Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

8 страниц

244.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Устанавливает методы лабораторной диагностики хламидиозного аборта овец, вызванного возбудителем из группы хламидий.

Стандарт предназначается для научно-исследовательских учреждений и республиканских ветеринарных лабораторий

Ограничение срока действия снято: Постановление Госстандарта № 624 от 30.06.92

Оглавление

1 Методы отбора проб

2 Серологический метод

3 Микроскопический метод

4 Метод иммунофлуоресценции

5 Метод постановки биопробы

6 Метод выделения хламидий

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

МЕЛКИЙ РОГАТЫЙ СКОТ

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХЛАМИДИОЗНОГО АБОРТА ОВЕЦ

ГОСТ 25381-82 (СТ СЭВ 2699-80)

Издание официальное

Цена I кол.


■»

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ

Москва

Страница 2

РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР ИСПОЛНИТЕЛИ

В. В. Гунемков, Л. М. Шапома. Г. Д. Кузнецова

ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. № 3152

Редактор Н. Е. Шестакова Технический редактор Г. А. Макарова Корректор А В Прокофьева

Саака в наб. 2100.82 Подл, в веч 17.09*3 0.3 п. л. 0.43 уч.-над я. Тир. 10С05 Нема 3 когт.

Орлова «Знак Почете» И:.длгс.1»ство стандартом, 124)67, Mot**». ХоваарсснвхскиО п«р.. 3 Тип «Московский ««чатив**. Москм. Лмви а»р. 6. Звк 830

Страница 3

УДК 636 : 576.3.07 : 006.354 Группа С79 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР МЕЛКИЙ РОГАТЫЙ СКОТ Методы лабораторной диагностики хплмидиозиого аборта овец ГОСТ 25381-82 Snail c-iltle Methods о! laboratory diagnostics oi chlaHtydions abortion (CT СЭВ 2699—80J Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. N> 3152 срок действия установлен Настоящий стандарт устанавливав! методы лабораторной диагностики хламндиозного аборта овец, вызванного возбудителем из группы лламидий (Chlamydia). Стандарт предназначается для научно-исследовательских учреждений и республиканских ветеринарных лабораторий. Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 2699- 80. 1.1. Для серологических исследований берут сыворотку крови взрослых овец, не привитых ннактивированной или другими вакцинами против хламндиозного аборта, полученную без добавления ингибиторов свертывания. 1.2. Для микроскопических исследований, выделения возбудителя и постановки биопробы отбирают пробы патологического материала—плодовые оболочки, влагалищную слизь, ткань легких, селезенки, желудка и печени плода. Сущность метода заключается в установлении титра антител против хламидий в сыворотке кроаи" инфицированных животных с помощью реакции связывания комплемента. с 01.01. »3 до 01.01. U Несоблюдение стандарта преследуется по закону 1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ 2. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД Издание офицналкиое Перепечати» воспрещен« Ф Издательство стандартов, 1982

Страница 4

Стр. 2 ГОСТ »1«-12 2.1. Аппаратура, материалы н реактивы 2.1.1. Для проведения исследования применяют: центрифугу лабораторную с частотой вращения ЗООО об/мин; холодильник, обеспечивающий температуру 4—8®С; пробирки бактериологические вместимостью 20 см3 по ГОСТ 10315-75: пробирки центрифужные вместимостью 10 см4: пипетки градуированные вмсстмостыо 1. 2, о и 10 см1 по ГОСТ 20292-74: штативы для бактериологических пробирок; баню водяную; микроскоп иммерсионный по ГОСТ 8284-78: термостат или инкубатор; пластины с лунками; сыворотки положительные н отрицательные; антиген специфический для реакции связывания комплемента в рабочем разведении; антиген отрицательный; комплемент: гемолизин; суспензию эритроцитов барана. 2.5%-ную; эмбрионы куриные: кислоту уксусную по ГОСТ 61-75. 1%-ныЙ раствор; фуксин карболовый; готовят разведением 0,3 г фуксина основного в 10,0 г этнловош спирта (95%-ного): масло иммерсионное по ГОСТ 13739-78; раствор физиологический. рН 7,2—7,4; фуксин основной (фильтрованный): раствор готовят следующим образом: 0.50 г фуксина растворяют в 200 см3 дистиллированной воды и фильтруют через бумажный фильтр; кислоту лимонную по ГОСТ 3652-69; раствор готовят следующим образом: 0,50 г кристаллической лимонной кислоты растворяют в 200 см3 дистиллированной воды. синь метнленовую; раствор готовят следующим образом: 2.0 г порошка метиленоиой сини растворяют в 200 см3 дистиллированной воды. 2.2. Подготовка к исследованию 2.2.1. Перед постановкой реакции сыворотку крови ннакти-вируют в водяной бане в течение 30 мин при температуре 58— 60°С. Затем готовят двукратные разведения сывороток, начиная с 1:5. 2.2.2. Титрование гемолизина проводят следующим образом: из гемолизина готовят ряд разведений от 1 :1000 до 1 :10000. В лунки пластины для микротитрования вносят капельной трубкой ' по дне капли (объем одной капли принимают равным 0,025 см3) физиологического раствора поваренной соли, по одной

Страница 5

ГОСТ »381—« Стр. 3 капле разведений гемолизина, по одной капле 10%-ного раствора комплемента и по одной капле суспензии эритроцитов барана. Результаты учитывают через 20 мин инкубации при температуре 37°С. В работе используют две единицы гемолизина. 2.2.3. Титрование комплемента проводят следующим образом: 10%-иый раствор комплемента вносят л пробирки по 0.1; 0,2; 0,3; 0,4; 0.5 и 0,6 см:<. Указанное количество комплемента доводят физиологическим раствором хлористого натрия до объема 1.0 см*. После этого в лунки пластины для микротитрованпя вносят по две капли физиологического раствора, добавляют по одной капле различных разведений комплемента и по две капли гемолитической системы (смеси гемолизина и эритроцитов, инкубированной в течение 20 мин при комнатной температуре). Смесь инкубируют в термостате в течение 20 мин при температуре 37°С и учитывают реакцию. За титр комплемента принимают наибольшее разведение его, которое дает полный гемолиз эритроцитов. В основном опыте используют полторы лозы комплемента. 2.3. Проведение исследования 2.3.1. Сыворотки в разведении 1:5 вносят по одной капле в две первые лунки двух рядов пластин для микротитрования и готовят разведения от 1:10 до 1 ; 160 на физиологическом растворе. Для контроля готовят аналогичные разведения положительной и отрицательной сывороток. В один ряд лунок добавляют но одной капле специфического антигена в рабочем разведении, во второй — по одной капле контрольного антигена или физиологического раствора, затем в каждую лунку добавляют комплемент в рабочем разведении. Пластины выдерживают в холодильнике в течение 18 ч при температуре 4— 83С или в термостате в течение 1 ч при температуре 37°С. Затем в каждую лунку вносят по две капли гемолитической системы и выдерживают в водяной бане в течение 20— 30 мин при температуре 37*С. 2.4. Обработка результатов 2.4.1. Отсутствие лизиса эритроцитов означает полное (четыре плюса) связывание, т. е. положительную реакцию, а полный их лизис — отсутствие связывания комплемента, т. е. отрицательную реакцию. Титром исследуемой сыворотки крови считают то наибольшее ее разведение, которое вызывало связывание комплемента (три или четыре плюса). Результаты исследовании на хламнднозный аборт овец считают положительными при титре сыворотки 1:10.

Страница 6

Стр. < ГОСТ 25391— 83 3. МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД Сущность метода заключается в непосредственном обнаружении хламидин в мазках-отпечатках, приготовленных из патологического материала. 3.1. Аппаратура й реактивы 3.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру и реактивы, указанные в п. 2.1.1. 3.2. Подготовка к исследованию 3.2.1. Для обнаружения возбудителя заболевания из отобранного патологического материала готовят мазки-отпечатки. Окрашивание проводит одним из следующих методов: по Циль-Нильсену в модификации Стамна; по Макквавелло. 3.2.1.1. При окрашивании по Цнль-Ннльсену в модификации Стампа мазки сушат на воздухе, фиксируют легким нагреванием над пламенем, окрашивают в течение 10 мин карболовым фуксином Циль-Инльсена, разведенным дистиллированной водой в соотношении 1:10. промывают 1%-ной уксусной кислотой в течение 10—30 с (в зависимости от толщины мазка), после чего окрашивают 1%-ным раствором малахитовой зелени в течение 1 — 2 мин. Окрашенные препараты промывают водой и сушат. 3.2.1.2. При окрашивании но Маккиавелло мазки сушат на воздухе, фиксируют легким нагреванием, окрашивают щелочным фуксином в течение 5 мин. промывают сначала водой, затем раствором лимонной кислоты в течение 15 с, снова промывают водой, окрашивают метиленовой синью в течение 20 с. Окрашенные мазки промывают водой и сушат. 3.3. Проведение исследования 3.3.1. Мазки-отпечатки просматривают под иммерсией светового микроскопа. 3.4. Обработка результатов 3.4.1. Наличие в поле зрения мелких округлых образований, окрашенных в малиново-красный цвет, свидетельствует об обнаружении хламндий. 4. МЕТОД ИММУНОФЛУО^ЕСЦЕНЦИИ Сущность метода заключается в обнаружении с помощью флуоресцирующих антител хламидин в мазках-отпечатках и срезах патологического материала. 4.1. Аппаратура, материалы и реактивы 4.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1. и дополнительно: микроскоп люминнспентный;

Страница 7

ГОСТ 1Яй1—«2 Ор. 5 стекла предметные по ГОСТ 9284-75; стекла покровные по ГОСТ 6672-75; чашки Петри; пипетки пастеровские; масло нефлуореснируюшее; иммуноглобулины против хламидий флуоресцирующие; ацетон по ГОСТ 2603-79, ч.; натрий хлористый но ГОСТ 4233-77; натрий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 4172-76, х. ч.: натрий фосфорнокислый одноэамещенный по ГОСТ 245-76, х. ч. 4.2. Подготовка к испытанию 4.2.1. Для обнаружения возбудителей заболевания из проб патологического материала готовят мазки-отпечатки или срезы на замораживающем микротоме толщиной 5 мкм. Препараты подсушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне 5 мин и обрабатывают флуоресцирующим иммуноглобулином в рабочем разведении. Обработку ведут во влажной камере при температуре 37°С в течение 45 мин. Препараты споласкивают в трех сменах забуферного физиологического раствора рН 7.2—7.4 и в дистиллированной воде, а затем подсушивают на воздухе. На препарат наносят нефлуорес-цирующее масло. Дли контроля готовят и обрабатывают флуоресцирующим иммуноглобулином препараты, приготовленные из органов незара-женных белых мышей. 4.3. Проведение исследования " 4.3.1". Мазкн-отлечаткк и срезы просматривают под люминнс-центны.м микроскопом в сине-фиолетовых лучах. 4.4. Обработка результатов 4.4.1. Наличие ярко флуоресцирующих зелено-желтым цветом гранул различной величины при тусклом зелсновато-сером свечении клеток свидетельствует об обнаружении хламиднй. 5. МЕТОД ПОСТАНОВКИ БИОПРОБЫ Сущность метода заключается в воспроизведении заболевания у белых мышей. 5.1. Аппаратура, материалы и реактивы 5.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактины. указанные в п. 2.1.1. 5.2. Подготовка к исследованию 5.2.1. Пробу патологического материала — плаценту, легкие, печень и другие органы плода — измельчают на мелкие кусочки и растирают в ступке со стерильным песком. Содержимое разбав-

Страница 8

Стр. 6 ГОСТ 25341-12 ляют десятикратным объемом физиологического раствора, содер-жащнм 0,5 мг/см3 стрептомицина. Суспензию центрифугируют с частотой вращения 1000 об/мин в течение 10 мин.' Супернатант ставят на 2 ч в холодильник при температуре 4—8*С. Затем материал снова центрифугируют с частотой вращения 2000 об/мин в течение 30 мин. Полученным супернатантом заражают белых мышей к куриные эмбрионы. 5.3. Проведение исследования 5.3.1. В носовую полость слегка наркотизированных 5—7-не-дельных белых мышей вносят несколько капель ннокуляга. Мышей, у которых наблюдаются симптомы болезни (затрудненное дыхание и общая депрессия), забивают и из легких приготовляют мазки-отпечатки для микроскопического исследования, которое проводится согласно разд. 3, и для иммунофлуоресцентного исследования, проводимого согласно разд. 4. Из той же колонии мышей оставляют в качестве контрольных экземпляров не менее трех мышей. 5.4. Обработка результатов 5.4.1. В случае появления у инфицированных мышей симптомов болезни или их гибели и обнаружения в мазках-отпечатках хламидий результаты считают положительными. *. МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ ХЛАМИДИЙ Сущность метода заключается в выделении хламидий на куриных эмбрионах и идентификации их микросколированием. 6.1. Аппаратура, материалы и реактивы 6.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1. 6.2. Проведение исследования 6.2.1. Яйца берут от кур, в рационе которых нет антибиотиков. При помощи ннъскцнонной иглы вводят 0,2 см3 исследуемого материала в желточный мешок 5—7-еуточных куриных эмбрионов и инкубируют их при 37°С. Гибель их в течение первых двух сутох считают неспецифической. Погибшие куриные эмбрионы, а также эмбрионы, пережившие 10—12 дней после заражения, асептически вскрывают и из желточных мешков делают мазки-отпечатки, которые исследуют согласно разд. 3. В случае отрицательного результата проводят дополнительно два-три пассажа. 6.3. Обработка результатов 6.3.1. При обнаружении хламидий в мазках-отпечатках, приготовленных из желточных мешков инфицированных павших или убртых куриных эмбрионов, результаты исследования на хламн-диозный аборт овец считают положительными.