Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

35 страниц

319.00 ₽

Купить МУ 1.2.2741-10 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Методические указания устанавливают требования к методам отбора от лабораторных животных проб биологических материалов, предназначенных для определения абиогенных (техногенных) и биогенных наночастиц и наноматериалов искусственного происхождения с учетом данных о путях поступления наноматериалов в организм и предполагаемых органах, в которых может происходить их накопление.

Требования, изложенные в настоящих методических указаниях, применяются в ходе проведения исследований по оценке безопасности наночастиц и наноматериалов искусственного происхождения в целях принятия решений по оценке рисков, связанных с воздействием наночастиц и наноматериалов на организм человека.

Методические указания разработаны с целью обеспечения единства методов и средств отбора проб в ходе оценки безопасности наноматериалов и нанотехнологий для состояния здоровья человека и компонентов естественных биоценозов.

Методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы научно-исследовательскими организациями гигиенического профиля, медицинскими учебными заведениями и иными организациями и учреждениями, проводящими исследования по оценке безопасности наноматериалов.

  Скачать PDF

Оглавление

1. Область применения

2. Нормативные ссылки

3. Общие положения

     3.1 Цель и назначение пробоотбора

     3.2 Требования к организации, осуществляющей отбор проб

     3.3 Перечень объектов и материалов, подлежащих пробоотбору

     3.4 Соблюдение правил надлежащей лабораторной практики

     3.5 Соблюдение мер конфиденциальности

     3.6 Организация защиты проб от несанкционированных внешних воздействий

     3.7 Ответственность организации, производящей отбор проб

4. Технология (процедура) пробоотбора

     4.1 Составление плана (схемы) отбора проб

     4.2 Протоколирование отбора проб

     4.3 Меры по обеспечению репрезентативности пробоотбора

     4.4 Методы гуманной эвтаназии животных

     4.5 Методы препарирования биологического материала для определения биогенных наноматериалов (рекомбинантные вирусы, рекомбинантные вирусные белки, псевдовирусные частицы)

     4.6 Методы препарирования биологического материала для определения наночастиц неорганического происхождения

     4.7 Фиксация (консервация) биологических проб для определения наноматериалов

     4.8 Количество отбираемых проб биологического материала

     4.9 Порядок отбора точечной, объединённой, средней, лабораторной, контрольной проб биологического материала

     4.10 Меры предосторожности при введении наноматериалов в животных, эвтаназии, препарировании биоматериала, отборе и консервации проб

     4.11 Возможные нештатные ситуации в ходе отбора проб биологических материалов и меры по их устранению

5. Транспортирование и хранение биологических образцов

     5.1 Требования к таре для транспортирования

     5.2 Требования к транспортным средствам

     5.3 Требования к хранилищу (банку) биологических образцов

     5.4 Температурный режим, допустимая длительность транспортирования

     5.5 Допустимые сроки хранения биологических образцов

     5.6 Признаки, свидетельствующие о порче (непригодности) биологических образцов

Приложение 1. Типовой акт отбора проб для выявления и идентификации наноматериалов в лабораторных животных

Приложение 2. Термины и определения

Приложение 3. Обозначения и сокращения

Показать даты введения Admin

Нормативные ссылки

Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16
Стр. 17
стр. 17
Стр. 18
стр. 18
Стр. 19
стр. 19
Стр. 20
стр. 20
Стр. 21
стр. 21
Стр. 22
стр. 22
Стр. 23
стр. 23
Стр. 24
стр. 24
Стр. 25
стр. 25
Стр. 26
стр. 26
Стр. 27
стр. 27
Стр. 28
стр. 28
Стр. 29
стр. 29
Стр. 30
стр. 30

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека


Государственная система санитарно - эпидемиологического нормирования Российской Федерации


НОРМАТИВНЫХ И МЕТОДИЧЕСКИХ ДОКУМЕНТОВ

[о:фициальтнЩ

111111111 III 111111111111111111


БЮЛЛЕТЕНЬ

УЧРЕДИТЕЛИ

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора

РЕДАКЦИОННАЯ КОЛЛЕГИЯ

Главный редактор Г. Г. Онищенко

Е. Н. Беляев,

А. И. Верещагин,

Л. П. Гульченко,

С. И. Иванов,

Г. Ф.Лазикова,

С. С. Перель,

Г. С. Перминова,

М.П. Шевырева,

Н. В. Шестопалов

РЕДАКЦИОННЫЙ СОВЕТ

A.    X. Агиров (Майкоп),

Г. В. Айдинов (Ростов-на-Дону),

B.    А. Алешкин (Москва),

А. А. Баранов (Москва),

Н. Н. Верещагин (Оренбург),

A.    Л. Гинцбург (Москва),

B.    В.'Губернаторова (Иваново),

B.    И. Евдокимов (Белгород),

Н.А. Забродин (Ижевск),

A.    И. Зайченко (Москва),

Н. Ф. Измеров (Москва),

О. Л. Гавриленко (Московская область), И. В. Корабельников (Сыктывкар),

C.    В. Куркатов (Красноярск),

Г. И. Куценко (Москва),

B.    Р. Кучма (Москва),

Б. В. Лимин (Вологда),

Г. Д. Минин (Уфа),

Б. И. Никонов (Екатеринбург),

B.    И. Покровский (Москва),

A.    И. Потапов (Москва),

Ю.А. Рахманин (Москва),

C.    И. Савельев (Липецк),

И. П. Салдан (Барнаул),

B.    Р. Саухат (Магадан),

В. П. Сергиев (Москва),

В. А. Тутельян (Москва),

Н. Н. Филатов (Москва),

В. П. Чащин (Санкт-Петербург),

М. И. Чубирко (Воронеж),

М. Г. Шандала (Москва)

НОРМАТИВНЫХ И МЕТОДИЧЕСКИХ ДОКУМЕНТОВ

ГОССАНЭПИДНАДЗОРА

Выпуск 1 (43), март 2011

Издается с 2000 г.

НОРМАТИВНЫЕ

ПРАВОВЫЕ

АКТЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ

ДОКУМЕНТЫ

Зарегистрирован Министерством Российской Федерации

по делам печати, телерадиовещания и средств массовых коммуникаций

Номер регистрационного свидетельства 77—1525

Подписано в печать 11.03.11

Формат 60x88/8, печ. л. 18,0, заказ 4457    , тираж 1000 экз.

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей

и благополучия человека

127994, Москва, Вадковский пер., д. 18, стр. 5, 7

Оригинал-макет подготовлен к печати отделом издательского обеспечения

Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а

Подписка на Бюллетень нормативных и методических документов госсанэпиднадзора принимается во всех почтовых отделениях России. Подписной индекс в каталоге агентства «Роспечать» «Газеты. Журналы» — 79682


Отделение реализации, тел./факс 952-5089 E-mail: edit@fcgsen.ru


Адрес редакции:

© Роспотребнадзор, 2011

© Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011

117105, Москва, Варшавское ш., 19а Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора

МЕТОДИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Перечень биологических материалов, отбираемых с целью определения наночастиц и наноматериалов, может изменяться по указанию организации, проводящей анализ наноматериалов в образцах, в зависимости от предполагаемой локализации исследуемого наноматериала в организме и используемых методов анализа.

3.3.2.    Общими требованиями к биологическому материалу являются максимальная концентрация исследуемого наноматериала в образце, а также отсутствие нежелательных примесей, которые могут вызвать искажение результатов проводимых

АНАЛИЗОВ.

3.3.3.    Методы, применяемые при отборе проб биологических материалов, их консервации, транспортировании и хранении, должны исключать или сводить к минимуму возможные изменения физико-химического состояния наночастиц и наноматериалов, присутствующих в образцах.

3.3.4.    Для исследований методом ПЦР кровь должна быть нативной (не свернувшейся), в связи с чем ее собирают в пробирки с. антикоагулянтом ЭДТА.

Важно: гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя, т. к. он является ингибитором ПЦР!

3.4. Соблюдение правил надлежащей лабораторной практики

3.4.1.    В процессе отбора проб для характеристики действия наноматериалов в лабораторных животных необходимо руководствоваться правилами надлежащей лабораторной практики в соответствии с положениями приказа Минздрава России от 19 июня 2003 г. № 267.

3.4.2.    Соблюдение правил надлежащей лабораторной практики обеспечивает:

•    надлежащее качество процедуры пробоотбора;

•    документальное сопровождение всех этапов пробоотбора;

•    совместимость различных методов пробоотбора между собой и отсутствие неконтролируемых влияний процедур пробоотбора на количество и физикохимическое состояние определяемых наноматериалов;

•    репрезентативность отбираемых проб;

•    гуманное обращение с лабораторными животными.

3.4.3.    Соблюдение правил надлежащей лабораторной практики применительно к процедурам отбора биологических образцов включает:

•    назначение руководителем организации лиц, ответственных за мониторинг качества и репрезентативности отбираемого биологического материала (из числа сотрудников, не участвующих в исследовании);

•    систему регистрации отбираемых образцов, их хранение и транспортирование в условиях, исключающих возможность порчи, изменения физико-химических свойств анализируемых наноматериалов;

•    наличие и соблюдение стандартных операционных процедур (СОП) на все производственные операции, включая: составление списка (перечня) отбираемых проб, отбор, идентификацию, маркировку, предварительную обработку проб, использование и хранение исследуемых веществ; обслуживание и градуировку средств измерения (весов, пипеток, дозаторов), применяемых при пробоотборе; приготовление реактивов, кормов; протоколирование отбора проб; обслуживание помещений; обезвреживание или утилизацию биологических образцов (если это необходимо); ликвидацию последствий нештатных ситуаций;

•    наличие средств измерений, прошедших поверку (калибровку) в установленном порядке;

•    эксплуатацию оборудования в соответствии с техническим паспортом и инструкцией по применению, регулярную фиксацию результатов поверки средств измерений и текущего ремонта оборудования в специальном журнале;

120

МЕТОДИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

•    наличие помещения для лабораторных животных (вивария), обеспечивающего изоляцию (карантин) поступающих животных, больных животных и животных, подозреваемых в носительстве инфекций; позволяющего осуществлять раздельное содержание различных видов животных и животных одного вида, которым были введены различные наноматериалы; соответствующего санитарно-эпидемиологическим и ветеринарным требованиям;

•    наличие отдельных помещений, инвентаря и оборудования для приготовления кормов для лабораторных животных, а также для работы с опасными для здоровья и жизни человека объектами исследования, соответствующих установленным санитарно-эпидемиологическим требованиям.

3.5. Соблюдение мер конфиденциальности

3.5.1.    Сотрудники, принимающие участие в процессе отбора проб для выявления наноматериалов в лабораторных животных, обязаны соблюдать конфиденциальность в отношении любых данных, полученных в ходе процедуры отбора проб, в соответствии с законодательством Российской Федерации.

3.5.2.    Организация, уполномоченная на проведение пробоотбора для выявления и идентификации наноматериалов в лабораторных животных, должна обеспечить конфиденциальность полученных в ходе пробоотбора данных и результатов в рамках принятых ею обязательств и в соответствии с законодательством Российской Федерации.

3.6 Организация защиты проб от несанкционированных внешних воздействий

3.6.1.    Организация, уполномоченная на проведение пробоотбора для выявления и идентификации наноматериалов в лабораторных животных, должна обеспечить их защиту от несанкционированных внешних воздействий.

3.6.2.    Контейнер с пробой необходимо запечатать либо упаковать в сейф-пакет, опломбировать или опечатать его таким способом, чтобы не допустить несанкционированного вскрытия пробы или чтобы несанкционированное вскрытие легко определялось.

3.7. Ответственность организации, производящей отбор проб

3.7.1.    Ответственность за качественный отбор проб, репрезентативность отобранной пробы, оформление документов на пробы и их сохранность, а также за соблюдение правил техники безопасности в процессе отбора проб несут организации, осуществляющие пробоотбор.

3.7.2.    Ответственность за сохранность проб и документации на пробы при перевозке, соблюдение правил техники безопасности при перевозке несут организации, осуществляющие перевозку проб.

IV. Технология (процедура) пробоотбора
4.1. Составление плана (схемы) отбора проб

4.1.1. План (схема) отбора проб составляется перед началом исследований и должен включать следующие данные:

•    наименование выявляемого наноматериала, оценка его потенциальной опасности согласно МР 1.2.2522—09, свойства наноматериала (согласно данным производителя (поставщика) продукции и (или) литературным данным);

•    вид отбираемых проб (исследуемого материала);

•    методику отбора проб;

121

МЕТОДИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

•    количество отбираемых проб;

•    инструкции по разделению отобранной пробы на части (выделению контрольной пробы при необходимости);

•    тип и характеристики тары для отбора проб;

•    расшифровку маркировки тары для отбора проб;

•    специальные меры предосторожности при работе с наноматериалами, соблюдение стерильности;

•    условия хранения и транспортирования проб;

•    инструкции по очистке и хранению оборудования для отбора проб, инактивации биоматериалов.

4.2. Протоколирование отбора проб

4.2.1.    Процедура отбора проб должна быть запротоколирована по окончании процесса. В протоколе (акте) отбора проб указывают:

•    название организации, производившей отбор проб;

•    фамилии сотрудников, проводящих отбор проб;

•    цель отбора пробы;

•    номер пробы;

•    наименование отбираемого биологического материала;

•    размер образца, единица измерения (объём или масса);

•    наименование введённого наноматериала;

•    дату введения наноматериала;

•    метод отбора пробы;

•    метод консервации пробы;

•    количество отобранных образцов (реплик пробы), в т. ч. лабораторных, контрольных;

•    дату и время отбора проб;

•    сведения о нумерации, опломбировании, опечатывании проб;

•    наименование лаборатории-получателя пробы;

•    перечень анализируемых компонентов в составе проб;

•    отметки о дополнительных сопроводительных документах (при необходимости);

•    способ отправки проб;

•    отметку о месте хранения контрольной пробы (при необходимости);

•    подписи сотрудников, осуществляющих отбор проб и их доставку в лабораторию, проводящую анализ наноматериалов.

4.2.2.    Протокол (акт) отбора проб составляется в двух экземплярах, один из которых остается в организации, производившей пробоотбор, а другой передается организации, осуществляющей проведение лабораторных исследований.

4.2.3.    При отборе однородных серийных проб возможно составление единого протокола (акта) на серию проб (образцов) с обязательным указанием порядка нумерации и общей численности индивидуальных проб.

4.3. Меры по обеспечению репрезентативности пробоотбора

4.3.1. Для медико-биологических исследований достоверными (достаточными) считаются доверительные границы, установленные с вероятностью безошибочного прогноза не менее 95 %. При этом вероятность выхода средней величины в генеральной совокупности за пределы доверительных границ будет равна или менее 5 %, т. е. уровень значимости - р < 0,05.

МЕТОДИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

В случае если тест проведен на N животных, для каждого из которых определено значение исследуемого фактора Х„ (содержания наноматериала в образце), принимают гипотезу о нормальном распределении фактора X. Далее рассчитывают среднее

_ И    1    и    -

по выборке X = Тх, и несмещенную выборочную дисперсию S = --~Е(Х,    -X)    .

,=i    N-1 )=1

метра Х() в интервале \x-t0025>ЛМ •—

В этом случае вероятность нахождения истинного значения исследуемого пара-

;^+'oo25,w-iравна 0,95, где ^025,w-i - коэффициент Стьюдента с N-1 степенью свободы для квантиля распределения, равного 0,025 (2,5 %).

Таким образом, число экспериментов N для определения доверительного интервала для истинного значения зависит не только от требуемой ширины интервала, но и от выборочной дисперсии для выборки Х„ которая может быть установлена опытным путём. Задаваясь величиной доверительного интервала (d) 10 % от выборочного среднего (X), определяют их фактические значения для выборки из 10 животных (N=9; t = 2,68), сравнивают с заданным соотношением, после чего в случае если d> 0,1Х, численность обследуемой группы животных увеличивают.

4.3.2. Количество животных, используемых в эксперименте, должно быть минимальным, однако достаточным для получения статистически достоверных результатов. Численность экспериментальной группы животных определяется в соответствии с п. 4.5.1. Для снижения числа животных в группе следует добиваться минимальной дисперсии определяемого показателя, для чего использовать животных высокого качества, свободных от специфических патогенов (SPF) и (применительно к мелким лабораторным животным) принадлежащих к определённой генетической линии.

4.4. Методы гуманной эвтаназии животных

4.4.1.    Эвтаназию лабораторных животных проводят в соответствии с приказом Министерства здравоохранения СССР от 12 августа 1977 г. № 755 «О мерах по дальнейшему совершенствованию организационных форм работы с использованием экспериментальных животных». Исполнителем должен быть обеспечен контроль за соблюдением правовых и этических норм использования лабораторных животных при проведении забоя животных и отбора проб.

4.4.2.    Оптимальным и универсальным методом эвтаназии животных является 3-кратная передозировка наркоза. Допускается эвтаназия мелких животных с помощью ингаляционного наркоза (хлороформ или эфир) без предварительного введения других видов анестетиков.

4.4.3.    Умерщвление и вскрытие животных проводят в отдельном специально оборудованном помещении (секционной) в пределах клиники лабораторных животных (вивария). Манипуляции с животными должны исключать возможность продолжительных стрессорных воздействий. Следует производить манипуляции с животными таким образом, чтобы этого не могли наблюдать остальные животные.

4.5. Методы препарирования биологического материала для определения биогенных наноматериалов (рекомбинантные вирусы, рекомбинантные вирусные белки, псевдовирусные частицы)

4.5.1. При отборе проб следует использовать следующее основное и вспомогательное лабораторное оборудование:

• ламинарный шкаф биологической безопасности класс II с вертикальным восходящим потоком воздуха БОВ-ОО1-АМС («Миасский завод медицинского оборудования», Россия) или аналогичный;

123

МЕТОДИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

•    облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 по ТУ 16-535—84;

•    холодильник бытовой электрический по ГОСТ 26678-85;

•    морозильная камера, обеспечивающая температуру -20 °С или ниже (фирмы «Vestfrost», Дания или аналогичная);

•    льдогенератор (SD18 фирмы «Simag», Италия или аналогичный);

•    центрифуга со скоростью вращения ротора до 12 ООО об./мин и охлаждением для пробирок вместимостью 1,5 и 0,5 см3 (5 415 R фирмы «Eppendorf,>>, ФРГ или аналогичная);

•    встряхиватель вибрационный типа «Вортекс» со скоростью вращения до 3 ООО об./мин (V3 фирмы «ElmiLtd», Латвия или аналогичный);

•    весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с погрешностью взвешивания не более 0,001 г по ГОСТ 24104-2001;

•    твердотельный термостат для пробирок объёмом 1,5 см3 с диапазоном рабочих температур 25—100 °С (Термит, «ДНК-Технология», Россия или аналогичный);

•    пластина для манипуляций с мелкими грызунами (мышами) (из пробки или пенопласта);

•    хирургический столик для мелких животных (крысы, морские свинки);

•    булавки или иглы для фиксации животных на препаровальном столике;

•    пинцет медицинский ГОСТ 21241-89;

•    ножницы медицинские по ГОСТ 21239-93;

•    скальпель по ГОСТ 30393-95 (возможно использование скальпеля со съёмными лезвиями);

•    резиновые груши для пипетирования биологического матариала;

•    дозаторы с переменным объёмом дозирования фирмы «Gilson», США: о 0,2—2,0 мм3 с шагом 0,01 мм3, с точностью ± 1,2 %;

о 2—20 мм3 с шагом 0,01 мм3, с точностью ± 0,8 %; о 1—10 см3 с шагом 0,1 см3, с точностью ± 0,5 %;

•    дозаторы «Ленпипет» по ТУ 9452-002-33189998—2007: о 0,5—10,0 мм3 с шагом 0,01 мм3, с точностью ± 0,8 %; о 20—200 мм3 с шагом 0,1 мм3, с точностью ± 0,6 %;

о 100—1 000 мм3 с шагом 1 мм3, с точностью + 3 %;

•    цилиндры стеклянные мерные лабораторные разной вместимости, колбы конические разной вместимости по ГОСТ 1770—74Е;

•    сосуды Дьюара по ГОСТ 12.2.003-91, ГОСТ 12.2.052-81, ГОСТ 12.1.004-91, ТУ 26-04-622—88.

Примечание: Для вскрытия желательно использовать два набора инструментов - для разрезания кожи и для взятия кусочков органов.

4.5.2. При отборе проб следует применять следующие реактивы и расходуемые материалы:

•    хлороформ по ГОСТ 20015-88;

•    диэгиловый эфир (эфир для наркоза стабилизированный) по ТУ 2600-001-43852015—05;

•    спирт этиловый ректификованный медицинский по ГОСТ Р 51652-2000;

•    азот жидкий по ГОСТ 9293-74;

•    изотонический раствор натрия хлорида (0,9 г/л хлористого натрия по ГОСТ 4233—77);

•    дистиллированная вода по ОСТ 11-029.003—80;

•    транспортная среда для биологических тканей (0,218 М сахароза по ГОСТ 5833—75, 0,0038 М калий фосфорно-кислый однозамещенный по ГОСТ 4198-75,

124

МЕТОДИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

0,0072 М калий фосфорно-кислый двухзамещенный по ГОСТ 2493-75, 1 % БСА по ТУ 6-09-10-342—90);

•    глицериновая смесь (2 л изотонического раствора, 1 л глицерина по ГОСТ 6259—75 и 20 % раствор фосфорно-кислого натрия двухзамещенного по ГОСТ 4172—76, pH довести до 7,8—8,0. Стерилизуют при давлении 0,5 атмосфер в течение 15—30 мин. После стерилизации pH должен быть 7,8);

•    фосфатная буферная смесь: на 1 л дистиллированной воды берут 0,45 г калия фосфорно-кислого однозамещенного по ГОСТ 4198-75 и 5,34 г калия фосфорнокислого двухзамещенного по ГОСТ 2493-75. Стерилизуют при давлении 1 атмосфера в течение 30 мин;

•    транспортная среда ESP, содержащая: саркозил 1 % (фирма «Amresco», США или аналогичный); ЭДТА 0,05 М (фирма «Sigma», США или аналогичная); свободная от нуклеаз проназа Е 1 мг/см3 (фирма «Sigma», США или аналогичная);

•    пробирки для микропроб однократного применения типа «Эппендорф» вместимостью 0,5, 1,5 и 2,0 см3 по ТУ 64-2-300—80;

•    криопробирки вместимостью 2,0 см3;

•    штативы для пробирок;

•    наконечники пластиковые объемом 1—200 мм3 и 200—1 000 мм3 с фильтром;

•    бакпечатки однократного применения по ТУ 64-2-279-—79;

•    пастеровские пипетки, воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

•    перчатки хирургические резиновые по ГОСТ 3-88;

•    термоконтейнеры различной вместимости или медицинская сумка-холодильник;

•    сейф-пакеты одноразовые для хранения и транспортирования проб.

4.5.3.    Кровь собирают асептически с использованием одноразовых инструментов, у крупных животных (кроликов, собак, птиц и т. д.) путем венопункции, у мелких животных (мышей, крыс) - из кончика хвоста или из сердца, в случае вскрытия животных, в стерильную пробирку (1,5—2 см3) с антикоагулянтом ЭДТА (гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя!). Плазму получают центрифугированием цельной крови в течение 20 мин при 3 000 об./мин.

Для выявления и идентификации наноматериалов в крови лабораторных животных методом ИФА приготавливают пробы сывороток: кровь отстаивают 0,5—1 ч в термостате при температуре 37 °С для формирования фибринового сгустка (не превратившийся в фибрин фибриноген может стать источником ложнопозитивных результатов), затем центрифугируют 10 мин при 1 200 g. Образовавшуюся прозрачную, без признаков гемолиза, сыворотку отбирают с помощью пипетки в отдельные чистые пробирки (1,5—2,0 см3).

Клетки крови (лейкоцитарную фракцию цельной крови, лейкоцитарную пленку) для выявления лейкотропных псевдовирусных наночастиц следует отбирать после центрифугирования цельной крови и удаления плазмы. Лейкоцитарную массу собирают с поверхности осадка клеток и переносят в стерильную пробирку объемом 1,5—2,0 см3.

4.5.4.    Другие жидкости организма (лимфа, спинномозговая жидкость, желчь) отбирают при помощи пункции стерильными иглами, либо пастеровскими пипетками в стерильные одноразовые пробирки объемом 1,5—2,0 см3.

4.5.5.    Соскобы осуществляют с помощью специальных стерильных.одноразовых инструментов - зондов, цитощеток или тампонов, .после чего рабочую часть зонда помещают в транспортную среду производителя набора для выделения нуклеиновых кислот. Согласно рекомендациям производителя рабочую часть зонда удаляют из пробирки либо обламывают и оставляют в транспортной среде, плотно закрыв крышку пробирки.

125

МЕТОДИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

4.5.6.    Смывы из носоглотки приготавливают путем введения с помощью одноразового шприца или зонда теплого стерильного изотонического раствора натрия хлорида в носовые ходы. Промывную жидкость собирают в стерильную пробирку.

4.5.7.    Мазки берут сухими стерильными ватными тампонами на пластиковой основе вращательными движениями. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда) помещают в стерильную одноразовую пробирку со специальной транспортной средой и аккуратно обламывают, пробирку плотно закрывают крышкой.

4.5.8.    Пробу фекалий отбирают отдельным наконечником с фильтром или одноразовыми лопатками, переносят в специальный стерильный флакон или бакпечатку. У мелких животных пробы фекалий отбирают при вскрытии в аспептических условиях из толстого отдела кишечника. Из твердых фекалий готовят фекальную суспензию, смешивая 0,8 см3 фосфатного буфера (или стерильного изотонического раствора натрия хлорида) с 0,1 г (0,1 см3) фекалий и тщательно ресуспендируя на вортексе до образования гомогенной суспензии. Для длительного хранения к суспензии добавляют глицерин до конечной концентрации 10—15 %.

Для выделения ДНК или РНК используют осветленный экстракт фекалий, который приготавливают из фекалий водянистой консистенции, свежей суспензии фекалий или суспензии, подвергавшейся замораживанию с глицерином. Взвесь фекалий интенсивно гомогенизируют на вортексе, осветляют путем центрифугирования при 10 000 g в течение 5 мин. В стерильную пробирку отбирают супернатант.

4.5.9.    Аутопсию лабораторных животных производят в специально оборудованном помещении, которое полностью соответствует санитарно-гигиеническим требованиям к помещениям данного назначения. Все инструменты должны пройти антисептическую обработку в соответствии с правилами надлежащей лабораторной практики. Стеклянную посуду, соприкасающуюся с пробами, предварительно тщательно моют и стерилизуют одним из следующих способов: насыщенным паром в автоклаве в течение 30 мин при 1^0 °С; горячим воздухом в стерилизаторе (сухожаровом шкафу) 30 мин при 100 °С. Допускается стерилизация инструментов погружением в этиловый спирт. Для обеззараживания рук и рабочих поверхностей необходимо использовать латексные, перчатки и 70 % этиловый спирт-ректификат. Одноразовая пластиковая стерильная посуда в неповрежденной упаковке дополнительной стерилизации не требует.

Кусочки тканей или органов отбирают методом биопсии либо при вскрытии животных стерильными инструментами. Предпочтительно использование одноразовых инструментов; многоразовые хирургические инструменты освобождают от загрязнения следами нуклеиновых кислот путём обеззараживания автоклавированием (/132 + 2/ °С, 0,2 МПа, 60 мин) или кипячением (100 °С, 30 мин). Необходимость отбора проб каждого из органов определяют по предположительной локализации исследуемого наноматериала.

Отобранные образцы тканей и органов помещают в стерильные пробирки или флаконы с транспортной средой согласно рекомендациям фирм-изгоговителей наборов для определения нуклеиновых кислот. Возможно также использование охлажденного изотонического раствора хлорида натрия либо замораживание проб в жидком азоте.

Отбор проб необходимо производить начиная с контрольной группы животных, во избежание контаминации проб исследуемой ДНК (РНК) от опытной группы животных.

4.6. Методы препарирования биологического материала для определения наночастиц неорганического происхождения

4.6.1. При отборе проб следует использовать следующее основное и вспомогательное лабораторное оборудование:

•    холодильник бытовой электрический по ГОСТ 26678-85;

•    морозильная камера, обеспечивающая температуру -200 °С или ниже (фирма «Vestfrost», Дания или аналогичная);

126

МЕТОДИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

•льдогенератор (SD18 фирма «Simag», Италия или аналогичный);

•    центрифуга со скоростью вращения ротора до 12 ООО об./мин и охлаждением для пробирок вместимостью 1,5 и 0,5 см3 (5 415 R фирма «Eppendorf», ФРГ или аналогичная);

•    встряхиватель вибрационный типа «Вортекс» со скоростью вращения до 3 ООО об./мин (V3 фирма «Elmi Ltd», Латвия или аналогичный);

•    весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с погрешностью взвешивания не более 0,001 г по ГОСТ 24104-2001;

•    твердотельный термостат для пробирок объёмом 1,5 см3 с диапазоном рабочих температур 25—100 °С (Термит, «ДНК-Технология», Россия или аналогичный);

•    pH-метр по ГОСТ 27987-88 или аналогичный;

•    пластина для манипуляций с мелкими грызунами (мышами) (из пробки или пенопласта);

•    хирургический столик для мелких животных (крысы, морские свинки);

•    пинцет медицинский ГОСТ 21241-89;

•    ножницы медицинские по ГОСТ 21239-93;

•    ножницы глазные по ГОСТ 21239-89;

•    скальпель по ГОСТ 30393-95 (возможно использование скальпеля со съёмными лезвиями);

•    резиновые груши для пипетирования биологического матариала;

•    сосуды Дьюара по ГОСТ 12.2.003-91, ГОСТ 12.2.052-81, ГОСТ 12.1.004— 91, ТУ 26-04-622—88;

•    термоконтейнеры различной вместимости или медицинская сумка-холодильник по ГОСТ Р 50444-92, ГОСТ Р 51350-99;

•    ультразвуковая ванна с выходной мощностью не менее 60 Вт и рабочей частотой не ниже 40 кГц.

4.6.2. При отборе проб следует применять следующие расходуемые материалы:

•    булавки или иглы для фиксации животных на препаровальном столике;

•    дозаторы с переменным объёмом дозирования фирмы «Gilson», США: о 0,2—2,0 мм3 с шагом 0,01 мм3, с точностью ±1,2 %;

о 2—20 мм3 с шагом 0,01 мм3, с точностью ± 0,8 %; о 1—10 см3 с шагом 0,1 см3, с точностью ± 0,5 %;

•    или дозаторы «Ленпипет» по ТУ 9452-002-33189998—2007: о 0,5—10,0 мм3 с шагом 0,01 мм3, с точностью + 0,8 %;

о 20—200 мм3 с шагом 0,1 мм3, с точностью ± 0,6 %; о 100—1 000 мм3 с шагом 1 мм3, с точностью ± 3 %;

•    пробирки для микропроб однократного применения типа «Эппендорф» вместимостью 0,5, 1,5 и 2,0 см3 по ТУ 64-2-30—80;

•    криопробирки вместимостью 2,0 см3;

•    штативы для пробирок;

•    наконечники пластиковые объемом 1—200 мм3 и 200—1 000 мм3;

•    цилиндры стеклянные мерные лабораторные разной вместимости, колбы конические разной вместимости по ГОСТ 1770—74Е; колбы плоскодонные конические на 250 см3 с НШ 29, тип КнКШ 250-29/32 по ГОСТ 10394-74; колбы мерные вместимостью 100, 500, 1 000 см3 тип 2-100-2, 2-500-2 по ГОСТ 1770-74; воронки лабораторные по ГОСТ 25336, иная посуда мерная лабораторная по ГОСТ 1770-74 и посуда лабораторная стеклянная по ГОСТ 25336-82;

•    перчатки хирургические резиновые по ГОСТ 3-88;

•    бритва фирмы «Ted Pella, Inc.» (США), кат. № 121-1 или аналогичная;

127

МЕТОДИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

•    чашки Петри по ГОСТ 25336-82;

•    флаконы стеклянные завинчивающиеся из темного стекла (вайл) объемом 10 см3;

•термоконтейнеры различной вместимости или медицинские сумки-

холодильники;

•    сейф-пакеты одноразовые для хранения и транспортирования проб.

4.6.3.    При отборе проб следует применять следующие реактивы:

•    хлороформ по ГОСТ 20015-88;

•    диэтиловый эфир (эфир д ля наркоза стабилизированный) по ТУ 2600-001-43852015—05;

•    спирт этиловый ректифицированный, 96 % по ГОСТ 51652-2000;

•    азот жидкий по ГОСТ 9293-74;

•деионизованная вода по ГОСТ 6709-79;

•    изотонический раствор натрия хлорида (0,9 г/л хлористого натрия по ГОСТ 4233—77);

•    глутаровый альдегид по ТУ 6-02-1273—89;

•    нейтральный формалин по ГОСТ 1625-75 или приготовленный в соответствии с ГОСТ 4517-87, п. 2.15;

•    раствор фосфорно-солевого буфера 0,04 М КН2Р04, 0,16 М К2НРО4, pH 7,2 - 7,4, 1,76 % КС1. Для приготовления раствора на лабораторных весах готовят навески 6,2 г КН2Р04 х Н20 (х.ч. по ГОСТ 4198-75), 33,65 г К2НР04 * ЗН20 (х.ч. по ГОСТ 2493— 75) и 17,4 г КС1 (х.ч., ГОСТ 4568-95) и вносят их в мерную колбу объемом 1 000 см3, содержащую 500 см3 дистиллированной воды. Соли растворяют при перемешивании, объем раствора доводят до 1 000 см3;

•    раствор для фиксации: 2,5 %-й раствор глутарового альдегида, 2 %-й раствор формалина на фосфатно-солевом буфере. Для приготовления 100 см3 раствора в мерную колбу вносят 50 см3 двухкратного раствора фосфатно-солевого буфера, 10 смкоммерческого препарата глутарового альдегида (25 % водный раствор) и 5 см3 коммерческого препарата формалина (40 % водный раствор). На pH-метре доводят pH буфера до 6,9 добавлением 1М НС1, далее объем раствора доводят до 100 см3.

4.6.4.    Кровь собирают асептически с использованием одноразовых инструментов, у крупных животных (крупного рогатого скота, овец, свиней, кроликов, собак, птиц и т. д.) путем венопункции, у мелких животных (мышей, крыс) - из кончика хвоста или из сердца, в случае вскрытия животных, в стерильную пробирку (1,5—2 см3), куда предварительно внесен раствор гепарина (10 ед./см) (для электронной микроскопии оптимально иметь не менее 30 мм3 сыворотки крови). После забора крови пробирки закрывают крышками и центрифугируют на небольшой скорости (до 2 000 g) в течение 10 с - 1 мин, чтобы сбросить капельки крови, осевшие на стенки пробирок, не дав им высохнуть.

4.6.5.    Процедуру отбора сыворотки следует начинать не позднее чем через 1,5 ч после отбора крови, чтобы избежать гемолиза. Для получения сыворотки кровь помещают в термостат (37 °С) на 30 мин, после чего центрифугируют в течение 10 мин на скорости 2 000 g. Отбирают сыворотку, не задевая тромба, в отдельную новую пробирку, которую маркируют соответствующим образом (с добавлением буквы «С» - сыворотка). Маркированные пробирки замораживают и хранят при температуре -20 °С.

4.6.6.    Процедуру отбора плазмы следует начинать непосредственно после отбора крови, чтобы избежать ее свертывания. Для получения плазмы в отобранную кровь добавляют гепарин (10 ед./см3). Пробирки с гепаринизированной кровью центрифугируют в течение 10 мин при скорости 2 000 g. Отбирают плазму, не задевая клеточный осадок, в отдельную пробирку, которую маркируют соответствующим образом (с добавлением буквы «П» - плазма). На пробирки с осадком клеток крови наносят марки-

МЕТОДИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

ровку «КК» - клетки крови. Маркированные пробирки замораживают и хранят при температуре -20 °С.

4.6.7.    Другие жидкости организма (лимфа, спинномозговая жидкость, желчь и др.) отбирают при помощи пункции одноразовыми шприцами в одноразовые пробирки объемом 1,5—2,0 см3. Пробирки маркируют, замораживают и хранят при температуре -20 °С.

4.6.8.    Соскобы осуществляют с помощью специальных одноразовых инструментов - зондов, цитощеток или тампонов, после чего рабочую часть зонда аккуратно обламывают и помещают в криопробирки с фосфатно-солевым буфером pH 7,2—7,4, плотно закрыв крышку. Каждая проба маркируется отдельно путем погружения в среду этикетки (надпись выполняется карандашом).

4.6.9.    Смывы из носоглотки приготавливают путем введения с помощью одноразового шприца или зонда теплого стерильного изотонического раствора натрия хлорида в носовые ходы. Промывную жидкость собирают в отдельную пробирку. Пробирки маркируют, замораживают и хранят при температуре -20 °С.

4.6.10.    Мазки берут сухими стерильными ватными тампонами на пластиковой основе вращательными движениями. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда) помещают в криопробирки с фосфатно-солевым буфером pH 7,2—7,4, плотно закрыв крышку. Каждая проба маркируется отдельно путем погружения в среду этикетки (надпись выполняется карандашом).

4.6.11.    Пробу фекалий отбирают отдельным наконечником или одноразовыми лопатками, переносят в специальный флакон. У мелких животных пробы фекалий отбирают при вскрытии в аспептических условиях из толстого отдела кишечника. Из твердых фекалий готовят фекальную суспензию, смешивая при помощи вибрационного встряхивателя 0,8 см3 фосфатно-солевого буфера (или стерильного изотонического раствора натрия хлорида) с ОД г (0,1 см3) фекалий до образования гомогенной взвеси. Для длительного хранения к суспензии добавляют глицерин до конечной концентрации 10—15 %.

4.6.12.    Аутопсию лабораторных животных производят в специально оборудованном помещении, которое полностью соответствует санитарно-гигиеническим требованиям к помещениям данного назначения. Все инструменты должны пройти антисептическую обработку в соответствии с правилами надлежащей лабораторной практики. Стеклянную посуду, соприкасающуюся с пробами, предварительно тщательно моют и стерилизуют одним из следующих способов: насыщенным паром в автоклаве в течение 30 мин при 120 °С; горячим воздухом в стерилизаторе (сухожаровом шкафу) 30 мин при 100 °С. Допускается стерилизация инструментов погружением в этиловый спирт. Для обеззараживания рук и рабочих поверхностей необходимо использовать латексные перчатки и 70 % этиловый спирт-ректификат. Одноразовая пластиковая стерильная посуда в неповрежденной упаковке дополнительной стерилизации не требует. Инструменты (скальпель, ножницы и пинцет), применяемые при вскрытии, и посуду многоразового использования, предназначенную для фиксации и хранения проб, дополнительно обрабатывают в ультразвуковой ванне с целью исключить вероятность перекрестного загрязнения образцов наночастицами.

Кусочки тканей или органов отбирают методом биопсии либо при вскрытии животных с использованием хирургических инструментов. При вскрытии животных в первую очередь отбирают кровь, поступающую к сердцу через нижнюю полую вену, чтобы избежать излияния крови в полости тела и исключить загрязнение тканей наночастицами в случае высокой их концентрации в крови. Затем последовательно выделяют тонкий и толстый кишечник, желудок, почки, печень, селезенку, легкие, сердце, аорту, брыжеечные, подмышечные и другие лимфатические узлы, после вскрытия че-

129

СОДЕРЖАНИЕ


НОРМАТИВНЫЕ ПРАВОВЫЕ АКТЫ


Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы в дошкольных организациях: СанПиН 2.4.1.2660-10..........................


Гигиенические требования к одежде для детей, подростков и взрослых. Доп. и изм. 1 к СанПиН 2.4.7/1.1.1286—03: СанПиН 2.4.7/ 1.1.2651-10 ...................................


73


МЕТОДИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ


Порядок отбора проб для выявления и идентификации наноматериалов в лабораторных животных: МУ 1.2.2741 —10.........


113


репной коробки животного - головной мозг. Необходимость отбора проб каждого из органов определяют по предположительной локализации исследуемого наноматериала.

Выделенный орган с помощью пинцета немедленно помещают в чашку Петри с фосфатно-солевым буфером pH 7,2—7,4 и промывают от крови. Желудок и кишечник освобождают от содержимого и тщательно промывают водой, а затем фосфатносолевым буфером pH 7,2—7,4. В зависимости от цели исследования органы переносят в соответствующие фиксирующие жидкости или замораживают в жидком азоте или с помощью сухого льда.

4.6.13.    Для приготовления срезов тканей для электронной микроскопии орган разрезают острой бритвой на куски размером 1 х 1 х 1 мм (6 кусков от одного органа одного животного). Куски пинцетом переносят в пенициллиновые флаконы с фиксатором (2,5 % глутаровый альдегид на 0,1 М фосфатно-солевом буфере pH 7,2—7,4 с добавлением 2 % нейтрального формалина) из расчета 4 см3 на один флакон. Из разных отделов желудка и кишечника вырезают кусочки площадью 1 мм2 (объемом не более 1 мм3), переносят в пенициллиновые флаконы с фиксатором. Органы желудочно-кишечного тракта и кожи требуют ориентации при фиксации. Для этого поперечные срезы кожи и определенных отделов желудочно-кишечного тракта прикладывают на небольшие кусочки бумаги и в таком виде помещают в фиксатор. Отношение объема фиксатора к фиксируемой ткани должно быть не менее 10 : 1. Пробы из'одного органа от одного животного помещают в один флакон. Каждый флакон маркируют специальным химически стойким маркером или восковым карандашом либо приклеивают бумажную этикетку, запись на которой делают карандашом. На этикетке необходимо указывать номер животного и название органа, а также вид анализа, для которого подготовлена проба. Возможно длительное (до 2 месяцев) хранение образцов в фиксаторе при температуре 4 °С. Нельзя допускать замораживание образцов, т. к. образующиеся кристаллы льда разрушают ткани.

4.6.14.    Для приготовления тканевых гомогенатов для электронной микроскопии из органов вырезаются фрагменты размером от 5 х 5 х 5 мм до 10х Ю х 10 мм, фрагменты большего размера предпочтительнее, небольшие органы или органы мелких животных можно фиксировать целиком. Органы или их фрагменты помещают в криопробирки с фосфатно-солевым буфером pH 7,2—7,4, плотно закрыв крышку. Каждая проба маркируется отдельно путем погружения в среду этикетки (надпись выполняется карандашом).

4.6.15.    Отобранные пробы соскобов, мазков, фекалий, кусочков органов и тканей замораживают погружением в жидкий азот, заключенный в морозоустойчивом теплоизолированном сосуде с широким горлом. Каждую пробу после замораживания быстро заворачивают в фольгу. Пробы от разных органов помещают раздельно и снабжают этикетками с названиями этих органов, пробы от одного животного помещают в общую упаковку и погружают в сосуд Дьюара или термос с жидким азотом для кратковременного хранения или транспортирования. Также можно использовать колотый сухой лед в морозоустойчивой термоизолирующей (например, пенопластовой) емкости.

Для длительного хранения препараты извлекают из жидкого азота и помещают в низкотемпературный холодильник с температурой не выше - 80 °С. В таких условиях пробы могут храниться в течение неограниченного времени.

4.7. Фиксация (консервация) биологических проб для определения наноматериалов

4.7.1. Пробы фекальных масс собирают в стерильную одноразовую посуду (бак-печатки) с консервантом или используют специальные транспортные системы, содержащие консерванты (транспортные среды). В качестве консервантов (транспортных сред) используют глицериновую смесь, фосфатно-солевой буфер.

1.2. ГИГИЕНА, ТОКСИКОЛОГИЯ, САНИТАРИЯ


Порядок отбора проб для выявления и идентификации наноматериалов в лабораторных животных


Методические указания МУ 1.2.2741—10


МЕТОДИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

1.    Авторский коллектив: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Г. Г. Онищенко, И. В. Брагина, Т. Ю. Завистяева); Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт питания РАМН (В. А. Тутельян, И. В. Гмошинский, С. А. Хотимченко, Е. А. Арианова, В. В. Бессонов, М. М. Гап-паров, Р. В. Распопов, О. Н. Тананова, В. В. Смирнова, А. А. Шумакова, О. И. Передеряев); Государственное учебно-научное учреждение Биологический факультет Московского государственного университета им. М. В. Ломоносова (М. П. Кирпичников, К. В. Шайтан, А. П. Бонарцев, А. В. Феофанов, Д. В. Багров, В. В. Воинова, О. В. Самсонова); Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика Н. Ф. Гамалеи РАМН (А. Л. Гинцбург, Б. С. Народицкий, М. М. Шмаров, Д. Ю. Логунов, Л. В. Черенова И. Л. Тутыхина); Федеральное государственное унитарное предприятие «Всероссийский научно-исследовательский институт метрологической службы» (ФГУП ВНИИМС) (С. А. Кононогов, С. С. Голубев); Учреждение Российской Академии наук Институт биохимии им. А. Н. Баха (ИНБИ РАН) (В. О. Попов, Б. Б. Дзантиев, А. В. Жердев, И. В. Сафенкова, О. Д. Гендриксон); Учреждение Российской академии наук Центр «Биоинженерия» РАН (К. Г. Скрябин, О. А. Зейналов, Н. В. Равин, С. П. Комбарова); ООО «Интерлаб» (А. Н. Веденин, Г. В. Казыдуб). Разработаны в рамках Федеральной целевой программы «Развитие инфраструктуры наноиндустрии в Российской Федерации на 2008—2010 гг.».

2.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 23 сентября 2010 г.

3.    Введены в действие с 10 октября 2010 г.

4.    Введены впервые.

114

Содержание

I. Область применения...................................................................................................................................116

И. Нормативные ссылки.................................................................................................................................116

III.    Общие положения.....................................................................................................................................119

3.1.    Цель и назначение пробоотбора......................................................................................119

3.2.    Требования к организации, осуществляющей отбор проб............................................119

3.3.    Перечень объектов и материалов, подлежащих пробоотбору......................................119

3.4.    Соблюдение правил надлежащей лабораторной практики...........................................120

3.5.    Соблюдение мер конфиденциальности...........................................................................121

3.6.    Организация защиты проб от несанкционированных внешних воздействий................121

3.7.    Ответственность организации, производящей отбор проб...........................................121

IV.    Технология (процедура) пробоотбора..................................................................................................121

4.1.    Составление плана (схемы) отбора проб........................................................................121

4.2.    Протоколирование отбора проб.......................................................................................122

4.3.    Меры по обеспечению репрезентативности пробоотбора............................................122

4.4.    Методы гуманной эвтаназии животных.........................................................................123

4.5.    Методы препарирования биологического материала для определения

биогенных наноматериалов (рекомбинантные вирусы, рекомбинантные вирусные белки, псевдовирусные частицы)..................................................................123

4.6.    Методы препарирования биологического материала для определения

наночастиц неорганического происхождения...............................................................126

4.7.    Фиксация (консервация) биологических проб для определения

наноматериалов................................................................................................................130

4.8.    Количество отбираемых проб биологического материала...........................................131

4.9.    Порядок отбора точечной, объединённой, средней, лабораторной,

контрольной проб биологического материала..............................................................132

4.10.    Меры предосторожности при введении наноматериалов в животных,

эвтаназии, препарировании биоматериала, отборе и консервации проб.................132

4.11.    Возможные нештатные ситуации в ходе отбора проб биологических

материалов и меры по их устранению....................................... 134

V.    Транспортирование и хранение биологических образцов.........................................................135

5.1.    Требования к таре для транспортирования....................................................................135

5.2.    Требования к транспортным средствам..........................................................................136

5.3.    Требования к хранилищу (банку) биологических образцов.........................................136

5.4.    Температурный режим, допустимая длительность транспортирования.....................137

5.5.    Допустимые сроки хранения биологических образцов.................................................138

5.6.    Признаки, свидетельствующие о порче (непригодности) биологических

образцов............................................................................................................................139

Приложение 1. Типовой акт отбора проб для выявления и идентификации

наноматериалов в лабораторных животных...............................................................140

Приложение 2. Термины и определения......................................................................................................142

Приложение 3. Обозначения и сокращения................................................................................................144

115

МЕТОДИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федераций

Г. Г. Онищенко

23 сентября 2010 г.

1.2. ГИГИЕНА, ТОКСИКОЛОГИЯ, САНИТАРИЯ

Порядок отбора проб для выявления и идентификации наноматериалов в лабораторных животных

Методические указания МУ 1.2.2741—10

I. Область применения

1.1.    Настоящие методические указания устанавливают требования к методам отбора от лабораторных животных проб биологических материалов, предназначенных для определения абиогенных (техногенных) и биогенных наночастиц и наноматериалов искусственного происхождения с учётом данных о путях поступления наноматериалов в организм и предполагаемых органах, в которых может происходить их накопление.

1.2.    Требования, изложенные в настоящих методических указаниях, применяются в ходе проведения исследований по оценке безопасности наночастиц и наноматериалов искусственного происхождения в целях принятия решений по оценке рисков, связанных с воздействием наночастиц и наноматериалов на организм человека.

1.3.    Методические указания разработаны с целью обеспечения единства методов и средств отбора проб в ходе оценки безопасности наноматериалов и нанотехнологий для состояния здоровья человека и компонентов естественных биоценозов.

1.4.    Методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы научно-исследовательскими организациями гигиенического профиля, медицинскими учебными заведениями и иными организациями и учреждениями, проводящими исследования по оценке безопасности наноматериалов.

II. Нормативные ссылки

2.1.    Федеральный закон Российской Федерации от 30 марта 1999 г. № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».

2.2.    Федеральный закон Российской Федерации от 02 января 2000 г. № 29-ФЗ «О качестве и безопасности пищевых продуктов».

2.3.    Федеральный закон Российской Федерации от 26 июня 2008 г. № Ю2-ФЗ «Об обеспечении единства измерений».

2.4.    Федеральный закон Российской Федерации от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании».

116

МЕТОДИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

2.5.    Федеральный закон Российской Федерации от 10 января 2002 г. № 7-ФЗ «Об охране окружающей среды».

2.6.    Постановление Правительства Российской Федерации от 21 декабря 2000 г. № 987 «О государственном надзоре и контроле в области обеспечения качества и безопасности пищевых продуктов».

2.7.    Постановление Правительства Российской Федерации от 21 декабря 2000 г. № 988 «О государственной регистрации новых пищевых продуктов, материалов и изделий».

2.8.    Постановление Правительства Российской Федерации от 30.06.2004 № 322 «Об утверждении Положения о Федеральной службе в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека».

2.9.    Приказ Министерства здравоохранения СССР от 12 августа 1977 г. № 755 «О мерах по дальнейшему совершенствованию организационных форм работы с использованием экспериментальных животных».

2.10.    Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 19 июня 2003 г. № 267 «Об утверждении Правил лабораторной практики».

2.11.    Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации и Главного государственного инспектора Российской Федерации по охране природы от 10.11.1997 № 25 и от 10.11.1997 № 03-19/24-3483 «Об использовании методологии оценки риска для управления качеством окружающей среды и здоровья населения в Российской Федерации».

2.12.    Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 23 июля 2007 г. № 54 «О надзоре за продукцией, полученной с использованием нанотехнологий и содержащей наноматериалы».

2.13.    Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 31 октября 2007 г. № 79 «Об утверждении Концепции токсикологических исследований, методологии оценки риска, методов идентификации и количественного определения наноматериалов».

2.14.    СП 2.2.2.1327—03 «Гигиенические требования к организации технологических процессов, производственному оборудованию и рабочему инструменту».

2.15.    СанПиН 2.1.7.1322—03 «Гигиенические требования к размещению и обезвреживанию отходов производства и потребления».

2.16.    СП 1.2.036—95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I—IV групп патогенности».

2.17.    СП 1.3.2322—08 «Безопасность работы с микроорганизмами III—IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».

2.18.    МУ 1.2.2520—09 «Токсиколого-гигиеническая оценка безопасности наноматериалов».

2.19.    МР 1.2.2566—09 «Оценка безопасности наноматериалов in vitro и в модельных системах in vivo».

2.20.    МР 1.2.2522—09 «Выявление наноматериалов, представляющих потенциальную опасность для здоровья человека».

2.21.    МР 1.2.2641—10 «Определение приоритетных видов наноматериалов в объектах окружающей среды, пищевых продуктах и живых организмах».

2.22.    МУ 1.3.2569—09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I—IV групп патогенности».

2.23.    МУ 4.2.2039—05 «Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории».

117

МЕТОДИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

2.24.    Р.3.5.1904—04 «Использование ультрафиолетового излучения для обеззараживания воздуха помещений».

2.25.    ГОСТ 8.207-76 «Государственная система обеспечения единства измерений. Прямые измерения с многократными наблюдениями. Методы обработки результатов наблюдений. Основные положения».

2.26.    ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».

2.27.    ГОСТ 3-88 «Перчатки хирургические резиновые. Технические условия».

2.28.    ГОСТ 20015-88 «Хлороформ. Технические условия».

2.29.    ГОСТ Р 51652-2000 «Спирт этиловый ректифицированный из пищевого сырья. Технические условия».

2.30.    ГОСТ 21241-89 «Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний».

2.31.    ГОСТ 21239-93 «Инструменты хирургические. Ножницы. Общие требования и методы испытаний».

2.32.    ГОСТ 30393-95 «Инструменты хирургические. Скальпели со съёмными лезвиями. Присоединительные размеры».

2.33.    ГОСТ 24104-2001 «Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия».

2.34.    ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».

2.35.    ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия».

2.36.    ГОСТ 9293-74 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».

2.37.    ГОСТ 12.2.003-91 «Система стандартов безопасности труда. Оборудование производственное. Общие требования безопасности».

2.38.    ГОСТ 12.2.052-81 «Система стандартов безопасности труда. Оборудование, работающее с газообразным кислородом. Общие требования безопасности».

2.39.    ГОСТ 12.1.004-91 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».

2.40.    ГОСТ 4233-77 «Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия».

2.41.    ОСТ 11-029.003—80 «Изделия электронной техники. Вода, применяемая в производстве. Марки, технические требования, методы очистки и контроля».

2.42.    ГОСТ 5833-75 «Реактивы. Сахароза. Технические условия».

2.43.    ГОСТ 4198-75 «Реактивы. Калий фосфорно-кислый однозамещенный. Технические условия».

2.44.    ГОСТ 2493-75 «Реактивы. Калий фосфорно-кислый двузамещенный 3-водный. Технические условия».

2.45.    ГОСТ 6259-75 «Реактивы. Глицерин. Технические условия».

2.46.    ГОСТ 4172-76 «Реактивы. Натрий фосфорно-кислый двузамещенный 12-водный. Технические условия».

2.47.    ГОСТ 1625-89 «Формалин технический. Технические условия».

2.48.    ГОСТ 4517-87 «Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе».

2.49.    ГОСТ Р 50444-92 «Приборы, аппараты и оборудование медицинские. Общие технические условия».

2.50.    ГОСТ Р 51350-99 «Безопасность электрических контрольно-измерительных приборов и лабораторного оборудования. Часть 1. Общие требования».

2.51.    ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025—2006 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий».

МЕТОДИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
III. Общие положения
3.1. Цель и назначение пробоотбора

3.1.1.    Целью отбора проб является получение представительной и усреднённой пробы, которая наиболее полно позволит выявить и идентифицировать исследуемые наноматериалы, введенные лабораторным животным, в составе их органов и тканей, а также в выделениях (экскретах) в ходе проведения исследований по токсикологогигиенической характеристике наночастиц или наноматериалов.

3.1.2.    Назначение процедуры отбора проб заключается в отборе для заданной цели тех органов, тканей и иных биологических материалов, которые наиболее пригодны для анализа и в которых с наибольшей вероятностью можно выявить и идентифицировать исследуемые наноматериалы.

3.1.3.    Биологические образцы, полученные от животных, которым по условиям эксперимента были введены наночастицы (наноматериалы), могут содержать эти наночастицы (наноматериалы) и поэтому должны рассматриваться как объекты, обладающие повышенной биологической опасностью. Особенности процедур отбора проб должны обеспечивать снижение риска воздействия наночастиц и наноматериалов, а также инфицированных микроорганизмами образцов на персонал организаций (лабораторий), проводящих отбор проб и последующие исследования биологических показателей, а также на население и окружающую среду до приемлемого уровня.

3.2. Требования к организации, осуществляющей отбор проб

3.2.1.    Организации, осуществляющие отбор проб, должны быть уполномочены в установленном порядке на право проведения медико-биологических исследований на лабораторных животных и обладать системой контроля качества, обеспечить независимость и прозрачность процедуры пробоотбора.

3.2.2.    Организации, осуществляющие отбор проб, должны быть оснащены необходимым оборудованием, в т.'ч. средствами измерений, прошедшими поверку (калибровку) в установленном порядке.

3.2.3.    Эксплуатация оборудования проводится в соответствии с техническим паспортом и инструкцией по применению. Результаты проведения поверки (калибровки) средств измерений и текущего ремонта оборудования фиксируются в специальном журнале, доступном в любое время сотрудникам, эксплуатирующим оборудование или обеспечивающим его обслуживание.

Персонал, проводящий отбор проб для выявления и идентификации наноматериалов в лабораторных животных, должен иметь профессиональную подготовку в области работы с лабораторными животными и пройти инструктаж по вопросам техники безопасности и методам преодоления последствий возможных нештатных ситуаций.

3.3. Перечень объектов и материалов, подлежащих пробоотбору

3.3.1. Для выявления и идентификации биогенных наноматериалов в лабораторных животных проводят отбор следующих биологических материалов:

•    соскобы со слизистых оболочек, отделяемое эрозивно-язвенных элементов, соскобы с конъюнктивы и т. д.;

•    мазки, смывы (из носоглотки, зева и т. д.);

•    мокрота, бронхо-альвеолярный лаваж;

•    кровь, плазма, сыворотка крови;

•    моча, различные биологические жидкости (лимфа, слюна, желчь, слезная жидкость, молоко);

•    фекалии;

•    биоптаты (кусочки тканей и органов).

119