвержденные Минздравом СССР: 30.07.73 №    1112;    22.09.75 N?    1350; 20.12.76 №№ 1357,    1544,    1547,

1551-1553, 1558; 18.02.77 №№ 1772, 1785, 1788, 1798-1800, 1802; 5.06.78 №№ 1881,1884; 27.09.78    №№    1911,    1916,    1920;    19.10.79

№№ 2058,    2075,    2076.    2081,    2086. 2091,    2097;    20.01.80    №N?    2132,

2133, 2136,    2143,    2144;    30.03.81 №№ 2358,    2362;    06.08.81    №№    2414,

2419; 28.12.82 №    2647,    2649;    12.05.83 №    2782;    24.08.83    N?№    2832,

2857; 12.04.85 N? 3247; 08.04.87    N?№    4321,    4361,    4364;    14.07.88

№ 4667.

Краткая характеристика препаратов приведена в таблице 20.

Из таблицы исключены препараты, применение которых в СССР нс разрешено.

59

Актеллик (пири-мифосмстил) 0,0-Диметил-О (2-диэтиламино-6-мс-тилпиримкдил-Отио-фосфат C«»!jbN,03PS Амифос. аминфос 0.0-Димсгил-$-(2-(ДАЕР) ацетамидоэтял)ди-тиофосфат C,UMNOA Антио (формо-тион) 0.0-flHMcmn-S-(N- MCTm-N-формилкар- бамоилмстил)дитио- фосфат c*huno4ps2 Афуган (пиразофос) О.О-Диэтил-О-(5-мстил-4-карбэтокси-п и ридon и ра золил -9) тиофосфат CMII»NAPS Базудин (диазинон) О.О-Диэтил-О-(2-иэопропил-4-метил- CuHjjNjOjPS пиримидкл-6) тиофос-фат Байтскс. лсбай-цид (фентион) 0,0-Дсмитил-0-(4-м егилтио-3-м етил-фенил) тиофосфат C»HuOjS2P Бирлан, супона О,О-Диэтил-О- [2-хлор-1-(2,4-дихлор-фенкл) винил) фосфат СпНцСЦР Бромофос О.О-Диметил-0-(2,5-дихлор-4 -бромфе-нил) тиофосфат C»II,BfO,Cl2PS Валсксон (фоксим) 0,0-Д иэтил ти офос-форил-О-(а-циано-бензальдоксим) CufluOjNjSP Гардона (тстра-хлорвинфос) О.О-Диметил-О-[2-хлор-1 -(2,4.5 три-хлорфснил)винкл] -фосфат cjuojo4? Гстсрофос S-Пропил-О-фенил-О-этклтиофосфат Cnii.APS ДДВФ, хлореин-фос (дихлорфос) О.О-Диметил-О- (2,2-дихлорвикил) фосфат c4ii,ciao4P Дибром (налсд) О.О-Димегил-О-(1.2-дибром-2.2-д ихл орэтил) фосфа т C4H,04C12P Дурсбан (хлор-пирифос) О.О-Диэтил-О-(3.6-трихлор-2-пи-рид ил) тиофосфат QH.ANCIjSP

305.4 0.13 (30*0 Tp.p. Ацетон, бензол, эфир, спирт, хлороформ 243,3 - - Ацетон, бензол, эфир, метанол, толуол 257.3 1.06-10-4 (20 °C) Tp.p. Бензол, спирт, хлороформ, эфир 373,2 2,27- КГ* (50 eC) 40 Бензол, ксилол, спирт, толуол 304.4 1,1210-* (20 eC) Ацетон, бензол, спирт, эфир, ксилол. хлороформ 278.3 4 10-» (20 °С) 0.005 CCI4. метанол, эфир, спирт 359.6 5.33-10-* (20 *С) 145 Ацетон, бензол, спирт, толуол 365.0 1.73-10-* (20 вС) 40 Ацетон, бензол, диметил формамид, хлороформ, эфир 298.3 1.3 (20 вО 7 Хлороформ, ацетон, эфир, спирт 366.0 5,6-10* (20*0 11 Димстил формамид 260.1 1.01 (20 вО Ацетон, бензол, хлороформ, гексан 221.0 1.6 (20 вС) 1000 Ацетон, бензол. ДДЭ, хлороформ, метанол 380.8 0.267 (20 °С) Н.р. Бензол, толуол, ксилол 350.6 2.53-10-* (25 вС) 0.2 Бензол, хлороформ

---

Метафос, мстацид вофатокс, (пара-тионметил) 0.0-Диметил-0-(4-нитрофенил) тиофосфат C4H10NOjPS Метафос кислородный аналог (метаксон) 0,0-Диметил-0-(4- нитрофснил)фосфат C*Hw06PN Плондрсл, лаптран (диталимфос) О.О-Диэтил-М-фта- лимндотиофосфат CUH, AN PS Примицид (пири-мифосэтил) 0-(2-Диэтиламино-6-метилпиримидид--4)-0,0-диэтил тиофосфат CuIImNjO^PS Релдан (хлорпи-рифосметил) О.О-Диметил-О-(3.5,6-трихлорпи-рид ил-2) тиофосфа т C^bCbNAPS Рицид-П. кита-цин (ИБФ) Селскрон. кура-крон (профенфос) Б-Венэил-О.О-ди-изопропил тиофосфат 0-(4-Бромо-2-хло-рофенил) -S-пропил-О-этилтиофосфат CuHAPS C„!luBrClOjPS Трибуфон (буто-иат) Т рихлормстафос. роннсл. фенхлор-фос 0,0-Д и м етил - (1-бу-тирокси-2,2,2-три-хл орэтил) фосфонат О.О-Диметил-О-(2,4,5-трихлорфс-нил) тиофосфат C4HMC1,P05 C.lUCljOiPS

263,2 1,29- 10*J (20 ea 55 Дихлорэтан, хлороформ 247.2 - Tp-P. Ацетон, спирт, хлороформ 299.9 - H.p. Ацетон, бензол, этила цстат. хлороформ 333.4 3.87-10-* (25 eC) 1 Ацетон, бензол, эфир, спирт, хлороформ 322.6 9.86-lO*5 4 Ацетон, хлороформ, бензол, метилен-хлорид. ацетонитрил 260.3 2.29-10-* (20 eC> 5 Ацетон, ДМФ. метанол 373.6 1,33-io-J (20 °C) 20 Гексан, бензол, мстилснхлорид. мета мол 327.5 - II-P Гексан, метанол, спирт 321.6 ' 0.107 (20 °C) 40 Гексан, ацетон, хлороформ

---

Продолжение

9-IC L

Торговое название препарата Химическое Брутто Молеку лярная масса Давление паров. Па (r,eC) Растворимость (общепринятое название) название формула » воде, мг/л (Л°С) в органическом растворителе Фснитрооксок 0,0-Диметил-0-(3-мстил-4-нитрофс-нил) фосфат C,ll|jN06P 261,2 - - Ацетон, спирт, хлороформ Феккаптон 0,0-Диатил-5-(2,5- дихлорфенилтиоме- тил)дитиофосфат СцН qCIjO]PS] 373.3 - Тр.р. Метанол, хлороформ Фосфамид, Би-58. О.О-Димстил-Э-СМ- CjUuNOjPSj 229.3 1.07-10-» 39 000 рогор (димстоат) мстил карбамоилмс-тил)дитиофосфдт (20 вС> дихлорэтан, эфир, хлороформ Фталофос, имидак 0.0-Димстил-$-(Н- CuIluNO.PS, 317.3 1.33-ю-* Тр.р. Бензол, мстил. (фосмст) фталимидомстил)ди- (20 вС> спирт. CCU. тазу- тиофосфат ол. эфир Фозалон. золон О.О-Д иатил-S- (2- CUHUC1N04PS2 _ До 50 °С 10 Гексан, ацетон. (бензофосфат) хл орбен эоксаэол и - нелетуч метанол, спирт. нон-2-ил-З-мстил) -дитиофосфат хлороформ Хлорофос, негу- 0.0-Диметил-(1-ок- С4Н*04С1, 254.4 1.04-10-» 123 000 Бензол, хлороформ вон. диптсрскс. си-2,2,2-трихлор- (20 вС> (трихлорфон) этил)фосфонат Хостаквик 0.0-Димстил-0-(6- C»HUCI04P 9.6-10-* 2.2 Ацетон, метанол. (гсптснофос) хлоробицикло- (20 *С) кс и лаз. н-гсксзм [3,2,01 гептадисн--1,5-ил)фосфонат (130 г/л) Цидеал (фено- О.О-Димстил-S-a- cun,APS2 320.4 5.33-10-* Тр.р. Бензол, дихлорэтан, эфир. ecu Ацетон, метанол, хлороформ тоат) карбатокс ибензил)-дитиофосфат (40 *С> Цианокс 0,0-Димстил-0-(4- C,IIieN0,PS 243.2 1.05-10-1 (20 *С) Н.р. (цианофос) цианофенил) тиофосфат Циодрин О,О-Димст ил-О-1- CUI1№06P 314.3 0.19 (20 вО 0.1 Метанол, эфир, хлороформ (кротоксифос) мстил-2-карбоксил-(a-фснилатил) ви- Экамст нил-фосфат О.О-Д и мстил-О (2- CM!1IIN204PS 292 8.6-10-* (20 вС) Тр-р. Этанол, ацетон, ксилол (этринфос) этил-4-этоксипири- мидил-6)тиофосфат 328.9 10 Ацетон, хлороформ. Этафос 5-Пропил-0-(2,4-дихлорфенкл) -О- CuIltfClAPS метанол Этиокон атилтиофосфат Бме-(0.0-диэтилди - СуИмОАР, 384.5 210-4 тр.р. Бензол. CCU. хлороформ, дихлор- (атион) тиофосфорил) метан Т),05 (26*0 750 Ацетон, бензаз. Этопрофос. О-Этил-Э-дипропил- C^HnOaPSi 242.3 спирт, эфир профос (этопроп) дитиофосфат

Методика определения фосфорорганических пестицидов методами ГЖХ и ТСХ

Принцип метода. Метод основан на экстракции ФОП из анализируемой пробы органическими растворителями (ацетон, хлористый метилен, хлоро4юрм, дихлормсган или //-гексан). Растворитель выбирают в зависимости от анализируемого объекта и физико-химических свойств пестицида. Применение //-гексана в качестве экстрагента ФОП ограничивается низким коэффициентом распределения соединений в этом растворителе и рекомендуется только для афугана, бромофоса, гардоны, мстафоса, карбофоса, цидсала. После очистки экстракта галогснсодср-жащис растворители упаривают досуха, так как их присутствие мешает дальнейшему газохроматографическому определению.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием селективных детекторов, различных неподвижных фаз при ГЖХ и различных систем подвижных растворителей и проявляющих реагентов при ТСХ. Некоторые производные енл/л-триазина мешают определению.

Приборы и посуда. Для экстракции и очистки экстрактов. Мерная посуда I класса точности. Воронки делительные на 1506-2000; 500; 200 мл. Источник УФ-свста. Ротационный вакуумный испаритель с набором колб. Аппарат для встряхивания. Микросублиматор (рис. 1). Колонки для адсорбционной хроматографии размерами 400 х 20, 300 х 18, 100 х 3 мм. Почвенное сито.

Для ГЖХ. Хроматограф с ДЭЗ или ПФД. Колонки стеклянные длиной 1,5 м с внутренним диаметром 3,5 мм. Микрошприцм на 10 мкл.

Д л я Т С X. Стеклянные пластинки размером 9 х 12 см (20 х 20 см). Пластинки «Силуфол». Камера для хроматографирования. Пульверизаторы. Эксикатор. Микропипстки (капилляры). Фен. Термостат.

Приготовление пластинок для ТСХ. Готовят сорбционную массу из расчета 14 г силикагеля, 1 г гипса, 40 мл воды (на 6-7 пластинок). Слой наносят общепринятым способом.

Реактивы и растворы. Основной стандартный раствор препарата 100 мкг/мл в ацетоне или в //-гексане для веществ, растворяющихся в гексане (10 мг вещества в 100 мл раствора), можно хранить в холодильнике нс дольше 1 мсс. Стандартный раствор в бензоле с тем же содержанием можно

Рис. 1. Прибор для микросублимации в вакууме (размеры в мм).

хранить в холодильнике 6 мсс. Рабочие стандартные растворы готовят разбавлением основного раствора в ацетоне, «-гексане или бензоле (содержание препарата 0,2; 0,5; 1 или 5 мкг/мл). Готовят в день употребления, хранят в холодильнике.

Для экстракции. Ацетон х.ч. //-Гексан х.ч. Бензол х.ч. Хлороформ ч. Хлористый метилен ч. Все растворители перегнанные, срок хранения 2 недели. Ацетонитрил ч., свсжспсрегнанный (хранить 1 сут). Метанол ч. Сульфат натрия безводный ч. и 2,5%-ный водный раствор. Хлорид натрия, 10%-ный водный раствор. Кислота хлороводородная, 0,1 н. водный раствор. Хлорид кальция, 0,05 н. водный раствор. Полистирольный гель (размер гранул 0,5-1 мм). Сополимер стирола с 2% дивинилбензола или амберлит ХАД-4.

Для очистки экстрактов. Уголь активированный БАУ, КАД, молотый. Оксид алюминия по Брокману II степени активности, нейтральный. Силикагель КСК (100-150 мсш). Силоксид. Оксид магния чд.а. Диатомит, промытый кислотой.

Для метода Г Ж X. Носитель хроматон N-AW-HMDS, хромо-сорб W, ИР, газохром Q, варапорт 30 (0,16-0,20 мм или 80-100 мсш). Стационарная фаза: неполярная DC-200, SE-30, SE-30I, OV-101 и др.; среднеполярная OV-17, ХЕ-60, QF-1 или др. в количестве 2%, полиди-этилснгликольсукцинат (ПДЭГС) в количестве 2%; полифен ил мстил силикон (ПФМС) в количестве 5%. Водород из баллона или получаемый из генератора водорода. Воздух из баллона или нагнетаемый компрессором. Азот особой чистоты (содержание 0₂ нс более 0,003%).

Для метода ТСХ. Силикагель марки КСК (100-150 мсш). ЛС 5/40 (70-100 мсш) или аналогичный сорбент. Оксид алюминия по Брокману II степени активности для хроматографирования. Сульфат кальция х.ч., прокаленный в течение 6 ч при 160 °С. Пластинки «Си-луфол*.

Для проявления хроматограмм используют следующие проявляющие реагенты. Раствор нитрата серебра в аммиаке и ацетоне. Нитрат серебра (0,5 г) растворяют в 5 мл дистиллированной воды, после чего прибавляют 7 мл аммиака и разбавляют раствор ацетоном до объема 100 мл. Готовят в день употребления. Хранят в темном месте. Применяют для ФОП, содержащих галоид.

Раствор нитрата серебра с 2-феноксиэтанолом. Нитрат серебра (0,5 г) растворяют в 5 мл дистиллированной воды, после чего прибавляют 1 мл 2-фсноксиэтанола и разбавляют раствор ацетоном до объема 100 мл. Готовят в день употребления, хранят в темном месте.

Раствор хлорида палладия. Хлорид палладия (0,2 г) помещают в коническую колбу на 100 мл, прибавляют 40-50 мл 0,01 н. раствора хлороводородной кислоты, опускают колбу в нагретую до 50-60 °С водяную баню на 10-15 мин, затем охлаждают при комнатной температуре. Во время нагревания и охлаждения колбу с содержимым часто встряхивают. Через 2-3 ч после полного растворения реактива раствор переливают в цилиндр и доводят 0,01 н. раствором хлороводородной кислоты объем до 100 мл. Раствор хранят на холоде несколько месяцев.

Бромфеноловый проявитель. Смесь бромфенолового синего и нитрата серебра. Готовят два раствора: 1) 0,5%-ный водно-ацетоновый (1:3) раствор нитрата серебра; 2) 0,05%-ный бромфеноловый синий в 10 мл ацетона. Второй раствор разбавляют первым раствором до объема

67

100 мл. Хранят в темном прохладном месте. После обработки хроматограмм бромфеноловым проявителем осветляют фон обработкой пластин 2%-ным раствором лимонной кислоты или 5%-ным раствором уксусной кислоты. Хранят в темном месте. Применяют для обнаружения дитио- и тиофосфатов.

Раствор 2,6-дибром-М-хлорхинонимина. 0,5%-ный раствор в гексане. Хранят в прохладном темном месте. 0,5%-ный раствор бриллиантового зеленого в ацетоне. 2%-ный раствор резорцина и 10%-ный раствор углекислого натрия (перед обработкой хроматограмм реактивы смешивают в соотношении 2:3) применяют для обнаружения трихлорфона и ди-хлорфоса. 4%-ный водный раствор едкого натра применяют для обнаружения ФОП, содержащих группы N0₂. 1%-ный раствор 4-(л-нитро-бснзил)пиридина в ацетоне и 10%-ный раствор тстраэтиленпентамина в ацетоне.

Хранение проб и подготовка их к анализу. Пробы животного происхождения следует хранить в холодильнике, анализировать в день отбора. Пробы воды, почвы и растительного материала можно хранить в холодильнике не более 5 дней. Пр- определении дихлорфоса пробы необходимо анализировать в день OTwpa. Каждую пробу воды отбирают в стеклянную бутылку с притертой пробкой вместимостью нс менее 1 л. Почву перед анализом просеивают через почвенное сито и анализируют в естественно-влажном состоянии. Параллельно определяют содержание влаги в почве в пересчете на воздушно-сухую массу.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Анализируемую пробу воды (1 л) помещают в делительную воронку на 1500-2000 мл, подкисляют 0,1 и. раствором 11С1 (5-10 мл) до pH 4-5, хорошо перемешивают, добавляют 50 мл 10%-ного раствора хлорида натрия, экстрагируют из водной фазы хлороформом (хлористым метиленом или дихлормстаном) трижды (порциями по 100, 50 и 50 мл). Растворители перед экстракцией предварительно встряхивают в течение 2-3 мин с дистиллированной водой, затем воду отбрасывают. Экстракты объединяют, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют небольшими порциями в грушевидную колбу ротационного вакуумного испарителя вместимостью 50 мл. Порциями отгоняют растворитель с помощью ротационного испарителя до 0,5-1 мл. Оставшийся растворитель отгоняют досуха на воздухе при комнатной температуре. К сухому остатку пипеткой добавляют 1 мл ацетона, колбу закрывают пробкой, тщательно обмывают стенки колбы растворителем. В хроматограф вводят 2-5 мкл полученного раствора. После определения ФОП методом ГЖХ с ТИД или ПФД в пробирку помещают заплааленный сверху стеклянный капилляр и удаляют растворитель слабым нагреванием на водяной бане с температурой 40°С до объема меньше 0,2-0,3 мл. Остаток количественно с помощью того же стеклянного капилляра, но с отломанным заплавленным концом переносят на хроматографическую пластинку.

Для извлечения некоторых ФОП (бромофос, пиразофос, паратионмс-тил, малатион, тстрахлорвинфос, фентоат) в качестве экстрагента может быть также рекомендован //-гексан. В этом случае из подготовленной описанным выше способом пробы воды (pH 4-5) указанные пестициды экстрагируют //-гексаном трижды порциями по 100 мл и далее поступают с //-гексановым экстрактами так же, как с хлороформными.

Концентрировать ФОП из воды можно на сополимере с дивинилбензо-

лом. 20 г сополимера стирола с 2% дивинилбензола (размер гранул 0,5-1,0 мм), предварительно отмытого бензолом, помещают в делительную воронку, куда наливают бензол (100 мл). После того как сополимер набухнет в органическом растворителе (1,5-2 ч), его переносят с водой в стеклянную колонку (высотой 40 см с диаметром 2 см). Высота слоя сополимера в колонке 21 см. Объем бензола, связанного сополимером, 72-75 мл. Через эту колонку пропускают 10 л воды, содержащей ФОП, со скоростью 80-100 мл/мин. Оставшуюся воду отсасывают водоструйным насосом, колонку на 30-60 мин заливают бензолом, а затем элюируют бензолом поглощенные вещества со скоростью 2 мл/мин. Собирают 100 мл олюата, упаривают растворитель и проводят определение с помощью ГЖХ или ТСХ.

Пробу почвы (10-25 г) помещают в коническую колбу, заливают 50 мл метанола или смеси ацетона с 0,05 н. водным раствором хлорида кальция (1:1), время экстракции 30 мин при периодическом встряхивании. Экстракцию повторяют трижды. Экстракт фильтруют (или центрифугируют). Мстанольный раствор разбавляют 150 мл воды и ФОП экстрагируют хлороформом * (трижды по 30 мл).

Из водно-ацетонового экстракта ФОП извлекают хлороформом* (хлористым метиленом или дихлорэтаном), трижды по 10 мл, объединяют хлороформный экстракт, сушат и упаривают, как при определении в воде. При необходимости экстракты очищают сублимацией в*вакууме, на колонках с адсорбентами.

Пробу растительного материала, не содержащего воска (25-50 г>. экстрагируют смесью ацетона и воды (1:1) или ацетонит ;и' к ; порциями по 50 мл, время каждой экстракции 15 мин при механическом встряхивании. Объединенный экстракт переносят в делительную воронку и прибавляют 250-300 мл дистиллированной воды.

Из водно-ацетонового раствора экстрагируют пестициды хлористым метиленом ♦ (хлороформом или дихлорметаном) трижды по 50 мл. Экстракт, содержащий пестициды, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют, концентрируют (как при определении в воде) до объема 0,2-0,3 мл (досуха на воздухе) и анализируют методами ГЖХ или ТСХ. При необходимости экстракт очищают микросублимацией в вакууме, на колонке с углем или в системе «-гексан - ацетонитрил.

Взвешивают 20 г исследуемой пробы фруктов, сушеных фруктов с высоким содержанием сахара - фиников, фиг, изюма, сушеных слив, заливают 50 мл дистиллированной воды и оставляют на 2 ч. Пробу измельчают гомогенизатором при высоких оборотах, а затем после прибавления 150 мл ацетона гомогенизируют еще 2-3 мин. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера. Промывают ножи гомогенизатора, посуду и осадок на фильтре 20-30 мл ацетона. Фильтрат переносят в делительную воронку вместимостью 1000 мл и добавляют в него 450 дистиллированной воды или раствора сульфата натрия. Количество соли зависит от образующейся эмульсии. Например, к экстракту бананов сульфат натрия не добавляют. К экстракту из яблок добавляют 2% сульфата натрия, а к экстракту из земляники - 4%. Из этой смеси ФОП экстра-

Растворитсли перед экстракцией насыщают водой, как указано

69