Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

9 страниц

304.00 ₽

Купить ГОСТ 30519-97 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной навеске продукта бактерий рода Salmonella

  Скачать PDF

Переиздание

Рекомендуется использовать ГОСТ Р 52814-2007 (ИУС 7-2008)

Действие завершено 01.01.2009

Оглавление

1 Сущность метода

2 Отбор и подготовка проб

3 Аппаратура, материалы, реактивы

4 Подготовка к анализу

4.1 Приготовление растворов и реактивов

4.2 Приготовление питательных сред

5 Проведение анализа

5.1 Неселективное предварительное обогащение

5.2 Селективное обогащение

5.3 Выделение и идентификации культур на агаризованных дифференциально-диагностических средах

5.4 Биохимическое подтверждение принадлежности выделенных характерных колоний к бактериям рода Salmonella

5.6 Серологическое подтверждение принадлежности культур к бактериям рода Salmonella

6 Оценка результатов

Приложение (обязательное) Биохимическая характеристика четырех подродов Salmonella и атипичных видов, входящих в подрод Salmonella I

Показать даты введения Admin

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ


ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ Метод выявления бактерий рода Salmonella

Издание официальное

МКЖГОСУДАРСТВКННЫЙ СОВЕТ НО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ Минск

ГОСТ 30519-97/ГОСТ Р 50480-93

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощссушилыюй промышленности (ВНИИКОП) и Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 «Продукты переработки плодов и овощей*

2    ПРИНЯТ Межгосударстветшым советом по стандартизации, метрологам и сертификации (протокол № 11 от 23 апреля 1997 г.)

За принятие проголосовали:

Наименование государства

Наименование национального органа по стандартны ни и

Республика Беларусь

Госстандарт Республики Беларусь

Республика Казахстан

Госстандарт Республики Казахстан

Кыргызская Республика

Кыргызстандарт

Республика Молдова

Молдова стандарт

Российская Федерация

Госстандарт России

Республика Таджикистан

Таджик госстандарт

Туркменистан

Главгосинспекция «Туркменстандартлары»

Республика Узбекистан

Узгос стандарт

3    Постановлением Госстандарта России от 16 апреля 1998 г. № 122 ГОСТ 30519-97 введен в действие в качестве государственного стандарта Российской Федерации с момента принятия указанного постановления и признан имеющим одинаковую силу с ГОСТ Р 50480-93 на территории Российской Федерации в связи с полной аутентичностью их содержания

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ

II

Настоящий стандарт нс может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

79

Группа Н09

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ГОСТ 30519-97 ГОСТ P 50480-93

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Метол выявления бактерий рола Salmonella

Food products.

Method for detection of Salmonella

МКС 07.100.30 ОКСТУ 9109

Дата введения 1994—01—01

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выяате-ния в определенной навеске продукта бактерий рода Salmonella.

1    Сущность метола

Метод выяапсния бактерий рода Salmonella основан на высеве определенного количества продукта в жидкую неселективную среду, инкубировании посевов, последующем выя&лении в этих посевах бактерий, способных развиваться в жидких селективных средах, образующих типичные колонии на агаризованных дифференциально-диагностических средах, имеющих типичные для бактерий рода Salmonella биохимические и серологические характеристики.

2    Отбор и подготовка проб

Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669 или по нормативно-технической документации на анализируемый продутег.

3    Аппаратура, материалы, реактивы

Для проведения анализа применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1, а также указанные ниже:

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 241041 2 с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности (для взвешивания реактивов);

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания I кг, 4-го класса точности (для взвешивания продукта); микроскоп световой биологический с увеличением 900—1000'; петлю бактериологическую; стекла предметные по ГОСТ 9284; стекла покровные по ГОСТ 6672;

термостат с диапазоном рабочих температур 28 2С—55 2С, позволяющий поддерживать заданную температуру с допустимой погрешностью ±1 2С. спирт изобугиловый по ГОСТ 9536; бриллиа>гговый зеленый; желчь сухую или натуральную;

• С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001 (здесь и далее).

ГОСТ 30519-97/ГОСТ Р 50480-93

контрольный штамп бактерий рола Salmonella , не относящихся к тифозной группе;

магний хлористый по ГОСТ 4209;

мочевину по ГОСТ 6691;

сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные сальмонеллезные сыворотки основных групп А, В, С, D, Е и редких групп;

феноловый красный.

4 Подготовка к анализу

4.1    Приготовление растворов и реактивов

4.1.1    Раствор бриллиантового зеленого концентрации 5 г/дм3: 0.5 г бриллиантового зеленого переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре нс более 3 мсс.

4.1.2    Раствор фенолового красного концентрации 4 г/дм3:0.4 г фенолового красного переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мсс.

4.1.3    Реактив Эрлиха: 1,0 г парадиметиламинобензальдегида растворяют в 95 см3 этилового спирта объемной концентрации 96 % и прибавляют 80 см3 концентрированной соляной кислоты (р = 1,18-1,19 г/см3).

4.1.4    Реактив Ковача: перемешивают 5,0 г парадиметиламинобензальдегида, 25 см3 концентрированной соляной кислоты и 75 см3 изобутилового спирта.

4.1.5    Спиртовой раствор ос-нафтола концентрации 50 г/дм3: 5,0 г а-нафтола помещают в колбу вместимостью 100 см3, растворяют в этиловом спирте объемной концентрации 96 % и доводят раствор этиловым спиртом до метки. Раствор готовят непосредственно перед применением.

4.1.6    Спиртовой раствор фенолового красного концентрации 2 г/дм3:0,2 г фенолового красного переносят в колбу вместимостью 100 см3, растворяют в этиловом спирте объемной концентрации 50 % и доводят раствор этиловым спиртом до метки.

4.1.7    Сухие агглютинирующие адсорбционные поливалс1гтныс сальмонеллезные сыворотки готовят перед употреблением по прописи, указанной в прилагаемом к ним наставлении.

4.2 Приготовление питательных сред

4.2.1    Забуфсрснная пептонная вода: 10,0 г пептона, 5,0 г хлористого натрия, 9,0 г двузамещенно-го фосфорно-кислого натрия (Na2HP04 • 12Н20), 1,5 г однозамещенного фосфорно-кислого калия растворяют при нагревании в 1000 см3 дистиллированной воды, устанавливают pH так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 *С 7,0±0,1. Разливают по колбам в количестве, ■зависящем от навески анализируемого продукта (если навеска равна 25 г, то разливают по 225 см3, то есть I : 9), и стерилизуют при температуре (121 ±1) *С в течение 20 мин.

4.2.2    Магниевая среда: готовят путем соединения трех растворов.

Приготовление раствора 1:8,4 г пегтгона, 14,3 г хлористого натрия, 40 см3 дрожжевого экстракта, приготовленного по ГОСТ 10444.1,2,85 г однозамещенного фосфорно-кислого калия растворяют при нагревании в 1780 см3 дистиллированной воды.

Приготовление раствора 2: 71,4 г хлористого магния (MgCI2 • 6Н20) растворяют при нагревании в 180 см3 дистиллированной воды.

Раствор 3: берут 1,8 см3 раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по 4.1.1.

Приготовленные растворы соединяют, устанавливают pH так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 “С 7,2±0,2, рахливают в колбы или флаконы по 100 см3 и стерилизуют при температуре (112± 1) *С в течение 30 мин.

4.2.3    Селенитовая среда: готовят из двух растворов.

Приготовление раствора 1: 5,0 г пептона, 7,0 безводного двузамещенного фосфорно-кислого натрия, 3,0 г безводного однозамещенного фосфорно-кислого натрия, 4,0 г лактозы растворяют при нагревании в 1000 см3 дистиллированной воды, охлаждают до 45 *С —55 ‘С, если необходимо, путем изменения соотношения фосфатных солей устанавливают pH 7,0±0,1. Среду разливают по 100 см3 в колбы или флаконы и стерилизуют текучим паром по 30 мин в течение двух дней или при температуре (112± 1) *С в течение 30 мин.

Приготоалснис раствора 2: 10,0 г кислого сслснисто-кислого натрия (NaMScOj) растворяют асептически в 100 см3 стерильной дистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.

Приготоатение среды: к 100 см3 раствора 1 прибавляют 4 см3 раствора 2.

Стерилизация приготоатенной среды нс допускается, так как при этом происходит редукция кислого селенисто-кислого натрия, выпадает осадок красного цвета и среда становится непригодной. Селенитовая среда выпускается в сухом виде и готовится по прописи, указанной на этикетке.

4.2.4    Тетратионатная среда (Мю.иер-Кауфман)

Приготоатение основы среды: в 100 см3 мясо-псптонного бульона, приготоатенного по ГОСТ 10444.1, помещают 4,5 г стерильного углекислого кальция. Углекислый кальций стерилизуют по ГОСТ 10444.1.

Приготоатенную основу стерилизуют при температуре (121 ±1) *С в течение 20 мин.

При приготоатении среды к 100 см3 основы среды асептически прибаатяют:

10 см3 раствора гипосульфита натрия (Na^Oj • 5Н20);

2 см3 йодного раствора;

0,2 см3 раствора бриллиантового зеленого;

5 см3 раствора желчи.

Указанные растворы прибаатяют к основе среды в приведенном выше порядке, перемешивая смесь после каждого прибаатения.

Среду допускается испотьзовать в течение одной недели посте приготоатсния.

Указанные выше растворы, прибаатяемые к основе среды, готовят следующим образом: раствор гипосульфита натрия: 50,0 г гипосульфита натрия помещают в колбу вместимостью 100 см3, растворяют в дистиллированной воде и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор перстивают в колбу или флакон и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин или при температуре (121 ± 1) *С в течение 20 мин;

йодный раствор: 25,0 йодистого катия помещают в колбу вместимостью 100 см3, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, прибавляют 20,0 г кристаллического йода, растворяют его. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки.

Раствор хранят в плотно закрытом темном сосуде; раствор бриллиантового зеленого готовят по 4.1.1;

раствор желчи: 10,0 г сухой желчи растворяют в 100 см3 дистиллированной воды или используют натуральную желчь. Раствор желчи или натуральную желчь стерилизуют при температуре (121 ± 1) *С в течение 20 мин.

4.2.5    Дифференциально-диагностические среды (сухие): висмут-сульфит агар (Вильсон-Блсра);

среду Плоскирсва; среду Эндо; среду Левина.

Среды готовят по прописи, указанной на этикетке.

4.2.6    Трехсахарный агар: 10,0 г пептона, 3,0 г сухого дрожжевого экстракта или 15 см3 дрожжевого экстракта, приготовленного по ГОСТ 10444.1, 10,0 г лактозы, 10,0 г сахарозы, 1,0 г глюкозы, 0,3 г цитрата железа (или 0,2 г аммоний-железо сульфата (NH4)2Fc(S04)2 • 6Н20 или 0,2 г сернокислого железа FcS04 • 6Н20), 0,3 г гипосульфита натрия, 6 см3 раствора фенолового красного, приготовленного по п. 4.1.2, 15,0 г агара растворяют при нагревании в 1000 см3 мясо-псптонного бульона, приготовленного по ГОСТ 10444.1, охлаждают до 45 *С—55 *С и устанавливают pH так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 *С 7,2±0,2. Среду разливают в пробирки по 6—7 см3 и стерилизуют при температуре (121 ± 1) *С в течение 10 мин.

4.2.7. Агар Кристенсена с мочевиной: среда готовится путем соединения основы среды и раствора мочевины.

Основа среды: 1,0 г пептона, 1,0 г глюкозы, 5,0 г хлористого натрия, 2,0 г безводного однозамс-шенного фосфорнокислого калия, 3 см3 раствора фенолового красного, приготовленного по 4.1.2, 15,0 агара растворяют при нагревании в 1000 см3 дистиллированной воды, охлаждают до 45 *С—55 ‘С и устанавливают pH так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 *С 6,7±0,1.

Основу среды мерно рахпивают в колбы или флаконы и стерилизуют при температуре (121 ± I) *С в течение 20 мин.

Раствор мочевины концентрации 400 г/дм3: 40,0 г мочевины помешают в колбу вместимостью 100 см3, растворяют в дистиллированной воде, объем раствора доводят дистиллированной водой до метки.

82

ГОСТ 30519-97/ГОСТ Р 50480-93

Раствор мочевины стерилизуют фильтрацией по ГОСТ 26670 или текучим паром в течение 30 мин.

При приготоапснии среды к 950 см3 основы прибаатяют асептически 50 см3 раствора мочевины, разливают в стерильные пробирки по 6—7 см3.

4.2.8 После стерилизации среды, приготоапенные по 4.2.6 и 4.2.7, скашивают так, чтобы оставался столбик высотой 2—2,5 см.

4.2.9. Полужидкий мясо-пептонный агар: готовят по ГОСТ 10444.1 так же, как мясо-псптонный агар, но при приготоапснии добаапяют 4,0—8,0 г агара на 1000 см3 мясо-псптонного бульона, перед стерилизацией среду разливают по 6—7 см3 в пробирки.

4.2.10    Мясо-псптонный бульон с глюкозой: готовят по ГОСТ 10444.1. Для посевов используют среду, разлитую в пробирки по 6—7 см3.

4.2.11    Бульон Хоттингера: готовят по ГОСТ 10444.1. Для посевов используют среду, разлитую в пробирки по 6—7 см3.

4.2.12    Мясо-пептонный бульон с 0,05 % L-триптофана: 0,05 L-триптофана растворяют в 100 сммясо-псптонного бульона, приготовленного по ГОСТ 10444.1, разливают в пробирки по 6—7 см3 и стерилизуют при температуре (121 ± 1) *С в течение 20 мин.

4.2.13    Среды с углеводами (среды Гисса): готовят по ГОСТ 10444.1 или используют сухие среды с углеводами, которые готовят по прописи, указанной на этикетке.

4.2.14    Мясо-пептонный агар: готовят по ГОСТ 10444.1 или испапьзуют среду, приготоапенную из сухого питательного агара.

Среду из сухого питательного агара готовят по прописи, указанной на этикетке.

5 Проведение анализа

5.1    Нссслсктивнос предварительное обогащение

Навеску продукта, в массе (объеме) которой нормативно-технической документацией на анапи-зирусмый продукт предусматривается отсутствие бактерий рода Salmonella, высевают в забуференную пептонную воду, приготовленную по 4.2.1. Соотношение массы (объема) продукта и забуференной пептонной воды I : 9.

При посеве жидких высококислотных продуктов для предотвращения снижения pH питательных сред на 0,5 и более pH продукта перед посевом доводят до 7,0±0,2.

При посеве твердых высококислотных продуктов доводят pH до 7,0±0,2 в посевах.

Доведение pH проводят асептически с помощью стерильных растворов гидроксида натрия и соляной кислоты, приготоапенных по ГОСТ 10444.1. Количество добаапясмого раствора гидроксида натрия устанавливают опытным путем.

Посевы инкубируют при температуре (36±1) *С в течение 18—20 ч.

5.2    Селективное обогащение

Культуры, полученные после инкубирования по 5.1, пересевают в две среды для селективного обогащения. Для этого по 10 см3 культуры переносят в 100 см3 магниевой среды, приготовленной по 4.2.2, и в 100 см3 тстратионатной среды, приготоапенной по 4.2.4, или по 10 см3 культуры переносят в 100 см3 селенитовой среды, приготовленной по 4.2.3, и в 100 см3 тстратионатной среды.

Посевы инкубируют в течение 24—48 ч на магниевой и селенитовой средах при температуре (36±1) *С, а на тстратионатной среде при температуре (43±1) *С.

5.3    Выделение и идентификация культур на авизованных дифференциально-диагностических средах

Культуры через 24 и 48 ч инкубирования по 5.2 пересевают (по ГОСТ 26670) на три авизованные среды, приготоапенные по 4.2.5: висмут-сульфит агар, среду Плоскирева и среду Эндо (или среду Левина).

Допускается использование одной чашки каждой из сред одновременного высева с двух селективных сред.

Посевы инкубируют при температуре (36±1) ‘С в течение 24 • —48 ч.

После 24 ч инкубирования посевов проводят предварительный учет результатов, а после 48 ч — окончательный.

После инкубирования посевов отмечают на дифферсшшально-лиапюстических средах рост колоний, характерных для бактерий рода Salmonella:

4

на висмут-сульфит агаре колонии черные с характерным металлическим блеском, а также зеленоватые с темнозеленым ободком и с пигментированием среды под колониями;

83

на среде Плоскирсва колонии бесцветные прозрачные, но более плотные, чем на среде Эндо;

на среде Эндо колонии круглые бесцветные или слегка розоватые, прозрачные;

на среде Левина колонии прозрачные, слабо-розовые или розовато-фиолетовые.

При отсутствии в посевах на дифференииалыю-диагностических средах характерных для бактерий рода Salmonella колоний дают заключение об отсутствии бактерий рода Salmonella в анализируемой навеске продукта.

При наличии хотя бы на одной диффсрснциально-диапсостичсской среде характерных для бактерий рола Salmonella колоний проводят их дальнейшее изучение.

5.4 Биохимическое подтверждение принадлежности выделенных характерных колоний к бактериям рода Salmonella

5.4.1    Нс менее трех характерных колоний с каждой дифференциально-диагностической среды (см. 5.3) пересевают на скошенную поверхность мясо-псптонного агара или среды из сухого питательного агара, приготовленных по 4.2.14, и часть колоний пересевают штрихом по поверхности и уколом в столбик трехсахарного агара, приготовленного по 4.2.6.

Посевы инкубируют при температуре (36±1) *С в течение 24 ч.

5.4.2    Из отобранных по 5.4.1 для биохимического подтверждения колоний приготовляют мазки и окрашивают по Граму.

Бактерии рода Salmonella являются грамоотри нательным и палочками с закругленными концами.

5.4.3    После инкубирования посевов, как указано в 5.4.1, проводят учет результатов ферментации лактозы, глюкозы и сахарозы на трехсахарном агаре:

пожелтение скошенной части среды указывает на ферментацию лактозы или сахарозы или обоих сахаров;

пожелтение столбика среды с разрывом агара или пузырьками газа указывает на ферментацию глюкозы с образованием газа, пожелтение столбика среды без разрывов или пузырьков газа указывает на ферментацию глюкозы без образования газа;

почернение среды в столбике указывает на образование сероводорода.

Типичными для бактерий рода Salmonella являются культуры, ферментирующие глюкозу с образованием или без образования газа, не фсрмс1гтирующие лактозу и сахарозу, образующие сероводород.

Дальнейшему изучению подвергают также лактозоположитсльныс бактерии или бактерии, нс образующие сероводород, но обязательно ферментирующие глюкозу с образованием или без образования газа.

5.4.4    У культур, отобранных согласно 5.4.3 и пересеянных предварительно, как указано в 5.4.1, на поверхность мясо-псптонного агара или среды, приготовленной из сухого питательного агара, изучают возможность расщепления мочевины, образования ацетоина и индола, ферментации сахарозы и маннита и подвижность.

5.4.5    Определение расщепления мочевины

Культуры пересевают штрихом на поверхность агара Кристенсена с мочевиной, приготовленного по 4.2.7.

Посевы инкубируют при температуре (36±1) *С в течение 24 ч.

При положительной реакции — расщеплении мочевины цвет среды от розового до светло-вишневого. Для урсазоположитсльных бактерий реакция часто становится видимой после 2 ч инкубирования.

Бактерии рода Salmonella не расщепляют мочевину.

5.4.6    Определение образования ацетоина (реакция Фогес-Проскауера)

Культуры пересевают в мясо-псптонный бульон с глюкозой, приготовленный по 4.2.10.

Посевы инкубируют при температуре (36± 1) *С в течение 48 ч.

После инкубирования к 1 см3 отобранной культуральной жидкости прибавляют 0,6 см3 раствора а-нафтола, приготовленного по 4.1.5, 0,2 см3 раствора гидроксида калия концентрации 400 г/дм3. После прибавления каждого реактива пробирку встряхивают. Появление розового окрашивания через 15 мин указывает на положительную реакцию.

Бактерии рода Salmonella нс образуют ацетоина (реакция Фогес-Проскауера отрицательная).

5.4.7    Определение образования индола

Культуры пересевают в бульон Хоттингера, приготовленный по 4.2.11, или в мясо-псптонный бульон с L-триптофаном, приготовленный по 4.2.12.

Посевы инкубируют при температуре (36±1) *С в течение 24 ч.

После инкубирования к посевам прибавляют по I см3 реактива Эрлиха или Ковача, приготовленных соответственно по 4.1.3 и 4.1.4.

Образование красного слоя указывает на положительную реакцию.

Бактерии рода Salmonella не образуют индол.

84

РОСТ 30519—97/ГОСТ Р 50480-93

5.4.8    Определение ферментации маннита и сахарозы

Культуры пересевают в среды Гисса с маннитом или сахарозой, приготовленные по 4.2.13.

Посевы инкубируют при температуре (36±1) *С в течение 24 ч.

Бактерии рола Salmonella нс сбраживают сахарозу, нс сбраживают маннит. При сбраживании маннита цвет среды изменяется, образуется или не образуется газ.

5.4.9    Определение подвижности

Культуры пересевают уколом в полужидкий мясо-пептонный агар.

Посевы инкубируют при температуре (36±1) *С в течение 24 ч.

При росте подвижных культур отмечается диффузный рост по всему столбику агара, при росте неподвижных культур — вдоль места укола.

Большинство штаммов бактерий рода Salmonella подвижны.

5.5    Результаты биохимического подтверждения культур оценивают, пользуясь таблицей приложения.

5.6    Серологическое подтверждение принадлежности культур к бактериям рода Salmonella

Серологическое подтверждение принадлежности к бактериям рода Salmonella проводят с культурами, давшими типичные биохимические реакции согласно приложению, и предварительно пересеянными, как указано в 5.4.1, на поверхность мясо-пептонного агара или среды, приготовленной из сухого питательного агара.

5.6.1    Определение самоаггл ют ин ирующих штаммов

Помещают каплю физиологического раствора, приготовленного по ГОСТ 10444.1, на тщательно очищенное предметное стекло. Диспергируют в этой капле часть тестируемой колонии так, чтобы получилось гомогенная и густая суспензия.

Покачивают осторожно стекло в течение 30—60 с. Отмечают результаты на темном фоне, лучше с помощью увеличительного стекла. Если наблюдается в разной степени склеивание бактерий, то есть образование осадка, то считают, что тестируемые штаммы обладают самоагглютинацисй.

Штаммы бактерий, обладающие самоагглютинацисй, не подвергают дальнейшей серологической идентификации.

5.6.2    Onpede.ienue наличия 0-антигенов

Штаммы, у которых не выявлено самоагглютинании, испытывают в реакции агглютинации с агглютинирующими адсорбированными поливалентными сальмонсллсзными сыворотками основных групп А, В, С, D, Е, а затем, если не выявлено 0-антигенов с сыворотками основных групп, ставят реакцию с сыворотками редких групп.

Подготовка сывороток к постановке реакции агглютинации и методика ее проведения указаны в наставлении, прилагаемом к сывороткам.

Агглютинация (наличие 0-антигенов) проявляется в виде склеивания бактериальной массы и полного или частичного просветления жидкости.

При отрицательной реакции агглютинации культура после тщательного смешивания с каплей сыворотки образует гомогенную смесь.

5.7    При определении биохимических и серологических характеристик выделенных культур в качестве контроля используют типичный по этим показателям штамп бактерий рода Salmonella, указанный в разделе 3.

6 Оценка результатов

6.1    Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.

6.2    Интерпретация биохимических и серологических испытаний

Культуры, показавшие типичные биохимические и серологические реакции, относят к бактериям рода Salmonella.

Предположительно к бактериям рода Salmonella относят:

культуры, у которых нс обнаружено самоагглютинании и 0-антигенов, но показавшие типичные биохимические реакции;

культуры, у которых обнаружена самоагглютинация и типичные биохимические реакции.

Культуры, у которых не обнаружено самоагглютинании, не давшие типичных биохимических и серологических реакций, не относят к бактериям рода Salmonella.

6.3    Результаты выявления бактерий рода Salmonella в определенной навеске продукта записывают: «бактерии рода Salmonella обнаружены в А' г (см3) продукта* или «бактерии рода Salmonella не обнаружены в X г (см3) продукта*.

А'-масса (объем) навески продукта, в которой выявляли бактерии рода Salmonella.

6

ПРИЛОЖЕНИЕ

(обязательное)

Биохимическая характеристика четырех полролов Salmonella и атипичных видов, входящих в подрод Salmonella I

Наименование

биохимических

характеристик

1

1-

Salmonella

II

Salmonella III-Arizona

Salmonella

IV

Salmonella

choleraesuis

J3 E

I    В

II

Salmonella paratyphi A

Salmonella

pullorum

J

If

Образование индола

Образование аистоина

Образование H;S на трехсахарном агаре

+

+

+

+

d

+

+

+

Расщепление мочевины

Подвижность

+

+

+

+

+

-

+

-

+

Сбраживание глюкозы с образованием газа

+

+

+

+

+

+

<+)

Сбраживание глюкозы с образованием кислоты

+

+

+

+

+

+

+

+

+

Сбраживание лактозы

-

-

d

-

-

-

-

-

-

Сбраживание сахарозы

Сбраживание маннита

+

+

+

+

+

+

+

+

+

Условные обозначения: «+* — 90 %—100 % штаммов положительны; «(+)► — 76 96—89 % штаммов положительны; «</* -26 %—75 % штаммов положительны; «—* — 0 %-10 % штаммов положительны.

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД. на который дана ссылка

Номер раздела, пункта, подпункта

Обозначение НТД. на который дана ссылка

Номер раздела, пункта, подпункта

ГОСТ 4209 77

3

ГОСТ 24104- 88

3

ГОСТ 6672-75

3

ГОСТ 26668 85

2

ГОСТ 6691-77

3

ГОСТ 26669 85

2

ГОСТ 9284 75 ГОСТ 9536 - 79 ГОСТ 10444.1-84

3

3

3, 4.2.2. 4.2.4, 4.2.6. 4.2.9, 4.2.10,4.2.11,4.2.12,4.2.13, 4.2.14, 5.1, 5.6.1

ГОСТ 26670-91

4.2.7, 5.3

86

1

Издание официальное

2