Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1 

31 страница

456.00 ₽

Купить ГОСТ Р 56145-2014 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на функциональные пищевые продукты, обогащенные пробиотическими микроорганизмами (молочные продукты, молочные составные продукты, молокосодержащие продукты, безалкогольные напитки и биологически активные добавки к пище), и функциональные пищевые ингредиенты, содержащие пробиотические микроорганизмы, и устанавливает методы микробиологического анализа посторонних микроорганизмов.

 Скачать PDF

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Термины и определения

4 Оборудование, посуда, реактивы, питательные среды, сыворотки, штаммы

5 Подготовка к анализу

6 Условия проведения анализов

7 Проведение анализа

8 Требования, обеспечивающие безопасность

Библиография

Нормативные ссылки:
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16
Стр. 17
стр. 17
Стр. 18
стр. 18
Стр. 19
стр. 19
Стр. 20
стр. 20
Стр. 21
стр. 21
Стр. 22
стр. 22
Стр. 23
стр. 23
Стр. 24
стр. 24
Стр. 25
стр. 25
Стр. 26
стр. 26
Стр. 27
стр. 27
Стр. 28
стр. 28
Стр. 29
стр. 29
Стр. 30
стр. 30

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

ГОСТР

56145—

2014

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ Методы микробиологического анализа

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2015


Предисловие

1    РАЗРАБОТАН коллективом специалистов Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт питания» (ФГБНУ «НИИ питания»)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК по стандартизации ТК 036 «Пищевые продукты специализированные»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 сентября 2014 г. № 1247-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0-2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (gost.ru)

© Стандартинформ, 2015

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ P 56145—2014

Хлорамфеникол (левомицетина сукцинат), содержание основного вещества не менее 98 %. Хлортетрациклина гидрохлорид, содержание основного вещества не менее 98 %.

Кислота налидиксовая.

Акрифлавина гидрохлорид.

Полимиксин В сульфат, содержание основного вещества не менее 6000 МЕ/мг.

Полимиксин Е (сульфат колистина), содержание основного вещества не менее 15000 МЕ/мг. Пентагидрат цефтазидима натрия, содержание основного вещества не менее 86 %.

Пергидроль 30 % (водорода перекись) по ГОСТ 177.

Дихпоран (2,6-дихпор-4-нитроанилин).

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805.

Плазма крови кролика цитратная сухая.

Сахароза по ГОСТ 5833.

Сафранин О или Т.

Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300.

Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья по ГОСТ 5962.

Агар трехсахарный железистый с мочевиной (TSI-arap с мочевиной).

Среда Эндо сухая.

Среда Клиглера сухая.

ГРМ-агар и ГРМ-бульон триптозный.

Агар/бульон триптон-соевый с дрожжевым экстрактом (TSYEA/TSYEB).

Магниевая среда Раппапорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон) сухая.

Селенитовая среда накопления (среда Лейфсона).

Бульон тетратионатный Мюллера-Кауфман (МКТ-бульон).

Ксилоза-лизин-дезоксихолатный агар (XLD-arap).

Агар бриллиантово-зеленый.

Среда Левина сухая.

Среда Плоскирева сухая.

Агар селективный с маннитом, лизином, кристалл-виолетом и бриллиантовым зеленым для выделения сальмонелл (MLCB).

Среда Кесслер сухая.

Сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные сальмонеллезные О-сыворотки против соматических антигенов (основных А, В, С, D, Е групп и редких групп), против Vi- и Н-антигенов.

Бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью.

Бульон селективный с лаурилсульфатом сухой.

EC-бульон с лаурилсульфатом сухой.

Бульон Жиолитти-Кантони модифицированный.

Сусло солодовое неохмеленное.

Среда Сабуро сухая.

Феноловый красный.

Фенолфталеин, ч. д. а.

Фуксин основной.

Уголь активированный.

Экстракт дрожжевой.

Экстракт мясной.

Яйца куриные пищевые по ГОСТ 31654.

Дрожжи хлебопекарные (прессованные) по ГОСТ Р 54731.

Тест-штаммы (контрольные) микроорганизмов, типичные по культуральным, морфологическим и биохимическим свойствам для вида, паспортизированные и депонированные*:

Listeria monocytogenes;

Escherichia coli;

Staphylococcus aureus\

Штаммы необходимо сохранять в лиофильно высушенном виде. При частом использовании допускается сохранять в полужидком агаре для бруцелл в пробирках с плотно притертыми пробками, в защищенном от света месте, при температуре (5 ± 1) °С с регулярным пересевом.

7

Salmonella typhimurium & enteritidis;

Rhodococcus equi;

Listeria innocua;

Listeria ivanovii;

Enterococcus faecalis.

Допускается использование других средств измерений с метрологическими характеристиками, вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не хуже указанных в настоящем стандарте. Допускается использование других реактивов, питательных сред и диагностических препаратов аналогичного назначения по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.

5 Подготовка к анализу

5.1    Отбор проб и подготовка их к анализу — по ГОСТ 31904, ГОСТ 26669, ГОСТ 26809, ГОСТ Р 53430, ГОСТ Р 54004 с учетом следующих положений.

5.1.1    Отбор проб пробиотических пищевых продуктов для микробиологических анализов проводят перед отбором проб для физико-химических и органолептических анализов.

Анализируют пробы, отобранные из транспортной или потребительской упаковки с продукцией, попавшей в выборку. Объем выборки установлен требованиями ГОСТ Р 53430, ГОСТ 26809, ГОСТ

15113.0, ГОСТ 6687.0, ГОСТ 28495.

При контроле продукции в потребительской упаковке из партии продукции отбирают соответствующее количество единиц потребительской упаковки для приготовления точечных проб по 5.1.3.

Пробу для анализа отбирают по ГОСТ 31904, ГОСТ Р 54004 взвешиванием (для твердых и сухих продуктов) или измерением объема (для жидких продуктов). Отбор проб проводят в стерильную посуду достаточной вместимости и подходящей формы (стеклянные колбы, банки, чашки Петри), закрывают стерильными пробками или крышками, горловины колб и банок закрывают стерильной бумагой и обвязывают. Допускается использовать для отбора проб одноразовые асептические контейнеры с крышками.

5.1.2    Жидкие и сыпучие порошкообразные пробиотические продукты перемешивают до вскрытия упаковки пятикратным переворачиванием. Перед вскрытием поверхность упаковки продукта протирается для удаления грязи, при необходимости обмывается питьевой водой и подсушивается. Затем поверхность упаковки протирается 70 %-ным этиловым спиртом. После высыхания поверхности производится вскрытие упаковки в асептических условиях стерильными или профламбированными инструментами. Продукт во вскрытых упаковках вновь тщательно перемешивается.

5.1.3    Из отобранной суммарной пробы готовят лабораторную пробу — определенное количество или определенный объем продукта, достаточное по размеру для приготовления проб для анализа, необходимых для анализа предполагаемого или допускаемого количества посторонних микроорганизмов, указанных в документе на анализируемый продукт (для высева в питательные среды и приготовления разведений).

При этом масса средней пробы для пробиотических продуктов на молочной и молокосодержащей основе твердых, сыпучих и пастообразных должна быть не менее 100 г, для жидких — не менее 100 см3.

Для прочих функциональных продуктов, обогащенных пробиотическими микроорганизмами, — не менее 150 г (см3), для БАД на основе пробиотических микроорганизмов сухих — не менее 70 г (см3), жидких — не менее 100 см3.

Масса или объем пробы, предназначенной для приготовления первого (исходного) разведения продукта или БАД, должна составлять 10 г или 10 см3 продукта, для посева в питательные среды — соответствовать нормируемой величине для определяемого микроорганизма.

Примечание — Например, при анализе БГКП в сухих БАД на основе пробиотических микроорганизмов размер точечной пробы для посева в питательную среду должен составлять 2 г, БАД жидких на основе чистых культур микроорганизмов неконцентрированных — 10 см3.

5.1.4    В случае многокомпонентного состава пробу продукта отбирают так, чтобы в ней были представлены все его компоненты в том же соотношении, что в анализируемой пробе.

5.1.5    Жидкие кисломолочные и сквашенные пробиотические продукты на молокосодержащей основе, жидкие БАД к пище с пробиотическими микроорганизмами и прочие пробиотические ферментированные продукты и ингредиенты, перед проведением анализа нейтрализуют для предотвраще-

ГОСТ P 56145—2014

ния резкого снижения pH (на 0,5 ед. pH и более) питательных сред. Из каждой пробы после тщательного перемешивания стерильной пипеткой или стеклянной палочкой отбирают необходимый объем продукта, помещают в стерильную посуду и затем на каждые 10 см3 анализируемого продукта добавляют около 1,0 см3 стерильного раствора двууглекислого натрия (гидрокарбоната) с массовой концентрацией 100 г/дм3; содержимое перемешивают с использованием стерильных приспособлений или шуттель-аппарата. Добавляют раствор гидрокарбоната, проверяя pH смеси с помощью индикаторной бумаги и доводя активную кислотность до (7,0 + 0,2) ед. pH.

Допускается проводить нейтрализацию после внесения продукта или его разведений в питательные среды с помощью стерильного раствора гидроокиси натрия, приготовленного по ГОСТ

10444.1. Добавляют раствор гидроокиси натрия, проверяя pH смеси с помощью индикаторной бумаги и доводя активную кислотность до (7,0 + 0,2) ед. pH.

5.1.6    Нейтрализацию сухих кисломолочных и сквашенных пробиотических продуктов на молокосодержащей основе, БАД на основе пробиотических микроорганизмов, высушенных в среде культивирования, в том числе таблетированных и инкапсулированных, ингредиентов сухих, содержащих пробиотические микроорганизмы, например, лиофилизированной биомассы пробиотических микроорганизмов, проводят на этапе приготовления разведений для посева или на этапе посева в среды для предварительного обогащения после внесения в них продукта или его разведений аналогично 5.1.5.

5.1.7    Творог, сыр, продукты творожные и другие аналогичные по консистенции пастообразные пробиотические продукты взвешивают на стерильном часовом стекле, чашке Петри, в бюксе, переносят в стерильную или профламбированную ступку, прикрытую крышкой от чашки Петри, или пакет для перистальтического гомогенизатора, тщательно растирают, нейтрализуют по 5.1.5.

5.1.8    Мороженое, обогащенное пробиотическими микроорганизмами

Пробы мороженого, обогащенного пробиотическими микроорганизмами, помещают в стерильную посуду с притертой или ватной пробкой. Перед использованием посуду с пробой нагревают на водяной бане при температуре не выше 40-45 °С и перемешивают до получения однородной эмульсии. При необходимости расплавленную пробу нейтрализуют по 5.1.5.

5.1.9    Микробиологические анализы скоропортящихся пробиотических продуктов проводят не позднее чем через 4 ч с момента отбора проб.

Пробы скоропортящихся пробиотических продуктов следует хранить и транспортировать до начала анализа в условиях, обеспечивающих температуру продуктов не выше (4 ± 2) °С, не допуская подмораживания.

Пробы замороженных пробиотических продуктов хранят и транспортируют при минусовых температурах в соответствии с условиями хранения конкретного продукта.

Пробы сухих пробиотических продуктов следует хранить и транспортировать до начала анализа в условиях температуры и относительной влажности, в соответствии с условиями хранения конкретного продукта.

5.2 Подготовка посуды и материалов

Всю новую посуду, предназначенную для бактериологических работ, кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты объемной долей 1 % — 2 %) в течение 15 мин, затем ополаскивают дистиллированной    водой.

Посуда с питательными средами после учета роста на них БГКП, Е. coli, Salmonella, S. aureus, дрожжей, плесневых грибов, Listeria обеззараживается перед мойкой путем стерилизации в автоклаве по режимам, установленным для соответствующих групп микроорганизмов в [4].

Вымытую посуду стерилизуют в сушильном шкафу при (160 ± 5) °С в течение 2 ч или в автоклаве при (121 ± 1) °С в течение (30 ± 1) мин с последующим подсушиванием в сушильном шкафу.

Чашки Петри, пипетки и т. п. стерилизуют завернутыми в плотную оберточную бумагу или в пеналах. В верхнюю часть пипетки предварительно вкладывают кусочек ваты.

Пробирки, флаконы, бутылки, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробки (кроме пробирок) надевают бумажный колпачок, который обвязывают вокруг горлышка ниткой или закрепляют резиновыми обхватами.

Каучуковые, корковые и стеклянные пробки стерилизуют отдельно в автоклаве завернутыми в бумагу.

Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками. Срок хранения стерильной посуды — не более 30 сут при ненарушенной завертке или невскрытых пеналах.

9

Допускается использование одноразовой стерильной пластиковой посуды при соблюдении сроков годности, указанных на упаковке.

5.3 Приготовление растворов реактивов и питательных сред

Для приготовления растворов и питательных сред используют дистиллированную воду или подготовленную питьевую воду.

5.3.1    Стерильная дистиллированная вода

Дистиллированную воду разливают в колбы или пробирки в необходимых количествах и стерилизуют в течение (20 ±1) мин при (121 ±1) °С.

5.3.2    Приготовление раствора двууглекислого натрия для нейтрализации проб

В мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см3 помещают (10,0 ± 0,1) г двууглекислого натрия, добавляют небольшое количество дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки. Полученный раствор разливают по IQ-20 см3 в пробирки и стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение (15 ± 1) мин.

5.3.3    Приготовление раствора соляной кислоты объемной долей 20 %

В мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 1000 см3 наливают до половины дистиллированную воду, потом осторожно добавляют 20 см3 концентрированной соляной кислоты плотностью 1,19 г/см3 по ГОСТ 3118. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки. При необходимости полученный раствор разводят, доводя до нужной концентрации по объему.

5.3.4    Приготовление изотонического раствора хлористого натрия

В мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 1000 см3 помещают (8,5 ± 0,1) г хлористого натрия. Добавляют дистиллированную воду и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки. Полученный раствор разливают по 10 см3 в пробирки, по 90 см3 в колбы соответствующей вместимости и стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение (20 ± 1) мин.

5.3.5    Приготовление концентрированного раствора фосфатного буфера

В мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 1000 см3 наливают 500 см3 дистиллированной воды, добавляют (34,0 ± 0,1) г однозамещенного фосфорнокислого калия (КН2РО4) и тщательно перемешивают. Устанавливают активную кислотность раствора (7,2 ± 0,1) ед. pH добавлением раствора гидроокиси натрия и доводят дистиллированной водой до метки.

Стерилизуют раствор при температуре (121 ± 1) °С в течение (20 ± 1) мин.

5.3.6    Приготовление разбавленного раствора фосфатного буфера

В мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 1000 см3 помещают 1,25 см3 концентрированного раствора фосфатного буфера, добавляют дистиллированную воду и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки. Полученный раствор разливают по 10 см3 в пробирки, по 90 см3 в колбы соответствующей вместимости, стерилизуют при температуре (121 ± 1)°С в течение (20 ± 1) мин и используют для приготовления разведений.

5.3.7    Приготовление раствора лимоннокислого натрия

Растворяют (20,0 ± 0,1) г трехзамещенного лимоннокислого натрия в 1 дм3 дистиллированной воды, разливают в пробирки по 10 см3 или в колбы по 90 см3 и стерилизуют при температуре (121 ± 2) °С в течение (15 ± 1) мин. Раствор используют для разведения функциональных продуктов на основе творога, творожных продуктов, сыра.

5.3.8    Приготовление забуференной пептонной воды

Забуференную пептонную воду для предварительного неселективного обогащения бактерий рода Salmonella, коагулазоположительных стафилококков готовят согласно ГОСТ 31659. Разливают в необходимом количестве в пробирки, флаконы или колбы соответствующей вместимости для обеспечения соотношения засеваемого продукта и среды 1:9, например, при посеве 25 г продукта — по 225 см3, 2 г продукта — 18 см3.

5.3.9    Приготовление растворов и реактивов для окраски по Граму осуществляют по ГОСТ

10444.1.

5.3.10    Для удаления закрепленных основных красящих растворов используют этиловый спирт (при окраске спиртовым раствором кристаллического фиолетового) и ацетон (при окраске водным раствором кристаллического фиолетового).

5.3.11    Приготовление питательных сред

Среды сухие промышленного изготовления, в том числе общего назначения, предназначенные для культивирования бактерий с целью изучения их свойств (питательный агар или бульон, триптон-соевый агар или бульон, мясо-пептонный агар или бульон, триптозный ГРМ-агар или бульон) готовят

10

ГОСТ P 56145—2014

согласно прописям, указанным на этикетках. Допускается применение сред лабораторного приготовления из отдельных компонентов. Проверку качества подготовки, изготовления и оценки эффективности питательных сред для выращивания бактерий осуществляют по ГОСТ ISO 7218, ГОСТ ISO 11133-1 и ГОСТ ISO 11133-2.

5.3.12    Определение pH питательных сред

Ориентировочное определение pH питательных сред допускается проводить с помощью индикаторных бумажных полосок для определения величины pH. Определение активной кислотности (pH) питательных сред проводят в использованием pH-метра по прилагаемым инструкциям к соответствующим приборам.

Устанавливают pH так, чтобы после стерилизации он составлял требуемую величину при температуре 25 °С. При необходимости корректируют pH питательной среды, устанавливая ее в небольшом объеме путем добавления по каплям растворов гидроокиси натрия или соляной кислоты. Допускается для подкисления сред использовать 20 %-ный раствор молочной кислоты.

Исходя из количества раствора, пошедшего на установление pH в данном объеме, вычисляют, какой объем раствора следует прибавить ко всему объему среды для достижения требуемой величины pH. После прибавления раствора и тщательного перемешивания снова проверяют pH среды.

5.3.13    Питательные среды и растворы реактивов для выявления бактерий группы кишечных палочек и Escherichia coli

5.3.13.1    Среда Кесслер (с лактозой)

Жидкую селективную обогатительную среду Кесслер готовят по ГОСТ 31747. Дополнительно в случае использования среды нормальной концентрации для посева образцов пробиотических продуктов на молочной основе, масса (объем) которых превышает 1 г (см3), разливают среду в колбы или флаконы соответствующей вместимости, содержащие пробирки Дархама (поплавки), по 50 см3; в случае использования среды двойной концентрации для посева образцов других пробиотических продуктов, масса (объем) которых превышает 10 г(см3), разливают среду в колбы или флаконы соответствующей вместимости, содержащие пробирки Дархама (поплавки), по 100 см3.

5.3.13.2    Бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью

Жидкую селективную обогатительную среду бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью готовят по ГОСТ 31747. Дополнительно в случае использования среды двойной концентрации для посева образцов, масса (объем) которых превышает 10 г(см3), допускается разливать среду в колбы или флаконы соответствующей вместимости, содержащие пробирки Дархама (поплавки), по 100 см3.

5.3.13.3    Бульон селективный с лаурилсульфатом (натрия додецилсульфатом)

К 1,0 дм3 водопроводной воды добавляют 20 г триптозы (ферментативного перевара казеина и животных белков), 5 г лактозы, по 2,75 г калия гидрофосфата и дигидрофосфата, 5 г хлористого натрия, 0,1 г натрия додецилсульфата (лаурил сульфата), растворяют, нагревая на водяной бане при помешивании 2-3 мин. При необходимости фильтруют через ватно-марлевый фильтр, после чего доводят объем водой до 1 дм3. Устанавливают pH (6,8 + 0,2) ед. при 25 °С. При необходимости приготовления среды двойной концентрации количество всех ингредиентов, кроме воды, удваивают. Разливают по 10 см3 в пробирки размером 16 х 160 мм, содержащие пробирки Дархама (в случае использования среды нормальной концентрации), или в пробирки размером 20 х 200 мм или колбочки вместимостью 50 см3, содержащие пробирки Дархама (поплавки) (в случае использования среды двойной концентрации).

Стерилизуют среду в автоклаве при температуре (121 + 1) °С в течение 10 мин. Пробирки Дархама не должны содержать воздушные пузырьки после стерилизации.

5.3.13.4    Сухие среды бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью, среду Кесслер, бульон селективный с лаурилсульфататом, EC-бульон промышленного производства подготавливают для посева согласно прописи на этикетке.

5.3.13.5    Среды сухие Левина, Эндо1

Среды Левина (эозин-метиленовоголубой агар), Эндо промышленного выпуска готовят согласно прописи, указанной на этикетке банок. Изготовленные и разлитые в стерильные чашки Петри среды можно хранить при температуре (4 ± 2) °С до 10 сут.

Среды могут использоваться также для пересева бактерий рода Salmonella.

11

5.3.13.6    Среда на индол (триптон/триптофановая среда)

В 1,0 дм3 дистиллированной воды растворяют 10 г ферментативного перевара казеина (трипто-на), 5 г хлористого натрия, 1 г DL-триптофана. Доводят pH до (7,0 + 0,1) ед. при 25°С, разливают в пробирки по 5,0 см3, стерилизуют в течение (15 ± 1) мин при температуре (121 ± 1) °С.

5.3.13.7    Среда Кларка с глюкозой (VP-среда)**

Взвешивают 7 г пептона, 5 г глюкозы, 5 г двузамещенного фосфорнокислого калия. Растворяют ингредиенты в 950,0 см3 дистиллированной воды, устанавливают pH (6,9 ± 0,2) ед. при 25°С. При необходимости фильтруют и доводят общий объем до 1,0 дм3 дистиллированной водой. Разливают в пробирки по 3,0-5,0 см3, стерилизуют в течение (20 ± 1) мин при (115 ± 1) °С.

5.3.13.8    90 %-ный раствор этилового спирта

В колбу по ГОСТ 1770 емкостью 1000 см3 к 900,0 см3 96 %-ного этилового спирта добавляют 60,0 см3 дистиллированной воды.

5.3.13.9    Раствор индикатора метилового красного

0,1 г индикатора метилового красного помещают в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 500 см3, растворяют в 300,0 см3 90 %-ного раствора этилового спирта, доливают до 500,0 см3 дистиллированной водой. Хранят раствор в колбе с притертой пробкой при температуре (4 ± 2) °С.

5.3.13.10    0,5 %-ный раствор бромтимолового синего в спирте

Взвешивают 0,5 г бромтимолового синего, помещают в мерную колбу по

ГОСТ 1770 вместимостью 100 см3, и доводят этиловым спиртом до метки. Раствор хранят при температуре (4 ± 2) °С течение 30-35 сут в колбе с притертой пробкой.

5.3.13.11    0,5 %-ный и 0,1 %-ный растворы бриллиантового зеленого.

Для приготовления 0,5 %-ного раствора асептически взвешивают 0,5 г индикатора бриллиантового зеленого, вносят в стерильную мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см3 и доводят стерильной дистиллированной водой до метки. Для приготовления 0,1 %-ного раствора в стерильный мерный цилиндр или колбу по ГОСТ 1770 к 10,0 см3 исходного 0,5 %-ного раствора индикатора добавляют 40,0 см3 стерильной дистиллированной воды.

Растворы хранят в холодильнике в течение 7-10 сут.

5.3.13.12    1,6 %-ный раствор бромкрезолового пурпурного в спирте

Взвешивают 1,6 г индикатора бромкрезолового пурпурного и количественно переносят в мерную колбу по ГОСТ 1770, вместимостью 100 см3. Доводят 96 %-ным этиловым спиртом до метки. При необходимости фильтруют через бумажный фильтр. Хранят в колбе со шлифом в условиях холодильника.

5.3.13.13    5 %-ный спиртовый раствор 1-Нафтола (альфа-нафтола)***

Взвешивают 5 г альфа-нафтола, растворяют в 100,0 см3 96 %-ного этилового спирта. Раствор готовят непосредственно перед применением.

5.3.13.14    40 %-ный раствор гидроокиси калия

В стакане, вместимостью 100 см3 взвешивают 40 г гидроокиси калия, переносят в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см3, растворяют в 60,0 см3 дистиллированной воды, затем доводят до метки дистиллированной водой. Раствор хранят при температуре 4-6 °С.

5.3.13.15    1 %-ный водный раствор кристаллического фиолетового

В мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см3 помещают 1 г кристаллического фиолетового, предварительно растертого в фарфоровой ступке с небольшим количеством дистиллированной воды, доводят до метки дистиллированной водой. Раствор хранят при температуре 4-6 °С.

5.3.13.16    Реактив на индол (Эрлиха)****

Взвешивают 5 г пара-диметиламинобензальдегида в стеклянном стакане вместимостью 100 см3, помещают в коническую колбу вместимостью 200 см3 по

ГОСТ 25336 и растворяют в 50,0 см3 этилового спирта. С помощью мерного цилиндра, вместимостью 100 см3, медленно добавляют 50,0 см3 концентрированной соляной кислоты (плотность 1,18-1,19 г/см3). Раствор хранят в колбе с притертой пробкой при температуре 4-6 °С.

5.3.13.17    Среда Козера 2 1

ГОСТ P 56145—2014

Взвешивают 1,5 г фосфорнокислого натрия-аммония, 1 г фосфорнокислого двузамещенного калия, 0,2 г сульфатамагния, 3 г лимонно-кислого трехзамещенного натрия. Растворяют в 950,0 см3 дистиллированной воды, добавляют 10,0 см3 0,5%-ного спиртового раствора бромтимолового синего. Устанавливают pH (6,8 ± 0,1) ед. при 25°С. Доводят объем дистиллированной водой до 1,0 дм3. Разливают по 10,0 см3в пробирки, стерилизуют в течение (15 ± 1) мин при (121 ± 1) °С.

5.3.13.18 Среда Симмонса

Среду готовят аналогично среде Козера (см. 5.3.13.15), но после измерения pH в нее добавляют 2 г агара на 1000 см3, прогревают на водяной бане до расплавления агара, стерилизуют в течение (15 ± 1) мин при (121 ± 1) °С. Разливают в стерильные чашки Петри или пробирки.

5.3.14 Питательные среды, растворы реактивов и диагностические сыворотки для выявления бактерий рода Salmonella

5.3.14.1    Магниевую среду Раппапорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон) — основную среду для селективного обогащения сальмонелл готовят по ГОСТ 31659.

Среду RVS-бульон сухую промышленного изготовления готовят согласно прописи на этикетке.

5.3.14.2    Селенитовую среду накопления Лейфсона — дополнительную среду для селективного обогащения сальмонелл готовят по ГОСТ 31659.

Дегидратированную селенитовую среду промышленного производства приготавливают согласно прописи на этикетке.

5.3.14.3    Бульон тетратионатный Мюллера-Кауфмана (МКТ-бульон) — дополнительную среду для селективного обогащения сальмонелл готовят по ГОСТ 31659.

5.3.14.4    Дифференциально-диагностические среды для выделения сальмонелл:

-    ксилоза-лизин-дезоксихолатный агар (XLD-arap) и бриллиантовый зеленый агар готовят по ГОСТ 31659;

-    среды Плоскирева и висмут-сульфитный агар промышленного производства готовят согласно прописи, указанной на этикетке банки.

Изготовленные и разлитые в стерильные чашки Петри среды можно хранить и холодильнике до 10 сут.

5.3.14.5    Трехсахарный железистый агар комбинированный с мочевиной (TSI-arap с мочевиной) TSI-arap с мочевиной готовят смешиванием следующих ингредиентов: дистиллированная вода — 1000,0 см3;

сухой питательный агар — 25 г; лактоза —10,0 г; сахароза —10,0 г; глюкоза — 1 г; мочевина —10,0 г;

железо сернокислое (FeS04-7H20) — 0,2 г;

Натрий серноватистокислый (Na2S203-5H20) — 0,3 г;

0,4 %-ный водный раствор фенолового красного — 4,0 см3.

Тщательно перемешивают и устанавливают значение активной кислотности (7,3 ± 0,1) ед. pH. Разливают в пробирки по 5,0-7,0 см3 и стерилизуют 15 мин в автоклаве при (121 ± 1) °С. После стерилизации пробирки со средой оставляют в наклонном положении так, чтобы высота столбика среды была не менее 3 см, а скошенная поверхность над ним — 5 см. Готовая среда имеет бледно-розовый цвет.

5.3.14.6    0,4 %-ный водный раствор фенолового красного

Взвешивают 0,1 г индикатора фенолового красного, вносят в колбу вместимостью 50 см3 по ГОСТ 1770 и вливают 25,0 см3 дистиллированной воды. Тщательно перемешивают до полного растворения. Раствор хранят в холодильнике до 7 сут.

5.3.14.7    Среда Клиглера из сухих питательных сред с мочевиной

Среду готовят и стерилизуют как указано в ГОСТ 28178. Пробирки со средой после стерилизации оставляют в наклонном положении так, чтобы высота столбика среды была не менее 3 см, а скошенная поверхность над ним — 5 см.

5.3.14.8    Сальмонеллезные агглютинирующие адсорбированные О-, Vi-, Н-сыворотки Необходимые разведения сыворотки готовят перед использованием согласно прилагаемым инструкциям изготовителя.

13

5.3.15    Питательные среды, растворы реактивов, эмульсии и дефибринированная кровь для выявления коагулазоположительных стафилококков и S. aureus

5.3.15.1    Солевой бульон

Жидкую селективную питательную среду солевой бульон для анализа функциональных пищевых продуктов и функциональных пищевых ингредиентов на молочной основе готовят по ГОСТ 30347, для других продуктов — по ГОСТ 31746.

5.3.15.2    Модифицированный бульон Жиолитти-Кантони

Жидкую селективную питательную среду модифицированный бульон Жиолитти-Кантони готовят по ГОСТ 31746.

5.3.15.3    Агар Байрд-Паркера

Дифференциально-диагностическую агаризованную среду Байрд-Паркера и используемые для ее приготовления 1 %-ный раствор теллурита калия, 0,2 %-ный раствор сульфаметазина в 1 М растворе гидроксида натрия готовят по ГОСТ 31746.

Дегидратированный агар Байрд-Паркера промышленного производства готовят согласно прописи на этикетке.

5.3.15.4    Желточно-солевой агар (ЖСА)

Дифференциально-диагностическую среду желточно-солевой агар (ЖСА) готовят по ГОСТ 30347.

5.3.15.5    Молочно-солевой агар

Дифференциально-диагностическую среду молочно-солевой агар (MCA) готовят по ГОСТ 30347.

5.3.15.6    Эмульсия яичного желтка

Эмульсию яичного желтка из свежих куриных яиц готовят по ГОСТ 31746.

Допускается использование готовой эмульсии яичного желтка промышленного производства, в этом случае эмульсию применяют в соответствии с инструкцией изготовителя.

5.3.15.7    Плазма крови кролика

Раствор плазмы крови кролика для определения способности выделенных культур коагулировать плазму крови готовят непосредственно перед использованием из плазмы крови кролика цитрат-ной сухой в соответствии с инструкцией изготовителя.

Допускается использование плазмы из свежеполученной в асептических условиях крови из сердца кролика. В этом случае ее приготовление к использованию проводят по ГОСТ 31746.

5.3.15.8    Дефибринированная кровь животных

Для определения гемолитической активности выделенных культур используют стерильную де-фибринированную кровь баранов, крупного рогатого скота, кроликов. Допускается использование свежевзятой крови лабораторных животных (кроликов, морских свинок), дефибринированной по ГОСТ 31746.

5.3.16    Питательные среды и растворы реактивов для определения количества плесневых грибов и дрожжей

5.3.16.1    Раствор солодового сусла с массовой долей сухих веществ (7,5 ± 0,5) %

Сусло фильтруют через фильтрованную бумагу, разливают в колбы и стерилизуют (30 ±1) мин в автоклаве при (108 ± 2) °С. Затем сусло декантируют. В прозрачном сусле определяют массовую долю сухих веществ ареометром-сахарометром, принимая каждые пять делений равными 1 % сухих веществ, и разбавляют водой до массовой доли сухих веществ (7,5 ± 0,5) %, разливают в колбы и стерилизуют при (116 ± 1) °С в течение (20 ± 1) мин. Солодовое сусло можно заменить виноградным суслом, которое готовят аналогично солодовому.

5.3.16.2    Сусловый агар

К 1,0 дм3 солодового сусла с массовой долей сухих веществ (7,5 ± 0,5) % прибавляют 30 г агара. Среду нагревают до полного расплавления агара и фильтруют через вату или фильтровальную бумагу. Охлаждают до (50 ± 5) °С и устанавливают pH так, чтобы при температуре 25 °С он составлял (3,6 ± 0,1) ед. с помощью молочной кислоты. Фильтрат разливают в колбы и стерилизуют при (116 ± 1) °С в течение (20 ± 1) мин.

5.3.16.3    Среда Сабуро

К 1,0 дм3 дистиллированной воды добавляют 18 г агара и оставляют на 30 мин для его набухания, затем 40 г мальтозы или глюкозы и 10 г пептона, нагревают до полного растворения (при наличии осадка фильтруют). Устанавливают pH так, чтобы при температуре 25 °С он составлял (6,5 ± 0,1) ед. pH с помощью молочной кислоты. Разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при (116 ± 1) °С в течение (20 ± 1) мин.

ГОСТ Р 56145-2014

5.3.16.4    Сывороточный агар — среду готовят на основе сывороточного агара БФ по ГОСТ 10444.12, используют при анализе пробиотических продуктов на молочной основе.

5.3.16.5    Для повышения селективности среды Сабуро по 5.3.16.3 и сывороточного агара по 5.3.16.4. непосредственно перед использованием в них добавляют водные растворы антибиотиков, приготовленные по 5.3.16.7-5.3.16.10.

Растворы антибиотиков вносят в расплавленные и охлажденные до (46 ± 1) °С питательные среды по схеме, указанной в таблице 1.

Таблица 1 — Схема добавления растворов антибиотиков в среду Сабуро и сывороточный агар

Объем питательной среды, см3

Объемы вносимых в среду растворов антибиотиков, см3

пенициллин

стрептомицин

неомицин

хлорамфеникол

(левомицетин)

980

10

10

-

-

930

-

-

70

-

975

-

-

-

25

Среды с антибиотиками хранению не подлежат.

5.3.16.6    Агар с дихпораном, бенгальским розовым, хпорамфениколом и хлортетрацикпина гидрохлоридом готовят по ГОСТ 10444.12.

5.3.16.7    Приготовление водного раствора пенициллина

Во флакон с бензилпенициллина натриевой или калиевой солью, содержащим 500000 ЕД, добавляют 5-7 см3 стерильной дистиллированной воды, тщательно перемешивают до растворения. Содержимое флакона переносят в стерильную мерную колбу, вместимостью 100 см3, и доводят до метки стерильной дистиллированной водой при температуре от 35 °С до 40 °С. Получают раствор пенициллина, содержащий 5000 ЕД/см3.

При использовании пенициллина другой активности, его растворяют в мерной колбе соответствующей вместимости до 5000 ЕД/см3.

Раствор готовят непосредственно перед внесением в среду.

5.3.16.8    Приготовление водного раствора стрептомицина

400 мг стрептомицина сульфата или дигидрострептомицина сульфата вносят в стерильную мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 10,0-20,0 см3 стерильной дистиллированной воды при температуре от 35 °С до 40° С, перемешивают до растворения, затем доливают стерильной дистиллированной водой до метки. Массовая концентрация стрептомицина в растворе 4 г/дм3. Раствор готовят непосредственно перед внесением в среду.

5.3.16.9    Приготовление водного раствора неомицина

500 мг неомицина сульфата вносят в стерильную мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 10,0-20,0 см3 стерильной дистиллированной воды при температуре от 35 °С до 40° С, перемешивают до растворения, затем доливают стерильной дистиллированной водой до метки. Массовая концентрация неомицина в растворе 5 г/дм3. Раствор готовят непосредственно перед внесением в среду.

5.3.16.10    Приготовление водного раствора хпорамфеникола (левомицетина)

400 мг хпорамфеникола (левомицетина) вносят в стерильную мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 10,0-20,0 см3 стерильной дистиллированной воды при температуре от 35 °С до 40 °С, перемешивают до растворения, затем доливают стерильной дистиллированной водой до метки. Массовая концентрация хпорамфеникола в растворе 4 г/дм3. Раствор готовят непосредственно перед внесением в среду.

5.3.16.11    Приготовление 1 %-ного спиртового раствора хпорамфеникола — 1 %-ный спиртовый раствор хпорамфеникола готовят и применяют по ГОСТ 10444.12.

5.3.16.12    Приготовление 0,1 %-ного водного раствора хпортетрациклина гидрохлорида — 0,1 %-ный водный раствор хпортетрациклина гидрохлорида готовят и применяют по ГОСТ 10444.12.

15

5.3.17 Питательные среды и растворы реактивов для выявления L. monocytogenes

5.3.17.1    Бульоны Фрейзера для первичного селективного обогащения (полуконцентрированный) и вторичного селективного обогащения (с полной концентрацией селективных компонентов) листерий готовят в соответствии с ГОСТ 32031.

Готовые среды разливают в стерильные колбы: полуконцентрированный бульон Фрейзера — в объемах, в 9 раз превышающих массу (объем) засеваемого продукта; бульон Фрейзера с полной концентрацией селективных компонентов — по 90 см3, и хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше 6 °С не более трех недель.

5.3.17.2    Селективный накопительный бульон (UVM), питательный бульон для выделения и культивирования листерий (ПБЛ I) для первичного селективного обогащения и селективный накопительный бульон (UVM II), питательный бульон для выделения и культивирования листерий (ПБЛ II) для вторичного селективного обогащения листерий готовят в соответствии с ГОСТ 32031.

5.3.17.3    Агар Listeria по Оттавиани и Агости (ALOA) — основную (первую) селективную дифференциально-диагностическую плотную среду для выделения листерий готовят в соответствии с ГОСТ 32031.

5.3.17.4    PALCAM-arap (полимиксин-акрифлавин-лития хпорид-цефтазидим-эскулин-маннитол — агар) — дополнительную (вторую) селективную дифференциально-диагностическую плотную среду для выделения листерий готовят в соответствии с ГОСТ 32031.

Готовую среду разливают в стерильные чашки Петри и хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше 8 °С

5.3.17.5    Оксфорд-агар — дополнительную (вторую) селективную дифференциальнодиагностическую плотную среду для выделения листерий готовят в соответствии с ГОСТ 32031.

При приготовлении среды допускается замена комплекса рекомендованных в 5.3.16.5 на поли-миксин В сульфат в количестве 500000 ME на 1 дм3 среды.

Готовую среду разливают в стерильные чашки Петри и хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше 8 °С.

5.3.17.6    Питательный агар для выделения листерий (ПАЛ) —дополнительную (вторую) селективную дифференциально-диагностическую плотную среду для выделения листерий готовят в соответствии с ГОСТ 32031.

5.3.17.7    Питательный агар с 1 % глюкозы (МПА с 1 % глюкозы) и питательный бульон с 1 % глюкозы (МПБ с 1 % глюкозы) — для изучения культурально-морфологических свойств листерий готовят в соответствии с ГОСТ 10444.1, в том числе из сухих основ промышленного производства — по 5.3.11.

5.3.17.8    Трипказо-соевый бульон (TSB) и трипказо-соевый агар (TSA) —для изучения культурально-морфологических свойств листерий готовят в соответствии с ГОСТ 32031.

5.3.17.9    Триптон-соевый бульон с дрожжевым экстрактом (ТБУЕВуТриптон-соевый агар с дрожжевым экстрактом (TSYEA) для изучения культурально-морфологических свойств листерий готовят в соответствии с ГОСТ 32031.

5.3.17.10    Кровяной агар для определения гемолитических свойств листерий

К растопленному и охлажденному до 45-50 °С питательному агару с 1% глюкозы (см. 5.3.17.8) добавляют 5 % по объему дефибринированной крови барана (см. 5.3.15.8). Разливают в чашки Петри диаметром 90 мм по 15 см3 среды и подсушивают при 37 °С. Посев производят в теплые чашки.

5.3.17.11    Питательный агар с эритроцитами барана для определения р-гемолитической активности Listeria monocytogenes

Дефибринированную или стабилизированную цитратом кровь барана центрифугируют в асептических условиях 30 мин при 900 об/мин. Надосадочную жидкость сливают. Осадок суспендируют в стерильном изотоническом растворе хлористого натрия до первоначального объема, добавляют в количестве 5 % по объему к растопленному и охлажденному до 45 °С — 50 °С питательному агару. Разливают в чашки Петри по 10 см3, подсушивают при 37 °С. Чашки используют для посева теплыми.

5.3.17.12    Среда для определения подвижности — среда для изучения физиологобиохимических свойств листерий

20 г гидролизата казеина ферментативного, 6 г пептона мясного ферментативного и 5 г агара растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды, устанавливают pH так, чтобы при температуре 25 °С

Среда может использоваться также для определения подвижности бактерий рода Salmonella.

16

ГОСТ P 56145—2014

Содержание

1    Область применения.....................................................................................................................................1

2    Нормативные ссылки.....................................................................................................................................1

3    Термины и определения...............................................................................................................................3

4    Оборудование, посуда, реактивы, питательные среды, сыворотки, штаммы.........................................4

5    Подготовка к анализу.....................................................................................................................................8

6    Условия проведения анализов...................................................................................................................18

7    Проведение анализа...................................................................................................................................18

8    Требования, обеспечивающие безопасность...........................................................................................23

Библиография.................................................................................................................................................25

III

ГОСТ P 56145—2014

после стерилизации его значение составляло (7,3 ± 0,2) ед. pH, разливают в пробирки по 5-7 см3 и автоклавируют 15 мин при температуре 121 °С.

5.3.17.13    Среды Гисса с маннитом, рамнозой, ксилозой

Среды Гисса с маннитом, рамнозой, ксилозой —для изучения ферментативных свойств и идентификации бактерий Listeria monocytogenes готовят по ГОСТ 10444.1.

5.3.17.14    Среды для определения лецитиназной активности листерий (лецитин-агар)

Готовят основы сред в двух вариантах:

1- й вариант — к среде ГРМ-агар (ГРМ № 1), приготовленной по 5.3.11, перед стерилизацией добавляют активированный уголь, растертый до порошкообразного состояния, до концентрации 0,5 % (вес/объем).

2- й вариант — готовят аналогично, но без добавления активированного угля.

К стерилизованной и охлажденной до 40 °С — 50 °С первому варианту основы питательной среды в условиях асептики добавляют эмульсию желтка куриного яйца, приготовленную по ГОСТ 32031, в количестве 5 % по объему. Разливают в чашки Петри по 20 см3 и подсушивают при 37 °С.

Аналогично готовят среду на втором варианте основы с добавлением желтка, но без добавления активированного угля.

5.3.17.15    Среды для проведения КАМП (CAMP) теста для идентификации бактерий Listeria monocytogenes готовят по ГОСТ 31031.

5.3.17.16    Раствор с объемной долей перекиси водорода 3 % готовят по ГОСТ 10444.1.

5.4 Приготовление разведений продуктов для посева

5.4.1    К 10 г лабораторной пробы добавляют по 10 г (см3) стерильный изотонический раствор хлористого натрия или разбавленный фосфатный буферный раствор до достижения общей массы или объема пробы 100 г (см3), после чего смесь тщательно перемешивают до гомогенного состояния вручную круговыми движениями либо с использованием аппарата для встряхивания жидкостей или гомогенизатора перистальтического типа. Пипетку осторожно промывают до 10 раз полученной смесью до верхнего уровня имеющихся на ней делений. Получают первое разведение продукта (1x10"1).

5.4.2    При анализе сыров и творожных продуктов, обогащенных пробиотическими микроорганизмами, для приготовления разведений используют раствор лимоннокислого натрия по 5.3.7.

5.4.3    Первое разведение для сухих кисломолочных продуктов и БАД на основе пробиотических микроорганизмов, высушенных со средой культивирования, нейтрализуют. Для этого на каждые 10 см3 разведения в стерильную посуду добавляется 1,0 см3 стерильного раствора натрия гидрокарбоната с массовой концентрацией 100 г/дм3; содержимое перемешивают с использованием стерильных приспособлений или шуттель-аппарата. Общая масса первого разведения пробы с разбавителем и нейтрализующим раствором должна составлять 100 г.

5.4.4    При анализе продуктов, обогащенных пробиотическими микроорганизмами в капсулированном виде, первое разведение капсул суспендируют. Для этого 10 г образца капсул переносят в 90 г разбавленного фосфатного буферного раствора, нагретого до температуры не выше 40 °С. Допускается использование гомогенизатора перистальтического типа, время гомогенизации 2 — 2,5 мин.

5.4.5    При анализе продукции, обогащенной пробиотическими микроорганизмами в микрокапсу-лированной форме, при приготовлении первого разведения необходимо освободить микроорганизмы от покрытий путем растворения последних.

5.4.6    В случае покрытия из полисахаридов, необходимо энергичное смешивание в течение IQ-15 мин круговыми движениями.

5.4.7    В случае двойного покрытия из полисахаридов и белков/пептидов перемешивание первого разведения должно продолжаться не менее 21 мин: осторожное размешивание (без образования пузырьков) в течение двух минут, отстаивание в течение пяти минут, операции повторяют три раза для полного растворения покрытия.

5.4.8    Далее проверяют состояние покрытий под микроскопом (хЮОО). Если покрытия полностью не растворились или клетки остались в агрегированном состоянии, процедуру повторяют.

5.4.9    При необходимости последующие десятикратные разведения продукта готовят, добавляя в 9 см3 стерильного разбавителя (изотонического раствора хлористого натрия, разбавленного фосфатного буферного раствора или раствора лимоннокислого натрия) по 1 см3 из предыдущего разведения продукта. При этом смесь каждый раз тщательно перемешивают, осторожно промывая пипетку

17

67 ПРОИЗВОДСТВО ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ

ОКС 67.100.10

Поправка к ГОСТ Р 56145-2014 Продукты пищевые функциональные. Методы микробиологического анализа

В каком месте

Напечатано

Должно быть

Первая страница стан-

Дата введения — 2016—0—01

Дата введения — 2016—01—01

дарта

(ИУС № 6 2015 г.)

171

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ

Методы микробиологического анализа

Functional foods.

Methods for microbiological analysis

Дата введения — 2016—0—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на функциональные пищевые продукты, обогащенные пробиотическими микроорганизмами (молочные продукты, молочные составные продукты, молокосодержащие продукты, безалкогольные напитки и биологически активные добавки к пище), и функциональные пищевые ингредиенты, содержащие пробиотические микроорганизмы, (далее — пробиотические продукты) и устанавливает методы микробиологического анализа посторонних микроорганизмов.

Примечание — При необходимости для выявления и определения количества посторонних микроорганизмов в функциональных пищевых продуктах и функциональных пищевых ингредиентах, содержащих пробиотические микроорганизмы, можно использовать другие методы, если они валидированы по ГОСТ ISO 16140 относительно методов, рекомендованных настоящим стандартом.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 177-88 Водорода перекись. Технические условия

ГОСТ 490-2006 Кислота молочная пищевая. Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2156-76 Натрий двууглекислый. Технические условия

ГОСТ 2493-75 Реактивы. Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный. Технические условия

ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 3652-69 Реактивы. Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия ГОСТ 4159-79 Реактивы. Йод. Технические условия

ГОСТ 4165-78 Реактивы. Медь (II) сернокислая 5-водная. Технические условия

Издание официальное

ГОСТ 4170-78 Реактивы. Натрий-аммоний фосфорнокислый двузамещенный 4-водный. Технические условия

ГОСТ 4198-75 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия

ГОСТ 4209-77 Реактивы. Магний хлористый 6-водный. Технические условия

ГОСТ 4232-74 Реактивы. Калий йодистый. Технические условия

ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 4523-77 Реактивы. Магний сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 4530-76 Реактивы. Кальций углекислый. Технические условия

ГОСТ 5556-81 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия

ГОСТ 5712-78 Аммоний щавелевокислый 1-водный

ГОСТ 5833-75 Реактивы. Сахароза. Технические условия

ГОСТ 5962-2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия ГОСТ 6038-79 Реактивы. D-глюкоза. Технические условия ГОСТ 6259-75 Реактивы. Глицерин. Технические условия

ГОСТ 6687.0-86 Продукция безалкогольной промышленности. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 6691-77 Реактивы. Карбамид. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ ISO 7218-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия ГОСТ 9485-74 Реактивы. Железо (III) сернокислое 9-водное. Технические условия ГОСТ 10444.1-84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе

ГОСТ 10444.12-2013 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Методы выявления и подсчета количества дрожжей и плесневых грибов

ГОСТ ISO 11133-1-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории

ГОСТ ISO 11133-2-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 13739-78 Масло иммерсионное для микроскопии. Технические требования. Методы испытаний ГОСТ 13805-76 Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические условия

ГОСТ 15113.0-77 Концентраты пищевые. Правила приемки, отбор и подготовка проб ГОСТ ISO 16140-2008 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ 17206-96 Агар микробиологический. Технические условия ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия ГОСТ 18481-81 Ареометры и цилиндры стеклянные. Общие технические условия ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия

ГОСТ 21241-89 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний ГОСТ 22280-76 Реактивы. Натрий лимоннокислый 5,5-водный. Технические условия ГОСТ 23932-90 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия ГОСТ 24363-80 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 25706-83 Лупы. Типы, основные параметры. Общие технические требования ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов

ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов

ГОСТ P 56145—2014

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

ГОСТ ISO 27205-2013 Продукты кисломолочные. Бактериальные заквасочные культуры. Стандарт идентичности

ГОСТ 27068-86 Реактивы. Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) 5-водный. Технические условия

ГОСТ 28495-90 Продукция микробиологическая. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия

ГОСТ 30347-97 Молоко и молочные продукты. Методы определения Staphylococcus aureus ГОСТ 30712-2001 Продукты безалкогольной промышленности. Методы микробиологического анализа

ГОСТ 30726-2001 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий вида Escherichia coli

ГОСТ 31654-2012 Яйца куриные пищевые. Технические условия

ГОСТ 31659-2012 (ISO 6579:2002) Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella

ГОСТ 31708-2012 (ISO 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа

ГОСТ 31746-2012 (ISO 6888-1:1999; ISO 6888-2:1999; ISO 6888-3:2003) Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества коагулазоположительных стафилококков и Staphylococcus aureus

ГОСТ 31747-2012 (ISO 4831:2006, ISO 4832:2006) Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)

ГОСТ 31904-2012 Продукты пищевые. Методы отбора проб для микробиологических испытаний ГОСТ 32011-2013 (ISO 16654:2001) Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод обнаружения Escherichia coli 0157

ГОСТ 32031-2012 Продукты пищевые. Методы выявления бактерий Listeria monocytogenes ГОСТ 32159-2013 Крахмал кукурузный. Общие технические условия

ГОСТ Р 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ Р 52349-2005 Продукты пищевые. Продукты пищевые функциональные. Термины и определения

ГОСТ Р 52791-2007 Консервы молочные. Молоко сухое. Технические условия ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ Р 53430-2009 Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа

ГОСТ Р 54004-2010 Продукты пищевые Методы отбора проб для микробиологических испытаний ГОСТ Р 54731-2011 Дрожжи хлебопекарные прессованные. Технические условия

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт

3

отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по [1], [2], ГОСТ 10444.12, ГОСТ Р 52349, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1    функциональные пищевые продукты, обогащенные пробиотическими микроорганизмами: Пищевые продукты и биологически активные добавки к пище, в состав которых в качестве функционального пищевого ингредиента включены жизнеспособные пробиотические микроорганизмы родов Bifidobacterium, Lactobacillus, Propionibacterium, а также штаммы рода Lactococcus и вида Streptococcus thermophilus.

3.2    биологически активные добавки к пище (БАД) на основе пробиотических микроорганизмов: Биологически активные добавки к пище, содержащие жизнеспособные пробиотические микроорганизмы, с добавлением или без добавления молочнокислых микроорганизмов, пищевых и(или) биологически активных веществ.

3.3    бактерии группы кишечных палочек (БГКП, колиформы): Грамотрицательные, неспорообразующие, аэробные и факультативно-анаэробные палочковидные микроорганизмы, ферментирующие лактозу с образованием газа при температуре (37 ± 1) °С за 24-48 ч, относящиеся преимущественно к родам Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter и Serratia.

3.4    презумптивные бактерии Escherichia coli: He утилизирующие цитраты грамотрицательные неспорообразующие палочковидные микроорганизмы, способные расти и ферментировать лактозу при температуре (44 ± 1) °С, образующие и не образующие индол из триптофана.

3.5    бактерии рода Salmonella: Грамотрицательные неспорообразующие аэробные и факультативно-анаэробные палочковидные преимущественно подвижные микроорганизмы, все представители рода которых патогенны для человека.

3.6    коагулазоположительные стафилококки: Грамположительные, каталаза- и коагулазопо-ложительные факультативно-анаэробные микроорганизмы сферической (кокковой) формы.

3.7    бактерии Staphylococcus aureus: Вид коагулазоположительных стафилококков, как правило, пигментированных, образующих ацетоин и ферментирующие мальтозу в аэробных условиях, большая часть представителей которого способна продуцировать термостабильные энтеротоксины.

3.8    бактерии Listeria monocytogenes: Грамположительные неспорообразующие факультативно-анаэробные палочковидные микроорганизмы, подвижные при 25 °С и неподвижные при 37 °С, обладающие бета-гемолитической и фосфолипазной активностью, все серотипы которых патогенны для человека.

4    Оборудование, посуда, реактивы, питательные среды, сыворотки, штаммы

рН-метр/иономер лабораторный с диапазоном измерения pH 0-14, погрешностью измерения pH ± 0,01 ед. pH.

Весы лабораторные, высокого и среднего классов точности, с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ± 0,01 г и ± 0,1 г по ГОСТ Р 53228.

Стерилизатор паровой медицинский (автоклав).

Бани водяные, поддерживающие температуру от 37 °С до 47 °С.

Баня водяная с терморегулятором, позволяющая поддерживать температуру от 0 °С до 100 °С.

Термостаты, позволяющие поддерживать температуры от 25 °С до 55 °С, с с погрешностью измерения температуры ± 1 °С.

Инкубатор с конвекционной вентиляцией для подсушки плотных сред в чашках Петри, поддерживающий температуру от (37 ± 1) °С до (55 ± 1) °С.

Термостат суховоздушный с охлаждением.

Термометр стеклянный жидкостной (нертутный), с диапазоном измерения температуры от 0 °С до 100 °С ценой деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498.

Ареометр-сахарометр с диапазоном измерений 0-10 %, с ценой деления шкалы 0,1% и пределом допускаемой погрешности + 0,1 % по ГОСТ 18481.

ГОСТ Р 56145-2014

Спиртовка СЛ-1 или аналогичная по ГОСТ 25336.

Шкаф сушильный, обеспечивающий поддержание температуры (160    ±    5)    °С.

Петля бактериологическая.

Часы или таймер.

Гомогенизатор бактериологический перистальтического типа (стомахер) со стерильными полимерными пакетами однократного применения

Аппарат для встряхивания жидкостей (шуттель-аппарат).

Микроскоп световой биологический с иммерсионной системой, обеспечивающий увеличение в 900х-1000х.

Микроскоп для фазово-контрастной микроскопии.

Лупа с увеличением в 4-10 раз по ГОСТ 25706.

Пробки резиновые конусные.

Емкости металлические или кастрюли для растворения, расплавления, нагревания или охлаждения питательных сред.

Вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.

Бумага пергаментная.

Бумага индикаторная универсальная для определения pH жидкостей (0 — 14) ед. pH.

Шпатели микробиологические Дригальского стеклянные.

Шпатели металлические лабораторные прямые.

Ложки из нержавеющей стали разной емкости.

Ножи из нержавеющей стали.

Ножницы из нержавеющей стали.

Консервные ножи цельнометаллические.

Пинцеты анатомические по ГОСТ 21241.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

Бумага индикаторная универсальная для определения величины pH.

Пипетки 1-1 (2)-1 по ГОСТ 29169.

Пипетки 1-1 (2)-1 (2)-1 (2, 5, 10) по ГОСТ 29227.

Дозаторы лабораторные (автоматические пипетки) с использованием стерильных наконечников необходимого объема.

Колбы мерные 2-50 (100, 200, 500, 1000)-2 по ГОСТ 1770.

Колбы конические Кн-2-(50, 100, 250)-34 ТХС по ГОСТ 25336.

Цилиндры 1(2)-50(100)-1 по ГОСТ 1770.

Пробирки П1, П2-16-150 ТС по ГОСТ 25336.

Пробирки П1, П2-21-200 ТС по ГОСТ 25336.

Пробирки Дархама (поплавки стеклянные) с размерами, пригодными для использования в пробирках с размерами 16x160 мм.

Чашки биологические (Петри) стеклянные или одноразовые из полимерных материалов по ГОСТ 23932.

Стаканчики для взвешивания (бюксы) типов СВ и СН по ГОСТ 25336.

Ступки лабораторные фарфоровые с пестиком по ГОСТ 9147.

Агар микробиологический по ГОСТ 17206.

Агар питательный сухой.

Агар Байрд-Паркера.

Агар солевой.

Агар сывороточный БФ.

Агар сдихлораном, бенгальским розовым и хлорамфениколом.

Бульон солевой.

1-Нафтол (альфа-нафтол) технический.

Бриллиантовый зеленый.

Бромтимоловый синий.

Бенгальский розовый.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Вода питьевая по [3].

Агар висмут-сульфитный.

Гидролизат казеина панкреатический ГОСТ 29311.

5

ГОСТ Р 56145-2014

Гидролизат сои ферментативный.

Гидролизат животных и растительных тканей ферментативный.

Глицерин по ГОСТ 6259.

Дефибринированная кровь барана или кролика.

D-глюкоза по ГОСТ 6038, ч.

D-лактоза 1-водная.

D(+) мальтоза для микробиологических целей.

DL-триптофан.

Желчь сухая или желчь нативная сельскохозяйственных животных стерильная.

Аммоний щавелевокислый 1-водный по ГОСТ 5712.

Ацетон по ГОСТ 2603.

Железо III сернокислое, 9-водное по ГОСТ 9485.

Йод по ГОСТ 4159.

Калия гидроокись, раствор массовой концентрацией 10 г/дм3 по ГОСТ 24363.

Калий йодистый по ГОСТ 4232, ч. д. а.

Калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198, ч.

Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный по ГОСТ 2493.

Кальций углекислый по ГОСТ 4530.

Кислота молочная, раствор объемной долей 20 % по ГОСТ 490.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, растворы объемной долей 20 %.

Кристаллический фиолетовый.

Лимонная кислота по ГОСТ 3652, х. ч. или ч.

Литий хлористый по ГОСТ 4328, ч. или х. ч., или ч. д. а.

Магний сернокислый 1- и 7-водный, х. ч. по ГОСТ 4523.

Магний хлористый 6-водный ГОСТ 4209, ч. х. ч. или х. ч., или ч. д. а.

Малахитовый зеленый.

Масло иммерсионное для микроскопии по ГОСТ 13739.

Натрия гидроокись, раствор массовой концентрацией 200 г/дм3 по ГОСТ 4328.

Медь сернокислая 5-водная по ГОСТ 4165, х. ч.

Молоко коровье обезжиренное стерильное.

Молоко коровье обезжиренное сухое по ГОСТ Р 52791.

Мочевина (карбамид) по ГОСТ 6691.

Бульон/агар мясо-пептонный ГОСТ 20730.

Набор для окраски по Граму.

Натрий-аммоний фосфорнокислый двузамещенный 4-водный по ГОСТ 4170, ч. или х. ч.

Натрий двууглекислый, раствор массовой концентрацией 100 г/дм3 по ГОСТ 2156.

Натрий лимоннокислый 5,5-водный ГОСТ 22280, ч. д. а.

Натрий серноватисто-кислый (натрия трисульфат) 5-водный по ГОСТ 27068.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233, ч. или х. ч., или ч. д. а.

Натрий додецилсульфат (лаурилсульфат).

Тиосульфат натрия (гипосульфит).

Цинка сульфат 7-водный, х. ч.

Пара-диметиламинобензальдегид, ч.

2,3,5-трифенилтетразолий хлористый, ч. д. а.

Экстракт дрожжевой.

Крахмал по ГОСТ 32159.

Эскулин, содержание основного вещества не менее 98 %.

Цитрат железа аммонийного.

D-маннит.

Неомицин сульфат, содержание основного вещества не менее 98 %.

Соль бензилпенициллина натриевая или калиевая, содержание основного вещества не менее

98 %.

Ванкомицина гидрохлорид, содержание основного вещества не менее 90 %.

Сульфат стрептомицина или дигидрострептомицина сульфат или пантотенат, содержание основного вещества не менее 72 %.

Сульфаметазин.

6

1

Реактив может использоваться также для определения образования ацетоина бактериями рода Salmonella. '** Реактив может использоваться также для определения образования индола бактериями рода Salmonella.

2

Среда может использоваться также для определения образования индола бактериями рода Salmonella. Среда может использоваться также для определения образования ацетоина бактериями рода Salmonella.