Стр. 1
 

7 страниц

244.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на кормовую муку животного происхождения и устанавливает методы бактериологического анализа

Введен впервые

Ограничение срока действия снято: Протокол № 2-92 МГС от 05.10.92 (ИУС № 2-93)

Оглавление

1 Отбор и подготовка проб

2 Аппаратура, материалы, реактивы

3 Подготовка к анализу

4 Проведение анализа

Показать даты введения Admin

Страница 1

Группа С19

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МУКА КОРМОВАЯ ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

гост

Методы бактериологического анализа    25311_82

Feeding flour of animal origin.

Methods of bacteriological analysis

ОКСТУ 9209

Дата введения 01.07.83

Настоящий стандарт распространяется па кормовую муку животного происхождения и устанавливает методы бактериологического анализа: определение общего количества микробов; определение присутствия бактерий группы кишечной палочки; определение присутствия бактерий из рода сальмонелл; определение присутствия бактерий анаэробов.

I. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

1.1.    Отбор проб для бактериологического анализа проводят по ГОСТ 17536 сухим стерильным щупом в сухую стерильную стеклянную банку.

1.2.    Масса точечной пробы должна быть не менее 100 г. Масса объединенной пробы должна быть не менее 500 г.

1.3.    Объединенную пробу тщательно перемешивают и делят пополам. Каждую часть упаковывают в стерильную стеклянную банку. Одну банку направляют в лабораторию, а другую сохраняют на предприятии до окончания анализа.

1.4.    Мри отборе проб составляют акты в двух экземплярах, которые должны содержать следующие данные: наименование предприятия-изготовителя, номер партии, вид и массу продукта, количество упаковочных единиц, дату изготовления продукции и отбора проб.

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ

2.1. Для проведения бактериологических анализов применяют следующие аппаратуру, материалы и реактивы: автоклав; анаэростат;

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104* 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г;

гомогенизатор бактериологический, смеситель или аппарат для измельчения тканей с частотой вращения не менее Ш)0 об/мин; дистиллятор;

лупы измерительные с увеличением 3х и 5х по ГОСТ 25706; лампы ртутно-кварцевые;

микроскоп марок МБИ и МБР по НТД или других аналогичных марок; мясорубку бытовую по ГОСТ 4025; потенциометр по ГОСТ 7164; прибор для подсчета колоний;

термостат электрический с автоматическим терморегулятором:

* С 1 июля 2002 г. ввалится в действие ГОСТ 24104-2001.

Перепечатка воспрещена

Ииание официальное

68

Страница 2

ГОСТ 25311-82 С. 2

холодильник электрический бытовой по ГОСТ 16317;

шкаф сушильный лабораторный;

агар микробиологический по ГОСТ 17206;

агар сухой с эозином метиленовым синим (среда Левина);

агар Эндо сухой бактериологический;

агар Плоскирева сухой бактериологический;

агар сухой висмут-сульфит;

альфаиафтиламин по НТД;

алхил бензол сульфонат;

баню водяную с терморегулятором;

бульон мясо-пептонный по ГОСТ 20730;

бумагу парафинированную по ГОСТ 9569;

бумагу фильтровальную по ГОСТ 12026;

вату медицинскую гигроскопическу ю по ГОСТ 5556;

воду мясную по ГОСТ 20729;

воду дистиллированную по ГОСГ 6709;

воронки стеклянные по ГОСТ 25336;

дрожжи хлебопекарные прессованные по ГОСТ 171;

желатин пищевой по ГОСТ 11293;

колбы стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336;

кристаллизатор с мостиком;

марлю бытовую по ГОСТ 11109;

марлю медицинскую по ГОСТ 9412;

масло иммерсионное для микроскопии по ГОСТ 13739;

масло вазелиновое медицинское по ГОСТ 3164;

мел химический осажденный по ГОСТ 8253;

мясо-говядину по ГОСТ 779;

набор углеводов для исследования ферментации микробов кишечной группы (большой); набор адсорбированных поливалентных са!ьмонеллезных 0-сывороток основных пяти групп (Л, В, С, Д, Е) и редких групп;

набор 0-моно и поливалентных агглютинирующих колисывороток; палочки стеклянные; парафин по ГОСГ 23683;

пептон венгерский фирмы «Рихтер*, чешский «Спофа»;

пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805; песок кварцевый для тонкой керамики по ГОСТ 7031; печень говяжью;

пинцеты для предметных стекол;

пипетки вместимостью 1, 2, 5, 10 см3 с ценой деления 0,1 см3 с широким концом; пипетки Мора вместимостью 25, 50 см3; пипетки пастеровские;

поплавки для пробирок и колб длиной 20, 45 и 75 мм и диаметром 5, 9 и К) мм соответственно;

препарат с индикатором ВР и глюкозой;

пробирки стеклянные бактериологические по ГОСТ 25336;

пробки корковые по ГОСТ 5541;

пробки резиновые конусные по НТД;

проволоку из никелевых сплавов диаметром 0,3—0,5 мм по ГОСТ 1791;

стекла покровные для микропрепаратов по ГОСТ 6672;

стекла предметные для микропрепаратов по ГОСТ 9284;

ступки фарфоровые с пестиком по ГОСТ 9147;

среду КОДЛ сухую питательную;

флаконы Сокслета:

69

Страница 3

С. 3 ГОСТ 25311-82

цилиндры мерные наливные I—1(H). 1—250, 1—500 по ГОСТ 1770; колбы мерные наливные 1—100—2, 1—250—2, 1—500—2 по ГОСТ 1770; часы песочные на 1, 2, 5 мин;

чашки стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336 типа ЧБН (чашки Петри);

шпатели Дригальского;

штативы для пробирок;

шумовку;

яйца куриные;

бриллиантовый зеленый:

бром крезол пурпур;

бромтимоловый синий;

генипианвиолет;

глицерин по ГОСТ 6259, х.ч.;

глюкозу кристаллическую гидратиую по ГОСТ 975, х.ч.; железо хлористое по ГОСТ 4147; йод по ГОСТ 4159, х.ч.; калий йодистый по ГОСТ 4232;

калий фосфорнокислый однозамешенный по ГОСТ 4198. х.ч.;

калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный по ГОСТ 2493, ч.д.а.;

калий едкий;

кальций углекислый по ГОСТ 4530; кислоту розоловую; кислоту щавелевую; кислоту сульфаииловую по ГОСТ 5821; лактозу, х.ч.;

магний хлористый 6-водный по ГОСТ 4209. х.ч.;

магний сернокислый 7-водный по ГОСТ 4523;

маннит по НТД, х.ч.;

метиленовый голубой;

мочевину по ГОСТ 6691, х.ч.;

натрия гидроокись по ГОСТ 4328;

сахарозу по ГОСТ 5833, х.ч.;

спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 59621;

спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300;

фенол рот:

фуксин основной для микробиологических целей;

фуксин (основной и кислый) для микробиологических целей;

хинозол;

натрий сернистокислый безводный по ГОСТ 195.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

3. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

3.1. Приготовление питательных сред: пептонной воды, мясо-пептонногоагара (МПА), сред Эндо, Крумвиде—Олькенипкого в модификации Ковальчука, Киллиана. Кауфмана, Мюллера, магниевой среды, селенитового бульона, Гнсса, «ХБ» (хинозол-бромкрезол-пурпуровый), хлористо-магниевой среды «М* (модифицированной), среды Хейфеца. Булира, Кесслера, Эйкмана, Левина, Ресселя, Плоскирева, висмут-сульфит агара, КОДА, Крумвиде—Олькенипкого, полужидкого агара, кровяного агара по Цейслеру, среды Китт—Тароцци, короткого пестрого ряда среды Вильсон—Блера — производят по ГОСГ 9958. ГОСТ 18963, ГОСТ 21237 и по методикам, утвержденным в установленном порядке.

(Измененная редакция, Изм. .№» 1).

70

1

В Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.

Страница 4

ГОСТ 25311-82 С. 4

3.2. Приготовление испытуемой взвеси и разведений

От обшей пробы отвешивают на лабораторных весах навеску массой 50 г и помешают ее в стерильную колбу или стакан гомогенизатора, содержащий 450 см3 стерильного физиологического раствора, и тщательно перемешивают в течение 30 мин, получая основное десятикратное разведение. После отстаивания в течение 10—15 мин из надосадочного слоя берут пипеткой 1 см3 жидкости, вносят в пробирку с 9 см3 стерильного физиологического раствора и получают последующее разведение. Из этой пробирки готовят последующие разведения (тысячекратное и т.д.).

4. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

4.1.    Определение общего количества микробов в 1 г муки

4.1.1.    Метод основан па способности живых бактериальных клеток образовывать макроколонии при оптимальных условиях культивирования на питательных средах.

4.1.2.    По 1 см3 каждого разведения вносят в стерильные бактериологические чашки и заливают 10—15 см3 стерильного, расалавленного и охлажденного до 45 *С мясо-пептонного агара. После застывания среды чашки помещают (вверх дном) в термостат при температуре (30.0±0,5) "С на 72 ч.

(Измененная редакция* Изм. .\е 1).

4.1.3.    Обработка результатов

Выросшие на чашках колонии подсчитывают, умножают на кратность соответствующего разведения. За общее количество микроорганизмов в 1 г муки принимают среднее арифметическое результатов двух смежных разведений.

4.2. Определение присутствия бактерий группы кишечной палочки

4.2.1.    Метод основан на способности бактерий группы кишечной палочки расщеплять маннит и лактозу, образовывать на средах «ХБ» и Хейфеца кислые продукты, изменяющие цвет индикаторов, входящих в состав этих сред.

(Измененная редакция, Изм. .\® 1).

4.2.2.    По I см3 каждого разведения вносят (по выбору) в пробирки, содержащие по 5 см3 среды: Эйкмана, Кесслер. Булира. Хейфеца, «ХБ* или КОДА. Посевы помешают в термостат при температуре 43 *С для первых пяти сред и 37 *С для последней.

4.2.3.    Через 24 ч учитывают рост на средах Эйкмана, Булира по помутнению среды и образованию газа, на средах Хейфеца, «ХБ» и КОДА — по изменению цвета сред.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

4.2.4.    Из пробирок, где наблюдается рост микробов, производят посев в количестве 0.1 —0.2 см3 на плотные дифференциально-диагностические среды (Эндо. Левина) и выдерживают в термостате при температуре 37 ’С в течение 18—24 ч.

Типичные колонии Е. Coli характеризуются круглой формой, выпуклой или слегка приподнятой в центре поверхностью, ровными краями, розового, красного или малинового цвета с металлическим блеском или без него на среде Эндо и фиолетового или черного — на среде Левина.

Выросшие изолированные колонии (не менее 4) пересевают на мясо-пептонный бульон, выдерживают в термостате при температуре 37 *С в течение 18—24 ч. После этого одну часть пробирок используют для приготовления мазков, посева на дифференциально-диагностические среды, заражения мышей, вторую — для приготовления кипяченого антигена.

4.2.5.    У выделенных культур изучают морфологические, культурально-биохимические и патогенные свойства с целью проведения их родовой дифференциации. Культурально-биохимические свойства изучают по комплексу ЛИМАЦ (лактоза+индол+метилрот+реакция фогес Проскауэра-, цитратно-аммонийные соли +).

Одновременно с определением морфологических, культурально-биохимических и патогенных свойств бактерий проводят серологическую типизацию культур кишечной палочки по 0-антигену.

Для приготовления антигена каждую предназначенную для типизации суточную агаровую культуру (пробирку со скошенным агаром) смывают стерильным физиологическим раствором, доводят суспензию бактерий до концентрации 5—6 млрд/см3, кипятят в водяной бане в течение I ч

71

Страница 5

С. 5 ГОСТ 25311-82

и ставят реакцию агглютинации па стекле с комплексной О-сывороткой. разведенной физиологическим раствором в соотношении 1:5.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

4.2.6.    Если комплексные О-колисыворотки в начальной реакции не агглютинируют антиген из убитой нагреванием культуры, то готовят из этого штамма суспензию бактерий и автоклавируют ее при давлении 105 Па (1 атм) в течение 2 ч для разрушения термостабильного А-антнгена. Автокла-вированный антиген исследуют с сыворотками OS. 09, 0101.

4.2.7.    Обработка результатов

При наличии агглютинации дают заключение о присутствии в исследуемой муке энтеропато-генных типов Е. Coli.

Кроме этого, энтеропатогеннымн признают культуры Е. Coli. которые:

серологически типизируются набором типоспеиифических колисывороток, но не вызывают гибель белых мышей:

серологически не типизируются, но вызывают гибель белых мышей.

4.3. Определение присутствия бактерий из рода сальмонелл

4.3.1.    Метод выявления сальмонелл основан на определении их характерного роста на элективных средах и установлении ферментативных и серологических свойств.

4.3.2.    Навеску муки массой от 50 до 200 г помещают в колбу, содержащую одну из сред предварительного обогащения (физиологический раствор, пептонная вода) при соотношении муки и среды 1:5. Содержимое колбы тщательно перемешивают и помешают в термостат при температуре 37 ‘С. Через 16— 1S ч производят посевы на две (по выбору) основные среды обогащения (селенитовый бульон, магниевую среду, среды Киллиана, Мюллера, Кауфмана) в соотношении 1:5.

После 16—18 ч термостатировання при температуре 37 "С из обогатительных сред бактериологической петлей производят посевы в чашки с твердыми дифференциально-диагностическими средами висмут-сульфит агар, среды Плоскирева или Левина (по две чашки), которые помещают в термостат при температуре 37 "С.

4.3.3.    Засеянные чашки просматривают через 24—48 ч.

На висмут-сульфит агаре S. typhi, S. paratyphi Л растут в виде мелких, нежных серовато* зеленых колоний с черным центром; S. Cholerae suis — в виде зеленых колоний. Колонии почти всех других сальмонелл значительно крупнее, темно-коричневого цвета с металлическим блеском, окруженные светлым ореолом, цвет участка среды под колонией - черный.

На среде Плоскирева сальмонеллы растут в виде прозрачных или нежно-розовых колоний: на среде Левина — прозрачные, бледные, нежно-розовые или розовато-фиолетовые колонии.

При обнаружении колоний, подозрительных на сальмонеллы, трн-пять из них засевают на комбинированные среды: Расселя. Крумвиде—Олькепицкого в модификации Ковальчука или трехсахарную (лактоза, глюкоза, сахароза) «скошенный столбик* с мочевиной.

Высев колоний делают на короткий пестрый ряд. включающий скошенный агар и среды Гисса с лактозой, глюкозой и сахарозой, а также на бульон Хоттингера для определения индола и сероводорода.

Культуры, представляющие грамотрицательные подвижные палочки, ферментирующие глюкозу с образованием газа, не ферментирующие лактозу и сахарозу, не разлагающие мочевину и не образующие индол, подвергаются серологическому исследованию — испытанию в реакции агглютинации на предметном стекле с поливалентной адсорбированной 0-сывороткой.

4.3.4.    Обработка результатов

Обнаружение подвижных (кроме S. pullorum, S. gallinarum) грамотрицателышх палочек, дающих характерный рост на элективных средах, не ферментирующих лактозу и сахарозу, ферментирующих глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа (S.typhi suis не ферментирует маннит), дающих положительную реакцию агглютинации с поливалентной адсорбированной 0-сывороткой, указывает на наличие бактерий из рода сальмонелл.

4.3.3, 4.3.4. (Измененная редакция, Изм. № 1).

4.4.    Определение присутствия бактерий анаэробов

4.4.1. Метод основан на способности анаэробов расти в отсутствие кислорода воздуха, морфологии возбудителей, росте на питательных средах и на выявлении патогенности возбудителей путем заражения лабораторных животных.

72

Страница 6

ГОСТ 25311-82 С. 6

4.4.2.    В пробирки со средами Китт—Тароицн н Вильсон—Блера и в чашки с кровяным агаром по ЦеЙслеру вносят по 1 см3 первых трех разведений испытуемой взвеси, помешают в термостат и инкубируют при температуре (37.0±0,5) *С в течение 24—48 ч.

Почернение среды Вильсон—Блера, а также быстрое начало роста на среде Китт—Тароццп при обильном газообразовании является характерным для С. perfringens. На кровяном агаре через 24 ч поверхность колоний С. perfringens слегка выпуклая, округлая, продолговатая, сочные колонии от серого до зеленого цвета, окружены большой зеленовато-коричневой зоной гемолиза. В мазках, приготовленных с кровяного агара, хорошо выражены капсулы и центрально расположенные, крупные овальные, по объему превышающие ширину палочки, споры. Биологическую пробу проводят на морских свинках и белых мышах путем внутри брюшного заражения двухсуточной бульонной культурой. При положительном результате подопытные животные гибнут через 2—3 сут. Рост С. botulinum наблюдается на 2—3 сут. и характеризуется помутнением среды Китт—Тароцци. образованием осадка и запахом прогорклого масла. При исследовании на наличие токсина берут навеску муки массой не менее 50 г, помешают в колбу, содержащую стерильный физиологический раствор в соотношении 1:4. Подготовленный материал настаивают в течение 2—3 ч. затем центрифугируют и центрифугатом заражают внутрибрюшинно или подкожно морских свинок в дозе 1—2 см3 или белых мышей в дозе 0,2—0.3 см3. Контрольным животным вводят подогретый на водяной бане при температуре 100 *С в течение 30 мин центрифугат в тех же дозах.

(Измененная редакция, Изч. .\е 1).

4.4.3.    Обработка результатов

Наиболее характерные признаки роста С. perfringens — почернение среды Вильсон—Блера, интенсивный рост на среде Китт—Тароцци с обильным образованием газа, слегка выпуклые, круглые или продолговатые колонии серо-зеленоватого цвета на кровяном агаре. Биопробу считают положительной, когда подопытные животные погибают в течение двух суток после введения им центрифугата, не подвергнутого кипячению.

73

Страница 7

С. 7 ГОСТ 25311-82

ИНФОРМАЦИОНН Ы Е ДАН Н Ы Е

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Министерством мясной и молочной промышленности СССР РАЗРАБОТЧИКИ

А.Ф. Савченко, канд. техн. наук; В.Г. Делаш. канд. вет. наук; А.Е. Широченно, канд. биолог, наук; Н.В. Луланова, старший инженер

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 17.06.82 № 2421

3.    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД, на который дана ссылка

Номер пункт

Обозначение НТД, мл который дана ссылка

Номер liyilKI-J

ГОСТ 171-81

2.1

ГОСТ 7031-75

2.1

ГОСТ 195-77

2.1

ГОСТ 7164-78

2.1

ГОСТ 779-55

2.1

ГОСТ 8253-79

2.1

ГОСТ 975-S8

2.1

ГОСТ 9147-80

2.1

ГОСТ 1770-74

2.1

ГОСТ 9284-75

2.1

ГОСТ 1791-67

2.1

ГОСТ 9412-93

2.1

ГОСТ 2493-75

2.1

ГОСТ 9569-79

2.1

ГОСТ 3164-78

2.1

ГОСТ 9958-81

3.1

ГОСТ 4025-95

2.1

ГОСТ 11109-90

2.1

ГОСТ 4147-74

2.1

ГОСТ 11293-89

2.1

ГОСТ 4159-79

2.1

ГОСТ 12026-76

2.1

ГОСТ 4198-75

2.1

ГОСТ 13739-78

2.1

ГОСТ 4209-77

2.1

ГОСТ 13805-76

2.1

ГОСТ 4232-74

2.1

ГОСТ 16317-87

2.1

ГОСТ 4328-77

2.1

ГОСТ 17206-%

2.1

ГОСТ 4523-77

2.1

ГОСТ 17536-82

1.1

ГОСТ 4530-76

2.1

ГОСТ 18300-87

2.1

ГОСТ 5541-76

2.1

ГОСТ 18963-73

3.1

ГОСТ 5556-81

2.1

ГОСТ 20729-75

2.1

ГОСТ 5821-78

2.1

ГОСТ 20730-75

2.1

ГОСТ 5833-75

2.1

ГОСТ 21237-75

3.1

ГОСТ 5962-67

2.1

ГОСТ 23683-89

2.1

ГОСТ 6259-75

2.1

ГОСТ 24104-88

2.1

ГОСТ 6672-75

2.1

ГОСТ 25336-82

2.1

ГОСТ 6691-77

2.1

ГОСТ 25706-83

2.1

ГОСТ 6709-72

2.1

5.    Ограничение срока действия снято но протоколу № 2—92 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 2—93)

6.    ПЕРЕИЗДАНИЕ с Изменением № 1, утвержденным в декабре 1987 г. (ИУС 4—88)

74