Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

16 страниц

304.00 ₽

Купить ГОСТ Р 51352-99 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на наборы реагентов для клинической лабораторной диагностики природного или искусственного происхождения, предназначенные для применения в медицинской и научно-исследовательской практике и используемые в клинико-диагностических, биохимических, иммунологических и генодиагностических лабораториях медицинских учреждений при проведении любых диагностических исследований in vitro, а также на составные части этих наборов, имеющие функциональное медицинское назначение и изготовляемые отдельно. Стандарт не распространяется на медицинские иммунобиологические препараты, предназначенные для специфической профилактики, диагностики и лечения инфекционных, паразитарных заболеваний и аллергических состояний.

  Скачать PDF

Действие завершено 01.01.2015

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Определения

4 Методы испытаний

Показать даты введения Admin

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

НАБОРЫ РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КЛИНИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

Методы испытаний

БЗ 4-99/65


Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 380 «Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы in vitro* и Комитетом по новой медицинской технике Минздрава России

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 11 ноября 1999 г. № 402-ст

3    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

© ИПК Издательство стандартов, 2000

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта России

II

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

НАБОРЫ РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КЛИНИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

Методы испытаний

Kits of reagents for clinical laboratory diagnostics. Test methods

Дата введения 2000—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на наборы реагентов для клинической лабораторной диагностики (далее — наборы) природного или искусственного происхождения, предназначенные для применения в медицинской и научно-исследовательской практике и используемые в клинико-диагностических, биохимических, иммунологических и генодиагностических лабораториях медицинских учреждений при проведении любых диагностических исследований in vitro, а также на составные части этих наборов, имеющие функциональное медицинское назначение и изготовляемые отдельно.

Стандарт не распространяется на медицинские иммунобиологические препараты, предназначенные для специфической профилактики, диагностики и лечения инфекционных, паразитарных заболеваний и аллергических состояний: вакцины бактерийные и вирусные, анатоксины, иммуноглобулины нормальные и специфические, сыворотки диагностические и антитоксические лечебные, бактериофаги диагностические и лечебно-профилактические, препараты нормфлоры (бифидумбак-терин, споробактерин, бактисубтил и др ), интерфероны, цитокины и другие биологические иммуномодуляторы для стимуляции антиинфекционного иммунитета, аллергены бактериальные, грибковые, пищевые, бытовые, пыльцевые и другие, диагностические тест-системы для иммунофер-ментного анализа инфекционных и паразитарных заболеваний, диагн ости кумы антигенные, анти-тельные, питательные среды (бактериальные, вирусологические).

Настоящий стандарт устанавливает методы испытаний наборов.

Технические требования к наборам — по ГОСТ Р 51088.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 8.315-97 Государственная система обеспечения единства измерений. Стандартные образцы состава и свойств веществ и материалов. Основные положения

ГОСТ Р 51088-97 Наборы реагентов для клинической лабораторной диагностики. Общие технические условия

3    Определения

В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:

набор: Комплект специально подобранных реагентов (реактивов), составных частей и инструкций по проведению анализа, предназначенный для определения in vitro одного конкретного вещества (или активности фермента), нескольких конкретных веществ (или суммарной активности ферментов), а также для детекции участка генома (ГОСТ Р 51088).

компоненты набора: Реагенты (реактивы) и составные части (планшеты, стрипы, пробирки и т. п.), используемые при проведении анализа (ГОСТ Р 51088).

Издание официальное

эксплуатационная документация на наборы: Инструкция по применению набора, паспорт (ГОСТ Р 51088).

иммунохимиисский анализ: Метод анализа, основанный на обратимом и нековалентном связывании антигена с антителом. С помощью иммунохимического анализа идентифицируют, а также качественно, полуколичественно или количественно определяют антигены и антитела (ГОСТ Р 51088).

антиген: Вещество, которое обратимо и нековалентно связывается со специфическими центрами антител (ГОСТ Р 51088).

антитела: Белки, продуцируемые лимфоцитами В, которые используют для связывания, обнаружения или определения антигена (ГОСТ Р 51088).

радиоиммунологический анализ: Метод анализа, основанный на иммунохимической реакции антигена со специфическим антителом, проводимой in vitro в присутствии меченного радионуклидом антигена или антитела (ГОСТ Р 51088).

иммуноферментный анализ: Метод анализа, основанный на иммунохимической реакции антигена со специфическим антителом, проводимой in vitro в присутствии меченного ферментом соединения или ферментзависимого субстрата (ГОСТ Р 51088).

иммунофлуоресцентный анализ: Метод анализа, основанный на иммунохимической реакции антигена со специфическим антителом, проводимой in vitro в присутствии флуоресцентной метки (ГОСТ Р 51088).

иммунохемилюминесцентный анализ: Метод анализа, основанный на иммунохимической реакции антигена со специфическим антителом, проводимой in vitro в присутствии хемилюминесцентной метки (ГОСТ Р 51088).

иммунохроматографнческий анализ: Метод анализа, основанный на конкуренции определяемого вещества и конъюгата аналога определяемого вещества за субстрат на полоске хроматографической бумаги (ГОСТ Р 51088).

микроанализ нуклеотидных последовательностей: Метод анализа, основанный или на процессе специфического умножения количества исследуемых участков дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) или рибонуклеиновой кислоты (РНК), в том числе методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующей детекцией сигнала, или на прямой детекции сигналов, возникающих при гибридизации с синтетическими зондами (ГОСТ Р 51088).

фотометрический анализ: Метод анализа, основанный на избирательном поглощении инфракрасного, видимого или ультрафиолетового излучения молекулами определяемого вещества или его соединения с соответствующим реагентом (ГОСТ Р 51088).

коагулометрический анализ: Метод анализа системы свертывания крови, основанный на регистрации времени фибринообразования (ГОСТ Р 51088).

чувствительность: Наименьшее количество анализируемого вещества (или активности фермента, или копий участка генома), определяемое с помощью данного набора.

специфичность: Способность данной аналитической системы (набора) определять только то вещество (или активность фермента, или участок генома), для которого эта система (набор) предназначена.

«линейность»: Отклонение значения концентрации определяемого вещества (или активности фермента) от теоретического в диапазоне рабочих концентраций.

«открытие»: Проверка соответствия значения определяемой концентрации вещества (или активности фермента) расчетной величине, полученной путем смешивания равных объемов контрольных растворов (калибровочных проб, контрольных сывороток или биологического материала) с установленной концентрацией (или активностью).

коэффициент вариации: Показатель воспроизводимости результатов определения, рассчитанный как отношение значения среднего квадратического отклонения к среднему арифметическому значению.

интерсепт: Концентрация анализируемого вещества, которая соответствует определенной точке на калибровочном фафике.

4 Методы испытаний

4.1 Проверка комплектности и составных частей набора

При получении набора необходимо проверить:

-    комплектность набора в соответствии с эксплуатационной документацией;

-    внешний вид и состояние упаковки набора и его компонентов;

2


-    наличие маркировки набора и его компонентов и соответствие маркировки требованиям нормативной документации.

Компоненты набора должны быть подвергнуты визуальному контролю.

Осмотр компонентов набора заключается в установлении соответствия показателей внешнего вида требованиям нормативной документации на наборы конкретных видов:

-    агрегатное состояние (таблетка, порошок, аморфная масса, жидкость и т. п.);

-    окраска;

-    прозрачность (для жидкостей);

-    наличие или отсутствие осадка или хлопьев (для жидкостей);

-    консистенция.

4.2 Экспериментальная проверка качества наборов

Экспериментальная проверка качества наборов должна быть основана на контроле качества системы определения анализируемого соединения в целом применительно к набору конкретного вида.

Измерительная аппаратура, лабораторная посуда, дозирующие устройства, весы и другие принадлежности, используемые при испытаниях, должны быть поверены в соответствии с требованиями, предъявляемыми к лабораторному оборудованию.

В случае, если отклонения значений pH растворов, входящих в состав набора, от заданных могут повлиять на правильность анализа, необходимо проводить контроль pH растворов.

Образцы наборов представляют на испытания в количестве, необходимом для проведения трех полных анализов в соответствии с требованиями нормативной документации на наборы конкретного вида.

4.2.1    Наборы для иммунохимического анализа

4.2.1.1    Наборы для радиоиммунологического анализа

Общая радиоактивность меченого компонента

Значение общей радиоактивности компонента, меченного радионуклидом (,251 или 3Н), является основанием для расчета некоторых других показателей. Кроме того, определение общей радиоактивности позволяет проконтролировать количество поставляемого меченого вещества.

Радиоактивность компонента А, килобеккерели (кБк), меченного 1251, определяют на день паспортизации набора по формуле


v/60 х 1000 ’


(1)


где Nскорость счета пробы меченого компонента, имп/мин;

V— общий объем меченого компонента в наборе, см3;

v — объем пробы меченого компонента, взятой для измерения скорости счета, см3; /— эффективность счета гамма-счетчика, доли единицы;


1

60х 1000


коэффициент перевода импульсов в минуту в килобеккерели.


Радиоактивность компонента А, кБк, меченного 3Н, определяют надень паспортизации набора по формуле


А =


N.V


v/60 х 1000


х К,


(2)


где N, — скорость счета пробы меченого компонента, имп/мин;

V— общий объем меченого компонента в наборе, см3;

V— объем пробы меченого компонента, взятой для измерения скорости счета, см3;

/— эффективность счета бета-счетчика, доли единицы;

ев x^qqq коэффициент перевода импульсов в минуту в килобеккерели;

К— коэффициент поправки на гашение (определяют экспериментально путем измерения скорости счета образцового радиоактивного раствора трития в соответствующей сцин-тилляциоиной жидкости до и после внесения в нее определенного количества растворенного меченого компонента и компонента, не содержащего меченое соединение). Тотальная (общая) радиоактивность, внесенная в анализируемую пробирку Для расчета ряда показателей качества набора необходимо определить тотальную (общую) радиоактивность (7), внесенную в анализируемую пробирку. Значение Топределяют как числовой результат скорости счета радиоактивности, внесенной в каждую аналитическую пробирку.


3


Для определения Т в пробирки вносят компонент, содержащий радионуклид, в объеме, указанном в инструкции по применению набора, после чего добавляют в пробирки все компоненты инкубационной среды в объеме, указанном в инструкции по применению набора; центрифугирование не производят.

Радиометрию каждой пробирки проводят в отдельности и определяют среднее арифметическое значение и значение коэффициента вариации. Достоверность сосчитанных импульсов должна быть в пределах 1—2 %, коэффициент вариации счета Г-проб не должен превышать 3 %, интенсивность счета Гдолжна быть не менее 10000 имп/мин для получения достоверности счета с погрешностью менее 1 %.

Специфически связанная радиоактивность (специфическое связывание)

Специфическое связывание определяют с помощью нулевой калибровочной пробы, т. е. при нулевой концентрации определяемого вещества.

Значение специфического связывания (применяют также термин «максимальное связывание») выражают в процентах как отношение значения радиоактивности образца с нулевой концентрацией, из которого исключено значение неспецифически связанной радиоактивности, к общей радиоактивности образца:

4х1оо.    <3>

где Bq — скорость счета в пробирке, содержащей нулевую калибровочную пробу, имп/мин;

Т— скорость счета тотальной радиоактивности, внесенной в аналитическую пробирку, имп/мин.

Значение специфического связывания дает основную информацию о протекании иммунохи-мической реакции между антителами и меченым антигеном в данной системе для радиоиммуноло-гичсского анализа. Его изменения могут быть обусловлены прежде всего изменениями концентраций обоих компонентов в реакционной смеси и их свойств, особенно сродства и емкости связи антител, удельной активности радиоиндикатора и его повреждением, а также изменениями, происходящими во время хранения или при инкубации. Кроме того, на значение специфического связывания могут оказать влияние и другие компоненты реакционной смеси, условия инкубации, а также правильность выполнения процедур сепарации. Любое заметное отклонение значения Bq/Tx 100 (более чем на 5 %) от обычно получаемых значений при данной методике должно служить сигналом о нарушении стандартных условий определения и качества составных частей набора, а также должно послужить основанием к дополнительной проверке набора.

Значение специфического связывания определяют следующим образом: в пробирки (8—10 шт.) вносят нулевую калибровочную пробу и все компоненты реакционной смеси, после чего проводят все процедуры, предусмотренные инструкцией по применению набора.

В идеале значение специфического связывания должно быть близко к 50 %. Чем ниже этот показатель, тем меньше разрешающая способность калибровочной кривой набора, поскольку калибровочная кривая будет более пологой. При высоком значении BJTх 100 чувствительность набора увеличивается, но «рабочий» отрезок калибровочной кривой уменьшается.

Неспецифически связанная радиоактивность (неспецифическое связывание)

Нсспецифическое связывание — это неспецифически связанная радиоактивность в образце при отсутствии специфических антител.

Определение значения неспецифического связывания дает прежде всего информацию об эффективности используемого метода сепарации свободной и связанной фракций и о неспецифическом захвате свободного радиоиндикатора в связанной фракции. Причиной неспецифического связывания прежде всего является неспецифическая сорбция свободного радиоиндикатора на стенках пробирок, на поверхности осадка и сорбентов. Кроме того, неспецифическое связывание — это влияние перекрестных реакций в присутствии эндогенных антител в анализируемых образцах и воздействие некоторых неспецифических факторов вследствие их присутствия в анализируемых образцах.

Поскольку неспецифическос связывание — одна из основных проблем радиоиммунологичес-кого анализа, его исследование и контроль важны и необходимы. При этом значение неспецифического связывания необходимо вычитать из значений полученных радиоактивностей для всех калибровочных проб.

Неспецифическое связывание определяют следующим образом: в пробирки (8—10 шт.) вносят нулевую калибровочную пробу (или любую калибровочную пробу, или сыворотку крови человека) и все компоненты набора, предусмотренные инструкцией по его применению, за исключением

4

ГОСТ Р 51352-99

антисыворотки (антител). Затем проводят все процедуры, предусмотренные инструкцией по приме нению набора.

Значение неспецифического связывания Вп, %, рассчитывают по формуле

(4)

Вн = | X 100,

где В — среднее арифметическое значение скорости счета в отдельных пробирках, имп/мин;

Т — среднее арифметическое значение тотальной радиоактивности, имп/мин.

Значение неспецифического связывания должно быть не более 5 %.

При использовании твердофазного метода значение неспецифического связывания не определяют.

Соотношение скоростей счета калибровочных проб

Для оценки правильности работы системы для радиоиммунологического анализа необходимо проводить определение соотношения скоростей счета (имп/мин) калибровочных проб. Значения скоростей счета калибровочных проб могут иметь прямую зависимость от концентрации анализируемого антигена (или антител): В$ < . . . < Вилкс (сэндвич-вариант), или обратную: Bq > . . . > Вмжкс (метод конкурентного связывания).

Соотношение скоростей счета калибровочных проб с максимальным и минимальным содержанием антигена (антител) и калибровочной пробы, не содержащей антиген (антитела)

Наклон калибровочной кривой в данной точке является одним из факторов, который определяет разрешающую способность и точность системы для измерения соответствующей концентрации анализируемого антигена. Значение соотношения скоростей счета калибровочной пробы с минимальным содержанием антигена и калибровочной пробы, не содержащей антиген |(ДМИН—ВН)/(В0— —Вн) х 100], может влиять на значение чувствительности системы для радиоиммунологического анализа. Соотношение же скоростей счета калибровочной пробы с максимальным содержанием антигена и калибровочной пробы, не содержащей антиген К4шк~4|)/(Аг>‘4|) х 100], хотя и не отражает разрешающую способность отдельных участков калибровочного графика, однако является одним из показателей стабильности системы для радиоиммунологического анализа при сравнении разных наборов одной серии и наборов разных серий.

Допускается определять соотношение скоростей счета калибровочной пробы с минимальным содержанием антигена и калибровочной пробы с максимальным содержанием антигена |(ДМИИ— —ВИ)/(ВилХ1С— Вн) х 100] и соотношение скоростей счета предпоследней калибровочной пробы (2?пр) и калибровочной пробы с максимальным содержанием антигена |(2fIIp— BH)/(ButKC— Вн) х 100].

Чувствительность

Значение чувствительности определяют следующим образом: в пробирки (8—10 игт.) вносят нулевую калибровочную пробу и все компоненты набора, предусмотренные инструкцией по его применению, после чего проводят все процедуры определения. На основании полученных данных вычисляют среднее квадратическое отклонение о по формуле

(5)

где Bt — значение скорости счета меченого соединения каждого измерения в пробирках с _ нулевой калибровочной пробой, имп/мин;

В — среднее арифметическое значение скорости счета меченого соединения в пробирках с нулевой калибровочной пробой, имп/мин;

I — знак суммирования; п — число определений.

На оси ординат калибровочного графика откладывают значение (Д0—2с) — если применяют принцип конкурентного связывания, или (2^+2о) — если используют сэндвич-вариант; из полученной точки проводят прямую, параллельную оси абсцисс, до пересечения с калибровочным пэафиком; из точки пересечения опускают перпендикуляр на ось абсцисс.

Соответствующая этому значению концентрация характеризует чувствительность, которую следует выражать в значениях концентрации анализируемого вещества.

Значение чувствительности зависит от крутизны калибровочного графика в области низких

5

концентраций, от точности определения нулевой калибровочной пробы, от константы ассоциации специфических антител (чем больше константа ассоциации, тем чувствительнее система для ралиоиммуноанализа), а также от значения соотношения скоростей счета калибровочной пробы с минимальным содержанием определяемого антигена и нулевой калибровочной пробы.

Тест на «открытие»

При постановке теста на «открытие* смешивают, как правило, равные объемы контрольной сыворотки (плазмы) и калибровочной пробы. Вместо контрольной сыворотки (плазмы) можно использовать калибровочную пробу с минимальной концентрацией определяемого вещества.

Тест на «открытие* ОТ, %, проводят в восьми-десяти повторностях. В исследуемой пробе определяют концентрацию анализируемого антигена и сравнивают ее значение с расчетным по формуле

ОТ = X 100,    (6)

ц

где Спр — полученное по калибровочному фафику (практическое) значение концентрации анализируемого антигена в исследуемой пробе;

Q — расчетное (теоретическое) значение концентрации антигена в исследуемой пробе.

Значение «открытия* должно находиться в пределах 90—110 %.

Тест на «открытие* является одним из основных для решения вопроса о специфичности и правильности проведения анализа. Важность данного теста заключается также и в том, что при его постановке сравнивают, как взаимодействуют анализируемый антиген, находящийся в исследуемой пробе (например, в контрольной сыворотке или плазме), и анализируемый антиген, находящийся в калибровочной пробе, с антителом. Если они взаимодействуют по-разному, что называется «мат-риксным эффектом*, то появляются систематические ошибки и непостоянство результатов определения.

В случае экспериментальной проверки качества наборов, предназначенных для определения антигена (антител) в сухих пятнах крови, тест на «открытие* не проводят.

Тест на *.линейность»

Этот тест заключается в последовательных разведениях калибровочной пробы с максимальной концентрацией антигена или контрольной сыворотки (плазмы) с высокой концентрацией этого антигена в 2,4, 8 и т. д. раз (возможны и другие пропорции разведения) с последующим сравнением полученных результатов с ожидаемыми при этих разведениях концентрациями анализируемого антигена. Разведения должны быть выполнены с таким расчетом, чтобы тест охватывал все участки калибровочного графика, поэтому наряду с максимальной калибровочной пробой можно использовать калибровочные пробы со средней и даже низкой концентрацией анализируемого вещества. Для разведения следует использовать нулевую калибровочную пробу или сыворотку (плазму) крови, не содержащую исследуемый антиген.

Тест на «линейность* Л, %, проводят в восьми-десяти повторностях. В анализируемых образцах определяют концентрацию исследуемого антигена, умножают на коэффициент разведения и сравнивают ее значение с расчетным по формуле

Л = х 100,    (7)

S

где Спр — полученное по калибровочному графику (практическое) значение концентрации анализируемого антигена в исследуемых пробах;

Ст — расчетное (теоретическое) значение концентрации анализируемого антигена в исследуемых пробах.

Значение «линейности* должно находиться в пределах 90—110 %.

Тест на «линейность» важен тем, что позволяет проконтролировать, насколько правильно калиброваны калибровочные пробы относительно друг друга. При разведении одной калибровочной пробы идет сравнение этой пробы с калибровочными пробами, близкими по концентрации к полученным результатам.

Тест на «линейность* позволяет устранить систематические ошибки, связанные с различной специфичностью анализа, на каждой стадии калибровки, а также позволяет оценить правильность работы системы для радиоиммунологического анализа на всех участках калибровочного графика.

6

ГОСТ Р 51352-99

В случае экспериментальной проверки качества наборов, предназначенных для определения антигена (антител) в сухих пятнах крови, тест на «линейность* не проводят.

Коэффициент вариации

При определении коэффициента вариации следует использовать аттестованные контрольные сыворотки (плазмы, сухие пятна крови) с низким, средним или высоким содержанием анализируемого антигена. Контроль воспроизводимости проводят в восьми-десяти повторностях. Воспроизводимость проверяют как для одного набора, так и для разных наборов одной серии и наборов разных серий.

Значение коэффициента вариации К.В, %, определяют по формуле

где С,— значение каждого измерения концентрации анализируемого антигена в контрольной _ сыворотке;

С — среднее арифметическое значение концентрации анализируемого антигена в контрольной сыворотке;

Г — знак суммирования; п — число определений.

Воспроизводимость результатов считают удовлетворительной, если значение К.В не превышает 8 % при проведении анализа в биологических жидкостях и 15 % — при проведении анализа в сухих пятнах биологических жидкостей.

Интерсепт

Значение интерсепта определяют по калибровочному графику, построенному в координатах logit—log (на оси ординат откладывают значение соотношения скоростей счета калибровочных проб — Вх и нулевой калибровочной пробы — Bq, а на оси абсцисс — значение концентрации антигена в логарифмическом масштабе). Если работа набора основана на принципе конкурентного связывания, то используют соотношение Вх /Bq у 100, если на принципе сэндвич-варианта — соотношение

1 (В„—Вп)/(В — Вп) у 100]. Значение интерсепта выражают в тех же единицах, что и значение

концентрации анализируемого антигена.

При контроле качества наборов для радиоиммунологического анализа обычно пользуются тремя значениями интерсепта — 20 % (25 %), 50 % и 80 % (75 %), хотя допускаются и другие варианты. Отрезок калибровочного графика, ограниченный значениями 20 % и 80 % интсрсепта, — это «рабочий» отрезок калибровочного графика, являющийся наиболее чувствительной его частью. Значение 50 % интсрсепта должно лежать на самой крутой части калибровочного графика и должно соответствовать одной и той же средней концентрации анализируемого антигена в пределах установленных колебаний.

Значения интсрсепта отражают стабильность концентрации антигена в анализируемой пробе в течение длительного времени; эти значения не должны в большой степени варьировать от набора к набору по наборам конкретного вида, так как от этого зависит достоверность получаемых в клинической практике результатов при использовании наборов разных серий.

Концентрация анализируемого антигена в контрольной сыворотке (плазме, сухом пятне крови)

Для проверки правильности (достоверности) определения указанной концентрации используют метод, основанный на применении контрольных сывороток (плазм, сухих пятен крови) с известной концентрацией анализируемого антигена, которые по составу и остальным свойствам должны быть наиболее близки к образцам анализируемого материала (во избежание «матриксного эффекта*). Наборы для радиоиммунологического анализа, как правило, комплектуют контрольными сыворотками с известным содержанием анализируемого антигена. Сравнение полученной в результате определения и указанной в паспорте на набор концентрации позволяет оценить достоверность (правильность) ее определения конкретным набором для радиоиммунологического анализа.

4.2.1.1.1 Наборы для иммунорадиометрического анализа

Экспериментальная проверка качества этих наборов включает в себя определение следующих показателей: общая радиоактивность меченого компонента — по формуле (1) или по формуле (2); тотальная (общая) радиоактивность; соотношение скоростей счета калибровочных проб: В0< ... < ВМЛКС; скорость счета в калибровочной пробе, не содержащей антиген (антитела); отношение скорости счета в калибровочной пробе с максимальным содержанием антигена к

7

тотальной (обшей) радиоактивности; «открытие* — по формуле (6); «линейность* — по формуле (7); коэффициент вариации — по формуле (8); интерсепт; концентрация анализируемого антигена (антител) в контрольной сыворотке (плазме). При определении чувствительности рассчитывают значение среднего квадратического отклонения (о) — по формуле (5), после чего на оси ординат калибровочного графика откладывают значение (Bq+2а) и из этой точки проводят прямую, параллельную оси абсцисс, до пересечения с калибровочным графиком; из точки пересечения опускают перпендикуляр на ось абсцисс — соответствующая этому значению концентрация характеризует чувствительность.

4.2.1.2    Наборы для иммунофермент но го анализа

Экспериментальная проверка качества этих наборов включает в себя определение следующих показателей, соотношение оптических плотностей (ОП) калибровочных проб: (ОП0 > ... > ОПШЛС при использовании метода конкурентного связывания, ОП0 < ... < 0ПиьхЛ — при сэндвич-варианте); соотношение ОП калибровочной пробы с минимальным содержанием антигена и нулевой калибровочной пробы (ОПМНН/ОП0 х 100); соотношение ОП калибровочной пробы с максимальным содержанием антигена и нулевой калибровочной пробы (ОПМ1ХС/ОП0 х 100); значение ОП в калибровочной пробе с максимальным значением ОП, чувствительность — определяют значение а по формуле (5), после чего остальные расчеты ведут так, как указано в 4.2.1.1; «открытие* — по формуле (6); «линейность* — по формуле (7); коэффициент вариации — по формуле (8); интерсепт; концентрация анализируемого антигена в контрольной сыворотке (плазме). Допускается определять соотношение ОП калибровочной пробы с минимальным содержанием антигена и калибровочной пробы с максимальным содержанием антигена (ОЛипн/ОПми,с х 100) и соотношение ОП предпоследней калибровочной пробы и калибровочной пробы с максимальным содержанием антигена (0#пр/0#мысс х 100).

4.2.1.3    Наборы для иммунофлуоресцентного анализа

Экспериментальная проверка качества этих наборов включает в себя определение следующих показателей: соотношение интенсивностей флуоресценции (ИФ) калибровочных проб: (ИФ0 > . . . > //ФМ4КС при использовании метода конкурентного связывания, #Ф0 < .. . < ИФилм.с — при сэндвич-варианте); соотношение ИФ калибровочной пробы с минимальным содержанием антигена и нулевой калибровочной пробы (ИФют/ИФ0 х 100); соотношение ИФ калибровочной пробы с максимальным содержанием антигена и нулевой калибровочной пробы (ИФШЯ£/ИФ0 х 100); значение ИФ в калибровочной пробе с максимальным значением антигена; чувствительность — определяют значение о по формуле (5), после чего остальные расчеты ведут так, как указано в 4.2.1.1; «открытие* — по формуле (6); «линейность» — по формуле (7); коэффициент вариации — по формуле (8); интерсспт, концентрация анализируемого антигена в контрольной сыворотке (плазме, сухом пятне крови). Допускается определять соотношение ИФ калибровочной пробы с минимальным содержанием антигена и калибровочной пробы с максимальным содержанием антигена (ИФЫЮ1/ИФЬШ.С х 100) и соотношение ИФ предпоследней калибровочной пробы (#Ф ) и калибровочной пробы с максимальным содержанием антигена (ИФщ/ИФми.с х 100).

4.2.1.4    Набор ы для и м му нохе м и л ю м и н е с це н т н о г о анализа

Экспериментальная проверка качества этих наборов включает в себя определение тех же

показателей, которые используют для проверки качества наборов для иммуноферментного анализа (см. 4.2.1.2); при этом определяют значение аналитического сигнала калибровочных и других исследуемых проб.

4.2.1.5    Наборы для других видов иммунохим ического анализа

Экспериментальная проверка качества этих наборов (основанных на использовании методов

иммунотурбидимстрии, иммунодиффузии и др.) включает в себя определение тех же показателей, которые используют для проверки качества наборов для иммуноферментного анализа (см. 4.2.1.2).

Описанные выше методы экспериментальной проверки качества наборов для различных вариантов иммунохим ического анализа относятся к наборам для выполнения количественных анализов (исследований).

При проверке качества наборов для качественного или полуколичественного определения особое значение имеет расчет соотношения значений оптических плотностей (или скоростей счета, или интенсивности флуоресценции, или аналитического сигнала) положительного и отрицательного контрольных образцов, входящих в состав набора. При этом используют следующие варианты:

а) разница значений оптических плотностей отрицательного и положительного контрольных образцов должна быть не более какого-либо заданного значения шли же должна находиться в каких-либо заданных пределах;