Государственное санитарно-эпидемиологическое
нормирование
Российской Федерации
4.1.
МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение
остаточных количеств
пестицидов в сельскохозяйственном
сырье, пищевых продуктах и
объектах окружающей среды
Сборник
методических указаний
по методам контроля
МУК
4.1.2907-11; 4.1.2923
- 4.1.2925-11;
4.1.2938-11
Москва
• 2011
1. Разработаны сотрудниками ГНУ Всероссийского НИИ защиты
растений Россельхозакадемии.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по
санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в
сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 2.06.2011 №
1).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в
сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным
санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.
4. Введены в действие с момента утверждения.
5. Введены впервые.
СОДЕРЖАНИЕ
1. Метрологическая характеристика метода. 3
2. Метод измерения. 4
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные
устройства и материалы.. 5
4. Требования безопасности. 6
5. Требования к квалификации операторов. 6
6. Условия измерений. 6
7. Подготовка к определению.. 6
8. Отбор проб и хранение. 8
9. Проведение определения. 8
10. Обработка результатов анализа. 10
11. Проверка приемлемости результатов параллельных
определений. 10
12. Оформление результатов. 10
13. Контроль качества результатов измерений. 11
14. Разработчики. 12
|
|
УТВЕРЖДАЮ
Руководитель
Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
Г.Г. Онищенко
12 июля 2011 г.
Дата введения:
с момента утверждения
|
4.1. МЕТОДЫ
КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств изопротурона и
дифлюфеникана в воде, почве, зерне и соломе
зерновых культур методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии
Методические указания
Настоящий документ устанавливает
методику измерения массовых концентраций изопротурона в воде водоемов в
диапазоне концентраций 0,001 - 0,01мг/дм3, в зерне в диапазоне 0,005
- 0,1 мг/кг, в почве - 0,01 - 0,1 мг/кг, дифлюфеникана в воде водоемов в
диапазоне концентраций 0,001 - 0,01 мг/дм3, в зерне и почве в
диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг, изопротурона и дифлюфеникана в соломе зерновых в
диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг.
Действующее вещество 1: изопротурон.
3-(4-изопропил)-1,1-диметилмочевина (IUPAC).
Брутто формула: C12H18N2О.
Молекулярная масса: 206,3.
Химически чистое вещество представляет собой белый
кристаллический порошок.
Температура плавления: 158 °С.
Давление пара 3,15∙10- мРа (20 °С).
Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода: Kow
lgP = 2,5 (20 °С).
Растворимость в воде (мг/дм3, 22 °С): 65.
Растворимость в органических растворителях (г/дм3,
20 °С) в метаноле - 75, дихлорметане - 63, ацетоне - 38, бензоле - 5, ксилоле -
4, н-гексане - 0,2.
Очень стабилен к воздействию света, кислот и щелочей.
Гидролизуется при нагревании в концентрированной щелочи.
Краткая токсикологическая характеристика: острая
оральная токсичность LD50 - 1826 - 2417 мг/кг (крысы), 3350 мг/кг
(мыши). При подкожном введении LD50 для крыс более 2000 мг/кг.
Ингаляционная токсичность для крыс LС50 превышает 1,95 мг/дм3
(период наблюдения 4 ч). Не раздражает кожу и слизистую глаз у кроликов.
Область применения: селективный системный гербицид,
адсорбируемый корнями и листьями растений. Используется для контроля до и после
появления однолетних трав и многолетних широколиственных сорняков на озимых и
яровых посевах пшеницы, ржи и ячменя с нормой расхода 1,0 - 1,5 кг/га.
В России для изопротурона установлены следующие гигиенические
нормативы: ДСД - 0,006 мг/кг/сут.; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,8 мг/м3;
ОДК в воде водоемов - 0,09 мг/дм3; ОДК в почве - 0,05 мг/кг; МДУ в
зерне хлебных злаков - 0,01 мг/кг.
Действующее вещество 2: дифлюфеникан.
2',4' - дифтор-2(α, α, α-трифтор-м-толилокси)никотинанилид
(IUPAC).
Брутто формула: C19H11F5N2О2.
Молекулярная масса: 394,3.
Химически чистое вещество представляет собой белый
кристаллический порошок.
Температура плавления: 159 - 161 °С.
Давление пара 4,25∙10-3 мРа (25 °С).
Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода: Kow
lgP = 4,9 (20 °С).
Растворимость в воде (мг/дм3, 25 °С): < 0,05.
Растворимость в органических растворителях (г/дм3,
20 °С) в ацетоне и диметилформамиде - 100, ацетофеноне и циклогексаноне - 50,
изофороне - 35, ксилоле - 20, циклогексане - 2, керосине - менее 10.
На воздухе стабилен вплоть до температуры плавления. При 22
°С очень стабилен в водных растворах при рН 5, 7 и 9. Достаточно устойчив к
фотолизу.
Краткая токсикологическая характеристика: острая оральная
токсичность LD50 более 2000 мг/кг (крысы), более 1000 мг/кг (мыши), более
5000 мг/кг (кролики). Ингаляционная токсичность для крыс LC50 более
2,34 мг/дм3 (период наблюдения 4 ч). Не раздражает кожу и слизистую
глаз у кроликов.
Область применения: гербицид, используемый для постобработки
осенних посевов с целью контроля трав и широколистных сорняков. Обычно
применяется в комбинации с изопротуроном или другими гербицидами хлебных
злаков. Норма расхода 125 - 250 г/га.
В России для дифлюфеникана установлены следующие гигиенические
нормативы: ДСД - 0,01 мг/кг/сут.; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,6 мг/м3;
ОДУ в воде водоемов - 0,15 мг/дм3; ОДК в почве - 0,05 мг/кг; МДУ в
зерне хлебных злаков - 0,05 мг/кг.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения
анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее
составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р =
0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.
Таблица 1
Метрологические параметры
Диапазон измерений, массовая
концентрация
|
Показатель повторяемости (относительное
среднеквадратическое отклонение повторяемости), σr, %
|
Показатель промежуточной прецизионности
(относительное среднеквадратическое отклонение в условиях вариации факторов
«время», «оператор» в одной лаборатории), σRл, %
|
Показатель воспроизводимости
(относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости),
σR, %
|
Показатель точности* (границы
относительной погрешности при вероятности Р = 0,95) ±δ, %
|
Изопротурон
|
Вода, мг/дм3
|
|
|
|
|
от 0,001 до 0,01 вкл.
|
7
|
8
|
10
|
19
|
Почва, мг/кг
|
|
|
|
|
от 0,01 до 0,1 вкл.
|
9
|
11
|
13
|
25
|
Зерно, мг/кг
|
|
|
|
|
от 0,005 до 0,05 вкл.
|
8
|
9
|
11
|
22
|
св. 0,05 до 0,1 вкл.
|
6,5
|
7
|
9
|
18
|
Солома, мг/кг
|
|
|
|
|
от 0,02 до 0,1 вкл.
|
6,5
|
7
|
9
|
18
|
св. 0,1 до 0,2 вкл.
|
5
|
6
|
7
|
14
|
Дифлюфеникан
|
Вода, мг/дм3
|
|
|
|
|
от 0,001 до 0,01 вкл.
|
6
|
7
|
8
|
16
|
Почва, мг/кг
|
|
|
|
|
от 0,01 до 0,1 вкл.
|
7,5
|
9
|
11
|
21
|
Зерно, мг/кг
|
|
|
|
|
от 0,01 до 0,1 вкл.
|
7,5
|
9
|
11
|
21
|
Солома, мг/кг
|
|
|
|
|
от 0,02 до 0,1 вкл.
|
7,2
|
8
|
10
|
20
|
св. 0,1 до 0,2 вкл.
|
6
|
7
|
8
|
16
|
*)
соответствует расширенной неопределенности Uотн. при коэффициенте охвата k = 2
|
Таблица 2
Полнота извлечения изопротурона и дифлюфеникана,
стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата
для n = 20, Р = 0,95
Аналит
|
Анализируемый объект
|
Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3)
|
Диапазон определяемых концентраций,
мг/кг (мг/дм3)
|
Среднее значение определения, %
|
Стандартное отклонение, S
|
Доверительный интервал среднего результата, ± %
|
Изопротурон
|
Вода
|
0,001
|
0,001 - 0,01
|
91,8
|
8,2
|
3,8
|
Почва
|
0,01
|
0,01 - 0,1
|
89,2
|
13,0
|
6,1
|
Зерно
|
0,005
|
0,005 - 0,1
|
90,5
|
10,5
|
4,9
|
Солома
|
0,02
|
0,02 - 0,2
|
95,9
|
6,8
|
3,2
|
Дифлюфеникан
|
Вода
|
0,001
|
0,001 - 0,01
|
89,1
|
2,3
|
1,1
|
Почва
|
0,01
|
0,01 - 0,1
|
84,9
|
9,9
|
4,7
|
Зерно
|
0,01
|
0,01 - 0,1
|
88,5
|
9,4
|
4,4
|
Солома
|
0,02
|
0,02 - 0,2
|
82,1
|
8,3
|
3,9
|
2. Метод измерения
Методика основана на определении изопротурона и
дифлюфеникана методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после их экстракции из
образцов смесью ацетона с водой и очистки экстракта методом последовательной
твердофазной экстракции на патронах Диапак С16 и Силикагель 60.
Идентификация изопротурона и дифлуфеникана проводится по
времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной
калибровки.
Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий
подготовки проб и хроматографирования.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные
устройства и материалы
3.1.
Средства измерений
Жидкостный хроматограф «ACQUITY»
фирмы «Waters» с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором,
автоматическим пробоотборником и термостатом колонки
|
|
Весы аналитические BЛA-200
|
ГОСТ
24104-2001
|
Весы технические ВЛКТ-500
|
ГОСТ
24104-2001
|
Колбы мерные на 10, 100, 1000 см3
|
ГОСТ
23932-90
|
Микродозаторы Ленпипет переменного
объема от 200 до 1000 мм3 и от 1 до 5 см3, вид
климатического исполнения УХЛЧ.2
|
ГОСТ
50444
|
Пипетки градуированные
|
ГОСТ
29227-91
|
Цилиндры мерные на 50, 100, 500 и
1000 см3
|
ГОСТ
23932-90
|
Допускается использование средств измерения с аналогичными
или лучшими характеристиками.
3.2.
Реактивы
Ацетон, чда
|
ГОСТ 2603-79
|
Ацетонитрил для ВЭЖХ, «В-230НМ»
или хч
|
ТУ 6-09-3534-87
|
Вода дистиллированная
|
ГОСТ 6709-79
|
Гексан, хч
|
ТУ 2631-003-05807999-989
|
Дифлюфеникан с содержанием
основного вещества 99,5 % (Sigma-Aldrich)
|
|
Изопротурон с содержанием
основного вещества 99,0 % (Sigma-Aldrich)
|
|
Этилацетат, хч
|
ГОСТ
22300-76
|
Допускается использование реактивов квалификацией не ниже
указанных.
3.3.
Вспомогательные устройства и материалы
Аналитическая колонка ACQUITY UPLC
ВЕН С18 (100×2,1) мм, 1,7 мкм (Waters)
|
|
Бидистиллятор
|
|
Баня ультразвуковая «Сапфир»,
УЗВ-1,3
|
ГОСТ
Р МЭК 60335-2-15-98
|
Вакуумный манипулятор для работы с
патронами для твердофазной экстракции (Waters, кат. № WAT 200677)
|
|
Воронка Бюхнера
|
ГОСТ 0147
|
Воронки лабораторные В-75-110
|
ГОСТ
25336-82
|
Колба Бунзена
|
ГОСТ 5614-75
|
Колбы круглодонные на шлифах КШ50
14/23 ТС
|
ГОСТ 10384-72
|
Колбы круглодонные на шлифах КШ250
29/32 ТС
|
ГОСТ 10384-72
|
Колбы плоскодонные на шлифах КШ
250 29/32 ТС
|
ГОСТ
25336-82
|
Мельница ножевая РМ-120 и
лабораторная зерновая ЛМЗ
|
ТУ 1-01-0593-79
|
Патроны Диапак С16 (БиоХимМак),
0,4 г
|
ТУ
4215-002-05451931-94
|
Патроны, заполненные силикагелем
60 (Merck), 0,5 г
|
|
Ротационный вакуумный испаритель
BuchI R 205 (Швейцария)
|
|
Фильтры бумажные «красная лента»
|
ТУ 6.091678-86
|
Допускается использование другого вспомогательного
оборудования с техническими характеристиками не хуже указанных.
4. Требования безопасности
4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования
техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими,
легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ
12.1.005, 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ
12.0.004.
При выполнении измерений с использованием жидкостного
хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила
электробезопасности в соответствии с ГОСТ
12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.
4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано
приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной
безопасности по ГОСТ
12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ
12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм,
установленных ГН
2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в
воздухе рабочей зоны».
5. Требования к квалификации операторов
Измерения в соответствии с настоящей методикой может
выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации
хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально
соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений
по п. 13.
6. Условия измерений
При выполнении измерений выполняют следующие условия:
• процессы приготовления растворов и подготовки проб к
анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности
не более 80 %;
• выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в
условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к определению
7.1.
Кондиционирование колонки
Перед началом анализа колонку (Acquity ВЕН С18)
кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 - 0,2 см3/мин) до
стабилизации нулевой линии.
7.2.
Приготовление растворов
7.2.1. 0,005 Мраствор ортофосфорной кислоты: (0,5 ±
0,01) г 98 % ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм3,
растворяют в биднстиллированной воде и доводят объем до метки.
7.2.2. Для приготовления подвижной фазы 1 смешивают
ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 40:60 по
объему, используя мерные цилиндры.
7.2.3. Для приготовления подвижной фазы 2 смешивают
ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 65:35 по
объему, используя мерные цилиндры.
7.2.4. Приготовление элюентов для твердофазной экстракции.
Элюент 1. В мерную колбу вместимостью 100 см3
помещают 5 см3 этилацетата и доводят объем до метки гексаном.
Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.
Элюент 2. В мерную колбу вместимостью 100 см3
помещают 20 см3 этилацетата и доводят объем до метки гексаном.
Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.
Элюент 3. В мерную колбу вместимостью 100 см3
помещают 50 см3 этилацетата и доводят объем до метки гексаном.
Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.
7.3.
Приготовление основных и градуировочных растворов
7.3.1. Основные растворы 1 и 2 с концентрацией 0,5 мг/см3:
точные навески изопротурона и дифлуфеникана (50 ± 0,5) мг помещают в мерные
колбы вместимостью 100 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят
объемы до метки тем же растворителем.
Градуировочные растворы изопротурона и дифлуфеникана с
концентрациями 0,05, 0,1, 0,2, 0,5, 0,75 и 1,0 мкг/см3 готовят
методом последовательного разбавления основных растворов 1 и 2 по объему,
используя соответственно подвижные фазы 1 и 2.
7.3.2. Раствор № 1 с концентрацией изопротурона 1,0 мкг/см3:
в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,2 см основного раствора
1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.3. Раствор № 2 с концентрацией изопротурона 0,75
мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят
7,5 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.4. Раствор № 3 с концентрацией изопротурона 0,5
мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают
5 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.5. Раствор № 4 с концентрацией изопротурона 0,2 мкг/см3:
в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2,0 см3
раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.6. Раствор № 5 с концентрацией изопротурона 0,1
мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают
1 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.7. Раствор № 6 с концентрацией изопротурона 0,05
мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают
0,5 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.8. Раствор № 7 с концентрацией дифлюфеникана 1,0
мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят
0,2 см3 основного раствора 2 и доводят объем до метки подвижной
фазой 2.
7.3.9. Раствор № 8 с концентрацией дифлюфеникана 0,75
мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят
7,5 см3 раствора 6 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
7.3.10. Раствор № 9 с концентрацией дифлюфеникана 0,5
мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят
5,0 см раствора 6 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
7.3.11. Раствор № 10 с концентрацией дифлюфеникана 0,2
мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят
2,0 см раствора 6 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
7.3.12. Раствор № 11 с концентрацией дифлюфеникана 0,1
мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят
1,0 см раствора 6 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
Основные растворы 1 и 2 можно хранить в холодильнике при
температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение
суток.
При изучении полноты определения изопротурона и
дифлуфеникана в почве, зерне и соломе зерновых используют ацетонитрильные
растворы веществ. Растворы с концентрациями аналитов 1,0 и 10,0 мкг/см3
готовят из основных растворов 1 и 2 с концентрациями изопротурона и
дифлюфеникана 0,5 мг/см3 методом последовательного разбавления по
объему ацетонитрилом.
7.4.
Построение градуировочного графика
Для установления градуировочных характеристик (площадь пика
- концентрация изопротурона или дифлуфеникана в растворах) в хроматограф вводят
по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных
измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых
концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости
среднего значения площади пика от концентрации изопротурона или дифлуфеникана в
градуировочных растворах.
Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочные
коэффициенты (K) в уравнении линейной регрессии:
C
= KS, где
S - площадь пика градуировочного раствора.
Градуировку признают удовлетворительной, если значение
коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
Градуировочную характеристику необходимо проверять при
замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической
системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного
коэффициента.
Градуировочную зависимость признают
стабильной при выполнении следующего условия:
С - аттестованное значение
массовой концентрации изопротурона или дифлуфеникана в градуировочном растворе
в мг/см3,
СК - результат контрольного измерения
массовой концентрации изопротурона или дифлуфеникана в градуировочном растворе
в мг/см3,
λконтр. - норматив контроля градуировочного
коэффициента, % (λконтр. = 10 % при Р = 0,95).
7.5. Подготовка патронов для твердофазной экстракции
Диапак С16: Непосредственно перед употреблением в два
последовательно соединенных патрона вносят сначала 1 см3
ацетонитрила, а затем 1 см3 воды.
Патрон Силикагель 60: Непосредственно перед
употреблением через патрон пропускают 2 см3 гексана.
8. Отбор проб и хранение
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными
правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и
объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№
2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с ГОСТ Р
51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб»; ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) «Зерновые.
Отбор проб зерна»; ГОСТ 28168-89 «Почвы. Отбор проб».
Пробы зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или
тканевой упаковке при комнатной температуре. Для длительного хранения пробы
почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного
света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом
сухую почву доводят до стандартной влажности, просеивают через сито с
отверстиями диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторных
мельницах.
9. Проведение определения
9.1.
Определение изопротурона и дифлюфеникана в воде водоемов
Две аликвоты воды по 50 см3 пропускают отдельно
через патроны Диапак С16. Фильтраты отбрасывают. Через каждый патрон пропускают
3 см3 ацетонитрила. Элюаты 1 и 2 собирают по отдельности и упаривают
досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С.
Сухой остаток 1 растворяют в 0,5 см3 подвижной фазы 1, а сухой
остаток 2 - в 0,5 см подвижной фазы 2. Первый раствор (10 мм3)
вводят в жидкостный хроматограф для определения изопротурона в соответствующих
условиях хроматографирования (см. п. 9.3).
Второй раствор хроматографируют в условиях соответствующих анализу
дифлюфеникана.
9.2.
Определение изопротурона и дифлюфеникана в почве, зерне и соломе зерновых
По (20 ± 0,1) г почвы или измельченного на лабораторной
мельнице зерна или (5 ± 0,1) г нарезанной ножом соломы помещают в коническую
колбу вместимостью 250 см3, прибавляют 10 см3 воды и,
спустя 2 - 3 мин, 40 см3 ацетона. Экстрагируют на ультразвуковой
бане в течение 10 мин. Массу фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» на
воронке Бюхнера. Экстракцию повторяют, используя в качестве экстрагента 50 см3
смеси ацетона и воды в соотношении 4:1. Объединенный экстракт упаривают на
вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °С до
полного удаления ацетона. Водный остаток (около 20 см3) фильтруют
через бумажный фильтр «красная лента» и пропускают через два, соединенных
последовательно и откон-диционированных по п. 7.5
патрона Диапак С16. Фильтрат отбрасывают. Изопротурон и дифлюфеникан элюируют 4
см3 ацетона. Элюат упаривают досуха на вакуумном ротационном
испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °С, сухой остаток растворяют
в 2,0 см3 гексана и количественно переносят в патрон Силикагель 60,
откондиционированный гексаном по п. 7.5.
Фильтрат отбрасывают. Патрон промывают двумя порциями по 2 см3
гексана и 2 см3 элюента 1. Промывки отбрасывают. Дифлюфеникан
элюируют 5 см3 элюента 2 и собирают элюат 1 в отдельную колбу.
Патрон промывают 2 см3 элюента 3. Промывку отбрасывают. Изопротурон
элюируют 5 см3 элюента 3, собирая отдельно элюат 2. Элюаты 1 и 2
упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной
бани не выше 40 °С. Сухие остатки изопротурона в зерне и соломе растворяют в 1
см3 подвижной фазы 1, а в почве - в 2 см3 подвижной фазы
1. Сухие остатки дифлюфеникана в почве и зерне растворяют в 2 см3
подвижной фазы 2, а остаток дифлюфеникана в соломе в 1 см3 подвижной
фазы 2.
9.3. Условия хроматографирования
Ультраэффективный жидкостный хроматограф «ACQUITY» фирмы
Waters с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором,
автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка
ACQUITY UPLC ВЕН С18 (2,1×100) мм, 1,7 мкм (Waters). Температура колонки
(30 ± 1) °С.
Изопротурон: Подвижная фаза 1: смесь ацетонитрила и
0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 40:60. Скорость потока элюента: 0,2
см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 240 нм. Объем вводимой
пробы 10 мм3. Время удерживания изопротурона (4,2 ± 0,1) мин.
Дифлюфеникан: Подвижная фаза 2: смесь ацетонитрила и
0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 65:35. Скорость потока элюента: 0,2
см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 285 нм. Объем вводимой
пробы 10 мм3. Время удерживания дифлюфеникана (4,7 ± 0,1) мин.
Линейные диапазоны детектирования изопротурона и
дифлюфеникана сохраняются в интервале концентраций 0,01 - 1,0 мкг/см3.
10. Обработка результатов анализа
Количественное определение
проводят методом абсолютной калибровки. Содержание изопротурона и дифлюфеникана
в воде (X, мг/дм3), в почве, зерне и соломе (X, мг/кг)
вычисляют по формуле:
где Sx - площадь
пика изопротурона или дифлюфеникана на хроматограмме испытуемого образца, AU∙сек
(AU);
K - градуировочный
коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной
зависимости;
V - объём пробы, подготовленной для
хроматографического анализа, см3;
Р - навеска анализируемого образца, г; (воды, см3);
f -
полнота извлечения изопротурона или дифлуфеникана, приведенная в табл. 2, (%).
Содержание остаточных количеств изопротурона или
дифлюфеникана в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.
Пробы, дающие пики большие, чем стандартный раствор
изопротурона или дифлюфеникана с концентрацией 1,0 мкг/см3,
разбавляют подвижной фазой 1 или 2, соответственно.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных
определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое
результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не
превышает предела повторяемости (1):
где X1 и Х2 - результаты
параллельных определений, мг/кг;
r - значение предела
повторяемости (r = 2,8σr).
При невыполнении условия (1)
выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь
выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде: (Х ± Δ)
мг/кг при вероятности Р = 0,95, где
X - среднее арифметическое результатов определений,
признанных приемлемыми, мг/кг;
Δ - граница абсолютной
погрешности, мг/кг.
где δ - граница относительной
погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном
концентраций), %.
В случае если содержание аналита менее нижней границы
диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
содержание изопротурона в зерне менее 0,005 мг/кг, в
почве - менее 0,01 мг/кг, дифлюфеникана в пробах почвы и зерна менее 0,01
мг/кг, содержание изопротурона и дифлюфеникана в пробах воды менее 0,001
мг/дм3, а в пробах соломы менее 0,02 мг/кг*
*0,005 мг/кг - предел обнаружения изопротурона в зерне,
0,01 мг/кг - предел обнаружения дифлюфеникана в пробах почвы и зерна,
изопротурона в пробах почвы; 0,001 мг/дм3 - предел обнаружения
изопротурона и дифлюфеникана в воде, а 0,02 мг/кг - предел обнаружения в пробах
соломы.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости
измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ
Р ИСО 5725-1-6-2002
«Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед
проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль
процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
Величина добавки Cд
должна удовлетворять условию:
Cд
= Δл,x + Δл,x' где
±Δл,x (±Δл,x')
- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа,
соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению
содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом:
Δл
= ±0,84∙Δ, где
Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:
где δ - граница относительной
погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном
концентраций), %.
Результат контроля процедуры Kк
рассчитывают по формуле:
Kк = Х' - Х - Сд,
где
Х', Х, Сд - среднее
арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по
п. 11) содержания компонента в образце с
добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
Проводят сопоставление результата контроля
процедуры (Kк) с нормативом контроля
(K).
Если результат контроля
процедуры удовлетворяет условию
процедуру анализа признают
удовлетворительной.
При невыполнении условия (2)
процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным
результатам, и принимают меры к их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений,
полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами
измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела
воспроизводимости (R):
где Х1 и Х2
- результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
R - предел воспроизводимости (в соответствии с
диапазоном концентраций), %.
14. Разработчики
Долженко В.И., Цибульская И.А., Журкович И.К., Луговкина
Н.В., Ковров Н.Г. (ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты
растений, Санкт-Петербург).
Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об
аттестации № 01.5.04.679) и внесена в Федеральный реестр (ФР.1.31.2011.10036).