МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПАСТЕРИЗАЦИИ
Издание официальное
И ПК ИЗДАТЕЛЬСТВО СТАНДАРТОВ Москва
УДК 631.1:006.354 Груша HI9
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ Методы определения пастеризации
Milk and milk products.
Methods for determination of pasteurization
МКС 67.100.10_
Лата введения 01.01.76
Настоящим стандарт распространяется на пастеризованное молоко, сливки, пахту, сыворотку и устанавливает методы определения пастеризации, а также на творог, сметану, сливочное масло, кисломолочные напитки и другие молочные продукты при оценке эффективности пастеризации сырья, из которою они выработаны.
1. ОТБОР ПРОБ
1.1. Отбор проб молока и молочных продуктов проводят по ГОСТ 26809 и ГОСТ 13928.
2. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕРОКСИДАЗЫ
2.1а. Пероксидаза инактивируется при температуре пастеризации нс ниже 80 °С с выдержкой 20-30 с.
(Введен дополнительно. Изм. № 2).
А. Метод определения пероксида ты по реакции с солянокислым рафенилендиачнном
2.1. Сущность метода
Метод основан на разложении перекиси водорода ферментом пероксидазы. содержащейся в молоке и маточных продуктах.
Освобождающийся при разложении перекиси водорода активный кислород окисляется парафе-нилендиамином, образуя соединение синего цвета.
2.2. Аппаратура, материалы и реактивы: весы лабораторные аналитические; весы лабораторные технические; пробирки по ГОСТ 23932;
пипетки вместимостью 2 и 5 см’ по ГОСТ 29169;
пипетки вместимостью 5 или 10 см* с ценой деления 0.1 см’ по ГОСТ 29169: капельницы из темного стекла или покрытые черным лаком; колбы мерные вместимостью 250 и 500 см’ по ГОСТ 1770; колбы конические вместимостью 250 см' по ГОСТ 1770; баня водяная с нагревательным прибором;
парафенилендиамин солянокислый, 2 %-ный водный раствор. Раствор нестойкий, его следует хранить в склянке из темного стекла с плотно закрытой пробкой, в темном, прохладном месте; кислота лимонная кристаллическая но ГОСТ 3652, х. ч. или ч. д. а.; кислота серная по ГОСТ 4204. х. ч.. концентрированная; калий марганцовокислый по ГОСТ 20490.0.1 н. раствор; перекись водорода «медицинская» по ГОСТ 10929. 0.5 %-ный раствор; вода дистиллированная по ГОСТ 6709;
натрий фосфорнокислый двузамещенный кристаллический по ГОСТ 11773; х. ч. или ч. д. а.
Перепечатка воспрещена
© Издательство стандартов. 1973 © ИПК Издательство стандартов. 2003
ГОСТ 3623-73 С. 2
2.3. Подготовка к апаш чу
2.3.1. Проверка пригодности 2 %-ного раствора сшянокислого парафена/ендиаиина
При применении 2 %-ного раствора солянокислого парафенилендиамина. хранившегося более 1—2 дней, следует проверить его пригодность. Для этого в пробирке нужно вскипятить 5 см’ молока, охладить, прилить 2.5 см’ буферной смеси, перемешать и поместить на 3—5 мин в водяную баню с температурой воды (35 ± 2) *С. Затем прибавить 6 капель 0.5 %-ного раствора перекиси водорода и 3 капли раствора солянокислого парафенилендиамина. перемешать и снова поместить в водяную баню. Появление темно-синей или серовато-синей окраски указывает на непригодность раствора.
2.3.2. Приготов. iение буферной смеси
97 г двузамешенного фосфорнокислого натрия и 0.65 г лимонной кислоты, взвешенных с погрешностью не более 0.0002 г. растворяют дистыиронанной водой в мерной колбе вместимостью 500 см’, датива ют до метки и перемешивают. Буферную смесь следует сохранять в склянке из темного стекла с плотно закрытой пробкой.
2.3.3. Определение содержания перекиси водорода в концентрированном растворе
3—4 г концентрированной перекиси водорода, взвешенной с по1решностью не более 0.01 г. переносят без потерь в мерную катбу вместимостью 250 см', доводят водой до метки и перемешивают. 10 см' приготовленного раствора переносят в коническую катбу вместимостью 250 см’, добавляют 50 см' воды. 10 см’ разбавленной серной кислоты (1:4) и содержимое титруют 0,1 н. раствором марганцовокислого катя до розового окрашивания, не исчезающего в течение I мин. Пархыельно проводят контратьный опыт в тех же условиях, с тем же количеством реактивов и воды (без перекиси водорода).
Массовую долю перекиси водорода X. %. вычисляют по формуле
(v-v,) 0.0017 25 100 Х~ т
где v — количество точно 0.1 н. раствора марганцовокислого калия, израсходованное на титрование раствора перекиси водорода, см’; г, — количество точно 0.1 н. раствора марганцовокислого калия, израсходованное на контрольное титрование, см’;
0.0017 — кашчесгво перекиси водорода, соответствующее 1 см’ точно 0,1 н. раствора марганцовокислого калия, г; т — навеска перекиси водорода, г.
2.3.4. Приготовление 0,5 %-ного раствора перекиси водорода
Для приготовления 0.5 %-ного раствора перекиси водорода имеющийся концентрированный раствор, в зависимости от содержания в нем перекиси водорода, разводят водой, предварительно прокипяченной и охлажденной. Раствор быстро разлагается, поэтому его следует приготовлять в не-батьшом количестве.
Растворы следует сохранять в склянке из темного стекла в прохладном месте.
2.4. Проведение анашча
В пробирку отмеривают или отвешивают анализируемый продукт и дистиллированную воду.
Количество дистиллированной воды и анализируемого продукта должно соответствовать указанному в табл. 1.
|
Таблица I |
|
Наименование продукта |
Количество
продукта |
Количество дистиллированной волы, см’ |
|
Молоко 1 тетери зова н нос |
5 см’ |
_ |
|
Стивки |
2—3 см’ |
2-3 |
|
Сметана |
2-3 г |
2-3 |
|
Кисломолочные напитки (кефир, ацидофильное молоко. ацидофилии, кумыс, fioiypr и др.); простокваша, напитки с Iполово-ягодными наполнителями (фильтраты) |
5 см’ |
|
|
Белковые продукты (творог, творожные изделия, паста и лр.) |
2-3 г |
2-3 |
|
Сливочное масло (плазма масла) |
2—3 см’ |
2-3 |
|
Кисломолочные напитки с плодово-ягодными напатнителямн фильтруют через бумажный фильтр. Пастеризацию определяют но реакции фильтрата с йодисто калиевым крахмалом.
Для получении 2—3 см' плазмы маета 50 г сливочного масла расплавляют при температуре не выше 50 ’С. затем охлаждают и застывший слой жира удаляют.
Пекле добавлении воды анализируемые продукты тщательно растирают стеклянной палочкой. Затем в пробирку с указанным количеством продукта и воды приливают 2.5 см' буферной смеси, тщательно перемешивают стеклянной палочкой и помещают в водяную баню с температурой воды (35 ± 2) *С. где выдерживают 3—5 мин. чтобы содержимое пробирки приняло эту температуру. Затем добавляют 6 капель 0.5 %-ного раствора перекиси водорода и 3 капли раствора парафенилендиамина солянокислою, перемешивают вращательными движениями содержимое пробирки после добавления каждого реактива. После этого снов;) помешают пробирку в водяную баню и наблюдают изменение окраски жидкости.
(Измененная редакция. Изм. .V 4).
2.5. Оценка результатов
При отсутствии фермента пероксидазы в молоке и молочных продуктах цвет содержимого пробирки не изменяется. Следовательно, молоко и маточные продукты подвергались пастеризации при температуре не ниже S0 *С.
При наличии пероксидазы в молоке, сливках, сливочном масле содержимое пробирок приобретает темно-синее окрашивание. При наличии пероксидазы в кисломолочных продуктах и кистосливочном маете содержимое пробирок приобретает серо-фиолетовый цвет, постепенно переходящий в темно-синее окрашивание. Следовательно, молоко и молочные продукты нс подвергались пастеризации или подвергались пастеризации при температуре ниже 80 *С. или были смешаны с непастеризованными продуктами. Чувствительность метода позволяет обнаружтпъ добавление не менее 5 % непастеризованных маточных продуктов к пастеризованным.
(Измененная редакция. Изм. .V 2).
Н. Определение пероксидазы по реакции с модистка.шевыч крахма.юм
2.6. Сущность метода
Метод основан на рахтожении перекиси водорода ферментом пероксидазой. содержащейся в молоке и молочных продуктах. Освобождающийся при рахтожении перекиси водорода активный кислород окисляет йодистый калий, освобождая йод. образующий с крахмалом соединение синего цвета.
2.7. Аппаратура, материалы и реактивы: аппаратура по н. 2.2;
перекись водорода «медицинская* но ГОСТ 10929.0.5 %-ный раствор;
крахмал картофельный по ГОСТ 7699;
калий йодистый по ГОСТ4232. х. ч. иди ч. д. а.;
вода дистиллированная по ГОСТ 6709;
воронки стеклянные В-56—80 ХУ-1 по ГОСТ 25336;
фильтры бумажные диаметром 11 см.
(Измененная редакция, Изм. .N? 4).
2.8. Подготовка к анашчу
2.8.1. Приготовление 0.5 %-ного раствора перекиси водорода по п. 2.3.4.
2.8.2. Приготовление йодистокашевого крахиаш
3 г крахмала взвешивают с погрешностью не более 0.01 г и смешивают с 5—10 см’ дистиллированной холодной воды до получения однородной массы. Отдельно в колбе доводят до кипения 100 см’ дистиллированной воды и при непрерывном помешивании приливают воду к разведенному крахмалу, не допуская образования комков. Подученный раствор доводят до кипения. Посте охлаждения к раствору крахмала прибавляют 3 г йодистого калия, перемешивая до растворения кристаыов йодистого кат ия.
Раствор йодистокашевого крахмала является нестойким реактивом, поэтому приготовлять его следует в небольшом количестве и сохранять в темном прохладном месте не более двух дней.
2.8.3. Проверка пригодности раствора йодистокашевого крахи а ш
Для определения пригодности раствора йодистокалиевого крахмала, хранившегося более двух дней, перед употреблением его необходимо проверить. Для этого в пробирке нужно вскипятить 5 см’ маюка. охладить, прилить 5 капель раствора йодистокашевого крахмала и 5 капель 0.5 %-ного раствора перекиси водорода и перемешать. Появление темно-синей или серовато-синей окраски указывает на непригодность распюра.
ГОСТ 3623-73 С. 4
2.8.4. Допускается вместо йодисто калиевого крахмала применять отдельно приготовленный 1 %-ный раствор крахмала и 10 %-ный раствор йодистого калия.
2.9. Проведение анашза
Отмеривание или взвешивание анализируемых продуктов и воды и подготовку плазмы масла производят по п. 2.4.
В пробирку с указанным количеством продукта и воды приливают 5 капель раствора йодисто-калиевого крахмала и 5 капель 0.5 %-ного раствора перекиси водорода, вращательными движениями перемешивают содержимое пробирки после добавления каждого реактива. Затем определяют наличие пероксидазы но изменению окраски.
Если применяют отдельно раствор крахмала и йодистого калия, то поступают следующим образом: в каждую пробирку с продуктами. подгото&ленными. как указано в п. 2.4, приливают 0.5 см’ 1 %-ного раствора крахмала. 2 капли 10 %-ного раствора йодистого калия и 5 капель 0,5 %-ного раствора перекиси водорода, перемешивают содержимое пробирок nocic добавления каждого реактива. затем определяют наличие пероксидазы по изменению окраски.
2.10. Оценка резу.1ыпатов
При отсутствии фермент пероксидазы в молоке и молочных продуктах цвет содержимого пробирки нс изменится. Следовательно, молоко и молочные продукты подвергались пастеризации при температуре не ниже 80 *С.
Мри наличии пероксидазы в молоке, сливках, сливочном масле содержимое пробирок приобретает темно-синее окрашивание. При наличии пероксидазы в кисломолочных продуктах и кислосливочном масле содержимое пробирок не более чем через 2 мин приобретает серовато-синюю окраску, постепенно переходящую в темно-синюю. Следовательно, молоко и молочные продукты не подвергались пастеризации или подвергались пастеризации при температуре ниже 80 *С. или были смешаны с непастеризованными маточными продуктами. Появление окраски в пробирках балее чем через 2 мин после добавления йодисто калиевого крахмала и перекиси водорода не указывает на отсутствие пастеризации. так как может вызываться разложением реактивов.
Чувствительность метода позволяет обнаружить добавление не менее 5 % непастеризованных маючных продуктов к пастеризованным, а для напитков с плодово-ягодными наполнителями —0.5 %. (Измененная редакция, Пзм. № 2. 4).
3. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОСФАТАЗЫ
3.1а. Фосфатаза инактивируется при температуре пастеризации не ниже 63'С с выдержкой 30 мин.
(Измененная редакция, Изм. .V? 2).
А. Определение фосфагаш но реакции с 4-амииоан1ипирином (арбитражный метод)
3.1. Сущность метода
Метод основан на гидролизе динатриевой соли <|>енил(|к>с<|>орной кислоты ферментом фосфатазой, содержащейся в молоке и маточных продуктах. Выделившийся при гид рал и зе свободный фенал в присутствии окислителя дает розовое окрашивание с 4-аминоантипирином.
3.2. Аппаратура, материалы и реактивы: весы лабораторные аналитические; весы лабораторные технические;
пробирки стеклянные по ГОСТ 23932. размером 16 х 150 мм; пипетки измерительные вместимостью 5 см’ по ГОСТ 29169; ступка фарфоровая с пестиком по ГОСТ 9147; колб;» коническая вместимостью 100 см* по ГОСТ 1770; цилиндр стеклянный вместимостью 25 см’ по ГОСТ 1770; баня водяная;
аммоний хлористый по ГОСТ 3773. х. ч.; аммиак водный по ГОСТ 3760. 25 %-ный. ч. д. а.;
фенил фосфорной кислоты диналриевая саль двуводная но действующей технической документации. утвержденной в установленном порядке;
4-аминоантипирин. ч.;
цинк сернокислый но ГОСТ 4174. х. ч.; медь сернокислая но ГОСТ 4165. х. ч.; эфир этиловый;
пода дистиллированная но ГОСТ 6709;
воронки стеклянные В 56—80 ХУ-1 ГОСТ 25336. колба мерная вместимостью 1000 см' по ГОСТ 1770;
фильтры бумажные диаметром 11 см; бумага индикаторная универсальная pH 1—10; натрия гидроокись но ГОСТ 4328. х. ч. или ч. д. а.. 1 н. раствор; уголь активированный.
(Измененная редакция. Изч. № 2, 3, 4).
3.3. Подготовка к анализу
Молоко пастеризованное, сливки, кисломаточные напитки, простокваша для проведении анализа дополнительной подготовки не требует. Творог и сметану необходимо развести дистиллированной водой. Для этою 1 г творога и сметаны помешают в пробирку и тщательно перемешивают с 2 см' дистиллированной воды.
Кисломолочные напитки с плодово-ягодными наполнителями необходимо профильтровать через бумажный фильтр с активированным углем (2 г активированного угля на 25 см' продукта). Сыворотку и фильтраты кисломаточных напитков с плодово-ягодными наполнителями следует нейтрализовать I н. раствором тдроокиси натрия до pH 6. контролируя по универсальной индикаторной бумажке. (Измененная редакция. Изм. № 4).
3.3.1. Приготовление основного буерного раствора (pH 10 ± 0.2)
40 г хлористого аммония (NH4CI). взвешенного с погрешностью не более 0.01 г, растворяют в 100—200 см' дистиллированной воды, добавляют 348 см’ 25 %-ного водного аммиака (NH4OH) и доводят до I дм'дистиллированной водой.
3.3.2. Приготов. ienue субстрата Приготовление раствора А
1.25 гдинатриевой соли фенилфосфорной кислоты (C„Hs04PNa,). взвешивают с по1решностью не более 0.0002 г. растворяют в 100 см' основного буферного раствора.
/ 1риготов. tenue раствора Б
0,8 г4-аминоантипирина (С^НцСЖ.Рч'Н,). взвешенногос погрешностью не более 0.0002 г. растворяют в 900 см' дистиллированной воды.
Растворы А и Б должны быть бесцветными и храниться в склянках из темного стекла в халодиль-нике. Срок хранения не балес 1 мес. Пожелтевшие раствори для работы непригодны.
Рабочий раствор субстрата готовят непосредственно перед определением реакции смешиванием растворов А и Б (1 ; 9). Рабочий распюр пригоден для работы в течение 8 ч при хранении его в склянке из темного стекла.
При необходимости динатриевуло саль фенилфосфорной кислоты очищают от свободного фенала промыванием этиловым эфиром до палного удаления (|>снала. Сушить рсак пш при комнатной температуре под тягой.
3.3.3. Приготов.\ение осадите.ы системы цинк-медь
30 г сульфата цинка (ZnS04B 7Н.О) и 6 г сульфата меди (CuSO, • 5Н.О). взвешенных с иогреш-ностью не более 0.01 г. растворяют в 1 л дистиллированной воды.
3.3.4. Приготов1ение I н. раствора гидроокиси натрия
40 г кристаллической гидроокиси натрия взвесить с но1решносгью не более 0.1 г и растворить в дистиллированной воде в мерной колбе 1 дм’, доведя объем до метки.
3.3.5. Активированный уголь в таблетках растереть в сту пке.
3.3.4. 3.3.5. (Введены дополнительно. Изм. № 4).
3.4. Проведение анализа
К 3 см’ молока, сливок, кефира, простокваши, сыворотки тын предварительно подготовленных для анализа по п. 3.3 продуктов добавляют 2 см' рабочего раствора субстрата. Затем перемешивают содержимое пробирки и ставят в водяную баню, нагретую до 40—45 *С на 30 мин. В пробирку, вынутую из водяной бани, добавляют 5 см' осадите!я системы цинк-медь, тщательно перемешивают содержимся: пробирки и снова ставят в водяную баню с температурой 40—45’С на 10 мин. Вынув
16
ГОСТ 3623-73 С. 6
пробирку из бани, производят визуальное сравнение содержимого пробирки испытуемого продукта с контрольным опытом.
Контрольным опытом для всех продуктов является аналогичная реакция с кипяченым молоком. Если контрольный опыт с кипяченым молоком дает слабо-розовое окрашивание — динатрий-фенил-фосфат подлежит дополнительной очистке по и. 3.3.2.
(Измененная редакция. Изм. Ns 2. 4).
3.5. Оценка результатов
3.5.1. При отсутствии фермента <]юсфаглзы в молоке и молочных продуктах окраска содержимого пробирки (раствора, отделившегося от осажденного белка) бесцветная, т. е. аналогичная содержимому пробирок конфального опыта. Следовательно, молоко и молочные продукты подвергались пастеризации при температуре не ниже 631C.
При наличии фосфатазы в молоке и молочных продуктах содержимое пробирок (раствор) имеет окрашивание от розового до темно-красного цвета. Следовательно, молоко и молочные продукты не подвергались пастеризации или подвергались пастеризации при температуре ниже 63 *С или были смешаны с непастеризованными молочными продуктами.
При оценке реакции учитывается только цвет, но не прозрачность раствора.
Чувствительность метода позволяет обнаружить добавление непастеризованных маточных продуктов к пастеризованным: 0.3 % в молоке, сливках, кисломолочных напитках и 0.5 % в твороге и сметане и 1 % в напитках с плодово-ягодными наполнителями и сыворотке.
(Измененная редакция, Изм. Ns 2, 4).
3.5.2. Творог и сметану на пастеризацию исходного сырья — молока и сливок определяют по фосфатазе не позднее семи суток с момента выработки творога, сметаны — не позднее пяти суток.
Определение пастеризации всех видов молочных, сливочных напитков и творожных изделий с наполнителями и продуктов из сыворотки должно производиться путем контроля исходного сырья (молоко, сливки, творог, сыворотка) в соответствии с разя. 3 А.
(Измененная редакция, Изм. Ns 2, 4).
Б. Определение фосфатазы по реакции с фенолфталеинфосфатом натрия
3.6. Сущность метода
Метод основан на гидролизе феналфталеинфосфата натрия ферментом фосфатазой, содержащейся в молоке и молочных продуктах. Освобождающийся при пиролизе фенолфталеин в щелочной среде шлет розовое окрашивание.
3.7. Аппаратура, материал и реактивы:
аппаратура по н. 2.2;
аммиак водный но ГОСТ 3760. ч. д. а., I н. раствор;
аммоний хлористый но ГОСТ 3773. х. ч. или ч. д. а.. 1 н. раствор;
смесь буферная аммиачная;
феналфталеинфосфат натрия порошкообразный. 10 или 0,1 %-ный раствор;
вода дистиллированная по ГОСТ 6709;
пробирки стеклянные по ГОСТ 23932 из бесцветного стекла с нанесенными метками на объем
2 см’;
пипетки измерительные вместимостью 1 и 2 см’ но ГОСТ 29169;
пробки резиновые.
(Измененная редакция, Изм. № 2).
3.8. Подготовка к шииту
3.8.1. Приготовление (питанной буферной смеси
80 см’ 1 н. раствора аммиака смешивают с 20 см' I н. раствора хлористого аммония (pH 9.8).
3.8.2. Приготовление 0,1 %-ного раствора (|>сналфгалеинфосфата натрия.
0.1 г порошкообразногофенолфталеинфосфата натрия, взвешенногос погрешностью не более 0,0002 г. растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см’ с небольшим количеством буферной смеси, затем доливают буферную смесь до метки и перемешивают.
3.9. Проведение анализа
В пробирку отмеривают анализируемый продукт, дистиллированную воду и реактив. Количество анализируемого продукта, дистиллированной воды и реактива должно соответствовать указанному в табл. 2.
|
Таблица 2 |
|
Наименование продуктов |
Количество продукта, см’ |
Количество дистиллированной воды, см1 |
Коли'кстко раствора фе молфталс и и фосфата натрия, см1 |
|
Молоко пастеризованное |
2 |
— |
1 |
|
Сливки |
2 |
2 |
1 |
|
Кисломолочные напитки: кефир, ацидофильное молоко, ацидофилин. кумыс, йогурт и лр. |
2 |
2 |
2 |
|
Простокваша |
2 |
2 |
2 |
|
После добавления дистиллированной воды и реактива содержимое пробирки закрывают пробкой и взбалтывают.
Затем пробирку помещают в водяную баню с температурой воды от 40 до 45 *С и определяют окраску содержимого пробирки через 10 мин и через 1 ч.
3.10. Оценка результатов
При отсутствии фермента фосфатазы в молоке и маточных продуктах окраска содержимого пробирки не изменяется. Следовательно, молоко и молочные продукты подвергались пастеризации при температуре не ниже 63 *С. При наличии фосфатазы в молоке и молочных продуктах содержимое пробирки приобретает окраску от светло-розовой до ярко-розовой. Следовательно, молоко и молочные продукты не подвергались пастеризации или подвергались пастеризации при температуре ниже 63 *С, или были смешаны с непастеризованными продуктами.
Чувствительность метода позволяет обнаружить добавление не менее 2 % непастеризованных маточных продуктов к пастеризованным.
Определение пастеризации всех видов молочных, сливочных напитков должно производиться путем контроля исходного сырья (молоко, сливки) в соответствии с разд. 3 Б.
(Измененная редакция, Изм. № 2).
4. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ КИСЛОЙ ФОС ФАТАЗЫ
4.1. Кислая фосфатаза инактивируется при температуре пастеризации молока и сливок 85 *С с выдержкой не менее 30 мин, 90 *С с выдержкой не менее 5 мин и кипячении; термической обработки сливок 103 *С с выдержкой 15—20 с.
Метод определения кислой фосфатазы предназначен для контроля эффективности термической обработки.
4.2. Сущность метода
Метод основан на свойстве кислой фосфатазы катализировать при pH (4.00 ± 0.05) пиролиз д и натриевой соли фенилфосфорной кислоты с образованием фенола и фосфата натрия. Фенол с 4-аминоантипирином при добавлении осадителя системы цинк-медь в условиях щелочной реакции образует окрашенное соединение, изменяющее интенсивность окраски от слаборозовой до темно-вишневой (в зависимости от концентрации фенола). По разнице в интенсивности окраски опытных и контрольных проб определяют активность кислой фосфатазы (соблюдены ли режимы термической обработки).
4.3. Аппаратура, материалы и реактивы
Анализатор потенциометрический с диапазоном измерения 3—4.5 сд. pH. позволяющий измерить pH с погрешностью ± 0.05. по ГОСТ 19881 или ГОСТ 27987.
Баня водяная с регулируемым подогревом или ультратермостат, обеспечивающие регулирование температуры от 25 до 50 ’С. с точностью ± 1 ’С.
Бюретки 3-1-25-0.1; 3-2-25-0.1; 3-1-50-0.1; 3-2-50-0.1 ГОСТ 29251.
Весы лабораторные общего назначения. 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104*.
Весы лабораторные общего назначения. 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г ПО ГОСТ 24104.
Воронка В-56-80 ХС ГОСТ 25336.
С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104 — 2001 (здесь и далее).
ГОСТ 3623-73 С. 8
Капельница 2-50 ХС ГОСТ 25336.
Колбы Км 2-250-34; 2-250-40; 2-250-50 ХС ГОСТ 25336.
Колбы 1-50-2; 1-100-2; 1-250-2; 1-500-2; 1-1000-2; 2-100-2; 2-50-2; 2-250-2; 2-500-2; 2-1000-2 ГОСТ 1770.
Пипетки 4-1-1; 4-1-2; 5-1-1; 5-1-2; 6-1-5; 6-1-10; 7-1-5; 7-1-10 ГОСТ 29169.
Пробирки П 4-15-14/23. П 2-16-150 ХС ГОСТ 25336.
Секундомер но нормативному документу.
Цилиндры 1-50; 1-100; 1-500; 3-50; 3-100 ГОСТ 1770.
Штат» для пробирок.
Бумага фильтровальная но ГОСТ 12026.
Фольга алюминиевая для упаковки по ГОСТ 745.
4-аминоантипирин. ч.
Аммиак 25 %-ный водный раствор по ГОСТ 3760. ч. д. а.
Вода дистиллированная но ГОСТ 6709.
Кислота соляная. 0.1 моль/дм’. фиксанал.
Кислота уксусная ледяная но ГОСТ 61.x. ч.
Медь серно-кислая 5-водная по ГОСТ 4165. ч.
Метиловый оранжевый, индикатор с массовой долей 0.1 %.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х. ч.
Фен ил фосфорной кислоты динатриевая соль 2-водиая. ч.
Цинк сернокислый 7-водный но ГОСТ 4174. ч.
4.4. Подготовка к анализу
4.4.1. Приготов.\ение буферного раствора
В мерную колбу вместимостью 10(H) см* вносят 72 см’ ледяной уксусной кислоты, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. Затем подщелачивают концентрированным раствором гидроокиси натрия до (3.78 ± 0.05) pH.
4.4.2. Приготовление и хранение раствора динатриевой cam феннлфосфорной кислоты и 4-а.ми-ноан пи трина.
В мерную колбу вместимостью ПК) см' вносят (0.3(H) ± 0.001) г динатриевой соли фенилфосфор-ной кислоты и (0.021 ± 0,001) г 4-аминоантипирина. 80 см’ дистиллированной воды, содержимое растворяют, добавляют 10 см’ буферного раствора, доводит дистиллированной водой до метки и перемешивают. Раствор готовят непосредственно перед проведением анализа.
Реактив хранят в темном месте при температуре (20 ± 5) *С не более 2 ч.
4.4.3. Приготовление осадителя системы цинк-медь
В мерную колбу вместимостью 1000 см’ вносят (150.00 ± 0.05) серно-кислою цинка и (ЗО.(Н) ± 0.05) г серно-кислой меди, растворяют в дистиллированной воде, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемешивают.
4.4.4. Приготовление 3 моль/дм' раствора аммиака и определение его концентрации
В мерной колбе вместимостью 1000 см’ разбавляют 333 см' аммиака с массовой долей 25 % до метки дистиллированной водой.
Концентрацию раствора аммиака проверяют 0.2 моль/дм’ раствором соляной кислоты, используя в качестве индикатора раствор с массовой долей 0.1 % метилового оранжевого. В коническую колбу вносят 1 см’ исследуемого раствора аммиака. 50 см' дистиллированной воды. 1—2 капли индикатора, перемешивают и титруют 0.2 моль/дм’ соляной кислотой. Концентрацию аммиака устанавливают но формуле
А'=0.2 А.
где К — молярная концентрация исследуемого раствора аммиака, моль/дм’;
0.2 — молярная концентрация соляной кислоты, моль/дм’;
А — объем израсходованной на ти трование соляной кислоты, см’.
Раствор аммиака хранят в плотно закупоренной посуде. Перед взятием аммиака содержимое бутылки перемешивают.
4.5. Проведение а н а л и з а
4.5.1. Приготовление опытной пробы
Исследуемое молоко или сливки вносят но 1 см’ в три пробирки. В одну из пробирок с молоком или сливками добавляют К) см’ раствора динатриевой cam феннлфосфорной кислоты и 4-аминоантн-
пирина. перемешивают, помешают в водяную баню или ультратермостат с температурой (36 ± 1) *С. Через одинаковые промежутки времени, например 1 мин. вышеуказанную операцию проводят последовательно с остальными двумя пробирками. Продолжительность выдерживания каждой из трех пробирок в водяной бане или ультратермостате, контролируемая но секундомеру, составляет 90 мин. Затем вносят из бюретки вместимостью 25 см’ или отмеривают пипеткой по 1 см’ осадителя системы цинк-медь. 0.6 см’ раствора с концентрацией аммиака 3 моль/дм' через те же промежутки времени, как и при смешивании с раствором соли фенилфосфорной кислоты и 4-аминоантипирина, перемешивают после добавления каждого реактива, фильтруют и выдерживают 60 мин при температуре (20 ± 5) *С.
4.5.2. Приготовление контрольной пробы
Контрольную пробу готовят следующим способом: в три пробирки вносят по 10 см* раствора динагриевой соли фенилфосфорной кислоты и 4-аминоантипирина. выдерживают подобно опытным пробам при температуре (36 ± I) *С 90 мин. Пробирки вынимают из водяной бани или улыратсрмос-тата. добавляют по 1 см' осадителя системы цинк-медь, I см' исследуемых молока или сливок и 0.6 см' раствора с концентрацией аммиака 3 моль/дм* (перемешивание выполняют посте каждой добавки), фильтруют и выдерживают 60 мин при температуре (20 ± 5) *С.
Во избежание попадания в содержимое пробирок постороннего фенола пробирки типа П2 закрывают фольгой. перемешивание выполняется 2-кратным переворачиванием пробирок на 180’ и возвращением ох в исходное наложение.
4.6. Оценка результатов
При потной инактивации кислой фосфатазы в молоке тын сливках окраска опытных проб нс отличается от окраски контрольных проб. Следовательно, молоко и сливки подвергались пастеризации при температуре 85 "С с выдержкой не менее 30 мин. 90 *С с выдержкой не менее 5 мин и кипячению; сливки подвергались термической обработке при температуре 103 *С с выдержкой 15—20 с.
В зависимости от активности кислой фосфатазы в молоке и сливках окраска опытных проб изменяет цвет от слабо-розового (но более яркого, чем окраска контрольных проб) до темно-вишневого. Следовательно, наличие активности кисюй фосфатазы свидетельствует о несоблюдении режимов термической обработки.
