МЕТОДЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

МИКРОКОЛИЧЕСТВ

ПЕСТИЦИДОВ

В ПРОДУКТАХ

ПИТАНИЯ,

КОРМАХ

ИВНЕШНЕЙ

СРЕДЕ

Том 2

МЕТОДЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

МИКРОКОЛИЧЕСТВ

ПЕСТИЦИДОВ

В ПРОДУКТАХ

ПИТАНИЯ,

КОРМАХ

И ВНЕШНЕЙ

СРЕДЕ

В ДВУХ ТОМАХ

Том 2

МОСКВА ВО «АГРОПРОМИЗДАТ» 1992

Натрий вольфрамовокислый. ГОСТ 18289-78.

Натрия гидроксид х. ч.. ГОСТ 4328-77; очищенный. ГОСТ 11078-78. Натрия гндросульфат, ГОСТ 246-76.

Натрий двууглекислый. ГОСТ 83-79.

Натрия дитионат, ТУ 6-09 01-283—75.

Натриевая соль додецилсульфокислоты, ТУ 6-09 64—75.

Натрий лимоннокислый, ГОСТ 22280-76.

Натрия мета-бисульфит. ГОСТ 10575-76.

Натрия нитропруссид, ГОСТ 4218-78.

Натрия сульфат безводный, ГОСТ 4166-76.

Натрий серноватнстокислый, ГОСТ 27068-86.

Натрий тетраборокнслый, ГОСТ 4199-76.

Натрий углекислый кислый, ГОСТ 4201-79.

Натрий уксуснокислый, ГОСТ 18290-72.

Натрия хлорид, ГОСТ 4233-77. а-Нафтила мин, ГОСТ 8827-74.

N-(1 -Нафтил)этилендиамик дигидрохлорид, ТУ 6-09-15-420—80. а-Нафтол, ГОСТ 5838-79. л-Нитроаннлин, ТУ 6-09-258—77.

4 (л-Нитробензил)пиридин, ТУ 6 09-15-93—74.

Нитрометан, ТУ 6-09-11-876—77.

Нингидрнн, ТУ 6-09-10-1384—79. л-Нитрофенол, МРТУ 6-09-3973—75.

Оксид алюминия для хроматографии, ГОСТ 8136-85.

Олово гранулированное. ТУ 6 09*2704—78.

Олово двуххлористос, ГОСТ 36-78.

Палладий двуххлористый, ТУ 6-09-2025—72.

Парафин. ТУ 6-09-3637—74.

Пенополиуретан эластичный. ТУ 6-05-1688—79.

Перекись водорода, ГОСТ 10929-76.

Пирокатехин фиолетовый, ТУ 6-09-07-1087—78.

Полидиэтиленгликоль сукцинат (ПДЭГС). ТУ 6-09-2827 —77.

Прочный голубой Б, ГОСТ 11263-80.

Прочный красный Б, ГОСТ 11827-77.

Резорцин, ГОСТ 9970-74.

Ртуть металлическая, ГОСТ 4658-73 Е.

Сахароза, ГОСТ 5833-75.

Свинец уксуснокислый, ГОСТ 1027-67.

Серебра нитрат, ГОСТ 1277-75.

Силикагель КСК для хроматографии, ГОСТ 3956-76 R.

Спирт амиловый, ТУ 6-09-3467—79.

Спирт м-бутнловый, ГОСТ 6006-78.

Спирт изопропиловый. ГОСТ 9805-84.

Спирт метиловый, ГОСТ 6995-77.

Спирт октиловый, ТУ 6-09-11-1055—78.

Спирт этиловый ректификат, ГОСТ 5962-67.

Судан, ТУ 6-09-4124-75.

Тальк очищенный, ГОСТ 19729-74.

Тетраэтилеипентамии. ТУ 6-09-05-804—78.

Титана сульфат, ТУ 6 09-01-477—77.

Титан трех хлористый, ГОСТ 311-78. о-Тол и дин, ТУ 6 09-2232—75.

0-Толундин, ТУ 6-09*2992—73.

Толуол. ГОСТ 5789-78 Трилон-Б, ГОСТ 10652-73.

Трнфторуксусный ангидрид. ТУ 6-09-4135—75.

2,2,2-Трихлорэтанол. ТУ 6-09-11-719—76.

328

Углерод четырехх лорнеты ft, ГОСТ 20288-74.

Уголь активированный АГ-3, АГ-5, ГОСТ 20464-75. Уголь активированный БАУ, ТУ 6 09-3247—73.

Уголь активированный КАД, МРТУ 6-09-1049—64. Уголь активированный ОУ-А, МРТУ 6-09-1049—64. 2-Феноксиэтаиол, ТУ 6-09-13-493—76.

Фенолфталеин, ГОСТ 5850-72.

Фильтры бумажные, ТУ 6-09-1678—77.

Хлористый метилен. ГОСТ 12794-80.

Хлороформ, ГОСТ 20015-74.

Циклогексан, ТУ 6-09-06-452—76.

Пинк гранулированный. ГОСТ 989-75. Цнпк-дитиол, ТУ 6-09-05-142—79.

Цинковая пыль, ГОСТ 12601-76.

Цинка сульфат, ГОСТ 4529-78.

Цинка хлорид, ГОСТ 4529-78.

Этнлаиетат, ГОСТ 22300 - 76.

Этиленгликоль, ГОСТ 10164-75.

Этпленднамин дигидрохлорнд, ТУ 6 09-10-645—77. Эфир диэтнловый, ГОСТ 6265-74.

Эфир петролейный. ТУ МХП-1867—48.

Приложение 2 НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКАЯ ДОКУМЕНТАЦИЯ НА ПОСУДУ ЛАБОРАТОРНУЮ

Посуда мерная лабораторная стеклянная (цилиндры, мензурки, мерные колбы, градуированные пробирки), ГОСТ 1770-74 Е.

Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые, ГОСТ 9147-80 Е.

Посуда и аппаратура лабораторная стеклянная. Шлифы сферические н взаимозаменяемые (вся химическая посуда на нормальных шлифах: круглодонные, плоскодонные, грушевидные колбы, колбы Эрленмейера, холодильники. двугорлые колбы, аллонжи, дефлегматоры и т. д.), ГОСЛГ 9737—70.

Приборы мерные лабораторные стеклянные (бюретки, пипетки), ГОСТ 20292-74 Е.

Пикнометры стеклянные, ГОСТ 22524-74 Е.

Посуда н оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры (воронки делительные, эксикаторы, камеры хроматографические, водоструйные насосы, стаканы стеклянные, пульверизаторы, бюк-сы, колбы, воронки Шотта и т. д.), ГОСТ 25336-82 Е.

Приложение 3

НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКАЯ ДОКУМЕНТАЦИЯ НА ПРИБОРЫ И АППАРАТУРУ

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081—73 или аналогичный.

Аспирационное устройство, ТУ 64-1862—77.

Баня водяная, ТУ 64-1*2850—76.

Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 19491-74.

Весы аналитические лабораторные, ТУ 64-1-1065—73.

Генератор водорода.

329

Гомогенизатор, МРТУ 42-1505—63.

Денситометр БИАН-170, ТУ 64-1-56—73.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-IM, ТУ 25-11-917—76 или аналогичный.

Лампа ртутно-кварцевая, ТУ 16-535-280—74 или аналогичная

Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236—79 или аналогичная.

Микрошприц МШ-10, МШ-1, ГОСТ 20292-74 Е.

Центрифуга, МРТУ 42-219—69.

Шкаф сушильный, ТУ 64-1-1411—76 Е.

Шприц медицинский, ГОСТ 22090-83 Е.

Электрокофемолка, ГОСТ 19423-81 Е.

Электроплитка, ГОСТ 14919-83 Е.

Колбонагреватель электрический, ТУ 92-275—76.

Приложение 4 САНИТАРНО-ГИГИЕНИЧЕСКИЕ НОРМЫ СОДЕРЖАНИЯ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, ВОЗДУХЕ,

ВОДЕ И ПОЧВЕ

Приведенные в данном сборнике методики определения остаточных количеств пестицидов предназначены для контроля за содержанием пестицидов в различных средах с целью выявления нарушений санитарно-гигиенических норм (МДУ, ПДК), их устранения и разработки мер профилактики.

Определения терминов заимствованы из «Словаря термином и их определения в области гигиенического нормирования факторов окружающей среды» под ред. академика Г. И. Сидоренко (М., 1988) и «Методических указаний по гигиенической оценке новых пестицидов» (Киев: ВНИИГИНТОКС, 1988).

Предельно допустимая концентрация (ПДК)—наибольшая концентрация Вредного вещества в объектах окружающей среды, которая в условиях постоянного воздействия иа организм или в отдаленные сроки после него не вызывает у человека каких-либо заболеваний или отклонений в состоянии здоровья, а также не влияет на условия его жизни.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ)—устанавливаемый расчетным методом временный ориентировочный гигиенический норматив содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест, воде водоемов, продуктах питания, используемый в основном для целей предупредительного санитарного надзора. Утверждается Министерством здравоохранения СССР на ограниченный срок (2—3 года), после чего может быть заменен ПДК, переутвержден на новый срок или отменен в зависимости от перспективы применения вещества и имеющейся информации о его токсических свойствах.

ПДК химических веществ в воздухе рабочей зоны — концентрация вредного вещества в воздухе рабочей зоны, воздействие которой независимо от наличия других вредных факторов в пределах нормативов при ежедневной работе в течение 8 ч (при другой продолжительности в пределах 41 ч и неделю) за весь рабочий стаж и в отдаленный после него период не вызовет у работающего и его потомства каких-либо заболеваний или других отклонений в состоянии здоровья, обнаруживаемых современными методами.

ПДК пестицидов в воздухе рабочей зоны при их применении в сельском хозяйстве — это предельно допустимые концентрации, установленные с учетом особенностей сельскохозяйственного производства (кратковременность и периодичность работы с пестицидами, влияние метеорологических факторов, непостоянство концентраций и т. п.) (табл. 196, 197, 198).

ПДК химических веществ в атмосфере населенных мест — максимальная концентрация вещества, отнесенная к определенному времени осреднения (20—30 мин, 24 ч, месяц, год), которая при регламентированной вероятности ее появления не оказывает ни прямого, ни косвенного вредного действия на организм человека, его потомство и санитарные условия жизни (табл. 199).

ПДК химических веществ в воде природных водоемов — максимальная концентрация вещества, которая не оказывает прямого или опосредованного влияния на состояние здоровья настоящего и последующих поколений (выявляемого современными методами исследований) при его воздействии на организм человека в течение всей жизни и не ухудшает гигиенические условия водопользования населения (табл. 200).

ПДК химических веществ в почве — максимальное количество вещества (в мг на 1 кг пахотного слоя почвы), не вызывающее прямого или опосредованного влияния на самоочищающую способность почвы, соприкасающейся с почвой среды и на здоровье человека.

ПДК пестицида в почве — максимальное содержание остатков, при котором происходит миграция препарата в сопредельные с почвой среды (растения. пода, почва) в количествах, не превышающих гигиенические нормативы содержания этого вещества в указанных объектах и не оказывающих отрицательною влияния на биологическую активность почвы. ОДК — ориентировочная допустимая концентрация пестицида в почве — может быть рассчитана по формуле

ОДК« 1,15 + 0.76 lg МДУ.

При необходимости вводят коэффициент запаса q, учитывающий стойкость и метаболизм препарата

<7= (л+ 1)ш.

где п — поправка на стойкость препаратов, равная 1 для препаратов с временем распада 7*₉5 в почне в природных условиях до 2 лет, в эксперименте до 7 мес. Для более стойких препаратов п=2; т — поправка на метаболизм, рапная в случае образования высокотоксичных продуктов метаболизма 2, и других случаях т = 1 (см. табл. 200).

МДУ остаточных количеств загрязнителей (в пищевых продуктах)— максимальные концентрации вредных веществ в пищевых продуктах, которые не вызывают заболевания или отклонения в состоянии здоровья населения, потребляющего эти продукты, или не могут отрицательно повлиять на последующие поколения (табл. 201).

МДУ устанавливают на уровне фактического содержания пестицидов при условии соблюдения гигиенически обоснованных регламентов применения и контролируют путем сопоставления с допустимой суточной дозой пестицида для человека (ДСД). МДУ выражают в мг на 1 кг пищевого продукта.

ДСД — суточная доза, .ежедневное поступление которой на протяжении всей жизни человека не должно оказывать вредного воздействия на организм. ДСД выражают в мг на 1 кг массы человека в сутки (см. табл. 201).

При отсутствии нормативов для отдельных культур следует ориентироваться на нормативы, установленные для соответствующих групп пищевых продуктов (овощи, фрукты, зерновые и т. д.) или отдельных культур из этих групп, учитывая возможную суточную норму потребления продукта и величину ДСД.

МДУ может быть рассчитан по формуле

где М — средняя масса взрослого человека (70 кг); С„ — суточная норма потребления (табл. 202); 0,7 — доля от суммарного содержания пестицидов во всех средах, приходящаяся на продукты питания.

331

Преимутсст- ПДК. МГ,М«* Преимущест- Пестицид пдк, ыг,м» венное агрегатное состоя- Пестицид венное агрегатное состоя- ние а воздухе * ние в воздухе * Абат 0,5 п + а ддт 0,1 п + а Алипур 1,0 а 2,4-Д кислота 1,0 а Альдрнн 0,01 п + а (2,4-Д) Аындофос 0,5 II 2,4-ДА аминная 1,0 а Аляфос 0,5 п + а соль 0,5 Анабазин сульфат 0,1 п + а 2,4-Д бутиловый п + а Антно (формоти- 0,5 л -г а зфир 1,0 он) Дианат а Атразин 2,0 а Дибром 0,5 л Афуган (лнразо- 0,05 л + а Дилор (дигидро- 0,2 л -? а фос) 2.0 гелтахлор) 0,01 Аднлат-1 п + а Дильдрин п «г а Банвел Д (дикам- 1,0 а Дикрезил 0,5 л 4- а ба) Диметил хлортио- 0,5 а Базагран (бейта- 5,0 п + а фосфат ’зон) Динитро-изопро- 0,05 н + а Базудии (диази- 0,2 п + а лилфенол 0,05 нон) Дииитро-о-кре- п + а Баклетои (триа- 0,5 п + а ЗОЛ диыефои) 0,5 Диносеб 0,05 и + а Бртаыал (фснмс- а Днфеиамид (ри- 5,0 п + а дифам) БМК (карбенда- 0,1 а дерон) Дихлоральмоче- 5,0 а ЗИМ) вина Боверин 0,3 а Дозанекс (ме- 0,5 а Бромофос 0.5 п + а токсурон) Бронокот (броио- 1,0 п + а Дропп (тидиазу- 1,0 а лрл) 0.2 рон) Бутифос л + а ЗоокумариН (вар- 0,001 а Валексон 0,1 п + а фарин) Бернам (верно- 5,0 п + а Иодофенфос 0,5 п f а лат) 1,0 (С-9491) Внтавакс (карбок- а Ираэин 2,0 а сна) Харбин 0,5 а Волатон (фоксим) 0,1 а Карбофос (ма 0,5 л + а Гардона (тетра- 1.0 а латнон) хлорвинфос) ГХБД (гекса- 0,005 л Кетозфнр Кронетон (тио- 2.0 0,05 и + а п + а хлорбутадиен) ГХЦГ (гекса- 0,1 п + а фенкарб) Купроцин 0,5 а хлорииклогек- Ленацил (вензар) 0,5 п + а сан) 0,05 Линурон 1.0 а v-Изомер ГХЦГ п + а Малоран (хлор- 0,5 а Г екснлур 0,5 л + а бромурон) Гелтахлор 0,01 Л Макеб 0,5 л Гетерофос 0,02 п + а Меди трихлор- 0,1 а Глифтор 0,05 п фенолят ДДВД (днхло- 0,2 п а Мельпрекс (кар- 0,1 а фос) пен)

332

Продолжены*

Пестицид ПДК, мг.м* Прсимушсст- f венное агро- 1! гатное состои-jj ние и воздухе *1 Пестицид ПДК. М|- м* Преимущественное агрегатное состояние в воздухе * Мсркаптофос 0,02 п + а Роннт (иихлоат) 1,0 п + а Меркуран (по 0,005 п + а Слпроль (трифо- 1,0 а ртути) рин) Метальлегид 0,2 а Севин (карба- 1.0 а Металлилхлорид о.з п рил) Метатион (фени- 0.1 п + а \ Семерои (десмет- 2,0 а тротион) рин) Метафос (пара- о, 1 п + а Сероуглерод 1.0 п тион метил) Симазин 2,0 а Метила бромид 1,0 п Солан (пситано* 1.0 н + а Метилаиетофос 1.0 п + а хлор) Мстилизоиианат 0,1 п С\льфа?л!Н 1.0 а (кпрбзтион) Сумилекс (про- 1.0 а Мстилмеркспио- 0.1 и + а нимидон) фос Тиазон (дазомет) 2.0 а Мпилнитрофос 0,1 п + а | Тнллам (пебулат) 1.0 п + а Метила гнлтиофос 0.03 n + a 1 Тиодан (эндо- 0.1 п -г а Мет\рин 3.0 а сульфан) Митак (амитрац) 0,5 и + а 1 Тиофос 0,05 а 2М-4Х (МСРЛ) 1.0 а Тиурам Л. ТМТД 0,5 а Нитрафен 1.0 а Гордон 22 К (хло 2,0 а Ннкотин-суль- 0.1 п + а рамп) фат Трефлан (три- 3,0 п + а Оке а мат 5.0 п + а флуралин) Октаметил 0,02 п + а Триаллат 1,0 п -г а Ордрам (молинат, 0,5 п + а (авадекс, диптал) ялан) Грихлормета- 0,03 п + а Пеитахлорфе- 0.1 п + а |фос-3 нолят натрия Тролен 0,3 п + а Пирамин (хлор- 0,5 п + а I Фенагон (2,4-Д) 0.5 а дазон. феназон) 1 Фенмедифам 2.0 а Пликтран (ци- 0,02 а Фенурон 3,0 а гсксатин) Фнтон (картоинд] 2,0 а Полямариин 5,0 а Фозалон 0.5 п Полихлорпннен 0.2 п + а Фосфамид (ли- 0,5 п+а Пропазин 5,0 а J мстоат, ротор ) Пропанид (про- 0,1 а ) Фосфид цинка 0,1 а пакил) |! Фталан (фолиет) 0,5 а Прометрин 5,0 а I Фталофос (фос- 0,3 и + а Рамрод (пропа- 0.5 а мст) хлор) i Фурадан (карбо- 0,05 п + а Ратиндан (дифе - 0,01 а ! Фуран) наиил) | Хлоразин 2.0 а Раундап (гли- 3,0 а | Хлорхолинхлорид 0.3 а фосат) 1 Холинхлорид 10 а Per лон (дикват) 0,05 а ! Хостаквик (геп - 0.5 п + а Рнцид-П (кита- 0,3 а 1 тенофос) Uilll) В Хлорат магния 5.0 а

II

333

Утверждено 08.06.87 Л? 4360—87

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ НИТРАПИРИНА И ЕГО МЕТАБОЛИТА 6-ХЛОРПИКОЛИНОВОЙ КИСЛОТЫ В ВОДЕ. ПОЧВЕ И БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ¹

Краткая характеристика препарата. Нитрапирин — 2-хлор-6-(трихлорме-тыл) пиридин. Брутто-формула CeHsCUN. Молекулярная масса 230,9. Общепринятое название — н-серве. Химически чистое вещество — кристаллический порошок со слабым сладковатым запахом. Температура воспламенения более 350°С, т. пл. 62—63°С. Давление пара при 25 °С составляет 0,37 Па. Нитрапирин хорошо растворим в хлороформе, ацетоне, безводном аммиаке, хлористом метилене, ксилоле при 29— 26 °С. Растворимость в воде менее 40 мг/л. Рекомендован для применения в качестве стабилизатора азотных удобрений.

Основной продукт превращения нитрапнрина в объектах окружающей среды и животном организме — 6-хлорпиколиновая кислота (6-ХГ1К). Брутто-формула QH4O2QN. Молекулярная масса 157,5. Химически чистое вещество — белый кристаллический порошок, хорошо растворимый в этила-цетате, ацетоне, малорастворимый в хлороформе, диэтиловом эфире, этаноле, бензоле, воде. МДУ нитралирина и 6-ХПК в овощных и зерновых культурах 0,4 мг/кг; ПДК в воде 0,02 мг/л.

Принцип метода. Метод основан на извлечении исследуемых соединений из пробы органическим растворителем, очистке экстрактов, хроматографировании в тонком слое пластинок «Силуфол» УФ254 и обнаружении препаратов раствором аммиаката серебра, подвергнутых УФ-облучению до и после проявления.

Метрологическая характеристика метода. Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 151.

Избирательность метода. В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии ХОП, а также таких близких по структуре и области применения соединений, как 2М-4Х, 2,4-Д, бенлат, БМК, хлорамп.

Реактивы и материалы. Ацетон ч. д. а. Этилацетат х. ч. Бензол х. ч. м-Гексан ч. Этиловый эфир медицинский. Хлорид калия х. ч.,    24%-ный

раствор, приготовленный на 0,5%-ном растворе едкого натра. Едкий натр х. ч., 0,5%-ный в. р. Серная кислота х. ч., 0,2%- и 10%-ный (по объему) в. р. Уксусная кислота х. ч. Сульфат натрия безводный ч. д. а. Нитрат серебра х. ч. Аммиак водный ч. д. а. Пластинки хроматографические «Силуфол» УФ¹,. Фильтры бумажные «синяя лента». Ортофосфорная кислота х. ч., 2%-ный (по объему) водный раствор, предварительно насыщенный хлоридом калия. Уголь активированный марки БАУ. Мета-кремнекислый магний ч. Стандартный раствор нитрапирин а в ацетоне с содержанием

151. Метрологическая характеристика метода определения нитраиирина и его метаболита 6-ХПК в объектах окружающей среды и биоматериале методом хроматографии в тонком слое

Анализируемый объькт	Предел определения. мг/л. мг/кг, мкг/г, мкг/мл	Среднее значение определения. %	Стандартное отклонение,	Доверительный интервал при п — 5. р—0.93. %
Вода	0,005	Нитрапирин 94,00	±4,60	± 5,72
Почва	0,02	84,10	±1,97	± 2,44
Картофель	0,02	86,40	±1.84	± 2,28
Свекла	0.02	84,40	±0,90	± 1.12
Зерно	0,02	82,00	±1.58	± 1.96
Печень	0,2	90,40	±5, 11	± 7,10
Почки	0.2	89,86	±6,62	t 8,23
Легкие	0,2	93,90	±4.34	± 5,39
Мозг	0.2	87,66	±5,21	± 6,48
Кал	0,2	88,40	±8,52	±10,60
Кровь	0,2	87,46	->-6,48	± 8.06
Моча	0,1	96,00	±5,47	± 6,80
Вода	0,005	6-ХПК 89,0	±1,57	±1.97
Почва	0,2	83,0	±3.00	±3,72
Зерно	0,2	82,0	±2,75	±3,34
Зеленая	0.3	80.0	±3,03	±3,78
масса Печень	0,1	87,6	±3,29	±4.08
Ночки	0,1	86.0	±1,58	гс 1.96
Легкие	0,1	88,0	->-3,87	±4.80
Мозг	0,2	83,0	±3,00	±3, >2
Кал	0,2	85,4	±3,64	±4,51
Кровь	0,1	94,0	±3,08	±3,82
Моча	0,1	91,2	±0,84	±1,04

100 мкг/мл. Стандартный раствор б-Х П К в этилацетате с содержанием 100 мкг/мл. Растворы нитрапиркна и 6-ХПК хранят в сухом прохладном месте не более 15 дней. Ацетонитрил ч.

Приборы, аппаратура, посуда. Ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4. Ротационный испаритель. Водоструйный насос. Воронки: Бюхнера; делительные на 100, 500 мл. Колбы: Бунзена; круглодонные короткогорлые со шлифом Л? 29 на 100, 250 мл; конические на 100, 250 мл; мерные на 25, 100 мл. Камера для хроматографирования. Камера для опрыскивания. Пипетки с делениями на 2, 5, 10 мл. Микропипетки на 0,1 мл. Пульверизаторы стеклянные. Стаканы химические на 50, 100, 250 мл.

Подготовка к определению. Приготовление проявляющих реагентов: № 1—0,5 г нитрата серебра помещают в мерную колбу на 100 мл, растворяют в нескольких миллилитрах ацетона, добавляют 5 мл аммиака и 5 мл дистиллированной воды. Содержимое колбы перемешивают, доводят уровень раствора до метки ацетоном. Раствор хранят в темной склянке не более 10 дней; Л? 2—0,85 г нитрата серебра помещают в мерную колбу на 100 мл и дважды растворяют в нескольких миллилитрах дистиллированной воды, прибавляют 2,5 мл концентрированного аммиака. Содер-

жнмос колбы перемешивают, доводят уровень раствора до метки дистиллированной водой. Реагент хранят в темной склянке не более 3 мес.

Подготовка хроматографической колонки с чередующимися слоями кремнекислого а^га-магния и безводного сульфата натрия. В хроматографическую колонку (длина 400 мм, диаметр 20 мм) помещают стекловату н насыпают безводный сульфат натрия высотой 2,5 см. Затем насыпают слой в 7,5 см жста-кремнекислого магния (активированного при 650 °С в течение 4 ч) и слегка уплотняют стеклянной палочкой. Затем вновь чередуют слой безводного сульфата натрия (2,5 см) и мега-кремнекислого магния (7,5 см) и снова уплотняют. В верхнюю часть колонки на высоту 2.5 см насыпают слой безводного сульфата натрия. Смачивают колонку 40 мл гексана и помещают под нее коническую колбу на 100 мл для сбора вытекающей из колонки жидкости.

Отбор проб. Пробы транспортируют в стеклянной таре с притертыми пробками. Анализы проводят в дни отбора проб.

Ход анализа. Определение нитрапирина. Экстракция и очистка. Пробу воды (100 мл) помещают в делительную воронку и экстрагируют нитрапирин трижды хлороформом порциями по 30 мл. Объединенный экстракт проводят через воронку с безводным сульфатом натрия и отгоняют растворитель на ротационном испарителе досуха при температуре не более 35 °С.

Навеску почвы в 50 г помещают в плоскодонную колбу и смешивают с 5 г безводного сульфата натрия. Экстракцию проводят 100 мл смеси гексан— ацетон (1:1). Экстракт отфильтровывают в делительную воронку через фильтр «синяя лента»» промывают 150 мл 2%-ного водного раствора сульфата натрия и встряхивают. После разделения гексановый слой переносят в круглодонную колбу со шлифом через воронку с 2—3 г безводного сульфата натрия. Растворитель отгоняют на роторном испарителе при температуре 35 ®С.

Образец картофеля или свеклы в 50 г измельчают, помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, добавляют 5 г безводного сульфата натрия и смешивают. Препарат извлекают дробными экстракциями (50, 30, 30 мл) при интенсивном встряхивании с гексаном. Объединенные экстракты промывают в делительной воронке 30 мл дистиллированной воды. Водный слой отбрасывают, а гексановый слой отфильтровывают через фильтр «синяя лента» с 2—3 г безводного сульфата натрия в круглодонную колбу со шлифом. Растворитель отгоняют на роторном испарителе при температуре 35 °С.

Пробу зерна крупного помола в 50 г помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, заливают 50 мл гексана и интенсивно встряхивают в течение 30 мин, затем проводят еще дважды, экстрагируют гексаном порциями по 30 мл. Объединенные экстракты отфильтровывают в круглодонную колбу и отгоняют растворитель на роторном испарителе при 35 °С. Сухой остаток растворяют в 10 мл этилового эфира, вливают в колонку для хроматографирования в тот момент, когда мениск ранее введенного гексана достигнет верхней части адсорбента. Затем колбу обмывают 10 мл этилового эфира и также вводят в колонку. Элюируют нитрапирин из колонки смесью гексана с этиловым эфиром (2:1). Собранные в приемник первые 60 мл элюата отбрасывают, а содержащие препарат последующие 40 мл собирают в круглодонную колбу со шлифом. Растворитель отгоняют на роторном испарителе при температуре 35 °С.

Экстракцию нз биосубстратов экспериментальных животных проводят следующим образом. Пробу крови, мочи (5 мл) трижды экстрагируют хлороформом порциями по 10 мл. Объединенные экстракты высушивают безводным сульфатом натрия и отгоняют растворитель на ротационном испарителе при температуре 35 °С досуха. Остаток с помощью ацетона наносят на хроматографическую пластинку и хроматографируют.

44

Пробу печени, мозга, легких, почек, кала (5 г) тщательно измельчают, помещают в коническую колбу на 100 мл, добавляют 10 мл ацетонитрила, смешивают стеклянной палочкой и экстрагируют. Экстракцию повторяют еще дважды ацетонитрилом порциями по 10 мл. Экстракты проводят через воронку с безводным сульфатом натрия. Объединенные экстракты очищают встряхиванием с гексаном 3 раза по 10 мл. Гексановые экстракты сливают, а ацетонитрильные упаривают на ротационном испарителе при температуре 35 °С досуха. Остаток с помощью ацетона наносят на хроматографическую пластинку и хроматографируют.

Хроматографирование и проявление хроматограмм с пробами нитрапирина. Сухой остаток после удаления растворителя растворяют в ацетоне и наносят на пластинку «Силуфол* УФ₂5<- Пластинку с нанесенными пробами и стандартными растворами помещают в камеру с подвижной системой гексан — ацетон (5:1). После поднятия фронта растворителей на 12 см пластинку вынимают из камеры, подсушивают и опрыскивают 5 мл проявляющего реагента X? 1 и подвергают УФ-облучению в течение 10 мин. Нитрапирин проявляется в виде темносерых пятен с Rf 0.77±0,02 на светло-коричневом фоне.

Обработка результатов анализа. Количественная оценка проводится сравнением площадей и интенсивности окраски пятен проб и стандартного раствора. Содержание нитрапирина в пробе (X. мг/кг, мг/л или мкг/г, а в случае биосубстратов — мкг/мл) вычисляют по формуле

где А — количество вещества, найденное путем сравнения со стандартами, мкг; Р — масса или объем анализируемой пробы, г или мл.

Определение 6-Х ПК. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу воды 200 мл помещают в делительную воронку, подкисляют 1,5—

2 мл 10%-пого раствора серной кислоты (до pH 1—2) и трижды экстрагируют этилацетатом порциями по 50 мл. Остаток количественно наносят на хроматографическую пластинку после упаривания на ротационном испарителе при температуре 55—60 °С.

Навеску почвы (50 г), измельченной и просеянной, подкисляют 20 мл 2%-ной ортофосфориой или 0,2%-ным раствором серной кислот н трижды экстрагируют этилацетатом порциями по 50 мл. Растворитель фильтруют через воронку Бюхнера, отгоняют на ротационном испарителе досуха при температуре 55—60°С. К сухому остатку прибавляют 10—15 мл 20%-ного раствора хлорида калия, приготовленного на 0,5%-ном растворе едкого натра, колбу тщательно ополаскивают и переносят в делительную воронку. Колбу еще раз промывают 10—15 мл того же раствора щелочи и сливают в ту же воронку. Объединенный щелочной экстракт промывают дважды по 10—15 мл гексана. Гексановые экстракты отбрасывают, а щелочной раствор подкисляют 10%-ным раствором серной кислоты до pH 1—2 и трижды экстрагируют этилацетатом порциями по 15—20 мл. Объединенный экстракт проводят через воронку с безводным сульфатом натрия, растворитель отгоняют при температуре 55—60 °С, остаток наносят на хроматографическую пластинку.

Пробу 25 г растительного материала (зерновые, зеленая масса) помещают в колбу и приливают 15—20 мл 2%-ного раствора ортофосфориой или 0.2%-лого раствора серной кислоты, предварительно насыщенных хлоридом калия, и экстрагируют 6-ХПК трижды по 50 мл этилацетатом. Растворитель фильтруют через воронку Бюхнера и отгоняют досуха на ротационном •испарителе при температуре 55—60 °С. Далее поступают аналогично анализу •печвы.

4>

Очистка экстрактов в случае сильного загрязнения пигментами. Если после первой экстракции этилацетатом экстракты сильно загрязнены пигментами, то очистку можно проводить следующим образом. В случае зеленой массы к сухому остатку прибавляют 15—20 мл 20%-ного раствора хлорида калия, приготовленного на 0,5%-ном. растворе едкого натра. Содержимое колбы тщательно перемешивают. В колбу при перемешивании прибавляют смесь, полученную в результате энергичного встряхивания 2 г активированного угля марки БАУ, 15 мл 0,5%-ного раствора едкого натра и 15 мл гексана. Пробу выдерживают 1 ч, периодически встряхивая, и фильтруют через воронку Бюхнера. Колбу и уголь на фильтре промывают дважды 0,5%-ным растзором едкого натра по 10 мл. Смесь переносят в делительную воронку, гексановый слой отбрасывают. К водному слою прибавляют 1—2 мл 10%-ного раствора серной кислоты (pH 1—2) и трижды экстрагируют этилацетатом порциями по 20— 30 мл. Объединенные экстракты высушивают, растворитель отгоняют при 55—60 °С, остаток наносят на хроматографическую пластинку.

Пробу биосубстратов экспериментальных животных (кровь, моча, печень, почки, легкие, мозг, кал) 5 г или 5 мл помещают в колбу и трижды экстрагируют этилацетатом порциями по 10—15 мл. Растворитель отфильтровывают через бумажный фильтр в колбу для выпаривания и отгоняют на ротационном испарителе досуха при температуре 55—60 °С. Далее поступают аналогично анализу почвы.

Хроматографирование и проявление хроматограмм с пробами 6-Х П К. После отгонки растворителя пробы с помощью этилацетата количественно наносят на пластинки «Силуфол» на расстоянии 1 см от нижнего края пластинки (размеры пластинки 15X15 см). Сначала хроматографирование проводят в бензоле. При этом 6-ХПК остается на старте, а примеси, содержащиеся в пробе, продвигаются вверх. После подсушивания пластинок на воздухе (под вытяжкой) проводят вторичное хроматографирование в смеси бензол — уксусная кислота (1:1). После хроматографирования пластинки ее высушивают и выдерживают под ртутно-кварцевой лампой 7—10 мин. Далее пластинку опрыскивают проявляющим реагентом № 2 и снова подвергают УФ-облучению до четкого проявления пятен (примерно 5 мин). При наличии в пробе 6-ХГ1К на пластинке проявляются пятна бурого цвета с величиной R_t 0,54±0,01.

Обработка результатов анализа. Количественная оценка проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен проб и стандартного раствора. Содержание 6-ХПК в анализируемой пробе (X, мг/кг, мг/л, а в случае биосубстратов — мкг/г, мкг/мл) определяют по формуле

где А — количество 6-ХПК. найденное путем сравнения со стандартами, мкг; Р — масса или объем анализируемой пробы, г или мл.

Требования безопасности. При работе с нитрапирином и 6-ХПК необходимо беречь глаза, а также соблюдать все необходимые меры предосторожности при работе в химических лабораториях и правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены.

46

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение 1 НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКАЯ ДОКУМЕНТАЦИЯ НА РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Амиловый эфир уксусной кислоты, ТУ 6-09-1239—76.

4-Аминоантипирин, ТУ 6-09-3948—75.

Аммиак особой чистоты, ГОСТ 24147-82; водный, ГОСТ 3760-79.

Аммония молибдат, ГОСТ 3765-78.

Аммония персульфат, ГОСТ 20478-75.

Аммоний роданистый, ГОСТ 27067-86.

Аммоний сульфаминовой кислоты, ТУ 6-09-15-364—78.

Аммоний углекислый кислый, ГОСТ 3762-78.

Аммония хлорид. ГОСТ 3773-72.

Ангидрид уксусный, ГОСТ 5815-77.

Анилин солянокислый, ГОСТ 5822-78.

Аннокообмеииая смола АВ-17-8, ГОСТ 20301-74.

Ацетон, ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил. ТУ 6-09-3534—74.

Бария хлорид, ГОСТ 4108-72.

Бензиднн. ТУ 6-09 10-1310—78.

Бензол, ГОСТ 5955-75.

Бор трехфтористый, эфират, ТУ 6-09-804—77.

Бром, ГОСТ 4109-79.

Бромкрезоловый зеленый, ТУ 6-09-450-77.

Бромтнмоловый синий, ТУ 6-09-2045—77.

Бромфеноловый синий, ТУ 6-09-4530—77.

Бумага индикаторная универсальная, ТУ 6-09-1181—76.

Вазелиновое масло, ГОСТ 3164-78.

Висмута нитрат основной, ГОСТ 4110-75.

Водород газообразный, из баллона, ГОСТ 3022-80.

Воздух газообразный, из баллона, ГОСТ 9-010-80. и-Гексан, ТУ 6-09-3375—78. я-Геатан, ГОСТ 25828-83.

Гибберелин кристаллический, ТУ 64-3-103 —75.

Гидразин сульфат, ГОСТ 5841-74.

Гндрокснламин солянокислый, ГОСТ 5456-79.

Гипс медицинский, ГОСТ 3210-77.

Глицерин, ГОСТ 6824-76.

2,6-Двбром-М-хлорхныонимин, ТУ 6-09-05-63—73. л-Днметиламннобекзальдегид, ту 6-09-3272—77.

Д и метиле ульфоксид, ТУ 6-09-3818—74.

Диметилформамид, ГОСТ 20258-74 Е.

Дитизон, ГОСТ 10165-79.

Дифениламин, ГОСТ 5825-70.

Днэтнламин. ГОСТ 13279-67.

Диэткленглнколь, ГОСТ 10136-77.

Днэтиловый эфир фталевой кислоты. ТУ 6 09-3663—74.

Железо (III) хлорное, ГОСТ 4147-74.

Изооктан, ГОСТ 12433-83.

Индиго (динатриевая соль дисульфокислоты), ТУ 6 09-07-44—73. Индоксилацетат, ТУ 6-09-07-1156—78.

Индофенилацетат, ТУ 6-09-469—77.

Иод, ГОСТ 4159-79.

Йодистый метил, ГОСТ 6518-69.

Кадмия йодид, ГОСТ 8421-79.

Кадмий уксуснокислый, ГОСТ 5824-79.

Калия бромат, ГОСТ 4457-74.

Калия бромид, ГОСТ 4160-74.

Калия гидроксид, ГОСТ 24363-80.

Калий железистосинеродистый. ГОСТ 4207-75.

Калии железосииеродистый, ГОСТ 4206-75.

Калия иодид, ГОСТ 4232-74.

Калия перманганат, ГОСТ 20490-75.

Калия роданид, ГОСТ 4139-75.

Калий фосфорнокислый, двузаметенный, трехводный. ГОСТ 2493-75 Калия фосфат однозаметенный. ГОСТ 4198-75.

Калий хлорноватокнслый, ГОСТ 2713-74.

Калий щавелевокислый, ГОСТ 5868-78.

Кальции сульфат. ГОСТ 3210-77.

Кальция хлорид, ГОСТ 4161-77.

Катиониты, ГОСТ 20298-74.

Кислота азотная особой чистоты, ГОСТ 11125—8ч.

Кислота аскорбиновая, ГОСТ 4815-76.

Кислота борная, ГОСТ 9656-75.

Кислота винная, ГОСТ 5817-77.

Кислота кремниевая, ГОСТ 1214-78.

Кислота лимонная, ГОСТ 908-79 Е.

Кислота муравьиная, ГОСТ 5848-73.

Кислота серная особой чистоты, ГОСТ 14262-78; х. ч.. ГОСТ 4204-77. Кислота сульфа и иловая, ГОСТ 5821-78.

Кислота тногликолевая, ТУ 6-09-3115—73.

Кислота трихлоруксусная, ТУ 6-09-1926—77.

Кислота уксусная особой чистоты. ГОСТ 18270-72; ледяная ч д а ГОСТ 61-75.

Кислота ^-фосфорная. ГОСТ 6552-80.

Кислота фосфорно-вольфрамовая, ГОСТ 18290“-72.

Кислота фосфорно-молибденовая. ТУ 6-09-3540—78.

Кислота хлороводородная х. ч., ГОСТ 3118-77; особой чистоты, ГОСТ 14261-77.

Кислота щавелевая, ГОСТ 22180 -76.

Крахмал водорастворимый, ГОСТ 10163-76.

Кремния диоксид для люминофоров, ТУ 6-09-3644—74 Ксилол, ТУ 6 09-3825-78.

Лантана нитрат, ТУ 6-09-4676—78.

Магния сульфат, ГОСТ 4523-77.

Магния хлорат, ГОСТ 10483-83 Е.

Меди нитрат, ТУ 6-09-3757—74.

Меди сульфат, ГОСТ 19347-84 Е.

Медь уксуснокислая, ГОСТ 5852-79.

Метиламин солянокислый, ТУ 6*09-2088—77.

Метиловый красный, ТУ 6-09-5169—84.

Метиловый оранжевый, ТУ 6-09-4530—77.

Мочевина, ГОСТ 6691-77.

Натрия нитрит, ГОСТ 4197-74.

Натрия нитрат, ГОСТ 4168-79.

327

1

Разработаны Ю. А. Бунятяном, М. С. Петросян, А. А. Геворгян, С. А. Джагацпанян (Филиал ВНИИГИНТОКС).

42