Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны

Сборник методических указаний МУК 4.2.3248—14 МУК 4.2.3250—14 МУК 4.2.3252—14 МУК 4.2.3254—14 МУК 4.2.3256—14

Выпуск 2

Издание официальное

Москва • 2015

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны

Сборник методических указаний МУК 4.2.3248—14 МУК 4.2.3250—14 МУК 4.2.3252—14 МУК 4.2.3254—14 МУК 4.2.3256—14

Выпуск 2

ББК 51.24 И37

И37 Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны: Сборник методических указаний. Вып. 2.—М: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015.—41 с.

ISBN 978—5—7508—1396—4

1.    Разработаны и подготовлены ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н. И. Пирогова» Минздрава России (д.б.н. Н. И. Шеина).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6 ноября 2014 г. № 2).

3.    Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 30 декабря 2014 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.24

© Роспотребнадзор, 2015 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015

МУК 4.2.3248—14,4.2.3250—14,4.2.3252—14 4.2.3254—14,4.2.3256—14

Содержание

Введение......................................................................................................................4

Микробиологическое измерение концентрации клеток микроорганизма Rhodococcus jialingiae Ikp ВКПМ Ac-1957 в воздухе рабочей зоны:

МУК 4.2.3248—14..................................................................................................5

Микробиологическое измерение концентрации Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 в воздухе рабочей зоны: МУК 4.2.3250—14.............13

Микробиологическое измерение концентрации Bacillus mucilaginosus Вас-10 ВКПМ В-8966 в воздухе рабочей зоны:

МУК 4.2.3252—14..............................................................................................211

Микробиологическое измерение концентрации Lysinibacillus xylanilyticus

5rb ВКПМ В-11685 в воздухе рабочей зоны: МУК 4.2.3254—14.................288

Микробиологическое измерение концентрации клеток микроорганизма Yarrowia lipolytica 2kp ВКПМ Y-4043 в воздухе рабочей зоны:

МУК 4.2.3256—14................................................................................................36

3

МУК 4.2.3248—14,4.2.3250—14,4.2.3252—14 4.2.3254—14,4.2.3256—14

Введение

Сборник методических указаний «Измерение К01гцентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны» (выпуск 2) разработан с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций микроорганизмов их предельно допустимым концентрациям (ПДК), что является обязательным при осуществлении санитарно-эпидемиологического контроля.

Включенные в данный список методические указания по контролю биотехнологических штаммов в воздухе рабочей зоны разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССТБ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования» и ГОСТ 8.563— 96 ГСИ. «Методики выполнения измерений».

Методики выполнены с использованием современных и адекватных микробиологических методов исследования и позволяют контролировать концентрации биотехнологических штаммов на уровне и ниже их 11ДК в воздухе рабочей зоны, установленных в гигиенических нормативах.

Методические указания по измерению концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны предназначены для лабораторий центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, санитарномикробиологических лабораторий промышленных предприятий, а также для научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований, для осуществления контроля за содержанием штаммов в воздухе рабочей зоны.

4

МУК 4.2.3256—14

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

30 декабря 2014 г.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Микробиологическое измерение концентрации клеток микроорганизма Yarrowia lipolytica 2kp ВКПМ Y-4043 в воздухе рабочей зоны

Методические указания МУК 4.2.3256—14

1. Назначение и область применения

1.1.    Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода микробиологического количественного анализа концентрации Y. lipolytica 2кр ВКПМ Y-4043 в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 5 ООО клеток в 1 м³ воздуха.

1.2.    Методические указания носят рекомендательный характер.

2. Биологическая характеристика штамма Y. lipolytica 2kp ВКПМ Y-4043 и его гигиенический норматив в воздухе рабочей зоны

Дрожжевая культура Yarrowia lipolytica 2kp выделена из загрязненных нефтепродуктами воды/стоков Московской области, природный изолят. Штамм отобран по способности эффективно снижать содержание нефти в загрязненной ею воде, песке и почвах. Растет на средах с гсксадеканом и нефтью в качестве единственных источников углерода. Является компонентом биопрепарата по биоремедиации почв, грунтов, водоемов и стоков от нефти и нефтепродуктов.

МУК 4.2.3256—14

По результатам проведенного анализа нуклеотидной последовательности, кодирующей часть 18S рРНК исследуемого штамма, установлено, что исследуемый штамм - Yarrowia lipolytica (98 %).

Аэроб. Способен к росту на средах, содержащих источники углерода.

Мезофил. Рост очень хороший - через 24 ч при 25—28 °С образует колонии на глюкозо-пептонном агаре (ГПА). При температуре 42 °С не растет. Выдерживает кошхентрадии хлорида натрия до 1 % и немного более.

Штамм растет на агаризованных средах - глюкозо-пептонном агаре (ГПА), мясо-пептонном агаре (МПА), АГВ-среде, картофельном агаре (КА). Можно культивировать в LB-бульоне, на LB-arape и глюкозо-пеп-тонной среде (ГПС).

На ГПА на 1—2-е сутки вырастают колонии белого цвета, сухие, круглые, поднимающиеся над агаром. Края колонии ровные, у старой культуры возможно образование складок и концентрических кругов различной плотности. Максимальный диаметр - 10—12 мм.

Клетки круглые, эллипсоидные или удлиненные. Бесполое размножение - многосторонним почкованием на узком основании. Образуется псевдомицелий или истинный мицелий, который может иногда распадаться на артроспоры. Аски не конъюгативные, образуются из диплоидных клеток гиф. Оболочка аска быстро растворяется. В аске 1—4 аско-споры, шаровидные, полусферические или шляповидные.

Способен расти в присутствии циклогексимида, обладает уреазной активностью, нитрат не использует, сахара не сбраживает. В роде Yarrowia один вид lipolytica, известный своей способностью к интенсивному образованию липолитических и протеолитических ферментов. Теле-оморфа - Candida paralipolytica. Встречается у человека и других млекопитающих, в зерне, маслинах и нефтепродуктах.

Штамм Yarrowia lipolytica 2kp депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ Y-4043.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 500 кл/м³, пометка А.

3. Пределы измерепнй

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток гриба в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 5 ООО клеток в 1 м³ воздуха при доверительной вероятности 0,95.

37

МУК 4.2.3256—14

4. Методы измерений

Метод основан на аспирации из воздуха рабочей зоны клеток псевдомицелия и подсчета количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим и физиолого-биохимическим признакам.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы.

5.1. Средства измерений Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5—790 мм рт. ст. и пределом допустимой погрешности ± 2,5 мм рт. ст.

Весы лабораторные, аналитические, наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности ± 0,2 мг Колбы мерные 2-100-2,2-250-2,2-1 000-2 Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см³ Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25 и 50 см³ Термометр лабораторный шкальный, пределы измерения 0—55 °С

Аспирационный аппарат и устройство для отбора проб воздуха

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

5.2. Вспомогательные устройства и материалы Шкаф сушильный стерилизационный, позволяющий поддерживать температуру (160 ±5) °С

Термостаты, позволяющие поддерживать рабочую температуру (28 ± 2) и (37 ± 2) °С Автоклав электрический

38

МУК 4.2.3256—14

Стерилизаторы паровые медицинские Дистиллятор

Облучатель бактерицидный настенный Холодильник бытовой Микроскоп биологический с иммерсионной системой

Лупа с увеличением х 10 Пробирки типов П1, П2 Спиртовки лабораторные стеклянные Чашки биологические (Петри) или одноразовые из полимерных материалов Воронки конусные диаметром 40—45 мм Груша резиновая Петля бактериологическая Марля медицинская Вата медицинская гигроскопическая Бумага фильтровальная лабораторная

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

5.3. Реактивы и питательные среды Агар микробиологический    ГОСТ 17206-96

Вода дистиллированная    ГОСТ 6709-90

Глюкоза    ГОСТ 6038-79

Пептон сухой ферментативный    ГОСТ 13805-76

Спирт этиловый технический    ГОСТ 17299-78

Спирт этиловый ректификованный    ГОСТ Р 51652-2000 или

ГОСТ 18300-87

Натрий хлористый, хч    ГОСТ 4233-77

Глюкозо-пептонная среда стандартная

Циклогексимид сын. актидион    ГОСТ 51921-02

Однозамещенный фосфорно-кислый натрий ГОСТ 245-76 Серно-кислый магний, хч    ГОСТ 4523—11

Куриный желток

Примечание. Допускается использование других питательных сред и диагностических препаратов с аналогичными характеристиками.

39

МУК 4.2.3256—14

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток гриба в воздухе рабочей зоны соблюдают следующие требования.

6.1.    СП 1.3.2322—08 «Безопасность работы с микроорганизмами III—IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».

6.2.    СП 1.3.2518—09. Дополнения и изменения 1 к СП 1.3.2322—08.

6.3.    Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.4.    Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

6.5.    Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Приготовление сред, подготовку к анализу проводят в следующих условиях:

- температура воздуха    (20 ± 5) °С;

-    атмосферное давление (760 ± 20) мм рт. ст.;

-    влажность воздуха    не    более    80    %.

9. Приготовление питательных сред

9.1. Глюкозо-пептонный агар (ГПА)

Для приготовления используют сухую готовую глюкозо-пептонную среду (ГПА): 50,0 г порошка размешивают в 1 000 см³ дистиллированной воды. Можно использовать отдельные компоненты среды следующего состава: пептон - 20,0 г; глюкоза - 10,0 г; хлорид натрия - 5,0 г; агар-агар - 15,0 г. Сухие компоненты растворяют в 1 000 см* дистиллированной воды, тщательно перемешивают и нагревают до полного растворения агара.

40