Стр. 1
 

7 страниц

244.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на пищевые продукты и устнавливает метод выявления в определенной навеске пищевого продукта колиформных бактерий и три метода определения их количества: метод наиболее вероятного числа и методы посева в или на агаризованные селективно-диагностические среды

Утратил силу в РФ

утратил силу на территории РФ, с 01.01.2009 пользоваться ГОСТ Р 52816-2007; ГОСТ Р 52816-2007 отменен с 15.02.2015. Действует ГОСТ 31747-2012

Действие завершено 01.01.2009

Оглавление

1 Сущность метода

2 Отбор и подготовка проб

3 Аппаратура, материалы, реактивы и питательные среды

4 Подготовка к испытанию

5 Проведение испытания

6 Обработка результатов

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ 30518-97

ГОСТ Р 50474-93

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)

Издание официальное

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ Минск

Страница 2

ГОСТ 30518-97/ГОСТ 1* 50474-93

Предисловие

1    РЛЗРАБО ГЛН И ВНЕСЕН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП) и Техническим комитетом по стандартизации ГК 93 «Продукты переработки плодов и овощей»

2    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 11 от 23 апреля 1997 г.)

За принятие проголосовали:

Наименование гоодарстпа

Наименование национального органа по стандартизации

Республика Беларусь Республика Казахстан Кыргызская Республика Республика Молдова Российская Федерация Республика Таджикистан Туркменистан Республика Узбекистан

Госстандарт Республики Беларусь

Госстандарт Республики Казахстан

Кыршзстандарт

Молдовастандарг

Госстандарт России

Таджиксгандарг

Главгосслужба «Туркменстандартлары* Узгосстандарт

3    Настоящий стандарт соответствует ИСО 4831-78 «Микробиология. Обшее руководство по подсчету колибактернй. Методика расчета наиболее вероятного значения после инкубации при 30 "С» и ИСО 4S32—78 «Микробиология. Общее руководство по подсчету колиформ. Метод подсчета колоний при температуре 30 *С» в части сущности методов

4    Постановлением Госстандарта России от 16 апреля 1998 г. № 122 ГОСТ 30518— 97 введен в действие в качестве государственного стандарта Российской Федерации с момента принятия указанного постановления и признан имеющим одинаковую силу с ГОСТ Р 50474-93 на территории Российской Федерации в связи с полной аутентичностью их содержания

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

6    ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

II    72

Страница 3

Группа Н09

МЕЖГОСУДАРСТВЕН» Ы Й СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Методы выявления и определения количества бактерий (руины    ГОСТ    30518_97

кишечных палочек (колиформных бактерий)    -

ГОСТ Р 50474-93

Food products. Methods for dctcction and quantity determination of coliformes

MKC 07.100.30 ОКСТУ 9109

Дата введении 1994—01—01

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной навеске нишевого продукта колиформных бактерий и три метода определения их количества: метод наиболее вероятного числа (НВЧ) и методы посева в или на агариэованные селективно-диагностические среды.

Метод определения НВЧ колиформных бактерий предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта менее 150 или в 1 см' жидкого продукта менее 15 клеток колиформных бактерий.

Метод определения количества колиформных бактерий посевом в агариэованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в I г твердого продукта более 150 или в 1 см5 жидкого продукта более 15 колониеобразующих единиц (КОЕ) колиформных бактерий.

Метод определения количества колиформных бактерий посевом на агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта более 1500 или в 1 см3 жидкого продукта более 150 КОЕ колиформных бактерий.

1    Сущность методов

Методы выявления и определения наиболее вероятного числа колиформных бактерий основаны на высеве определенного количества продукта и (или) разведений навески продукта в жидкую селективную среду с лактозой, инкубировании посевов, учете положительных пробирок (колб), пересеве, при необходимости, культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективно-диагности-ческой среды для подтверждения по биохимическим и культуральным признакам роста принадлежности выделенных колоний к кол и формным бактериям.

Методы определения количества колиформных бактерий посевом в (на) агаризованные селективно-диагностические среды основаны на высеве определенного количества продукта или его разведений в или на агаризованную селективно-диагностическую среду с лактозой, инкубировании посевов. подсчете типичных колоний, подтверждении, при необходимости, по биохимическим признакам принадлежности выделенных колоний к колиформным бактериям.

2    Отбор и подготовка проб

Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 26668. ГОСТ 26669.

Издание официальное ★

I

73

Страница 4

ГОСТ 30518-97/ГОСТ I» 50474-93

3    Аппаратура, материалы, реактивы и питательные среды

3.1    Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 241044 с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности (для взвешивания реактивов):

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания I кг, 4-го класса точности (для взвешивания продукта):

микроскоп световой биологический с увеличением 900- 10001; петля бактериологическая; поплавки (трубки Дархема); стекла предметные по ГОСТ 9284;

термостат с диапазоном рабочих температур 28 "С—55 С. позволяющий поддерживать заданную температуру с допустимой погрешностью ±1 “С; бриллиантовый зеленый; генциан виолет:

желчь говяжья сухая или натуральная; метиловый фиолетовый: феноловый красный.

3.2    Для проведения испытания применяют питательные среды: агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным; бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью; бульон Мак-Конки;

бульон Кесслер; среду Эндо.

4    Подготовка к испытанию

4.1    Приготовление растворов

4.1.1    Щелочной раствор бромкрезолового пурпурного концентрацией Юг/дм': 1 г бромкрезоло-вого пурпурного переносят в фарфоровую ступку с 19 см5 раствора гидроокиси натрия с (NaOH) = = 0.1 моль/дм5 и после растворения добавляют 80 см’ дистиллированной воды.

4.1.2    Раствор бриллиантового зеленого концентрации 5 г/дм5: 0,5 г бриллиантового зеленого переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см5 и доводят дистиллированной водой до метки.

4.1.3    Раствор генцианвиолета или кристаллического фиолетового, или метилового фиолетового концентрацией 10 г/дм3: 1 годной из анилиновых красок переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят дистиллированной нодой до метки.

4.1.4    Раствор фенолового красного концентрации 2 г/дм3:0,2 г фенолового красного переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью НК) см5 и доводят дистиллированной водой до метки.

4.1.5    Растворы, приготовленные по 4.1.1—4.1.4. хранят в закрытых сосудах из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.

4.1.6. Растворы и реактивы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1.

4.2 Приготовление питательных сред

4.2.1 Агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным: 3,0 г мясного экстракта, 10,0 г пептона, 10.0 г лактозы. 5.0 г хлористого натрия. 0.5 г фосфорнокислого дву замещенного калия. 15,0 г агара добаатяют к 1000 см3 дистиллированной воды. При отсутствии мясного экстракта

2

1

С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001 (здесь и далее).

74

Страница 5

ГОСТ 30518-97/ГОСТ Р 50474-93

допускается использовать вместо мясного экстракта, пептона и дистиллированной воды мясопептон-ный бульон по ГОСТ 10444.1. Смесь нагревают до полного растворения компонентов, охлаждают до 45 'С—55 ”С. устанавливают pH так, чтобы после стерилизации она составляла при 25 ‘С 7,0±0,1. Среду стерилизуют в течение 20 мин при температуре <115± 1) “С, затем охлаждают до 45 “С-55 *С и прибавляют 40 см' раствора фенолового красного, приготовленного по 4.1.4, и 2 см’ раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по 4.1.2, тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри, колбы или флаконы.

4.2.2    Бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчыо: 10.0 г пептона, 5,0 г лактозы, 6.45 г двузамещенного фосфорнокислого безводного натрия, 2.0 г однозамешенного фосфорнокислого безводного калия, 20.0 г сухой говяжьей желчи или 200 см' натуральной желчи, 3 см3 раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по 4.1.2. добавляют к 1000 см3 дистиллированной волы (в случае использования натуральной желчи к 800 см’ дистиллированной воды), тщательно перемешивают, нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1-2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45 'С—55 "С и устанавливают pH таким образом, чтобы она составляла при 25 'С 7.2±0.1. после чего среду вновь доводят до кипения. Среда не подлежит стерилизации в автоклаве, ее разливают с соблюдением правил асептики по 10 см3 в стерильные пробирки с поплавками или по 100 см3 в колбы.

4.2.3    Бульон Мак-Конки: 20.0 г пептона, 10,0 г лактозы, 5.0 г хлористого натрия, 5,0 г сухой говяжей желчи или 50 см3 натуральной желчи, 1 см3 раствора бромкрезолового пурпурного, приготовленного по 4.1.1, добавляют к 1000 cmj дистиллированной воды (в случае использования натуральной желчи к 950 см3 дистиллированной воды), нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1-2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45 ’С-55 ’С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации она составляла при 25 ‘С 7,2—0,1. Среду разливают по 10 см3 в пробирки с поплавками или в колбы по 100 см5 и стерилизуют 15 мин при температуре < 121 ± 1) *С.

4.2.4    Среда Кесслер: 10.0 г пептона. 2,5 г лактозы, 5.0 г сухой говяжьей желчи или 50 см' натуральной желчи, 2 см’ раствора генцианвиолета или кристаллического фиолетового, или метилового фиолетового, приготовленного по 4.1.3, добавляют к 1000 см3 дистиллированной воды (в случае использования натуральной желчи к 950 см3 дистиллированной воды), тщательно перемешивают, нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1—2 мин. фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45 *С—55 'С, устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации она составляла при 25 ‘С 7,3±0,2. Среду разливают по 10 см5 в пробирки с поплавками или в колбы по 100 см' и стерилизуют 20 мин при температуре (115± 1) "С.

4.2.5    Среда Эндо: выпускается Дагестанским НПО «Питательные среды* и готовится по прописи, указанной на этикетке.

4.2.6    Жидкие среды двойной концентрации готовят по 4.2.2-4.2.4, но при приготовлении берут удвоенную массу (объем) ингредиентов, кроме дистиллированной воды, и разливают в посуду с учетом последующего количества добавляемого жидкого продукта.

5 Проведение испытания

5.1    Посевы для определения количества колиформных бактерий

5.1.1    Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений по ГОСТ 26669 так, чтобы можно было определить в 1 г (см3) продукта предполагаемое количество колиформных бактерий или их количество, указанное в нормативном документе на конкретный продукт.

5.1.2    При определении количества колиформных бактерий посевом на агазированные селек-тивно-диагностические среды по 0,1 или 0.2 см' навески продукта или его разведения наносят на поверхность одной из сред, приготовленных по 4.2.1 или 4.2.5 и рахлитых в две параллельные чашки Петри. Подготовку' чашек Петри со средой к посеву и посев проводят по ГОСТ 26670.

При применении метода мембранных фильтров по ГОСТ 26670 фильтры переносят на поверхность агаризованиой селективно-диагностической среды, избегая образования пузырьков

75

3

Страница 6

ГОСТ 30518-97/ГОСТ I» 50474-93

воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обрашена вверх.

При определении количества колиформных бактерий посевом в агаризованиые селективно-диаг-ностические среды по 1 см’ навески продукта или его разведения вносят в две параллельные чашки Петри. Посевы заливают по ГОСТ 26670 на поверхность одной из агаризованных сред, приготовленных по 4.2.1 или 4.2.5.

5.1.3 При определении количества колиформных бактерий по методу НВЧ высевают три последовательные навески продукта it (или) его разведения, отличающиеся по количеству продукта в них в 10 раз.

Каждую навеску продукта и (или) его разведение в трехкратной повторности высевают в колбы или пробирки с одной из питательных сред, приготовленной по одному из следующих пунктов: 4.2.2, 4.2.3. 4.2.4.

Соотношение между количеством высеваемого продукта или его разведения и питательной средой 1 : 9. а для сред двойной концентрации —1.1.

5.2    Посев для выявления колиформных бактерий в определенной навеске продукта

При выявлении колиформных бактерий в определенной навеске проду кта или его эквивалентном разведении эту навеску или разведение вносят в одну из питательных сред, приготовленную по одному из следующих пунктов 4.2.2, 4.2.3, 4.2.4. Соотношение между количеством высеваемого продукта или его эквивалентным разведением и питательной средой 1 : 9, а для сред двойной концентрации -1:1.

5.3    При испытании высококислотных продуктов для предотвращения резкого снижения pH (на 0.5 и более) питательных сред при внесении в них проду кта или его разведений pH питательных сред доводят до допустимых значений с помощью стерильного раствора гидрооксида натрия, приготовленного по ГОСТ 10444.1, или при приготовлении питательных сред pH устанавливают выше заданного с учетом ее последующего снижения при внесении продукта. Количество добавляемого раствора гидроксида натрия или величину, на которую необходимо увеличить pH при приготовлении питательных сред, устанавливают опытным путем.

5.4    Посевы на агаризованных и жидких средах инкубируют при температуре (36±1) *С втечение 24—48 г. Чашки Петри с посевами инкубируют дном вверх. Посевы просматривают через (24±3) ч, отмечают положительные посевы в жидкие среды, а окончательный учет проводят через (48±3) ч.

Положительными считают посевы в жидкие среды, в которых имеет место интенсивный рост микроорганизмов, проявляющийся в помутнении среды, образовании газа, подкнсленни среды (то есть изменении пвета среды).

5.5    При необходимости, для подтверждения принадлежности микроорганизмов, выросших на жидких средах, к колнформным бактериям делают пересевы по ГОСТ 26670 на поверхность одной из агаризованных селективно-диагностических сред, приготовленных по 4.2.1 или 4.2.5. Посевы инкубируют при температу ре (36±1) *С в течение (24±3) ч.

5.6    Посевы на агаризованных средах по 5.1 и 5.5 после инкубирования просматривают и отмечают рост характерных колоний.

На агаре лактозном с бриллиантовым зеленым и феноловым красным колиформные бактерии образуют ярко-желтые колонии диаметром 2-4 мм с желтой прозрачной зоной диаметром 1—3 мм вокруг колонии.

На среде Эндо колиформные бактерии образуют колонии бледно-розового или красного пвета. часто с металлическим блеском.

В посевах по 5.1.2 отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 характерных колоний. При посеве методом мембранных фильтров на них подсчитывают количество колоний и в том случае, если их менее 15.

5.7    При необходимости подтверждения принадлежности выросших микроорганизмов к колнформным бактериям из чашек Петри с посевами по 5.1 и 5.5 отбирают не менее чем попять колоний. Из каждой отобранной колонии приготавливают мазки и окрашивают по Граму (по ГОСТ 30425).

Колиформные бактерии являются грамотри нательным и палочками.

76

4

Страница 7

ГОСТ 30518-97/ГОСТ Р 50474-93

6 Обработка результатов

6.1    Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.

6.2    К колиформным бактериям относят аэробные и факультативно-анаэробные не образующие спор грамотрицательные палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа.

6.3    При определении НВЧ или при выявлении колиформных бактерий в определенной навеске продукта посевы в жидких средах считают положительными, если при последующем пересеве и подтверждении характерных колоний хотя бы в одной колонии будут обнаружены колиформные бактерии.

НВЧ колиформных бактерий в I г (см3) продукта определяют по количеству положительных колб (пробирок) по ГОСТ 26670.

6.4    Если при подтверждении характерных колоний в 80 % случаев, то есть не менее чем в 4 из 5 колоний, подтвержден рост колиформных бактерий, то считают, что все характерные колонии, выросшие на чашке Петри (см. 5.6), принадлежат к колиформным бактериям. В остальных случаях количество колиформных бактерий определяют, исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству характерных колоний, взятых для подтверждения.

Пересчет количества колиформных бактерий, определенного посевом в или на агаризованные среды, на I г (см1) продукта проводят по ГОСТ 26670.

6.5    Результаты определения количества колиформных бактерий и выявления их о определенной навеске продукта записывают по ГОСТ 26670.

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Ойошлчснне НТД. ни который лапа ссылка

Номер раздела, пункта, подпункта

ГОСТ 9284—75

3.1

ГОСТ 10444.1—S4

3.1, 5.3

ГОСТ 24104—88

3.1

ГОСТ 26668—HS

2

ГОСТ 26669-85

2, 5.1.1

ГОСТ 26670-91

5.1.2, 5.5. 6.3, 6.4, 6.5

ГОСТ 30425-97

5.7

77

5