Сертификация: тел. +7 (495) 175-92-77
Стр. 1
 

10 страниц

304.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной навеске пищевого продукта колиформных бактерий и три метода определения их количества: метод наиболее вероятного числа (НВЧ) и методы посева в или на агаризованные селективно-диагностические среды.

Метод определения НВЧ колиформных бактерий предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1г твердого продукта менее 150 или в 1куб. см жидкого продукта менее 15 клеток колиформных бактерий.

Метод определения количества колиформных бактерий посевом в агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта более 150 или в 1 куб. см жидкого продукта более 15 колониеобразующих единиц (КОЕ) колиформных бактерий.

Метод определения количества колиформных бактерий посевом на агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта более 1500 или в 1 куб. см жидкого продукта более 150 КОЕ колиформных бактерий

Отменён

Принят в качестве межгосударственного стандарта; действует ГОСТ Р 52816-2007; данные о замене ГОСТ Р 50474-93 опубликованы в ИУС № 11-2008

Действие завершено 01.01.2009

Оглавление

1. Сущность методов

2. Отбор проб

3. Аппаратура, материалы, реактивы и питательные среды

4. Подготовка к испытанию

5. Проведение испытания

6. Обработка результатов

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ Р 50474-93

ГОСУДАРСТВГННЫП СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧГГ.ТВА БАКТЕРИЯ ГРУППЫ КИШЕЧНЫХ ПАЛОЧЕК (КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИИ)

Издание официальное

БЗ 11-92/1058


ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Страница 2

УДК 663/.664 : 543.9 : 006.3W    Группа    НО*

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Методы выявления и определения количеств бактерий группы кишечных палочек (колиформиых бактерий)

ГОСТ Р

50474 — 93

Food products.

Methods for detection and quantity determination of col i formes

ОКСТУ 9109

Дата введения 01.01.»*

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты к устанавливает метод выявления и определенной навеске нишевого продукта колиформиых бактерий и три метода определения их количества: метод наиболее вероятного числа (НВЧ) и методы посева в или на агаризованные селективно-диагностические среды.

Метод определения НВЧ колиформиых бактерий предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта менее 150 или в 1 см"3 жидкого продукта менее 15 клеток колнформ-ных бактерий.

Метод определения количества колиформиых бактерий посевом в агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта более 350 или в 1 см3 жидкого продукта более 15 колоннеобразую-щих е,..'ниц (КОП) колиформиых бактерий,

Метод определения количества колиформиых бактерий посевом на | изованные селективно-диагностические среды предназначен л пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта более 500 или в 1 ем1 жидкого продукта более 150 КОП коли-форм:»ых бактерий.

1. СУЩНОСТЬ МЕТОДОВ

Методы выявления и определения наиболее вероятного числа кол кормных бактерий основаны па высеве определенного коли-чес в.п продукта и (или) разведений навески продукта в жидкую сслек-тньную среду с лактозой, инкубировании посевов, учете по-

Издание -Фицнальиое ★

© Издательство стандартов, 1993

Настоящий стандарт ие иожет быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен без разрешения Госстандарта России

Страница 3

С. 2 ГОСТ Р 50474-93

ложителькых пробирок (колб), пересеве, при необходимости, культуральной жидкости на поверхность агаризованнон селективно* диагностической среды для подтверждения но биохимическим и культуральным признакам роста принадлежности выделенных колоний к колнформным бактериям.

Методы определения количества колнформных бактерий посевом в (на) агаризованные селективно-диагностические среды основаны на высеве определенного количества продукта или его разведений в или на агаризованную селективно-диагностическую среду с лактозой, инкубировании посевов, подсчете типичных колоний, подтверждении, при необходимости, по биохимическим признакам принадлежности выделенных колоний к колнформным бактериям.

2. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669.

3. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ И ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

3.1.    Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками но ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности (для взвешивания реактннов);

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24101 с наибольшим пределом взвешивания 1 кг, 4-го класса точности (для взвешивания продукта); микроскоп световой биологический с увеличением 900—1000ГОСТ 9284;

термостат с диапазоном рабочих температур 28—55°С, позволяющий поддерживать заданную температуру с допустимой погрешностью ±ГС;

бриллиантовый зеленый; генциан в иол ет;

желчь говяжья сухан или натуральная; метиловый фиолетовый; феноловый красный.

3.2.    Для проведения испытания применяют питательные среды: агар лактознмй с бриллиантовым зеленым и феноловым красным;

бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью; бу ihtii1 Мак-Конки; с ро г Kivc.iep;

сре. •    :».

Страница 4

ГОСТ Р 50474 —9$ С- 3

4. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

4.1.    II р иготовлен ие растворов

4.1.1.    Щелочной раствор бромкрезолового пурпурного концентрацией 10 г/дм3: I г бромкрезолового пурпурного переносят о фарфоровую ступку с 19 см3 раствора гидроокиси натрия c(NaOH) = =0,1 моль/дм3 и после растворения добавляют 80 см3 дистиллированной воды.

4.1.2.    Раствор бриллиантового зеленого концентрацией 5 г/дм3: 0.5 г бриллиантового зеленого переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см' и доводят дистиллированной водой до метки.

4.1.3.    Раствор генцнанвнолета или кристаллического фиолетового, или метилового фиолетового концентрацией 10 г/дм3: 1 г одной из анилиновых красок переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воле. Раствор переливают к мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят дистиллированной водой до метки.

4.1.4.    Раствор фенолового красного концентрацией 2 г/дм3: •0,2 г фенолового красного переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят дистиллированной водой до метки.

4.1.5.    Растворы, приготовленные по пп. 4.1.1—4.1.4, хранят в закрытых сосудах из темного стекла при комнатной температур* не более 3 мес.

4.1.6.    Растворы и реактивы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1.

4.2. П р игото в л ен не питательных сред

4.2.1. Агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным: 3,0 г мясного экстракта, 10,0 г пептона, 10,0 г лактозы, 5,0 г хлористого натрия, 0,5 г фосфорнокцелого двузамещенного калия, 15.0 г агара добавляют к 1000 см3 дистиллированной воды. При отсутствии мясного экстракта допускается исиользовать вместо мясного экстракта, пептона и дистиллированной воды мясо-пептонный бульон по ГОСТ 10444.1. Смесь нагревают до полного растворения компонентов, охлаждают до 45—55°С, устанавливают pH так, чтобы после стерилизации он составлял при 25°С (7,0± ±0,1). Среду стерилизуют в течение 20 мин при температуре (П5±1)°С, затем охлаждают до 45—55°С и прибавляют 40 см* раствора фенолового красного, приготовленного по п. 4.1.4, и 2 см3 раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по п. 4.1.2, тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петрн, колбы или флаконы.

Страница 5

С. 4 ГОСТ Р 50474-аз

4.2.2.    Бульон лактозный с бриллиантовым зеленим и желчью: 10,0 г пептона, 5,0 г лактозы, 6,45 г двузамещекиого фосфорнокислого безводного натрия, 2,0 г однозамощенного фосфорнокислого безводного калия, 20,0 г сухой говяжьей желчи или 200 см* натуральной желчи, 3 см* раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по п. 4.1.2, добавляют к 1000 см3 дистиллированной воды (в случае использования натуральной желчи к 800 см3 дистиллированной воды), тщательно перемешивают, нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1—2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45—55°С и устанавливают pH таким образом, чтобы он составлял при 25°С (7,2±0,1), после чего среду вновь доводят до кипения. Среда не подлежит стерилизации в автоклаве, ее разливают с соблюдением правил асептики по 10 см3 в стерильные пробирки с поплавками или по 100 см3 в колбы.

4.2.3.    Бульон Мак-Конки: 20,0 г пептона, 10,0 г лактозы. 5,0 г хлористого натрия, 5,0 г сухой говяжьей желчи или 50 см3 натуральной желчи, 1 см3 раствора бромкрезолового пурпурного, приготовленного по п. 4.1.1, добавляют к 1000 см3 дистиллированной воды (в случае использования натуральной желчи к 950 см3 дистиллированной воды), нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1—2 мин, фильтруют через натно-марлевый фильтр, охлаждают до 45—55°С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25СС (7,2±0,1). Среду разливают по 10 см3 в пробирки с поплавками или в кОлбы по 100 см* и стерилизуют 15 мин при температуре (121±1)°С.

4.2.4.    Среда Кесслер: 10,0 г пептона, 2,5 г лактозы. 5,0 г сухой говяжьей желчи или 50 см* натуральной желчи. 2 см3 раствора генциан виол era «ли кристаллического фиолетового, или метилового фиолетового, приготовленных по п. 4.1.3, добавляют к 1000 сма дистиллированной воды (в случае использования натуральной желчи к 950 см3 дистиллированной воды), тщательно перемешивают. нагревают иа слабом огне до кипения, кипятят 1—2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45—55РС, устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25°С (7,3±0,2). Среду разливают по 10 см3 в пробирки с поплавками или в колбы по 100 см3 и стерилизуют 20 мин при температуре (П5=Ь1)°С.

4.2.5.    Среда Эндо: выпускается Дагестанским НПО «Питательные среды» и готовится по прописи, указанной на этикетке.

4.2.6.    Жидкие среды двойной концентрации готовят по пп. 4.2.2—4.2.4, но при приготовлении берут удвоенную массу (объем) ингредиентов, кроме дистиллированной воды, и разливают в посуду с учетом последующего количества добавляемого жидкого продукта.

Страница 6

ГОСТ Р 30474-М С. 5

5. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

5.1. Посевы для определения количества коли форм ных бактерий

г исходное и ряд десятикрат-

чтобы можно было опреде-

«пю о • I ^    .i^A*<wiaiaeMoe    количество    колиформ-

ных бактерий или их количество, указанное в нормативно-технической документации на конкретный продукт.

5.1.2. При определении количества колиформных бактерий посевом на агаризованные селективно-диагностические среды по 0,1 или 0.2 см* навески продукта или его разведения наносят на поверхность одной из сред, приготовленных по п. 4.2.1 или п. 4.2.5 и разлитых в две параллельные чашки Петри. Подготовку чашек Петри со средой к посеву и посев проводят по ГОСТ 26670.

При применении метода мембранных фильтров по ГОСТ 26670 фильтры переносят на поверхность агаризованной селективно-диаг-ностической среды, избегая образования пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх.

При определении количества колиформных бактерий посевом в агаризова«ные селективно-диагностические среды по I см3 на-вечгки продукта или его разведения вносят в две параллельные чашки Петри. Посевы заливают по ГОСТ 26670 на поверхность одной из агаризованных сред, приготовленных по п. 4.2.1 или

II. 4.2 5.

5.1.3. При определении количества колиформных бактерий по методу НВЧ нысевают три последовательные >наяески продукта и (или) его разнедення, отличающиеся по количеству продукта в них в 10 раз.

Каждую наяеску продукта и (или) его разведение в трехкратной повторности высевают в колбы или пробирки с одной из питательных сред, приготовленной по одному из следующих пунктов: п. 4.2.2. п. 4.2.3. п. 4.2.4.

Соотношение между количеством высеваемого продукта кли его разведения и питательной средой 1:9, а для сред двойной концентраиин— 1:1.

5.2. Посев для выявления колиформных бактерий в определенной навеске продукта

При выявлении колиформных бактерий в определенной навеске продукта или его эквивалентном разведении эту навеску или разведение вносят в одну из питательных сред, приготовленную по одному из следующих пунктов: п. 4.2.2, п. 4.2.3, п. 4.2.4. Соотношение между количеством высеваемого продукта или его эквивалентным разведением и питательной средой 1 :9, а для сред двойной концентрации — 1:1.

Страница 7

С. 6 ГОСТ Р 50474 —93

5.3.    При испытании высококислотных продуктов для предотвращения резкого снижения pH (на 0,5 и более) питательных сред при внесении в них продукта или его разведений pH питательных сред доводят до допустимых значений с помощью стерильного раствора гидроокиси натрия, приготовленного по ГОСТ 10444.1, или при приготовлении питательных сред pH устанавливают выше заданного с учетом его последующего снижения при внесении продукта. Количество добавляемого раствора гидроокиси натрия или величину, на которую необходимо увеличить pH при приготовлении питательных сред, устанавливают опытным путем.

5.4.    Посевы на авизованных и жидких средах инкубируют при температуре (36 ' 1)СС в течение 24—48 г. Чашки Петри с по-сепамн инкубируют дном вверх. Посеиы просматривают через {24 *-3) ч, отмечают положительные посевы в жидкие среды, а окоичан- и.ный учет проводят через (48+3) у.

Полол тельными считают посевы в жидкие среды, в которых имеет место интенсивный рост микроорганизмов, проявляющийся и помутнении среди, образовании газа, подкнеленнн среды (то есть изменении цвета среды).

5.5.    При необходимости, для подтверждения принадлежности микроорганизмов, выросших на жидких средах, к ноли формным бактериям делают пересевы по ГОСТ 26670 на поверхность одной из агаризовашых селективно-диагностических сред, приготовленных но п. 4.2.1 или п. 4.2.5. Посевы инкубируют при температуре (36±1)°С в течение (24±3) ч.

5.6.    Посевы на агарнзованных средах но пп. 5.1 и 5.5 после инкубирования просматривают и отмечают рост характерных колоний.

На агаре лактозном с бриллиантовым зеленым и феноловым красным холиформные бактерии образуют ярко-желтые колония диаметром 2—4 мм с желтой прозрачной зоной диаметром 1— 3 мм вокруг колонии.

На среде Эндо холиформные бактерии образуют колонии бледно-розового или красного цвета, часто с металлическим блеском.

В 'посевах по п. 5.1.2 отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 характерных колоний. При посеве методом мембранных фильтров на них подсчитывают количество колоний и в том. случае. если их менее 15.

5.7.    При необходимости подтверждения принадлежности выросших микроорганизмов к колиформным бактериям из чашек Петри с посевами по пп. 5.1 и 5.5 отбирают не менее чем по 5 колоний. Из каждой отобранной колонии приготавливают мазки и окрашивают но Граму (но ГОСТ 10444.3).

Колиформные бактерии являются грамотрнцательными палочками.

Страница 8

ГОСТ Р 50474-9.3 С. 7

в. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

6.1.    Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.

6.2.    К колиформным бактериям относят аэробные и факультативно-анаэробные не образующие спор грамотрицательные палочки. сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа.

6.3.    При определении НВЧ или при выявлении колнформных бактерии и определенной 'навеске продукта посевы в жидких средах считают положительными, если при последующем пересеве и подтверждении характерных колоний хогя бы в одной колонии будут обнаружены колиформные бактерии.

НВЧ коли формных бактерий в 1 г (см3) продукта определяют по количеству положительных колб (пробирок) по ГОСТ 26670.

6.4.    Если при подтверждении характерных колоний в 80% случаев. то есть не менее чем в 4 из 5 колоний, подтвержден рост колнформных бактерий, то считают, что все характерные колонии, .выросшие на чашке Петри (см. п. 5.6). принадлежат к кол и формным бактериям. В остальных случаях количество колнформных бактерий определяют, исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству характерных колоний, взятых для подтверждения.

Пересчет количества колнформных бактерий, определенного посевом в или на агармзованные среды, на I г (см3) продукта проводят по ГОСТ 26670.

6.5.    Результаты определения количества колнформных бактерий и выявления их в определенной навеске продукта записывают по ГОСТ 26670.

Страница 9

С. в ГОСТ Р 50474-93

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП) и Техническим комитетом по стандартизации 93 «Продукты переработки плодов и овощей»

РАЗРАБОТЧИКИ

В. И. Рогачев, д-р техн. наук; Б. И. Голод, канд. биол. наук; Р. А. Волкова; Н. В. Бурычснко

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 25.01.93 № 18

Настоящий стандарт соответствует ИСО 4831 — 78 «Микробиология. Общее руководство по подсчету колибактерий. .Методика расчета наиболее вероятного значения после инкубации при 30°С» и ИСО 4832 — 78 «Микробиология. Общее руководство по подсчету колиформ. Метод подсчета колоний при температуре ЗО’С» в части сущности методов

3.    Срок первой проверки — 1999 г., периодичность проверки — 5 лет

4.    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5.    ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД,

ид котори* дана ссы.ч»

Ном«ф пункта

ГОСТ 9284-75

3.1

ГОСТ 10444.1— М

3.1. 5.3

ГОСТ Ю444 3—85

5.7

ГОСТ 24104-88

3.1

ГОСТ 26668-85

ГОСТ 26669-85

2. 5.1.1

ГОСТ 26670-91

5.1:2. 5.5. 6.3. 6.4. 65

Страница 10

Редактор С В Жидкова Технический редактор И. Н. ПРусакова Корректор Р, И. Корчагина

Сдано ■ вавор    Под»,    в    веч.    2Т.0<.9&    Уел.    пе».    л.    0.75.    Уел.    «р.    отт.    0.73.

Уч- изд. л. о.ае. 7*р. аю«. с и».

Ордена «Зим Почете» Издательство стандартом. ЮГОТО, Москы. Кигодезиы* пер. 11 Тио. «Москоисяиа печатях». Мосхоз, .'1нлин пер.. 6. За». 100