Стр. 1
 

9 страниц

304.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной навеске продукта бактерий рода Salmonella

Утратил силу в РФ

Утратил силу на территории РФ, с 01.01.2009 пользоваться ГОСТ Р 52814-2007. ГОСТ Р 52814-2007 отменен с 15.02.2015. Действует ГОСТ 31659-2012

Действие завершено 01.01.2009

Оглавление

1 Сущность метода

2 Отбор и подготовка проб

3 Аппаратура, материалы, реактивы

4 Подготовка к анализу

   4.1 Приготовление растворов и реактивов

   4.2 Приготовление питательных сред

5 Проведение анализа

   5.1 Неселективное предварительное обогащение

   5.2 Селективное обогащение

   5.3 Выделение и идентификации культур на агаризованных дифференциально-диагностических средах

   5.4 Биохимическое подтверждение принадлежности выделенных характерных колоний к бактериям рода Salmonella

   5.6 Серологическое подтверждение принадлежности культур к бактериям рода Salmonella

6 Оценка результатов

Приложение (обязательное) Биохимическая характеристика четырех подродов Salmonella и атипичных видов, входящих в подрод Salmonella I

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ 30519-97

ГОСТ Р 50480-93

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ Метод выявления бактерий рода Salmonella

Издание официальное

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ Минск

Страница 2

ГОСТ 30519-97/ГОСТ I» 50480-93

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП) и Техническим комитетом по стандартизации ГК 93 «Продукты переработки плодов и овощей»

2    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 11 от 23 апреля 1997 г.)

За принятие проголосовали:

Наименование к>с) дарема

Наимснопанне национального органа по стандарт»займи

Республика Беларусь Республика Казахстан Кыргызская Республика Республика Молдова Российская Федерация Республика Таджикистан Туркменистан Республика Узбекистан

Госстандарт Республики Беларусь Госстандарт Республики Казахстан Кыршзстандарт Молдовастандарг Госстандарт России Т аджикгоссгандарт

Главгосинспекиия «Туркмснстандартлары» Узгосстандарг

3    Постановлением Госстандарта России от 16 апреля 1998 г. № 122 ГОСТ 30519-97 введен в действие в качестве государственного стандарта Российской Федерации с момента принятия указанного постановления и признан имеющим одинаковую силу с ГОСТ Р 50480-93 на территории Российской Федерации в связи с полной аутентичностью их содержания

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

79    II

Страница 3

Группа Н09

МЕЖГОСУДАРСТВЕН» Ы Й СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ Метол выявления бактерий рола Salmonella

Food products.

Method for detection of Salmonella

MKC' 07.100.30 О КС ТУ 9109

Дата введения 1994—01—01

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выяаае-ння в определенной навеске продукта бактерий рода Salmonella.

1    Сущность метода

Метод выявления бактерий рода Salmonella основан на высеве определенного количества продукта в жидкую неселективную среду, инкубировании посевов, последующем выявлении в этих посевах бактерий, способных развиваться в жидких селективных средах, образующих типичные колонии на агаризованных дифференциально-диагностических средах, имеющих типичные для бактерий рода Salmonella биохимические и серологические характеристики.

2    Отбор и подготовка проб

Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 26668. ГОСТ 26669 или по нормативно-технической документации на анализируемый продукт.

3    Аппаратура, материалы, реактивы

Дня проведения анализа применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1. а также указанные ниже:

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104'1 с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности (для взвешивания реактивов):

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 1 кг, 4-го класса точности (для взвешивания продукта); микроскоп световой биологический с увеличением 900—1000'; петлю бактериологическую; стекла предметные по ГОСТ 9284; стекла покровные по ГОСТ 6672;

термостат с диапазоном рабочих температур 28 'С-55 "С, позволяющий поддерживать заданную температуру с допустимой погрешностью ±1 'С. спирт иэобутиловый по ГОСТ 9536; бриллиантовый зеленый; желчь сухую или натуральную;

* С I июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001 (здесь и далее).

1

1

80

Страница 4

ГОСТ 30519-97/ГОСТ Р 50480-93

контрольный штамп бактерий рода Salmonella , не относящихся к тифозной группе:

магний хлористый по ГОСТ 4209;

мочевину по ГОСТ 6691:

сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные сальмонеллеише сыворотки основных групп А, В. С, D, Е и редких групп;

феноловый красный.

4 Подготовка к анализу

4.1    Приготовление растворов и реактивов

4.1.1    Раствор бриллиантового зеленого концентрации 5 г/дм3: 0.5 г бриллиантового зеленого переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют п дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см* и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.

4.1.2    Раствор фенолового красного концентрации 4 г/дм0.4 г фенолового красного переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.

4.1.3    Реактив Эрлиха: 1,0 г парадиметиламинобензальдегида растворяют в 95 см' этилового спирта объемной концентрации ЧЬ% и прибавляют 80 см5 концентрированной соляной кислоты (р = 1.18—1.19 г/см5).

4.1.4    Реактив Ковача: перемешивают 5.0 г парадиметиламинобензальдегида, 25 см3 концентрированной соляной кислоты и 75 см5 изобутиловото спирта.

4.1.5    Спиртовой раствор «-нафтола концентрации 50 г/дм3: 5,0 г «-нафтола помещают в колбу вместимостью 100 см3, растворяют в этиловом спирте объемной концентрации 96 % и доводят раствор этиловым спиртом до метки. Раствор готовят непосредственно перед применением.

4.1.6    Спиртовой раствор фенолового красного концентрации 2 г/дм3: 0.2 г фенолового красного переносят в колбу вместимостью 100см', растворяют в этиловом спирте объемной концентрации 50 % и доводят раствор этиловым спиртом до метки.

4.1.7    Сухие агглютинирующие адсорбционные поливалентные сальмонеллезные сыворотки готовят перед употреблением по прописи, указанной в прилагаемом к ним наставлении.

4.2 Приготовление питательных сред

4.2.1    Забуфереиная пептон пая вода: 10,0 г пептона, 5,0 г хлористого натрия, 9.0 г дву замещенного фосфорно-кислого натрия (Na,HP04 • 12Н.О). 1,5 г одно замещенного фосфорно-кислого калия растворяют при нагревании в 1000 см3 дистиллированной воды, устанавливают pH так. чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 *С 7,0±0,1. Разливают по колбам в количестве, зависящем от навески анализируемого продукта (если навеска равна 25 г. то разливают по 225 см\ то есть 1 : 9), и стерилизуют при температу ре (121 ±1) *С в течение 20 мин.

4.2.2    Магниевая среда: готовят путем соединения трех растворов.

Приготовление раствора 1:8,4 г пептона, 14.3 г хлористого натрия. 40 см3 дрожжевого экстракта, приготовленного по ГОСТ 10444.1. 2,85 г однозамешенного фосфорно-кислого калия растворяют при нагревании в 1780 см'дистиллированной воды.

Приготовление раствора 2: 71,4 г хлористого магния (MgCl, • 6Н.О) растворяют при нагревании в 180 см'дистиллированной воды.

Раствор 3: берут 1.8 см' раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по 4.1.1.

Приготовленные растворы соединяют, устанавливают pH так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 *С 7,2±0,2. разливают в колбы или флаконы по 100 см3 и стерилизуют при температу ре (112±1) *С в течение 30 мин.

4.2.3    Селенитовая среда: готовят из двух растворов.

Приготовление раствора 1: 5,0 г пептона. 7,0 безводного двузамещенного фосфорно-кислого натрия. 3,0 г безводного однозамешенного фосфорно-кислого натрия, 4,0 г лактозы растворяют при нагревании в 1000 см' дистиллированной воды, охлаждают до 45 *С —55 “С, если необходимо, путем изменения соотношения фосфатных солей устанавливают pH 7,0±0,1. Среду разливают по 100 см3 в колбы или флаконы и стерилизуют текучим паром по 30 мин в течение двух дней или при температуре (112+1) 'С в течение 30 мин.

SI

2

Страница 5

ГОСТ30519—97/ГОСТ 1* 50480-93

Приготовление раствора 2: 10.0 г кислого селенисто-кислого натрия (NaHSeO,) растворяют асептически в 100 см5 стерильной дистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.

Приготовление среды: к 100 см? раствора I прибавляют 4 см3 раствора 2.

Стерилизация приготовленной среды не допускается, так как при этом происходит редукция кислого селенисто-кислого натрия, выпадает осадок красного цвета и среда становится непригодной. Селенитовая среда выпускается в сухом виде и готовится по прописи, указанной на этикетке.

4.2.4    Тетратионатная среда ( Мю.иер - Кауфман)

Приготовление основы среды: в 100 см’ мясо-пептонного бульона, приготовленного по ГОСТ 10444.1. помешают 4.5 г стерильного углекислого кальция. Углекислый кальций стерилизуют по ГОСТ 10444.1.

Приготовленную основу стерилизуют при температуре (121 ± 1) *С в течение 20 мин.

При приготовлении среды к 100 см3 основы среды асептически прибавляют:

10 см* раствора гипосульфита натрия (Na,S,0, • 5Н,0);

2 см3 йодного раствора;

0,2 см3 раствора бриллиантового зеленого;

5 см3 раствора желчи.

Указанные растворы прибавляют к основе среды в приведенном выше порядке, перемешивая смесь после каждого прибавления.

Среду допускается использовать в течение одной недели после приготовления.

Указанные выше растворы, прибавляемые к основе среды, готовят следующим образом: раствор гипосульфита натрия: 50.0 г гипосульфита натрия помешают в колбу вместимостью 100 см3, растворяют в дистиллированной воде и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор переливают в колбу или флакон и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин или при температуре (121 ± 1) "С в течение 20 мин;

йодный раствор: 25,0 йодистого калия помешают в колбу вместимостью 100 см3, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, прибавляют 20,0 г кристаллического йода, растворяют его. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки.

Раствор хранят в плотно закрытом темном сосуде; раствор бриллиантового кленого готовят по 4.1.1;

раствор желчи: 10.0 г сухой желчи растворяют в 100 см3 дистиллированной воды или используют натуральную желчь. Раствор желчи или натуральную желчь стерилизуют при температуре (121±1) "С в течение 20 мин.

4.2.5    Дифференциально-диагностические среды (сухие): висмут-сульфит агар (Вильсон-Блера);

среду Плоскирева: среду Эндо; среду Левина.

Среды готовят по прописи, указанной на этикетке.

4.2.6    Трехсахарный агар: 10.0 г пептона, 3,0 г сухого дрожжевого экстракта или 15 см* дрожжевого экстракта, приготовленного по ГОСТ 10444.1. 10.0 г лактозы. 10,0 г сахарозы. 1,0 г глюкозы, 0.3 г пнтрата железа (или 0,2 г аммоний-железо сульфата (NH,),Fe(S04)2 • 6Н,0 или 0,2 г сернокислого железа FeS04 • 6Н ,0), 0,3 г гипосульфита натрия, 6 см' раствора фенолового красного, приготовленного по п. 4.1.2, 15,0 г агара растворяют при нагревании в 1000 см3 мясо-пептоииого бульона, приготовленного по ГОСТ 10444.1, охлаждают до 45 ' С—55 'С и устанааливают pH так. чтобы после стерилизации он состаалял при температуре 25 *С 7,2±0,2. Среду разливают в пробирки по 6—7 см3 и стерилизуют при температуре (121 + 1) *С в течение 10 мин.

4.2.7. Агар Кристенсена с мочевиной: среда готовится путем соединения основы среды и раствора мочевины.

Основа среды: 1.0 г пептона. 1.0 г глюкозы, 5,0 г хлористого натрия. 2,0 г безводного однозаме-шенного фосфорнокислого калия. 3 см3 раствора фенолового красного, приготовленного по 4.1.2, 15.0 агара растворяют при нагревании в 1000 смг дистиллированной воды, охлаждают до 45 "С—55 "С и устанааливают pH так, чтобы после стерилизации он состаалял при температуре 25 ‘С 6,7±0,1.

Основу среды мерно разливают в колбы или флаконы и стерилизуют при температуре (121 ± 1) *С в течение 20 мин.

Раствор мочевины концентрации 400 г/дм3: 40,0 г мочевины помещают в колбу вместимостью 100 см5, растворяют в дистиллированной воде, объем раствора доводят дистиллированной водой до метки.

82

3

Страница 6

ГОСТ 30519-97/ГОСТ Р 50480-93

Раствор мочевины стерилизуют фильтрацией по ГОСТ 26670 или текучим паром в течение 30 мин.

Мри приготовлении среды к 950 см' основы прибавляют асептически 50cmj раствора мочевины, разливают в стерильные пробирки по 6-7 см’.

4.2.8 После стерилизации среды, приготовленные по 4.2.6 и 4.2.7. скашивают так. чтобы оставался столбик высотой 2—2,5 см.

4.2.9. Полужидкий мясо-пептонный агар: готовят по ГОСТ 10444.1 так же, как мясо-пептонный агар, но при приготовлении добавляют 4,0—8,0 г агара на 1000 см} мясо-пептонного бульона, перед стерилизацией среду разливают по 6—7 см' в пробирки.

4.2.10    Мясо-пептонный бульон с глюкозой: готовят по ГОСТ 10444.1. Для посевов используют среду, разлитую в пробирки по 6—7 см\

4.2.11    Бульон Хоттингера: готовят по ГОСТ 10444.1. Для посевов используют среду, разлитую в пробирки по 6—7 см1.

4.2.12    Мясо-пептонный бульон с 0.05 % L-триптофана: 0.05 L-трипгофана растворяют в 100 cmj мясо-пептонного бульона, приготовленного по ГОСТ 10444.1. разливают в пробирки по 6—7 см3 и стерилизуют при температуре (121±1) *С в течение 20 мин.

4.2.13    Среды с углеводами (среды Гисса): готовят по ГОСТ 10444.1 или используют сухие среды с углеводами, которые готовят по прописи, указанной на этикетке.

4.2.14    Мясо-пептонный агар: готовят по ГОСТ 10444.1 или используют среду, приготовленную из сухого питательного агара.

Среду из сухого питательного агара готовят по прописи, указанной на этикетке.

5 Проведение анализа

5.1    Неселекгивное предварительное обогащение

Навеску продукта, в массе (объеме) которой нормативно-технической доку ментацией на анализируемый продукт предусматривается отсутствие бактерий рода Salmonella, высевают в забуференную пептонную воду, приготовленную по 4.2.1. Соотношение массы (объема) продукта и забуферепной пептонной воды 1 : 9.

При посеве жидких высококнслотных продуктов для предотвращения снижения pH питательных сред на 0,5 и более pH продукта перед посевом доводят до 7.0±0,2.

При посеве твердых высококислотных продуктов доводят pH до 7,0+0.2 в посевах.

Доведение pH проводят асептически с помощью стерильных растворов гидроксида натрия и соляной кислоты, приготовленных по ГОСТ 10444.1. Количество добавляемого раствора гидроксида натрия устанавливают опытным путем.

Посевы инкубируют при температуре (36±1) "С в течение 18—20 ч.

5.2    Селективное обогащение

Культуры, полученные после инкубирования по 5.1. пересевают в две среды для селективного обогащения. Для этого по 10 см3 культуры переносят в 100 см3 магниевой среды, приготовленной по 4.2.2. и в 100 см' тетратионатиой среды, приготовленной по 4.2.4. или по 10 см’ культуры переносят в 100 см’ селенитовой среды, приготовленной по 4.2.3. ив 100 см3 тетратионатиой среды.

Посевы инкубируют в течение 24—48 ч на магниевой и селенитовой средах при температуре (36±1) *С, а на тетратионатиой среде при температу ре (43±1) *С.

5.3    Выделение и идентификация культур на агаризованных лифференциалыю-диагноетических средах

Культуры через 24 и 48 ч инкубирования по 5.2 пересевают (по ГОСТ 26670) на три агаризован-ные среды, приготовленные по 4.2.5: висмут-сульфит агар, среду Плоски рева и среду Эндо (или среду Левина).

Допускается использование одной чашки каждой из сред одновременного высева с двух селективных сред.

Посевы инкубируют при температуре (36± I) *С в течение 24 • - 48 ч.

После 24 ч инкубирования посевов проводят предварительный учет результатов, а после 48 ч -окончательный.

После инкубирования посевов отмечают на дифференциально-диагностических средах рост колоний, характерных для бактерий рода Salmonella:

на висмут-сульфит агаре колонии черные с характерным металлическим блеском, а также зеленоватые с темнозеленым ободком и с пигментированием среды под колониями;

83

4

Страница 7

ГОСТ30519—97/ГОСТ 1* 50480-93

на среде Плоскирева колонии бесцветные прозрачные, но более плотные, чем на среде Эндо;

на среде Эндо колонии круглые бесцветные или слегка розоватые, прозрачные:

на среде Левина колонии прозрачные, слабо-розовые или розовато-фиолетовые.

При отсутствии в посевах на дифференциально-диагностических средах характерных для бактерий рода Salmonella колоний даюг заключение об отсутствии бактерий рода Salmonella в анализируемой навеске продукта.

При наличии хотя бы на одной дифференциально-диагностической среде характерных для бактерий рода Salmonella колоний проводят их дальнейшее изучение.

5.4 Биохимическое подтверждение принадлежности выделенных характерных колоний к бактериям рода Salmonella

5.4.1    Не менее трех характерных колоний с каждой дифференциально-диагностической среды (см. 5.3) пересевают на скошенную поверхность мясо-пептонного агара или среды из сухого питательного агара, приготовленных по 4.2.14. и часть колоний пересевают штрихом по поверхности и уколом в столбик трехсахарного агара, приготовленного по 4.2.6.

Посевы инкубируют при температу ре (36±1) "С в течение 24 ч.

5.4.2    Из отобранных по 5.4.1 для биохимического подтверждения колоний приготовляют мазки и окрашивают по Граму.

Бактерии рода Salmonella являются грамоотрицательными палочками с закругленными концами.

5.4.3    После инкубирования посевов, как указано в 5.4.1. проводят учет результатов ферментации лактозы, глюкозы и сахарозы на трехсахарном агаре:

пожелтение скошенной части среды указывает на ферментацию лактозы или сахарозы или обоих сахаров:

пожелтение столбика среды с разрывом агара или пузырьками газа указывает на ферментацию глюкозы с образованием газа, пожелтение столбика среды без разрывов или пузырьков газа указывает на ферментацию глюкозы без образования газа;

почернение среды в столбике указывает на образование сероводорода.

Типичными для бактерий рода Salmonella являются культуры, ферментирующие глюкозу с образованием или без образования газа, не ферментирующие лактозу и сахарозу, образующие сероводород.

Дальнейшему изучению подвергают также лактозоположительные бактерии или бактерии, не образующие сероводород, но обязательно ферментирующие глюкозу с образованием или без образования газа.

5.4.4    У культур, отобранных согласно 5.4.3 и пересеянных предварительно, как указано в 5.4.1, на поверхность мясо-пептонного агара или среды, приготовленной из сухого питательного агара, изучают возможность расщепления мочевины, образования ацетоина и индола, ферментации сахарозы и маннита и подвижность.

5.4.5    Опре(кление расщепления мочевины

Культуры пересевают штрихом на поверхность агара Кристенсена с мочевиной, приготоатенного по 4.2.7.

Посевы инкубируют при температуре (36±1) "С в течение 24 ч.

При положительной реакции — растеплении мочевины пвет среды от розового до светло-вишневого. Для уреазоподожительных бактерий реакиия часто становится видимой после 2 ч инкубирования.

Бактерии рода Salmonella не расшепляют мочевину.

5.4.6    Определение обраювания ацетоина (реакция Фогес-Нроскауери)

Культуры пересевают в мясо-пептонный бульон с глюкозой, приготовленный по 4.2.10.

Посевы инкубируют при температуре (36±1) *С в течение 48 ч.

После инкубирования к 1 см3 отобранной культуральной жидкости прибавляют 0.6 см' раствора а-нафтола, приготовленного по 4.1.5. 0,2 смл раствора гидроксида калия концентрации 400 г/дм1. После прибавления каждого реактива пробирку встряхивают. Появление розового окрашивания через 15 мин указывает на положительную реакцию.

Бактерии рода Salmonella не образуют ацетоина (реакция Фогес-Проскауера отрицательная».

5.4.7    Определение обраювапия ин(к>.\а

Культуры пересевают в бульон Хоттингера, приготовленный по 4.2.11. или в мясо-пептонный бульон с L-триптофаном. приготовленный по 4.2.12.

Посевы инкубируют при температуре (36±1) “С в течение 24 ч.

После инкубирования к посевам приба&пяют по 1 см: реактива Эрлиха или Ковача, приготовленных соответственно по 4.1.3 и 4.1.4.

Образование красного слоя указывает на положительную реакцию.

Бактерии рода Salmonella не образуют индол.

5

S4

Страница 8

ГОСТ 30519-97/ГОСТ Р 50480-93

5.4.8    Определение ферментации маннита и сахаром

Культуры пересевают в среды Гисса с маннитом или сахарозой, приготовленные по 4.2.13.

Посевы инкубируют при температуре (36±1) "С в течение 24 ч.

Бактерии рода Salmonella не сбраживают сахарозу, не сбраживают маннит. При сбраживании маннита цвет среды изменяется, образуется или не образуется газ.

5.4.9    Определение подвижности

Культуры пересевают уколом в полужидкий мясо-пептонный агар.

Посевы инкубируют при температуре <36± 1) *С в течение 24 ч.

При росте подвижных культур отмечается диффузный рост по всему столбику агара, при росте неподвижных культур — вдоль места укола.

Большинство штаммов бактерий рода Salmonella подвижны.

5.5    Результаты биохимического подтверждения культур оценивают, пользуясь таблицей приложения.

5.6    Серологическое подтверждение принадлежности культур к бактериям рола Salmonella

Серологическое подтверждение принадлежности к бактериям рода Salmonella проводят с культурами. давшими типичные биохимические реакции согласно приложению, и предварительно пересеянными, как указано в 5.4.1. на поверхность мясо-пептоиного агара или среды, приготовленной из сухого питательного агара.

5.6.1    Определение самоаггмтинирующих штаммов

Помещают каплю физиологического расгвора. приготовленного по ГОСТ 10444.1. на тщательно очищенное предметное стекло. Диспергируют в этой капле часть тестируемой колонии так, чтобы получилось гомогенная и гу стая суспензия.

Покачивают осторожно стекло в течение 30—60 с. Отмечают результаты на темном фоне, лучше с помощью увеличительного стекла. Если наблюдается в разной степени склеивание бактерий, то есть образование осадка, то считают, что тестируемые штаммы обладают самоагтлютинацией.

Штаммы бактерий, обладающие самоагтлютинацией, не подвергают дальнейшей серологической идентификации.

5.6.2    Определение наличия 0-антигенов

Штаммы, у которых не выявлено самоагтлютинации, испытывают в реакции агглютинации с агглютинирующими адсорбированными поливалентными сальмонеллезными сыворотками основных групп А, В. С. D. Е. а затем, если не выявлено 0-антигенов с сыворотками основных групп, ставят реакцию с сыворотками редких групп.

Подготовка сывороток к постановке реакции агглютинации и методика ее проведения указаны в наставлении, прилагаемом к сывороткам.

Агглютинация (наличие 0-антигенов) проявляется в виде склеивания бактериальной массы и полного или частичного просветления жидкости.

При отрицательной реакции агглютинации культура после тщательного смешивания с каплей сыворотки образует гомогенную смесь.

5.7    При определении биохимических и серологических характеристик выделенных культур в качестве контроля используют типичный по этим показателям штамп бактерий рода Salmonella, указанный в разделе 3.

6 Оценка результатов

6.1    Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.

6.2    Интерпретация биохимических и серологических исньпаиий

Культуры, показавшие типичные биохимические и серологические реакции, относят к бактериям рода Salmonella.

Предположительно к бактериям рода Salmonella относят.

культуры, у которых не обнаружено самоагглютинации и 0-антигенов, но показавшие типичные биохимические реакции;

культуры, у которых обнаружена самоагглютинация и типичные биохимические реакции.

Культуры, у которых не обнаружено самоагглютинации, не давшие типичных биохимических и серологических реакций, не относят к бактериям рода Salmonella.

6.3    Результаты выявления бактерий рода Salmonella в определенной навеске продукта записывают: «бактерии рода Salmonella обнаружены в А" г (см1) продукта* или «бактерии рода Salmonella не обнаружены в .V г (см5) продукта*.

vV-Macca (объем) навески продукта, в которой выяатяли бактерии рода Salmonella.

S5

6

Страница 9

ГОСТ 30519-97/ГОСТ 1* 50480-93

ПРИЛОЖЕНИЕ

(обязательное)

Биохимическая характеристика четырех подродов Salmonella и атипичных видов, входящих в подрод Salmonella I

Наименование

биохимических

характеристик

я

о

с

О

6

2_

я

X

с

С

Е

а =

я 2

1! s <

2 =

я

о

С

о

£

3? >

л •§

II 21

3 s

ё I

i 2 £ —

а i

л <

а с 1 &

11

я

11

0    с

1    S а а

Я

Я

с _ с «

з S

Обра зование индола

-

-

-

-

-

-

-

Образование ацетоина

-

-

-

-

-

-

Образование H.S на трехсахарном агаре

+

+

+

d

+

+

+

Расщепление мочевины

-

-

-

-

-

-

-

Подвижность

+

+

+

+

-

+

+

Сбраживание глюкозы с образованием газа

+

+

+

+•

+

( + )

Сбраживание глюкозы с образованием кислоты

+

+

-

+

+

+

+

+

+

Сбраживание лактозы

d

-

-

-

-

-

Сбраживание сахарозы

-

-

-

-

-

-

Сбраживание машина

+

+

-

+

+

+

+

+

+

Условные обозначения: «■*■* — 90 %—100 % штаммов положительны; «(+)* — 76 %—89 % штаммов положительны: »d» —26 %—75 % штаммов положительны: «—» — 0 %—10 % штаммов положительны.

И НФОРМАЦИОН Н Ы Е ДАН Н Ы Е

ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД, на который дани ссылка

Номер раздели, пункта, подпункта

Обозначение НТД. на который дана ссылка

Номер рамела. пункта, подпункта

ГОСТ 4209-77

3

ГОСТ 24104-88

3

ГОСТ 6672-75

3

ГОСТ 26668-85

2

ГОСТ 6691-77

3

ГОСТ 26669-85

2

ГОСТ 9284-75 ГОСТ 9536-79 ГОСТ 10444.1-84

3

3

3. 4.2.2, 4.2.4. 4.2.6, 4.2.9, 4.2.10.4.2.11.4.2.12.4.2.13. 4.2.14.5.1, 5.6.1

ГОСТ 26670-91

4.2.7.5.3

7

86