ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

«ТОМСКИЙ ПОЛИТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» АККРЕДИТОВАННАЯ МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ СЛУЖБА ТПУ

(аттестат об аккредитации No РОСС RU 01.00143-03 от 24.12.01) ООО «ВНЕДРЕНЧЕСКАЯ НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ФИРМА «ЮМХ»

«УТВЕРЖДАЮ»

Директор

ООО «ВНПФ «ЮМХ»

_^ ' Г.Б.Слепченко

“ 5 " сентября 2006 г.

МУ 08-47/205

(по реестру аккредитованной метрологической службы ТПУ)

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ПРЕПАРАТЫ. ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ АЗИТРОМИЦИНА ДИГИДРАТА

«СОГЛАСОВАНО» Метролог метрологической службы ТПУ

^    •    Ь Н.П.Пикула

" 5 " сентября 2006 г.

Томск 2006

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

«ТОМСКИЙ ПОЛИТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» АККРЕДИТОВАННАЯ МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ СЛУЖБА ТПУ (аттестат об аккредитации № РОСС RU 01.00143-03 от 24.12.01)

ООО «ВНЕДРЕНЧЕСКАЯ НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ФИРМА «ЮМХ»

СВИДЕТЕЛЬСТВО ОБ АТТЕСТАЦИИ МВИ

№ 08-47/205

Методика выполнения измерений массовой доли азитромицина дигидрата методом вольтамперометрии, разработанная в Томском политехническом университете и ООО «ВНП Ф «ЮМХ» и регламентированная в МУ 08-47/205 (по реестру аккредитованной метрологической службы Томского политехнического университета)

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ПРЕПАРАТЫ. ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ АЗИТРОМИЦИНА ДИГИДРАТА

аттестована в соответствии с ГОСТ Р 8.563 (ГОСТ 8.010).

Аттестация осуществлена по результатам теоретического и экспериментального исследования МВИ.

В результате аттестации МВИ установлено, что данная МВИ соответствует предъявляемым к ней метрологическим требованиям и обладает следующими основными метрологическими характеристиками:

1 Диапазоны измерений, относительные значения показателей точности, повторяемости и воспроизводимости методики при доверительной вероятности Р=0,95

Определяемый компонент Диапазон измеряемых концентраций, мг/дм3 (мг/кг) Показатель повторяемости (среднеквадратическое отклонение повторяемости), Показатель вослроиз: водимостй (среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), сф].% Показатель точности (границы, в которых находится погрешность методики), 5,% Азитро мицина дигидрат От 0,008 до 800 включ. 2 3 6

Наименование [АзитромициН    ————

Трассе Развертка I Режим 1 Элементы I Контроль I

Время, с Потенциал В УФО ГАЗ Мешалка Г~ Подготовка раствора нт Года г г Г Скорость Г* Обработка раствора 1 0 Года г г г | 0 Г" Обработка электрода гг Года Года г г г Г Очистка электрода г_ Года г г г Р Накопление По Года г р г 1 о Р Успокоение гг Гмбо Р Развертка Г*^ Г__ !__

Отмена

Мс юдина

Наименование {Азигромицин

Тра<жа Развертка | Ражим J Элементы | Контроль Тип развертки |иклульсная "3 Диапазон тока |аоз мА Шаг развертки |ю ^1 мВ Задержка 1 |30 и % Задержка 2 |б0 ll X Начало импульса [i If X Окончание импульса |50 И X Амплитуда импульса |-40 ~И мВ Накопление |14 jtl раз

Проводят разметку полученных вольтамперограмм (см. «Руководство пользователя», раздел 4.3 «Разметка вольтамперных зависимостей»), удаление «выпадающих» кривых» (см. «Руководство пользователя», раздел 4.4 «Обработка вольтамперных кривых»).

При наличии на вольтамперных кривых пиков определяемого компонента высотой более 0,1 мкА содержимое стаканчиков выливают, отмывают стаканчики и электроды по 9.1 так, чтобы в чистом фоне отсутствовали пики определяемого компонента (или были менее 0,1 мкА). По окончании измерения фона содержимое стаканчиков не выливают.

9.2.3 Проверка работы стеклоуглеродных электродов по контрольной пробе (методом «введено-найдено»)

Проверку работы стеклоуглеродных электродов (СУЭ) проводят:

1)    после обработки электрода полирующей пастой;

2)    при неудовлетворительной сходимости результатов анализа;

3)    при отсутствии на вольтамперограммах пробы с добавкой пика определяемого компонента.

Вводят в стаканчики с раствором фонового электролитом 0,02 см³ аттестованного раствора азитромицина дигидрата концентрации 1,0-10'³ моль/л. Полученный раствор является контрольной пробой с содержанием азитромицина дигидрата равным 2,0-10'⁶ моль/л при объеме пробы 10,0 см³.

Запускают команду « Получение вольтамперограмм пробы».-'Снимают по 3 -5 вольтамперограмм. Проводят их разметку (см. «Руководство пользователя», раздел

4.3 «Разметка вольтамперных зависимостей»), удаление «выпадающих» кривых (см. раздел 4.4 «Обработка вольтамперных кривых»,).

Измерение пробы с первой добавкой Вводят в каждый стаканчик еще одну добавку аттестованного раствора азитромицина объемом 0,02 см³ концентрации 1,0-1 О*³

моль/л. Запускают команду « ’* Получение вольтамперограмм пробы с добавкой». Снимают по 3 - 5 вольтамперограмм. Проводят их обработку.

Измерение пробы со второй добавкой. Вводят в каждый стаканчик еще одну добавку аттестованного раствора азитромицина дигидрата объемом 0,02 см³ концентрации 1,0-1 O'³ моль/л. Запускают команду «.^-Получение вольтамперограмм пробы с 2-мя добавками». Снимают по 3 - 5 вольтамперограмм. Проводят их обработку.

В окне «Результаты измерения сигналов» ® отображаются результаты разметки для всех типов вольтамперограмм:

Расчет массовой концентрации компонента в контрольной пробе. Заполняют таблицу «Количество» 4L., например:

Количество

Ячейке 1 | Ячейка 21 Ячейка 3 J

Регистрационный номер пробы j    120

Масса навески    [    0.0

Объем пробы    |    10.0

Объем мниералиэата    | '    0.01

Объем апнкеоты    |    65Г

Добаека! | Добаека 2 j

(г) (см3) (см3) (см3) N9 Элемент Объем лобавки АС (см3) Концентрация АС (мг/дмЗ)

! 1 Аг [ 0.05 [ 0.001 Применить для всех J 0k Отмена ;

Для перехода в таблицу «Концентрация» в главном окне на панели управления

нажимают кнопку-^ Окно просмотра результаты анализа. (См. «Руководство пользователя», раздел 4.9 «Вычисление концентрации»

Если расхождения между полученными и введенными концентрациями не превышают 30 %, стеклоуглеродные электроды считают пригодными к работе. В противном случае проверку стеклоуглеродных электродов следует повторить еще раз.

9.3 Анализ подготовленной для анализа пробы на содержание ёзитромицина

дигидрата

Одновременно рекомендуется проводить анализ двух параллельных и одной резервной пробы в трех стаканчиках.

В проверенные на чистоту стаканчики по 9.1 с раствором фонового электролита объемом по 10,0 см³ переносят аликвотную часть анализируемой пробы объемом по

0,02 - 0,05 см³, подготовленной по разделу 8.5 «Подготовка проб» настоящей методики .

Запускают команду «^п> Получение вольтамперограмм пробы» (см. Руководство пользователя раздел 4.6 «Запуск анализа пробы»). Снимают по 3 - 5 вольтамперограмм, проводят их разметку (см. «Руководство пользователя», раздел 4.3 «Раз-метка вольтамперных зависимостей»), удаление «выпадающих» кривых» (см. «Руководство пользователя», раздел 4.4 «Обработка вольтамперных кривых»,).

В стаканчики с пробой с помощью пипетки или дозатора вносят добавки АС азит-ромицина дигидрата в таких объемах, чтобы высоты пиков на вольтамперограмме увеличились примерно в 2 раза (например 0,02 см³ аттестованного раствора азитромици-на концентрации 1,0-10'³ моль/л).

Запускают команду « '* Получение вольтамперограмм пробы с добавкой». .Снимают по 3 - 5 вольтамперограмм. Проводят их обработку так же, как и при измерении пробы.

При необходимости в стаканчики с пробой вводят вторую добавку АС компонента,

запускают команду «J³’ Получение вольтамперограмм пробы с двумя добавками»,

снимают 3-5 вольтамперограмм, проводят их обработку,

В окне « ® Просмотр результатов измерения сигнала» смотрят результаты разметки для всех типов вольтамперограмм во всех 3-х ячейках (после второй добавки).

Вычисление массовых концентраций азитромицина. В таблице «Количество» для каждой активной ячейки указывают: массу навески или объем пробы, объем минерализата, пошедший на растворение оголённой пробы, и объем аликвотной части подготовленной к анализу пробы.

Нажимают кнопку « ^ Окно просмотра результатов анализа» в главном окне на панели управления.

В таблице представлены значения массовых концентраций азитромицина для каждой из параллельных проб. Нажимают кнопку [Приемлемость], в случае, когда результаты измерений параллельных проб приемлемы, вычисляется среднее арифметическое значение, которое принимают за результат анализа.

Сохранение документа. Для сохранения документа на панели управления нажимают кнопку «® Сохранить файл архива (F6)» или в главном меню выбирают пункт Документ/Сохранить в архиве. (См. «Руководство пользователя», раздел 5 «Работа с документом»).

Для печати вольтамперных кривых на принтере нажимают кнопку « ® Печать кривых вольтамперограмм» или в главном меню выбирают пункт Документ / Печать графиков (См. «Руководство пользователя», раздел б «Печать»).

Данные результата анализа могут быть распечатаны в виде протокола в формате Microsoft ® Word по существующему шаблону отчета (См. «Руководство пользователя», раздел 7.2). Так же возможно создание шаблона по требуемому типу оформления отчета (См. «Руководство пользователя», раздел 7.1).

25    |    H₀,    \xA    /В

20

0.2    0.4    0.6    0.8    1

E, В

Рисунок .1. Вольтамперограммы фонового электролита, пробы и пробы с добавками АС компонента при определении массовой концентрации азитромицина

дигидрата 10 ВЫЧИСЛЕНИЕ И ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА

При использовании вольтамперометрического анализатора в комплекте с компьютером регистрацию и обработку результатов измерений аналитических сигналов и расчет массовых концентраций компонента в пробе (г/кг) выполняет автоматически система сбора и обработки данных анализатора по формуле;

где: X} - содержание компонента в анализируемой пробе» г/кг;

Сас - концентрация аттестованной смеси компонента, из которой делается добавка к анализируемой пробе, мг/дм³;

Vac - объем добавки АС компонента, см³;

It - величина максимального катодного тока компонента в анализируемой пробе, А или мм;

\г - величина максимального катодного тока компонента в пробе с добавкой АС» А или мм;

т - масса анализируемой пробы, г,

V_np - объем раствора приготовленной пробы, см³;

Van - объем аликвоты раствора пробы, взятой для ВА измерения, см³.

Комплекс проводит вычисления для каждой из двух параллельных анализируемых проб; получают соответственно значения X* и Х₂

10.2 Проверка приемлемости результатов измерений

10.2.1 Проверяют приемлемость полученных результатов параллельных определений. Расхождение между полученными результатами двух параллельных анализируемых проб не должно превышать предела повторяемости г. Значение предела повторяемости для двух результатов параллельных определений приведено в таблице 4.

Таблица 4 - Диапазон измерений, значения пределов повторяемости при доверительной вероятности Р=0,95__

Определяемый компонент Диапазон измеряемых концентраций, мг/дм3 (мг/кг) Предел повторяемости (для двух результатов параллельных определений), Г Предел воспроизводимости (для двух результатов измерений), R Азитроми- цина дигидрат От 0,008 до 800 включ. 0,05 ■ X 0,08■ X X - среднее арифметическое значение результатов параллельных определений массовой концентрации элемента. X - среднее арифметическое значение результатов анализа, полученных в двух лабораториях.

Результаты считают приемлемыми при выполнении условия

|Х,-Х₂|^г.    (2)

Абсолютное значение предела повторяемости рассчитывается для среднеарифметического значения результатов двух параллельных определений

(3)

по таблице 4.

При выполнении условия (2) значение х принимается за результат измерения массовой концентрации определяемого компонента в пробе.

10.2.4    При превышении предела повторяемости (г) необходимо'дополнительно получить еще два результата параллельных определений. Если при этом размах (Х_тах - X_min) результатов четырех параллельных определений равен или меньше предела повторяемости г*, то в качестве окончательного результата принимают среднее арифметическое значение результатов четырех параллельных определений. Значения предела повторяемости (г*) для четырех результатов параллельных определений приведены в таблице 4.

Если размах (Х_тах - Х_т|_П) больше г*, выясняют причины появления неприемлемых результатов параллельных определений. При этом проводят оперативный контроль повторяемости по МИ 2335-2003 [4] или разделу А.2 приложения А настоящего документа на методику.

10.2.5    Числовое значение результата измерения должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение предела повторяемости результатов параллельных определений, и содержать не более двух значащих цифр.

10.3 Оформление результатов измерений

10.3.1    Результаты измерений хранят в памяти компьютера (при использовании компьютеризированного вольтамперометрического анализатора) или оформляют записью в журнале. При этом приводят сведения об анализируемой пробе, условиях измерений, дате получения результата измерений. Запись в журнале удостоверяет лицо, проводившее измерения.

10.3.2    Результат измерения (анализа) в документах, выдаваемы» лабораторией представляют в следующих видах:

(f ±д), г/кг, Р=0,95,

или (х ± Д,,), г/кг, Р=0,95, при условии А я < А,

где:    X    - результат измерения, полученный в соответствии с настоящим документом

на методику выполнения измерений;

± Ал - значения характеристики погрешности результатов измерений, установленное при реализации методики в лаборатории;

± А - значения характеристики погрешности настоящей методики выполнения измерений, которые рассчитываются по формуле

А = 0,01.5 X,    (4)

где 8 - относительное значение показателя точности (характеристики погрешности) методики, приведенное в таблице 1.

Примечание 1. Для получения результата анализа в мг/100 г продукта необходимо полученное значение X и Д (в мг/кг) разделить на 10.

Примечание 2. Характеристику погрешности результатов измерений при реализации методики в лаборатории допускается устанавливать по формуле

д_л =0,84-д    (5)

с последующим уточнением по мере накопления информации в процессе контроля стабильности результатов измерений по разделам 12.3 и 12.4 настоящего документа.

12 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ ПРИ РЕАЛИЗАЦИИ МЕТОДИКИ В ЛАБОРАТОРИИ

12.1 Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории предусматривает:

-    оперативный контроль процедуры анализа (на основе оценки погрешности результатов анализа при реализации отдельно взятой контрольной процедуры);

-    контроль стабильности результатов анализа (на основе контроля стабильности среднеквадратического отклонения внутрилабораторной прецизионности, погрешности, среднеквадратического отклонения повторяемости).

12.2    Оперативный контроль процедуры анализа (выполнения измерений)

проводят;

-    при внедрении методики выполнения измерений в лаборатории;

-    при появлении факторов, которые могут повлиять на стабильность процесса анализа (например, при смене партии реактивов, после ремонта прибора, при длительном промежутке времени между анализами и т.д.).

Оперативный контроль процедуры анализа проводит сам исполнитель с целью проверки его готовности к проведению анализа рабочих проб.

Оперативный контроль процедуры анализа проводят по МИ 2335-2003 [4] или по приложению А настоящего документа на методику.

12.3    Одной из форм контроля стабильности результатов анализа является контроль стабильности результатов анализа в пределах лаборатории с использованием контрольных карт, реализуемый

-    путем контроля и поддержания на требуемом уровне погрешности результатов измерений;

-    путем контроля и поддержания на требуемом уровне внутрилабораторной прецизионности;

-    путем контроля и поддержания на требуемом уровне повторяемости результатов параллельных определений.

12.4    Процедуры и периодичность контроля точности (контроля стабильности) получаемых результатов измерений в пределах лаборатории проводят с учетом требований раздела 6 ГОСТ Р ИСО 5725-6 или по МИ 2335-2003.

Ответственность за организацию проведения контроля стабильности результатов анализа возглавляют на лицо, ответственное за систему качества в лаборатории.

12.5    Периодичность контроля исполнителем процедуры выполнения измерений, а также реализуемые процедуры контроля стабильности результатов выполняемых измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.

13 ПРОВЕРКА ПРИЕМЛЕМОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ ДЛЯ ДВУХ ЛАБОРА ТОРИЙ

13.1 Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости (в двух лабораториях, т=2), проводят с учетом требований 5.3.2.1

ГОСТ Р ИСО 5725-6 по отношению к пределу воспроизводимости, приведенному в таблице 6, или к критической разности для двух среднеарифметических результатов измерений в соответствии с 5.3.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

Расхождение между результатами измерений, полученных в двух лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости. Значения предела воспроизводимости приведены в таблице 6.

При выполнении этого условия приемлемы оба результата измерений, и в качестве окончательного может быть использовано их общее среднее значение.

При превышении предела воспроизводимости могут быть использованы методы оценки приемлемости результатов измерений согласно раздела 5 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

Таблица 6 - Диапазон измерений, значения предела воспроизводимости при доверительной вероятности Р=0,95

Определяемый компонент Диапазон измеряемых концентраций, мг/дм3 (мг/кг) Предел воспроизводимости (для двух результатов измерений), R Азитромицина дигидрат От 0,008 до 800 включ. 0,08 ■ X X - среднее арифметическое значение результатов анализа, полученных в двух лабораториях.

13.2 Разрешение противоречий между результатами двух лабораторий проводят в соответствии с 5.3.3 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

Приложение А Алгоритмы оперативного контроля процедуры анализа А.1 Общие положения

А.1.1 Оперативный контроль процедуры анализа осуществляет непосредственно исполнитель на основе информации, получаемой при реализации отдельно взятой контрольной процедуры с использованием средств контроля.

А.1.2 Роль средств контроля выполняют:

-    образцы для контроля (АС по МИ 2334-2002 [5]);

-    рабочие пробы с известной добавкой определяемого компонента:

-    рабочие пробы стабильного состава.

А. 1.3 Схема оперативного контроля процедуры анализа предусматривает:

-    реализацию контрольной процедуры;

-    расчет результата контрольной процедуры;

-    расчет норматива контроля;

-    сравнение результата контрольной процедуры с нормативом контроля;

-    принятие решения по результатам контроля.

A.2 Алгоритм оперативного контроля повторяемости результатов контрольных измерений

А.2.1 Получают два результата параллельных определений любого средства контроля (по А. 1.2).

А.2.2 Реализуют схему контроля повторяемости (по А.1.3), получая два результата параллельных определений. Результат контрольной процедуры равен

Гк=\Ху-Х_г j.    (А.1)

Норматив контроля повторяемости равен пределу повторяемости г при п=2, значение которого приведено в таблице 5.

Проверяют условие

г_к<г.    (А. 2)

А.2.3 Если условие (А.2) выполняется, то рассчитывают результат контрольной процедуры анализа как среднее арифметическое из результатов двух параллельных определений.

Если г_к> г, то делают повторную контрольную процедуру, получая заново два результата параллельных определений.

При повторном превышении предела повторяемости процедуру анализа прекращают и выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам.

А.З Алгоритм оперативного контроля процедуры анализа в условиях внутрилабораторной прецизионности

А.3.1 Образцами для выполнения данной процедуры являются средства контроля по А. 1.2. Объем отобранной пробы для контроля должен соответствовать удвоенному объему (массы), необходимому для проведения измерений. Отобранный объем (масса) делят на две части и анализируют в соответствии с требованиями настоящего стандарта в условиях внутрилабораторной прецизионности или различными операторами, или в различное время, или с использованием различных средств измерений и т.д., при соблюдении условий и сроков хранения проб.

А.3.2 Рассчитывают результат контрольной процедуры

(^А-³)

Рассчитывают или устанавливают норматив контроля внутрилабораторной прецизионности

R„ = 0,84 • R,    (А.4)

где R - значение предела воспроизводимости, приведённое в таблице 6,

X - среднее арифметическое значение результатов, полученных Ь условиях внутрилабораторной (промежуточной) прецизионности.

А.3.3 Результаты, полученные в условиях внутрилабораторной прецизионности (_ _) _{считают} удовлетворительными при условии

Я_Лк^_л.    (А.5)

А.3.4 При выполнении условия (А.5) общее среднее арифметическое х представляют в качестве результата контрольной процедуры.

При невыполнении условия (А.5) измерения повторяют.

При повторном невыполнения условия (А.5) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

АЛ Алгоритм контроля процедуры выполнения измерений с спользоеанием метода добавок

А.4.1 Контроль исполнителем процедуры выполнения измерений/фоводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры Кк с нормативом контроля Кд.

А.4.2 Результат контрольной процедуры Кк рассчитывают по формуле:

к_к = |х'* - х - с| > ^где    (А.    6)

х¹ - результат контрольного измерения массовой концентрации компонента в пробе с известной добавкой - среднее арифметическое двух результатов параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предала повторяемости г. Значение г приведено в таблице 4.

X - результат контрольного измерения массовой концентрации компонента в пробе без добавки - среднее арифметическое двух результатов параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости г,

С - величина добавки.

Примечание. Величина добавки должна составлять от 50 до 150 % от массовой концентрации компонента в пробе без добавки.

А.4.3 Норматив оперативного контроля Кд рассчитывают по формуле

А » д

_лл ₎ »а - значения характеристики погрешности результатов измерении, установленные в лаборатории при реализации методики, соответствующие массовой концентрации компонента в пробе без добавки и в пробе с добавкой соответственно.

При установлении Ад можно использовать примечание в разделе 11.2 настоящего документа.

А.4.4 Качество контрольной процедуры признают удовлетворительным, при выполнении условия:

Кк й Кд .    (А.    8)

При невыполнении условия (А.8) эксперимент повторяют.

При повторном невыполнении условия (А.8) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам.

А.5 Алгоритм оперативного контроля процедуры выполнения измерений с использованием образцов для контроля

А.5.1 Образцами для контроля являются рабочие пробы с отсутствием данного компонента или малой концентрацией компонента, в которые введена точная концентрация искомого компонента (аттестованная характеристика - С). Компонент концентрации С вводят в пробу до стадии пробоподготовки.

А.5.2 Алгоритм проведения контроля точности с применением образцов для контроля состоит в сравнении результата контрольной процедуры К_к, равного разности между результатом контрольного измерения аттестованной характеристики в образце для контроля - X и его аттестованным значением - С, с нормативом оперативного контроля точности - К.

Результат контрольной процедуры равен

К_к =|х-с|.    (А.    9)

Норматив контроля точности К рассчитывают по формуле:

1 НАЗНАЧЕНИЕ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Настоящий документ (МУ 08-47/205) устанавливает методику выполнения измерений массовых доли азитромицина дигидрата при анализе проб лекарственных препаратов (субстанций, таблеток) методом вольтамперометрии (ВА).

Диапазон определяемых концентраций компонента (азитромицина) составляет от 0,008 до 800 включ. мг/дм³ (мг/кг).

Если содержание компонента в пробе выходит за верхнюю границу диапазона определяемых концентраций, допускается разбавление подготовленной к измерению пробы или уменьшения навески анализируемой пробы.

2 НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

В настоящей методике использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия

ГОСТ 2405-88 Манометры, вакуумметры, мановакуумметры, напоромеры, тягомеры и тягонапоромеры. Общие технические условия

ГОСТ 4172-76 Реактивы. Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный. Технические условия

ГОСТ 4461-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия ГОСТ 5381-72 Редуктор. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 5962-67 Спирт этиловый ректификованный, водный раствор с объемной долей спирта 96 %

ГОСТ 8625-77 Манометр. Технические условия

ГОСТ 9293-74 (ИСО 2435-73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 15150-69 Машины, приборы и другие технические изделия. Исполнения для различных климатических районов. Категории, условия эксплуатации, хранения и транспортирования в части воздействия климатических факторов внешней среды ГОСТ 17435-72 Линейки чертежные. Технические условия ГОСТ 21400-75 Стекло химико-лабораторное. Технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28165-89 Приборы и аппараты лабораторные из стекла. Аквадистилляторы. Испарители. Установки ректификационные. Общие технические требования

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29225-91 (ИСО 1775-75) Посуда и оборудование фарфоровые лабораторные. Общие требования и методы испытаний.

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29228-91 (ИСО 835-2-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 2. Пипетки градуированные без установленного времени ожидания-

ГОСТ Р 8.563-96 Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

3 СУЩНОСТЬ МЕТОДИКИ

Сущность методики состоит в переводе проб лекарственных препаратов (таблеток, капсул, порошков для инъекций) и субстанции в раствор путем растворения навесок соответствующих проб в этаноле последующим вольтамперометри-ческим определением массовой концентрации азитромицина дигидрата (азитромици-

на).

Метод ВА измерения основан на способности азитромицина окисляться на индикаторном стеклоуглеродном электроде при определенном потенциале, характерном для данного органического вещества.

Процесс электрохимического окисления азитромицина проводят в растворе натрия фосфорнокислого двузамещенного концентрации 0,05 - 0,10 моль/дм³ на индикаторном стеклоуглеродном электроде в диапазоне потенциалов от 0,2 В до 1,50 В относительно насыщенного хлорсеребряного электрода (нас.х.с.) в зависимости от содержания азитромицина в пробе.

Регистрация аналитического сигнала азитромицина на вольтамперограмме проводится при линейно-меняющемся (в сторону положительных значений) потенциале на универсальном полярографе (ПУ-1 и др.) или дифференциальной развертке потенциала на аналитическом вольтамперометрическом комплексе СТА в дифференциальном режиме записи вольтамперограмм.

Массовая концентрация азитромицина в пробе определяется методом добавок аттестованных смесей азитромицина.

Общая схема анализа проб методом вольтамперометрии представлена на рисунке 1.

Рисунок 1. Основные этапы анализа проб методомВА

4 ПРИПИСАННЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОГРЕШНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ И ЕЕ СОСТАВЛЯЮЩИХ

4.1 Методика выполнения измерений массовых концентраций азитромицина дигидрата в пробах таблеток, капсул, порошков для инъекций и субстанций методом вольтамперометрии обеспечивает получение результатов измерений g погрешностью, не превышающей значений, приведенных в таблице 1.

Таблица 1 - Диапазоны измерений, относительные значения показателей точности, повторяемости и воспроизводимости методики при доверительней вероятности Р=0,95

Определяемый компонент Диапазон измеряемых концентраций, мг/дм3 (мг/кг) Показатель повторяемости (среднеквадратическое отклонение повторяемости), Показатель воспроизводимости (среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), Показатель точности (границы, в которых находится погрешность методики), 5,% Азитро- мицина дигидрат От 0,008 до 800 в ключ. 2 3 6

4,2 Значения показателя точности методики используют при:

-оценке деятельности лабораторий на качество проведения испытаний;

-оценке возможности использования результатов измерений при реализации методики выполнения измерений в конкретной лаборатории.

5 ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ, ОХРАНЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ ПРИ ВЫПОЛНЕНИИ ИЗМЕРЕНИЙ

5.1    Условия безопасного проведения работ

К работе с полярографом или вольтамперометрическим анализатором, нагревательными приборами и химическими реактивами допускается персонал, изучивший инструкцию по эксплуатации прибора, правила работы с химическими реактивами и химической посудой.

При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.

При работе с электроустройствами соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации приборов.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

5.2    Требования к квалификации операторов

Измерения может проводить химик-аналитик, владеющий техникой вольтамперо-метрического анализа и изучивший инструкцию по эксплуатации используемой аппаратуры.

5.3    Условия выполнения измерений

Измерения проводят в нормальных лабораторных условиях:

6 ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ

Отбор и хранение проб лекарственных препаратов и субстанций проводят в соответствии с нормативными документами (НД) на данный вид сырья или препарата в соответствии с ГОСТ или другим конкретным нормативным документом, регламентирующим отбор проб конкретных видов и типов. При отборе проб составляется сопроводительный документ по утвержденной форме.

Растворы проб лекарственных препаратов и субстанций хранят под темным колпаком в холодильнике и анализируют в течение рабочего дня, так как азитромицин дигидрат со временем в растворе разлагается на свету (происходит уменьшение его концентрации в пробе).

7 СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ВСПОМОГАТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ, ПОСУДА, РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ

При проведении количественного химического анализа применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование, посуду, материалы и реактивы:

7.1 Средства измерений и вспомогательное оборудование

7.1.1 Комплекс аналитический вольтамперометрический СТА [2] в комплекте с IBM-совместимым компьютером (приложение Б - для программного обеспечения windows)

или полярограф (РА-2, ПУ-1 или другой) в комплекте с двухкоординатным самописцем и цифровым вольтметром Ф-203 [1] (Приложение В);

Допускается использовать другое оборудование и приборы, позволяющие воспроизводить технические и метрологические характеристики, указанные в данной методике анализа.

7.1.2    В состав комплекса аналитического СТА должны входить:

-    электроды;

•    индикаторный электрод - стеклоуглеродный электрод (СУЭ) стеклоугле

родный стержень диаметром 1,5-2,0 мм и рабочей поверхностью околов - 12 мм;

•    электрод сравнения - хлоридсеребряный (ХСЭ), заполненный раствором

хлорида калия [3] концентрации 1,0 мг/дм³, с сопротивлением не более

3,0 кОм;

•    вспомогательный электрод - хлоридсеребряный (ХСЭ), заполненный рас

твором хлорида калия [3] концентрации 1,0 мг/дм³, с допротивлением не более 3,0 кОм.

-    сменные стаканчики из кварцевого стекла вместимостью 20 - 25 см³;

-    трубка для подвода инертного газа с целью удаления растворенного кислорода и пе

ремешивания раствора.

7.1.3    Редуктор по ГОСТ 5381 с манометром (250±1) атм. по ГОСТ 8625.

7.1.4    Весы лабораторные аналитические общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности по ГОСТ 24104.

7.1.5    Дозаторы типа ДП-1-50 или ДП-1-200 или ДП-1-1000 с дискретностью установки доз 1,0 или 3,0 мкл и погрешностью не более 5 % отн.

7.1.6    Шланги резиновые для подвода газа к ячейке (при использовании инертного таза).

7.1.7    Линейка чертежная мерительная по ГОСТ 17435.

7.1.8    Темный бокс или светозащитная бумага.

7.1.9    Центрифуга ОПН-8 или любая другая.

7.2 Посуда

7.2.1    Пипетки мерные лабораторные стеклянные 2-го класса точности вместимостью 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 см³ по ГОСТ 29227.

7.2.2    Посуда мерная лабораторная стеклянная 2-го класса точности по ГОСТ 1770: колбы вместимостью 50,0, 25,0; 100,0, 250,0 см³, цилиндры вместимостью

25,0 см³.

7.2.3    Стаканчики из оптически прозрачного кварца вместимостью 20 - 25 см3, по ГОСТ 19908

7.2.4    Палочки стеклянные по ГОСТ 21400.

7.2.5    Воронки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336.

7.2.6    Ступка фарфоровая с пестиком по ГОСТ 29225.

7.3 Реактивы и материалы

7.3.1    Вода бидистиллированная по ГОСТ 6709.

7.3.2    Калий хлористый [3].

7.3.3    Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный по ГОСТ 4172.

7.3.4    Спирт этиловый ректификованный, водный раствор с объемной долей спирта 96 % по ГОСТ 5962-67

7.3.5 Азитромицин дигидрат (сухой порошок с содержанием основного вещества не менее 99,0 %).ФС 42-2277-84

7.3.6    Кислота серная концентрированная по ГОСТ 11125 ос.ч. или по ГОСТ 4461 х.ч.

7.3.7    Азот газообразный по ГОСТ 9293 или другой инертный газ (аргон, гелий) с массовой долей кислорода не более 0,01 %.

7.3.8    Бумага индикаторная универсальная pH 1-14, ТУ 6 6-09-1181-76.

7.3.9    Фильтры беззольные любой марки.

,7.3.10 Бумага масштабно-координатная.

8 ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ

При подготовке к выполнению измерений проводят следующие этапы работы:

-    подготовка приборов к работе,

-    проверка и подготовка лабораторной посуды,

-    подготовка индикаторного электрода, электрода сравнения и вспомогательного электрода,

-    приготовление основных и вспомогательных растворов, подготовка проб.

8.1    Подготовка приборов к работе

Подготовку и проверку комплекса аналитического СТА или универсального поля-рографа, самописца, цифрового вольтметра и др. проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации, «Руководством пользователя» и техническим описанием соответствующего прибора.

8.2    Проверка и подготовка лабораторной посуды

8.2.1    Лабораторную стеклянную посуду, сменные наконечники дозаторов, пипетки протирают фильтром с питьевой содой, промывают многократно дистиллированной водой и высушивают.

8.2.2    Проверку стаканчиков для анализа на чистоту проводят путем регистрации вольтамперограмм раствора фонового электролита после многократного ополаскивания их дистиллированной водой и раствором фонового электролита.

Оптимальными по чистоте являются реактивы и посуда, когда регистрируемые аналитические сигналы тиамина в растворе фонового электролита практически отсутствуют.

8.3 Подготовка электродов

8.3.1    Подготовка индикаторного (рабочего)    электрода

Стеклоуглеродный электрод (СУЭ) представляет собой стеклоуглеродный стержень диаметром 1,5-2,0 мм, запрессованный во фторопластовый держатель диаметром 5 - 6 мм так, чтобы длина выступающей части стержня (рабочей поверхности) стеклоуглерода составляла 8-12 мм. Контакт электрода с прибором осуществляли с помощью металлического токоподвода и стандартного разъема.

Для подготовки электрода к работе электрод отполировывают алмазной пастой до зеркального блеска, обезжиривают этиловым спиртом и промывают бидистиллиро-ванной водой. По мере необходимости при снижении чувствительности и воспроизводимости измерений стеклоуглеродный электрод подвергают механической обработке. Для этого электрод промывают в 96% этиловом спирте с последующим зачищением поверхности электрода фильтровальной бумагой. Между анализами электрод хранится на воздухе или в спирте.

8.3.2    Подготовка к работе электрода сравнения

В качестве электрода сравнения используют хлоридсеребряный электрод (ХСЭ)

ХСЭ представляет собой спираль из серебряной проволоки, покрытой хлоридом серебра, помещенную в корпус с полупроницаемой пробкой, корпус заполнен раствором каЛия хлорида концентрации 1 моль/дм . Конец серебряной проволоки имеет токовыводящий контакт для подключения к прибору.

Перед работой корпус электрода заполняют с помощью дозатора или шприца раствором калия хлорида концентрации 1 моль/дмЗ, закрывают и выдерживаю не менее 12 час (при первом заполении) в растворе калия хлорида концентрации 1 моль/дмЗ для установлениия равновесного значения потенциала электрода.

Заполнение электродов производят не реже 1 раза в 2 недели.

Хранят электроды в растворе хлорида калия.

8.4    Приготовление растворов

8.4.1 Основной раствор (ОР), азитромицина дигидрата концентрации 1,0-10‘³

моль/л.

На аналитических весах берут навеску (0,020±0,001) г азитромицина дигидрата и переносят в мерную колбу вместимостью 25,0 см³, приливают 25,0 см³ 96%-ный этиловый спирт, тщательно перемешивают до полного растворения азитромицина дигидрата. Основной раствор азитромицина дигидрата устойчив в течение 1 недели.

Основной раствор азитромицина дигидрата концентрации 1,0-1 O'³ моль/л одновременно является и аттестованной смесью (АС-1)

8.4.2 Раствор фонового электролита - раствор натрия фосфорнокислого двуза-мещенного 12-водного концентрации 0,05 - 0,10 моль/дм³

На аналитических весах взвешивают навеску натрия фосфорнокислого двузаме-щенного 12-водного массой (40 ± 5) г, переносят в мерную колбу вместимостью

1,0 дм³, приливают небольшое количество бидистиллированной воды, перемешивают до полного растворения соли и доводят бидистиллированной водой до метки.

8.5    Подготовка проб

Анализируемые пробы лекарственных препаратов (таблеток, капсул) готовят для анализа, предварительно удалив желатиновую оболочку, измельчив до порошкообразного состояния и растворив пробу с этаноле.

Навеску таблетки, содержащую азитромицин дигидрат массой 250 - 500 мг помещают в коническую колбу вместимостью 250,0 см³, добавляют этанол. Тщательно встряхивают в течении 20-30 мин, затем раствор фильтруют через бумажный фильтр.

Для ВА измерений берут аликвоту, объемом 0,01 - 0,05 см³.

9 ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ

Выполнение измерений с использованием вольтамперометрического комплекса СТА с программным обеспечением Windows.

Выполнение измерений с использованием вольтамперометрического комплекса СТА с программным обеспечением DOS в приложении Б.

Выполнение измерений с использованием универсального полярографа в приложении В.

При выполнении ВА измерений для определения массовых концентраций азитро-мицина дигидрата выполняют следующие операции:

-    устанавливают параметры измерений ;

-    проводят проверку электрохимической ячейки (электроды, раствор фонового электролита) на чистоту;

-    проводят регистрацию вольтамперограммы - аналитического сигнала (It) элемента в.растворе подготовленной пробы;

-    проводят регистрацию вольтамперограммы - аналитического сигнала (Ь) элемента в растворе пробы с введенной добавкой АС компонента.

Величина аналитического сигнала (пика) компонента пропорциональна массовой концентрации компонента.

ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КОМПЛЕКСА АНАЛИТИЧЕСКОГО ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКОГО СТА (с программным обеспечением Windows)

Комплекс СТА должен быть предварительно подготовлен к работе в соответствии с «Руководством пользователя» на данный вольтамперометрический комплекс.

9.1    Подготовка электродов и стаканчиков

Электроды:

■    индикаторный электрод - стеклоуглеродный стеклоуглеродный стержень диаметром 1,5 - 2,0 мм, с длиной рабочей поверхности 8 -12 мм ;

■    электрод сравнения - хлоридсеребряный, заполненный хлоридом калия концентрации 1,0 моль/дм³ с сопротивлением не более 30, кОм.

Сменные стаканчики из кварцевого стекла вместимостью 15-20 см³.

Трубки тефлоновые для подвода инертного газа с целью удаления растворенного кислорода и перемешивания раствора.

9.2    Проверка стаканчиков, раствора фонового электролита и электро-дов на чистоту при определении концентрации азитромицина дигидрата

9.2.1 Выбор или создание параметров определения

Для загрузки существующей методики в главном меню выбирают пункт ^ МЕТОДИКА / ОТКРЫТЬ. В окне выбора файла выбирают необходимый файл методики и нажимают кнопку ОТКРЫТЬ ФАЙЛ (например, «Азитромицин»).

Создание новой методики (см. раздел 3.1 «Руководства пользователя».) В главном меню выбирают пункт ^ Методика / Новая. В окно редактирования вводят параметры согласно методике проведения количественного химического анализа.