Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской Федерации_
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны
Сборник методических указаний МУК 4.2.3248—14 МУК 4.2.3250—14 МУК 4.2.3252—14 МУК 4.2.3254—14 МУК 4.2.3256—14
Выпуск 2
Издание официальное
Москва • 2015
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны
Сборник методических указаний МУК 4.2.3248—14 МУК 4.2.3250—14 МУК 4.2.3252—14 МУК 4.2.3254—14 МУК 4.2.3256—14
Выпуск 2
ББК 51.24 И37
И37 Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны: Сборник методических указаний. Вып. 2.—М: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015.—41 с.
ISBN 978—5—7508—1396—4
1. Разработаны и подготовлены ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н. И. Пирогова» Минздрава России (д.б.н. Н. И. Шеина).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6 ноября 2014 г. № 2).
3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 30 декабря 2014 г.
4. Введены впервые.
ББК 51.24
© Роспотребнадзор, 2015 © Федеральный центр гигиены и
эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015
МУК 4.2.3248—14,4.2.3250—14,4.2.3252—14 4.2.3254—14,4.2.3256—14Содержание
Введение......................................................................................................................4
Микробиологическое измерение концентрации клеток микроорганизма Rhodococcus jialingiae Ikp ВКПМ Ac-1957 в воздухе рабочей зоны:
МУК 4.2.3248—14..................................................................................................5
Микробиологическое измерение концентрации Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 в воздухе рабочей зоны: МУК 4.2.3250—14.............13
Микробиологическое измерение концентрации Bacillus mucilaginosus Вас-10 ВКПМ В-8966 в воздухе рабочей зоны:
МУК 4.2.3252—14..............................................................................................211
Микробиологическое измерение концентрации Lysinibacillus xylanilyticus
5rb ВКПМ В-11685 в воздухе рабочей зоны: МУК 4.2.3254—14.................288
Микробиологическое измерение концентрации клеток микроорганизма Yarrowia lipolytica 2kp ВКПМ Y-4043 в воздухе рабочей зоны:
МУК 4.2.3256—14................................................................................................36
3
МУК 4.2.3248—14,4.2.3250—14,4.2.3252—14 4.2.3254—14,4.2.3256—14
Введение
Сборник методических указаний «Измерение К01гцентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны» (выпуск 2) разработан с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций микроорганизмов их предельно допустимым концентрациям (ПДК), что является обязательным при осуществлении санитарно-эпидемиологического контроля.
Включенные в данный список методические указания по контролю биотехнологических штаммов в воздухе рабочей зоны разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССТБ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования» и ГОСТ 8.563— 96 ГСИ. «Методики выполнения измерений».
Методики выполнены с использованием современных и адекватных микробиологических методов исследования и позволяют контролировать концентрации биотехнологических штаммов на уровне и ниже их 11ДК в воздухе рабочей зоны, установленных в гигиенических нормативах.
Методические указания по измерению концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны предназначены для лабораторий центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, санитарномикробиологических лабораторий промышленных предприятий, а также для научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований, для осуществления контроля за содержанием штаммов в воздухе рабочей зоны. 1
МУК 4.2.3254—14
УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации
А. Ю. Попова
30 декабря 2014 г.
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Микробиологическое измерение концентрации Lysinibacillus xylanilyticus 5rb ВКПМ В-11685 в воздухе рабочей зоны
Методические указания МУК 4.2.3254—14
МУК 4.2.3254—14
Является компонентом биопрепарата по очистке почв, грунтов, водоемов и стоков от нефти, нефтепродуктов и от других стойких органических загрязнителей, а также по очистке загрязненных промышленных объектов.
По результатам проведенного анализа секвенсов вариабельных участков генов, кодирующих 16S рРНК, тестируемый штамм наиболее близок к видам Lysinibacillus xylanilyticus (99 %).
Культурально-морфологические особенности штамма. Коковидные клетки. Колонии блестящие с желтовато-оранжевым оттенком. Рост умеренно хороший, через 48 ч при 25—28 °С штамм образует колонии на глюкозо-пептонном агаре.
Клетки представляют собой грамположительные одиночные подвижные кокковидные клетки, образующие споры. В первые часы роста (логарифмическая фаза) образуются цепочки из 2—3 клеток вытянутой формы. К 48—56 ч (стационарная фаза) цепочки распадаются, клетки утолщаются, появляются споры, имеющие центральное положение и овальную форму.
Штамм растет на жидких и агаризованных средах: глюкозно-пеп-тонном агаре (ГПА), мясо-пептонном агаре (МПА), АГВ-среде, картофельном агаре (КА). Можно культивировать в LB-бульоне, на LB-arape и готовой глюкозо-пептонной среде (ГПС).
Штамм Lysinibacillus xylanilyticus 5rb депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ В-11685.
Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 50 ООО кл/м3.
3. Пределы измерений
Методика обеспечивает выполнения измерений количества клеток в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 50 ООО клеток в 1 м3 воздуха при доверительной вероятности 0,95.
4. Методы измерении
Прямой метод основан на аспирации из воздуха рабочей зоны бактерий на глюкозо-пептонный агар и подсчета количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам.
29
МУК 4.2.3254—14
5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы, реактивы и питательные среды.
5.1. Средства измерений Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5—790 мм рт. ст. и пределом допустимой погрешности (1 ± 2,5) мм рт. ст.
Весы лабораторные, аналитические, наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности ± 0,2 мг Колбы мерные 2-100-2,2-250-2,2-1000-2 Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см3 Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25 и 50 см3 Термометр лабораторный шкальный, пределы измерения 0—55 °С
Аспирационный аппарат и устройство для отбора проб воздуха
Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
ТУ 9452-010-00141798—02
ТУ 9452-002-00141798—97 ГОСТ 9586-75 ГОСТ РЕН 13060—11,
ГОСТ Р 51935-02 ТУ 4952-007-33142130—2000 ТУ 9444-015-03965956—08
5.2. Вспомогательные устройства и материалы Шкаф сушильный стерилизационный, позволяющий поддерживать температуру (160 ±5)°С
Термостаты, позволяющие поддерживать рабочую температуру (28 ± 2) и (37 ± 2) °С Автоклав электрический Стерилизаторы паровые медицинские
Дистиллятор
Облучатель бактерицидный настенный
МУК 4.2.3254—14
Холодильник бытовой ГОСТ 26678-85
Микроскоп биологический с иммерсионной
системой
Лупа с увеличением х 10
Пробирки типов П1, П2
Спиртовки лабораторные стеклянные
Чашки биологические (Петри) или
одноразовые из полимерных материалов
Петля бактериологическая
Марля медицинская
Вата медицинская гигроскопическая
Бумага фильтровальная лабораторная
Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
5.3. Реактивы и питательные среды Агар микробиологический ГОСТ 17206-96
Вода дистиллироватшая ГОСТ 6709-90
Глюкоза ГОСТ 6038-79
Пептон сухой ферментативный ГОСТ 13805-76
Спирт этиловый технический ГОСТ 17299-78
Спирт этиловый ректификованный ГОСТ Р 51652-2000 или
ГОСТ 18300-87
Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233—77
Глюкозо-пептонная среда стандартная
Примечание. Допускается использование других питательных сред и диагностических препаратов с аналогичными характеристиками.
6. Требования безопасности
При выполнении измерений концентрации клеток в воздухе рабочей зоны соблюдают следующие требования.
6.1. СП 1.3.2322—08 «Безопасность работы с микроорганизмами 111—IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
6.2. СП 1.3.2518—09. Дополнения и изменения 1 к СП 1.3.2322—08.
6.3. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.
31
МУК 4.2.3254—14
6.4. Электробезопасность при работе с электроустановками но ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
6.5. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
7. Трсбовапия к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.
8. Условия измерении
Приготовление сред, подготовку к анализу проводят в следующих условиях:
- температура воздуха (20 ± 5) °С;
- атмосферное давление (760 ± 20) мм рт. ст.;
- влажность воздуха не более 80 %.
9. Приготовление питательных сред
Для приготовления используют сухую готовую глюкозо-пептонную среду (ГТ1А): 50,0 г порошка размешивают в 1 000 см3 дистиллированной воды.
Можно использовать отдельные компоненты среды следующего состава: пептон - 20,0 г, глюкоза - 10,0 г, хлорид натрия - 5,0 г, агар-агар - 15,0 г. Сухие компоненты растворяют в 1 000 см3 дистиллированной воды и тщательно перемешивают.
Приготовленную среду разливают в стерильные колбы по 250— 500 см3 и автоклавируют при 121 °С в течение 15 мин.
Готовую среду хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше 8 °С в течение 14 дней, нс более.
10. Проведение измерения
10.1. Отбор проб воздуха
Отбор проб воздуха проводят с учетом требований ГОСТ 12.1.005-88 с изменением 1 «ССБ'Г. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны» и ГОСТ 8.563-96. ГСИ. «Методики выполнения измерений».
32
1
