КОНСЕРВЫ

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ПЛЕСЕНЕЙ ПО ГОВАРДУ

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2010

Настоящий стандарт распространяется на томатные продукты, плодовые пюре и соки с мякотью, в которых отсутствуют видимые признаки плесневения. и устанавливает метод подсчета количества гифов плесеней по Говарду.

Требования настоящею стандарта янляются обязательными.

1. СУЩНОСТЬ МЕТОДА

Метод основан на микроскопировании продуктов в определенных условиях и заключается в определении числа Говарда: процента полей зрения с плесенями, устанавливаемого в препаратах продуктов при непосредственном микроскопировании.

2. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

Метод отбор;« проб — по ГОСТ 26668. подготовка проб — по ГОСТ 26669.

3. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ И РАСТВОРЫ

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания I кг и пределом допускаемой погрешности ±10.00 мг по ГОСТ 24104^{1 2}.

Рефрактометр, шкала которого фадуирована в единицах показателя преломления, с ценой деления не более 0.001 и пределом основной допускаемой погрешности ±0.0002.

Баня водяная.

Центрифуга лабораторная типа ЦЛН-2 или центрифуга другого аналогичного типа, осуществляющая центрифугирование при факторе разделения около 5500. с центрифужными пробирками из полимерных материалов вместимостью 10 см' по ГОСТ 25336.

Термометр ртутный стеклянный с пределами измерений температуры 0—100 °С, ширешностью измерения не более ±1.0 ’С по ГОСТ 28498.

Сито с сеткой диаметром отверстий 0.4 мм по ГОСТ 6613.

Микроскоп биологический с оптической системой, обеспечивающей просмотр препарата в плоском поле зрения диаметром 1,382 мм. с передвижным столиком, снабженным нониусом и препарато-водителем.

Камера Говарда, имеющая плоскую поверхность, опущенную на 0.1 мм окруженную канавками и имеющую выгравированный круг диаметром 1.382 мм, либо две параллельные линии на таком же расстоянии друг от друга.

* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.

ГОСТ 10444.14-91 С. 2

Допускается применять камеры Горяева. Тома. Бюргера и другие, имеющие плоские поверхности. ограниченные канавками, опушенные на 0.1 мм относительно общей плоскости, на которые нанесены сетки из квадратов со стороной 0,05 мм.

Стаканы вместимостью 250 и 400 см³ но ГОСТ 25336.

Пипетки 1—2—10 но НТД.

Палочки из химико-лабораторною стекла по ГОСТ 21400.

Стекла покровные для камеры по ГОСТ 6672.

Мыло хозяйственное.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Спирт этиловый по ГОСТ 5962³.

Эфир или ацетон по ГОСТ 2603.

Сода кальцинированная техническая по ГОСТ 5100.

Метиленовый голубой, растворе массовой концентрацией 10 г/дм³.

Допускается применение аппаратуры с техническими характеристиками не ниже указанных.

4. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

4.1.    Продукты перед анализом не термостатируют.

Каждую единицу продукции анализируют отдельно.

4.2.    Подготовка к анализу томатных продуктов

Томатные продукты, содержащие целые или дробленые томаты, перед анализом протирают через

стгто.

В каждой пробе анализируемой продукции определяют массовую долю растворимых сухих веществ (/и₄) по ГОСТ 28562.

В стакан отбирают 50,0 г продукта с известной массовой долей растворимых сухих веществ.

Концентрированные томатные продукты разбавляют дистиллированной водой и раствором метиленового голубого или только дистиллированной водой до массовой доли растворимых сухих веществ (8.410.4) % гак. чтобы показатель рефракции при температуре (20±1) ³С составлял 1.3446—1.3460.

Необходимую суммарную массу диспыл про ванной воды и раствора метиленовою голубого для получения нормативного значения массовой дали растворимых сухих веществ (т₀) в граммах вычисляют по формуле

т₀ = л», + т₂.

т| = niy (0.107 • т₄ — 1).

т₂ = ту • 0,012 • т₄.

где т₁ — масса добавляемой дистиллированной воды, г:

м₂— масса добавляемого раствора метиленового юлубою. г;

Му — масса навески продукта, г;

т₄ — массовая доля растворимых сухих веществ. %.

При разбавлении концентрированных томатных продуктов только дисти. пиро ванной водой массу диспылированной воды (ту) в граммах вычисляют по формуле

ту = ту • (0,119 • т₄ —1).

При вычислении массы воды для разбавления томатных продуктов с солью предварительно определяют массовую долю хлоридов по ГОСТ 26186 и вычитают полученное значение из массовой дат растворимых сухих веществ.

Томатные продукт ы с массовой долей растворимых сухих веществ (8.410.4) % и менее используют для анализа без разведения.

Массовую долю растворимых сухих веществ в разбавленных продуктах контролируют по рсфрак-тометру непосредственно перед заполнением камеры.

С. 3 ГОСТ 10444.14-91

4.3. Подготовка к анализу плодовых пюре и соков с мякотью

В каждой пробе анализируемой продукции определяют массу мякоти но ГОСТ 8756.10. Осажденную в центрифужной пробирке мякоть разбавляют дистиллированной водой и раствором метиленового голубого до массовой доли 40 %.

Необходимую суммарную массу диспил про ванной воды и раствора метиленового голубого (/я₀) в граммах для получения нормативного значения массовой доли мякоти вычисляют по формуле

Щ = 1.5 т6.

где т_ь — масса мякоти в навеске, г.

Массу добавляемого раствора метиленового голубого (т₂) в граммах вычисляют по формуле

"к, 14 100 '

Массу добавляемой д испил про ван ной воды </w,) в граммах вычисляют по формуле

/И| — /Н() — ffli .

Разбавленную мякоть используют для приготовления препарата.

4.4.    Подготовка камеры

Непосредственно перед приготовлением препарата камеру последовательно промывают раствором детергента и дистиллированной водой, спиртом, эфиром или ацетоном. Камера считается подготовленной к анализу в том случае, если покровное стекло iuotho притирается к ней с образованием ньютоновских (радужных) колец на внешней по отношению к канавкам поверхности камеры.

Бактериологической петлей, шпателем или скальпелем отбирают часть продукта и переносят в цен тр в углубление камеры между канавками. Углубление камеры заполняют анализируемым продуктом на столько, чтобы продукт полностью покрыл поверхность камеры между канавками, но не попал в канавки и по другую сторону от них. Затем на камеру помешают ребром покровное стекло гак. чтобы оно касалось продукта, и. плавно наклоняя, опускают его на углубление камеры, заполненное продуктом. Края покровного стекла притирают к камере до появления ньютоновских колец.

4.5.    Подготовка микроскопа

Оптическую систему микроскопа настраивают по калибровочным линиям (крузу) на камере Говарда до получения диаметра ноля зрения 1.382 мм. что соответствует i но щади поля зрения

1.5    мм².

В случае применения камер Горяев;!. Тома. Бюргера и др. микроскоп настраивают таким образом, чтобы в его поле зрения вписался квадрат со стороной, равной 0.975—0,977 мм. что соответствует

19.5    квадратам со стороной, равной 0,05 мм. Дчя этого используют одно из сочетаний объектива 7^х, 8^х. 9^х. 10^х с окуляром 7^х. 10^х, 15^х с соответствующей механической длиной выдвижного тубуса, выставленной по шкале тубуса. Если микроскоп имеет неподвижный тубус, то длину его, при необходимости. раулируюг помешенной перед окуляром картонной или металлической насадкой, высота которой обеспечивает требуемый диаметр поля зрения. При работе с окуляром 10^х и объективом 9^х передвижной тубус микроскопа выдвигают до деления 165. При просмотре препарата свет должен быть сфокусирован на конденсор.

5. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

5.1.    Из каждой пробы Д1Я анализа готовят четыре препарата.

5.2.    Препарат помешают на препаративный столик микроскопа и просматривают, передвигая его так. чтобы одно и то же место препарата не попало повторно в поле зрения микроскопа. Подсчет гиф плесеней начинают с одного из углов препарата, передвигая паче зрения на (1.510.1) мм с помощью нониуса. Просмотрев поля водном ряду, перемещают препарат в следующий ряд. Расстояние между цен грами полей зрения в проелклренном ряду и новом должно быть (1.510.1) мм.

Для достижения максимальной четкости отдельных структур в препарате яркость света изменяют ирисовой диафрагмой. Каждое ноле зрения тщательно исследуют, просматривая препарат по всей глубине, для чего фокус микроскопа непрерывно передвигают вверх и вниз с помощью

306

ГОСТ 10444.14-91 С. 4

микровинта. При необходимости исследуемое место просматривают мри большем увеличении (порядка 200^х) и затем возвращаются к установленному увеличению, обеспечивающему диаметр поля зрения 1.382 мм.

Применение метиленового голубого позволяет установить на синем фоне препарата сине-зеленые нити гиф.

5.3.    В каждом препарате просматривают 25 нолей зрения, расположенных равномерно по всему препарату. В каждом пате зрения отмечают наличие или отсутствие гиф плесеней, пользуясь их характеристикой, приведенной в приложении.

5.4.    Поле оценивается положительным (содержащим гифы плесеней), если длина одной или общая длина двух или трех гиф превышает '/₆ диаметра поля зрения микроскопа. В общую длину входит длина нитей, мысленно вытянутых в одну линию с добавлением ответвлений.

Поле считается отрицательным, если оно нс содержит гиф плесеней или если общая длина одной, двух или трех гиф менее '/б диаметра поля зрения.

6. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

6.1.    Число Говарда определяют в каждой пробе продукции.

Результат определения выражают как процент полей зрения, содержащих гифы плесеней.

6.2.    В томатных продуктах число Говарда в пробе (X) в процентах по результатам просмотра четырех препаратов вычисляют по формуле

= — • 100

л,

где п — число положительных natevi зрения:

/»1 — число просмотренных патей зрения.

6.3. В плодовых пюре и соках с мякотью число Говарда в пробе определяют в два этапа: число Говарда (X) в разбавленной мякоти и число Говарда (G) в пробе.

Число Говарда (X) в процентах в разбавленной мякоти вычисляют по формуле, приведенной в

п. 6.2.

Число Говарда ((7 ) в процентах в пробе вычисляют по формуле

Щ • 100

М • 40

где т₍, — масса мякоти в навеске, г;

М — масса навески пробы, г;

X — число Говарда в разбавленной мякоти. %.

6.4. Если при просмотре первых 10 патей зрения все патя патожительные, то просмотр прекращают и дают заключение о том. что число Говарда в пробе (процент положительных патей зрения) батее 80.

Если при просмотре первых 10 полей зрения все поля отрицательные, то просмотр прекращают и дают заключение, что число Говард;» в пробе менее 10 %.

307

ПРИЛОЖЕНИЕ

Справочное

ХАРАКТЕРИСТИКА ГИФ ПЛЕСЕНЕЙ

Пол микроскопом гифы плесеней имеют ряд особенностей, отличающих их от остатков ткани плодов.

Гифы плесеней сегментированы или гранулированы; нити плодов прозрачные, стекловидные или волокнистые. Гифы плесеней имеют характерную разве тленность, образуя, как правило, острый угол, сосудисто-волокнистые ткани Iиолов шины под микроскопом в biuc свернутых спирально пружин. Если последние разрушены, то они отличаются от гриф плесеней по характерному завитку. Волоски, окружающие оболочку семени томатов или покрывающие поверхность плодов, тонкостенные, длинные, суживающиеся на конус, под микроскопом имеют вид сосульки. Гифы плесеней имеют трубчатое, цилиндрическое строение и иол микроскопом выглядят плоскими, с параллельными стенками.

Характерные особенности гиф плесеней и тканевых остатков плодов, позволяющие отличать одно от другого, приведены в таблице и на чертеже.

Наименование	Характеристика для
показатели	плесневых структур	тканевых остатков плодов
1. Форш	Тонкие длинные трубочки	Формы не трубчатые, а сферические, прямоугольные, аморфные и т. л.
2. Стенки	Две параллельные, хорошо видимые стенки, никогда нс заканчивающиеся острым концом. Обе стенки видны в одном фокусе, на протяжении всей их длины стенки одинаковые, за исключением оборванных концов. Иногда часть стенок можно рассмотреть с использованием большого увеличения (200-)	Структуры, как правило, нс имеющие двух стенок; если же дне стенки имеются. то они исчезают в некоторых местах. При наведении на фокус стенки оказываются перекрученными или расстояние между сгсиками неравномерное
3. Цитоплазма	Между сгсиками имеется цитоалаз-ма (которая нс всегда видна при увеличении 100—150’). часто разделенная на длинные или короткие участки, заканчивающиеся тупыми концами. Иногда 1иггоплазма имеет гранулиро-наниос строение (в виде точек, кружков. извалнетых пятен)	Между стенками и между видимыми участками стенки цитоплазма отсутствует. Между стенками moi>t просматриваться длинные или короткие темные полосы. более или менее параллельные стенкам
4. Концы	Конны гиф тупые тип заканчиваются плавным закруглением	Концы нитчатых <|юрм. оканчивающиеся незаметно, имеют расщепления, расширяются тин суживаются на конус
5. Боковые ветви	Боковые ветви гиф в точке разветвления образуют острый угол	Ветви нитчатых форм вырастают одна из другой, могут образовывать ссгку или иметь расшсалснис
6. Изгибы стенок	Изгибы сгснок гиф неравномерны, за исключением некоторых частей	Изгибы сгснок нитчатых форм однородные или же длинные, прямые, выглядят жесткими

зок

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским и проектно-конструкторским институтом продуктов детского литания и систем управления агропромышленными комплексами консервной промышленности. Техническим комитетом «Продукты переработки плодов и овощей»

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метроло-ти СССР от 23.12.91 № 2058

3.    ВЗАМЕН ГОСТ 10444.14-75

4.    ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД. на который лапа ссылка Номер раздела, пункта ГОСТ 2603-79 3 ГОСТ 5100-85 3 ГОСТ 5500-2001 3 ГОСТ 5962 —67 3 ГОСТ 6613-86 3 ГОСТ 6672-75 3 ГОСТ 6709-72 3 ГОСТ 8756.10-70 4.3 ГОСТ 21400- 75 3 ГОСТ 24 КМ-88 3 ГОСТ 25336-82 3 ГОСТ 26186-84 4.2 ГОСТ 26668- 85 2 ГОСТ 26669-85 2 ГОСТ 28498-90 3 ГОСТ 28562-90 4.2

5. П ЕРЕИЗДАН И Е. Апрель 2010 г.

310

1

Иианис официальное    Перепечатка    воспрещена

2

© ИПК Издательство стандартов. 1991 © СТАНДАРТИНФОРМ. 2010

3

На reppитории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.