МУК 4.2.2321-08
Методы определения бактерий рода Campylobacter в пищевых продуктах

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методы определения бактерий рода Campylobacter в пищевых продуктах

Методические указания МУК 4.2.2321—08

Издание официальное

Москва • 2008

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методы определения бактерий рода Campylobacter в пищевых продуктах

Методические указания МУК 4.2.2321—08

ББК 51.23 М54

М54 Методы определения бактерий рода Campylobacter в пищевых продуктах: Методические указания.—М.: Федеральный центр гиг иены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2008.—31 с.

ISBN 5—7508—0740—1

1.    Разработаны: Государственным учреждением Научно-исследовательским институтом питания Российской Академии медицинских наук (В. А. Ту-тельян. С. А. Хотимченко. С. А. Шевелева, Н. Р. Ефимочкина, Ж. Н. Шу-рышева). Федеральным Государственным учреждением науки Государственным научным центром прикладной микробиологии и биотехнологии Роспотребнадзора (И. А. Дятлов, М. В. Храмов), Федеральным Государственным учреждением науки «Федеральный Научный Центр гигиены им. Ф. Ф. Эрмсмана» Роспотребнадзора (Г. М. Трухина), Управлением Роспотребнадзора по г. Москве (Н. Н. Филатов. И. И. Пискарева). ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в г. Москве» (О. В. Захарова, Н. Я. Салова).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека. Протокол от 06.12.2007 Ns 3.

3.    Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации. Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека Г. Г. Онищенко 24.01.2008.

4.    Введены впервые.

ББК 51J3

ISBN 5—7508—0740—1

© Роспотребнадзор, 2008 О Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2008

МУК 4.2.2321—08

Содержание

1.    Общие положения и область применения............................................................4

2.    Сущность метода....................................................................................................5

3.    Аппаратура, материалы, лабораторная посуда, реактивы и питательные

среды........................................................................................................................5

3.1.    Аппаратура и инструментарий.................. 5

3.2.    Лабораторная посуда и материалы..........................................................6

3.3.    Реактивы и питательные среды...............................................................7

3.4.    Тест-штаммы микроорганизмов............................................................10

4.    Подготовка к анализу...........................................................................................10

4.1.    Приготовление растворов и реактивов..................................................10

4.2.    Приготовление питательных сред.........................................................12

5.    Отбор и подготовка проб пищевых продуктов для анализа..............................18

5.1.    Общие положения по отбору и подготовке проб...................................18

5.2.    Отбор и подготовка проб мяса птицы и пти цеп роду ктов, мяса,

мясных полуфабрикатов, колбасных изделий и других мясопродуктов.....................................................................................19

5.3.    Отбор и подготовка проб молока, молочных продуктов, сыров,

мороженого.........................................................................................20

6.    Создание микроаэрофильных условий культивирования.................................20

7.    Проведение анализа..............................................................................................21

7.1.    Качественное определение....................................................................21

7.2.    Количественное определение................................................................22

8.    Отбор колоний и идентификация выделенных культур....................................23

8.1.    Определение принадлежности к роду Campylobacter.............................23

8.2.    Подтверждающие тесты родовой и видовой идентификации.................24

8.3.    Учет результатов и выдача ответа.........................................................27

9.    Требования безопасности.....................................................................................29

Библиографические данные.....................................................................................29

Приложение 1. Схема процедуры посева по НВЧ.................................................30

Приложение 2. Таблица для расчета наиболее вероятного числа

микроорганизмов (по ГОСТ 51446-99).....................................31

3

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

24 января 2008 г.

Дата введения: с момента утверждения.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГ ИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методы определения бактерий рода Campylobacter в пищевых продуктах

Методические указания _МУК    4.2.2321—4)8_

1. Общие положения и область применения

1.1.    Настоящие методические указания устанавливают порядок контроля и методы определения бактерий рода Campylobacter - возбудителей пищевых токсикоинфекций и острых кишечных заболеваний в пищевых продуктах при осуществлении государственного санитарно-эпидемиологического надзора, а также при санитарно-эпидемиологическом расследовании вспышек пищевых отравлений и инфекций с пищевым путем передачи.

Проведение контроля на бактерии рода Campylobacter позволит оценить степень загрязненности пищевой продукции и получить реальную картину ситуации в Российской Федерации, дать оценку эффективности принимаемых мер в целях обеспечения ее безопасности в плане новых и вновь возникающих возбудителей инфекций с пищевым путем передачи для здоровья и жизни человека.

1.2.    Методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, в т. ч. импортируемых в Российскую Федерацию, а также лабораторную диагностику заболеваний с пищевым путем передачи. Методические указа-

4

МУК 4.2.2321—08

ния могут быть использованы другими лабораторными центрами, осуществляющими контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованными в установленном порядке.

2. Сущность мегода

Метод определения бактерий рода Campylobacter основан на высеве определенных количеств продукта в жидкие селективные среды, содержащие антибиотики и аэротолерантные добавки с последующим пересевом на поверхность твердых селективных сред, инкубировании посевов, выявлении в этих посевах бактерий, способных расти и образовывать типичные колонии на поверхности селективнот агара, с последующим выделением чистой культуры. Все этапы инкубации посевов осуществляются в микроаэрофильных условиях. Идентификация чистых культур проводится по совокупности морфологических, биохимических и других признаков, определяющих принадлежность к видам бактерий рода Campylobacter.

3. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда, реактивы и питательные среды

3.1. Аппаратура и инструментарии

Анализатор потенциометрический, погрешность измерений pH ± 0,01 Шкаф сушильный стерилизационный ШСС-80 П или других марок, позволяющий поддерживать температуру (160 ± 5) °С Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру 37 °С с отклонением от заданной ±1 °С

Термостат, позволяющий поддерживать

рабочую температуру 42 °С с отклонением

от заданной ±1 °С

Баня водяная с подогревом

Весы лабораторные общего назначения, 2 и

4 класса точности, с наибольшим пределом

взвешивания 200 г

Микроскоп биологический МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, МБР-1, МБР-3, МБС Стерилизаторы паровые медицинские или аналогичные

ГОСТ 19881-74

ТУ 9452-010-00141798—2002

ТУ 9452-002-00141798—97

ТУ 9452-002-00141798—97 ГОСТ 12026-76

ГОСТ 24104—88Е

ТУ 9443-076-07502348—96 ГОСТ Р 500444-92

5

Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды в соответствии с ГОСТ 6709-90

Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 или других видов

Холодильник бытовой электрический с

морозильной камерой

Пинцет медицинский

Ножницы медицинские

Скальпель хирургический, 15 см

Штативы для пробирок

Часы механические сигнальные

Электроплитка

Универсальная лабораторная центрифуга (20000 х g) с охлаждением типа SIGMA 2-16К Стационарный анаэробный инкубатор или С0₂-инкубатор (Flow Lab.)

Или система для анаэробного культивирования с манометром (анаэростат) (HiMedia LE 001) Отсасыватель хирургический типа ХО-450-1 ТУ АО «Элема» (г. Новосибирск) или стерильные газонепроницаемые пакеты для контейнеров-анаэростатов HiMedia LE 010 Зажимы для контейнеров анаэростатов HiMedia LE 011

ТУ 4952-007-33142130—2000 ТУ 16-535—84

ГОСТ 16317-87 ГОСТ 21241-89 ГОСТ 21239-89 ГОСТ 21240-89

ГОСТ 3145-84 ГОСТ 14919-83

ТУ РЯГК 941624.001

Контейнеры для анаэробного культивирования HiMedia LE 007, LE 008 или LE 009 Гомогенизатор перистальтического типа «Микс-2», «Стомайкер» или других наименований AES Lab.,

Cat.N AESAP 1066

3.2. Лабораторная посуда и материалы Бумага фильтровальная лабораторная    ГОСТ 120260-76

Бутылки стеклянные для химических реактивов ГОСТ 15844-92 Кастрюли эмалированные    ГОСТ 24778-81

Марля медицинская    ГОСТ 9412-77

Колбы плоскодонные конические или

круглые разной вместимости    ГОСТ 1770-74

Флаконы стеклянные    ТУ 64-2-281—84

Воронки стеклянные    ГОСТ 25336-82

6

МУК 4.2.2321—08

ГОСТ 5556-81 ГОСТ 29227-91 ГОСТ 25336-82 ГОСТ 6672-75 ГОСТ 23932-90

ГОСТ 13646-68

ГОСТ 23932-90

Вата медицинская гигроскопическая Пипетки емкостью 1, 2, 5, и 10 см³ Пробирки типов П1, П2 Стекла предметные для микропрепаратов Спиртовки лабораторные стеклянные Термометр ртутный с диапазоном измерения от 0 до 100 °С (цена деления шкалы 1 °С)

Т ермоконтейнер (сумка-холодильник)

Петли бактериологические Чашки биологические (Петри)

Маркеры по стеклу

Отраслевой стандартный образец мутности ОСО 42-28-85-04П на 10 ед. НИИ СКМБП им. Тарасевича Роспотребнадзора Г азогенераторные пакеты для кампилобакте-рий объемом 3,5 литра HiMedia LE 002 D Смесь газов: кислорода (0₂) - 5 %, двуокиси углерода (СОг) -10%, азота (N₂) - 85 % в баллонах Обхваты резиновые

Допускается использование другой аппаратуры, инструментария, лабораторной посуды и материалов аналогичного назначения для проведения исследовании в соответствии с данным документом. Аппаратура, инструментарий, лабораторная посуда и материалы импортного производства должны иметь разрешение уполномоченных органов Российской Федерации на их применение.

ТУ 6-16-2956—92

3.3. Реактивы и питательные среды

3.3.1. Реактивы, компоненты сред Натрий гиппурат (содержание основного вещества 99 %) Acros 41170 Нингидрин (содержание основного вещества 99 %) Riedel-de Наеп 33437 Раствор перекиси водорода 3 %-й водный Дистиллированная вода    ГОСТ 6709-90

Диски для выявления оксидазы HiMedia DD018

Натрий фосфорнокислый двухзамешенный

Ыа₂НР0₄ (безводный), чда    ГОСТ 4193-75

7

Натрий фосфорнокислый однозамещенный гидрат NaHP0₄ • Н₂0 Натрия хлорид

Набор реактивов для окраски по Граму Масло иммерсионное для микроскопии Спирт этиловый ректификованный Агар-агар микробиологический Пептон

Мясной экстракт

Кровь баранья дефибринированная стерильная ЗАО «Эколаб», Россия Натрий пировинограднокислый, ч Железо (II) сернокислое Натрий мстабисульфит Или ростовая (аэротолерантная) добавка для кампилобактерий следующего состава: натрия пируват- 125,0 мг, натрия метабисульфит- 125,0 мг, железа (II) сульфат -

125.0    мг HiMedia FD 009

Добавка антибиотиков для кампилобактерий-1 (по Блэйзер-Вонг): полимиксин В - 1250 ME, ванкомицин - 5,0 мг, триметоприм - 2,5 мг, амфотерицин В - 1,0 мг, цефалотин - 7,5 мг HiMedia FD006

Добавка антибиотиков для кампилобактерий-II (по Бутцлеру), модифицированная, следующего состава:

бацитрацин - 12 500 ME, колистина сульфат -5 000 ЕД, амфотерицин В - 5,0 мг, цефазолина натриевая соль - 7,5 мг, новобиоцин - 2,5 мг HiMedia FD165

Добавка антибиотиков модифицированная III (по Дойлу): ванкомицин - 7,50 мг, тримето-прима лактат - 2,50 мг, амфотерицин В -

5.00    мг, полимиксина В сульфат - 10 000 ME HiMedia FD 159

Добавка антибиотиков для кампилобактерий-IV (по Престону) модифицированная: полимиксина В сульфат - 2 500 ME, рифампицин - 5,00 мг, триметоприма лактат -

ГОСТ 4198-75 ГОСТ 4233-77

ГОСТ 31739-78 ГОСТ 5962-67 ГОСТ 17206-96 ГОСТ 13805-76

ТУ 6-09-08-990—75 ГОСТ 4148-66 ГОСТ 10.575-76

8

МУК 4.2.2321—08

5.00    мг, амфотерицин В - 5,00 мг HiMcdia FD158

Добавка антибиотиков для кампилобактерий-V: цсфоперазон - 16,00 мг HiMedia FD067 Добавка антибиотиков для селективного выделения термофильных камиилобактерий (CAT): цефоперазон - 4,0 мг, тейкопланин -

2.0    мг, амфотерицин В - 5,0 мг HiMedia FD145 Селективная добавка антибиотиков для кампилобакагара: иолимиксин В - 1 мг, рифампицин - 5 мг, амфотерицин В - 1,5 мг, ристомицин - 5 мг, ФГУН ГНЦ ПМБ

(Оболенск)    ТУ    9398-057-7895326—2007

Диски с цефалотином (Ch 30) HiMedia SD050 Диски с налидиксовой кислотой (Na 30)

HiMedia SD050

Тетраметил-пара-фенилендиамин (гидрохло-

3.3.2.1.    Обогащающие бульоны Основа бульона для накопления кампилобак-терий (Престона) HiMedia М899

Основа бульона для накопления кампилобак-

терий (Дойла) HiMedia М 916

Основа бульона для бруцелл HiMedia М 348

3.3.2.2.    Агаровые среды Основа агара Престон HiMedia М 939 Основа угольного селективного агара для кампилобактерий HiMedia М 887 Основа колумбийского кровяного агара HiMedia М 144 BD BBL™

Основа агара Мюллера-Хинтона HiMedia М 173 BD BBL”

Кампилобакагар    ТУ    9398-057-7895326—2007

рид) (C₁₀H₁₆N₂ • 2НС1)

Ацетон

Спирт бутиловый нормальный, чда Кислота соляная, хч Натрия гидроокись, чда

ТУ 6-09-1903—77 ГОСТ 2768-84 ГОСТ 6006-51 ГОСТ 3118-77 ГОСТ 4328-77

3.3.2. Среды питательные

9

«Питательные среды», ФГУН ГНЦ ПМБ (Оболенск)

Трехсахарный железосодержащий агар (ТСА)

HiMedia М 021/М 0211 Или среда № 13 Трехсахарный железосодержащий агар ФГУН ГНЦ ПМБ (Оболенск)    ТУ 9398-013-7895326—2006

Допускается использование других коммерческих питательных сред и диагностических препаратов аналогичного состава и назначения для проведения исследований в соответствии с данным документом. Питательные среды и диагностические препараты импортного производства должны иметь разрешение уполномоченных органов Российской Федерации на их применение. При их приготовлении следует руководствоваться рекомендациями изготовителя.

3.3.2.3. Тест-системы биохимические для видовой идентификации API CAMPY, BioMerieux (или тест-системы аналогичного назначения других изготовителей, обеспечивающие выполнение видовой идентификации кампилобактерий)

3.4'. Тест-штаммы микроорганизмов Тест-штаммы Campylobacter jejuni,

Campylobacter coli, Campylobacter lari, типичные по культуральным, морфологическим и биохимическим свойствам, паспортизированные и депонированные в установленном порядке, ФГУН ГНЦ ПМБ (Оболенск)

Штаммы необходимо сохранять в лиофильно высушенном виде. При регулярном использовании допускается сохранять в полужидком агаре для бруцелл в пробирках с плотно притертыми пробками, в защищенном от света месте, при температуре (5 ± 1) °С с еженедельным пересевом.

4. Подготовка к анализу

4.1. Приготовление растворов и реактивов

4.1.1. Изотонический раствор хлорида натрия Натрия хлорид - 85,0 г Дистиллированная вода - 1,0 л

Растворить натрия хлорид в дистиллированной воде, стерилизовать автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин.

МУК 4.2.2321—08

4.1.2. Реактив для обнаружения оксидазы Тстрамстил-пара-фенилендиамин (гидрохлорид) - 0,1 г Стерильная дистиллированная вода - 10 мл

Растворить тетраметил-пара-фенилсндиамин (гидрохлорид) в дистиллированной воде, использовать непосредственно после приготовления.

4.1.3. Фосфатный буферный раствор для приготовления раствора гиппурата натрия Двухзамещенный фосфорнокислый натрий Na2HP0₄ (безводный) -12,0 г

Однозамещенный фосфорнокислый натрий NaHP0₄ • Н₂0 - 2,2 г Натрия хлорид - 85,0 г Дистиллированная вода - 1,0 л

Растворить ингредиенты в небольшом объеме дистиллированной воды в колбе. После растворения довести объем дистиллированной водой до 1,0 литра. В случае необходимости довести pH до 7,4—7,5 с помощью 0,1 н НС1 или 0,1 н NaOH. Стерилизовать автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин.

4.1.4. Раствор гиппурата натрия Натрий гиппурат (содержание основного вещества 99 %) - 10,0 г Фосфатный буферный раствор - 1,0 л

Растворить гиппурат натрия в стерильном буферном растворе. Разлить в пробирки по 0,4 мл. Хранить при температуре минус 20 °С не более 1 месяца. Перед использованием разморозить при комнатной температуре.

4.1.5. Раствор нингидрина Нингидрин (содержание основного вещества 99 %)- 10,0 г Ацетон - 25 мл Бутиловый спирт - 25 мл

Растворить нингидрин в смеси ацетона и бутилового спирта. Хранить в защищенном от света месте при температуре (5 ± 1) °С не более 3 месяцев.

4.1.6. Лэротолерантная добавка Натрий пировинограднокислый - 6,25 г Железо (II) сернокислое - 6,25 г Натрий метабисульфит - 6,25 г Стерильная дистиллированная вода - 100 мл

11

Растворить натрий пировинограднокислый в 10—20 мл стерильной дистиллированной воды, после растворения довести объем воды до 100 мл. Добавить железо (11) сернокислое и натрия метабисульфит. Разлить в пробирки по 4 мл. Хранить в защищенном от света месте при температуре минус 20 °С не более 1 месяца. Раствор чрезвычайно чувствителен к воздействию света, после добавления в питательные среды рекомендуется сохранять их в защищенном от света месте.

4.1.7. Приготовление растворов и реактивов для окраски препаратов по Грому

Производят согласно требованиям ГОСТ 10444.1 или в соответствии с инструкцией по применению.

4.2. Приготовление питательных сред

Селективность сред для выделения бактерий рода Campylobacter по отношению к сопутствующей микрофлоре достигается путем включения в их состав антибиотиков: цсфоперазона, колистина, амфотерицина В, ванкомицина, триметоприма, полимиксина и других. С целью повышения аэротолерантности и снижения окислительно-восстановительного потенциала сред, в них добавляют дефибринированную баранью кровь в количестве не менее 7 % к объему или древесный уголь, а также восстанавливающие агенты: натрия пируват, натрия метабисульфит, железо (II) сульфат.

Так как бактерии рода Campylobacter являются микроаэрофильны-ми микроорганизмами, крайне важно предотвращать попадание кислорода в питательные среды для их культивирования, для чего необходимо соблюдать следующие правила:

•    предпочтительней использовать свежеприготовленные среды, срок хранения питательных сред не должен превышать двух недель в условиях холодильника;

•    перемешивание компонентов готовых сред (при растворении добавок антибиотиков, перемешивание крови), самих сред после добавления в них компонентов проводить способом, исключающим попадание в них пузырьков воздуха;

•    подсушивание поверхности чашек перед посевом в термостате осуществлять с закрытыми крышками, при температуре 42 °С в течение 2—3 часов.

Среды промышленного изготовления, поименованные в п. 3.3.2, готовятся согласно прилагаемым инструкциям или прописям на этикетках. Допускается применение сред лабораторного приготовления по п.п. 4.2.1.1,4.2.2.1 из отдельных компонентов.

4.2.1. Приготовление бульонов

4.2.1.1. Селективный бульон (Престона) для накопления кампилобактерий. Состав основы среды:______

Ингредиенты

Количество, г

Пептон

10,0

Мясной экстракт

10,0

Натрия хлорид

5,0

Агар

1,0

Вода

1 000,0

Растворить основные компоненты в дистиллированной воде. При необходимости подогреть до кипения для полного растворения частиц. В случае необходимости установить pH 7,5 ± 0,2 с помощью 0,1 н HCI или 0,1 н NaOH. Стерилизовать автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин. Остудить до 45—50 °С Приготовление полной среды:

Перед использованием в 1 000 мл бульона асептически добавить: 70 мл стерильной дефибринированной крови барана; растворенное в 50%-ном растворе ацетона содержимое двух флакончиков с добавкой антибиотиков для кампилобактерий IV (по Престону) или 1 (по Блэйзер-Вонг) или растворенное в 50 %-ном растворе этанола содержимое двух флакончиков с добавкой антибиотиков II (по Бущлеру) и растворенное в стерильной дистиллированной воде содержимое двух флакончиков ростовой добавки для кампилобактерий или 4 мл аэротолерантной добавки по п. 4.1.6, тщательно перемешать и разлить среду в соответствующие емкости в количествах, необходимых для проведения исследования.

4.2.1.2. Селективный бульон (Дойла) для накопления кампилобактерий. Состав основы среды:_

Ингредиенты

Количество, г/л

Г ид ро лизат казеина

10,0

Пептический перевар животной ткани

10,0

Дрожжевой экстракт

2,0

Глюкоза

1,0

Натрия хлорид

5,0

Натрия бисульфит

0,1

Натрия сукцинат

3,0

L-цистеина гидрохлорид

0,1

pH (при 25 °С) 7,0 ± 0,2

Используют готовую основу среды промышленного изготовления указанного состава.

13

Приготовление осуществляют согласно прописи на этикетке. Растворить сухую основу порошка в дистиллированной воде. При необходимости подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин. Остудить до температуры 45 °С.

Приготовление полной среды:

Перед использованием в 500 мл бульона асептически добавить 35 мл стерильной дефибринированной крови барана, а также растворенное в 50 %-ном растворе этанола содержимое 1 флакончика с добавкой антибиотиков модифицированной III (по Дойлу). Тщательно перемешать и разлить в соответствующие емкости в количествах, необходимых для проведения исследования.

4.2.1.3. Бульон для бруцелл (неселективный) Состав основы среды:__

Ингредиенты

Количество, г/л

Г идролизат казеина

10,0

Пептический перевар животной ткани

10,0

Дрожжевой экстракт

2,0

Глюкоза

1.0

Натрия хлорид

5,0

Натрия бисульфит

0,1

pH (при 25 °С) 7,0 ± 0J2

Используют готовую основу среды промышленного изготовления указанного состава.

Приготовление осуществляют согласно прописи на этикетке. Растворить порошок сухой основы в дистиллированной воде. При необходимости подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин. Разлить по пробиркам из расчета 10 мл на 1 пробирку.

4.2.2. Приготовление агаровых сред.

4.2.2.1. Селективный агар Престона. Состав основы среды:__

Ингредиенты

Количество, г

Пептон

10,0

Мясной экстракт

10,0

Натрия хлорид

5,0

Агар-агар

12,0

Вода

1 000,0

pH (при 25 °С) 7,5 ± 0,2

МУК 4.2.2321—08

Растворить основные компоненты в дистиллированной воде. При необходимости довести до кипения для полного растворения частиц. В случае необходимости установить pH 7,5 ± 0,2 с помощью 0,1 н НС1 или 0,1 н NaOH. Стерилизовать автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин. Остудить до 45—50 °С.

Приготовление полной среды:

Перед использованием в 1 000 мл расплавленного и остуженного до 45—50 °С агара асептически добавить: 70 мл стерильной дефибриниро-ванной крови барана; растворенное в 50 %-ном растворе ацетона содержимое двух флакончиков с добавкой антибиотиков для кампилобакте-рий IV (по Престону) или I (по Блэйзер-Вонг), или растворенное в 50 %-ном растворе этанола содержимое двух флакончиков с селективной добавкой для кампилобактерий II (но Бутцлер) и растворенное в воде содержимое двух флакончиков ростовой добавки для кампилобактерий или 4 мл аэротолерантной добавки по п. 4.1.6, тщательно перемешать и разлить среду в стерильные чашки Петри слоем толщиной 4—5 мм.

42.2.2. Угольный селективный агар для кампилобактерий. Состав основы среды:__

Ингредиенты

Количество, г/л

Г идролизат казеина

3,0

Пептический перевар животной ткани

10,0

Мясной экстракт

10,0

Натрия хлорид

5,0

Железа сульфат

0,25

Натрия пируват

0,25

Уголь древесный бактериологический

4,0

Агар-агар

12,0

pH (при 25 °С) 7,0 ±0,2

Используют готовую основу среды промышленного изготовления указанного состава.

Приготовление осуществляют согласно прописи на этикетке. Растворить порошок сухой основы в дистиллированной воде. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин. Остудить до 45— 50 °С.

Приготовление полной среды:

в 500 мл расплавленного и остуженного до 45—50 °С агара асептически добавить растворенное в 2 мл стерильной дистиллированной воды содержимое 1 флакончика с добавкой антибиотиков CAT или раство-

15

рсиное в 2 мл стерильной дистиллированной воды содержимое 1 флакончика с добавкой антибиотиков-V. Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри слоем толщиной 4—5 мм.

4.2.2.3. Кампилобакагар. Состав основы среды:

Ингредиенты

Количество, г/л

Панкреатический гидролизат казеина

5,0

Кислотный гидролизат казеина

20,0

Агар

15,0 ±3,0

Натрий углекислый

0,1—0,4

Используют готовую основу среды промышленного изготовления указанного состава.

Приготовление осуществляют согласно прописи на этикетке. Растворить порошкообразную сухую основу в дистиллированной воде. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин. Остудить до 45—50 °С.

Приготовление полной среды:

перед использованием в 1 ООО мл расплавленного и остуженного до 45—50 °С агара асептически добавить 70 мл стерильной дефибриниро-ванной крови барана. Содержимое флакона с селективной добавкой антибиотиков для кампилобакагара растворить в 1,5 мл стерильной дистиллированной воды с добавлением 5—7 капель 96 %-ного этилового спирта. Полученную смесь антибиотиков в количестве двух флаконов добавить в агар, тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри слоем толщиной 4—5 мм.

4.2.2.4. Полужидкий бульон для бруцелл (неселективный). Состав основы бульона:__

Ингредиенты

Количество, г/л

Г ид ролизат казеина

10,0

Пептический перевар животной ткани

10,0

Дрожжевой экстракт

2,0

Глюкоза

1,0

Натрия хлорид

5,0

Натрия бисульфит

0,1

pH (при 25 °С) 7,0 ± 0,2

К готовой основе среды промышленного изготовления указанногр состава добавить агар из расчета 2,0 г/л среды, далее приготовление

МУК 4.2.2321—08

осуществлять согласно прописи на этикетке. Растворить порошкообразную сухую основу в дистиллированной воде. Довести до кипения для полного растворения частиц, тщательно перемешать, разлить по пробиркам из расчета 5 мл на 1 пробирку. Стерилизовать автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин.

4.2.2.5. Колумбийский кровяной агар (неселективный). Состав основы среды:____

Ингредиенты

Количество, г/л

Пептон (специальный)

23,0

Крахмал кукурузный

1,0

Натрия хлорид

5,0

Агар-агар

15,0

pH (при 25 °С) 7,3 ±0,2

Используют готовую основу среды промышленного изготовления указанного состава.

Приготовление осуществляют согласно прописи на этикетке. Растворить порошкообразную сухую основу в дистиллированной воде. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать ав-токлавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин. Остудить до 40—50 °С и асептически внести 70 мл стерильной дефибринированной крови барана, тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри слоем 4—5 мм.

4.2.2.6. Агар Мюллера-Хинтона. Состав основы среды:_

Ингредиенты

Количество, г/л

Мясной настой

300,0

Г идролизат казеина

17,5

Крахмал

1,5

Агар-агар

17,0

pH (при 25 °С) 7,3 ± 0,2

Используют готовую основу среды промышленного изготовления указанного состава.

Приготовление осуществляют согласно прописи на этикетке. Растворить порошкообразную сухую основу в дистиллированной воде. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин. Остудить до

17

45—50 °С. Добавить 70 мл стерильной дефибринированной крови барана, тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

4.2.2.7. Трехсахарный железосодержащий агар (для идентификации). Допускается использование двух модификаций среды: ТСА и среды № 13.

Состав сред:

Ингредиенты, г/л

Среды:

№ 13

ТСА

Пептический перевар животной ткани

10,0

20,0

Гидролизат казеина

10,0

-

Дрожжевой экстракт

3,0

3,0

Мясной экстракт

3,0

3,0

Лактоза

10,0

10,0

Сахароза

10,0

10,0

Глюкоза

1,0

1,0

Натрия хлорид

5,0

5,0

Железа сульфат

0,2

-

Железа (III) цитрат

-

0,3

Натрия тиосульфат

0,3

-

Натрия тиосульфат (• 5Н₂0)

-

0,3

Феноловый красный

0,024

0,024

Агар-агар

12,0

12,0

pH (при 25°С) 7,4 ± 0,2

Используют готовые основы сред промышленного изготовления с указанным составом.

Приготовление осуществляют согласно прописям на этикетках. Растворить порошкообразную сухую основу в дистиллированной воде. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Тщательно перемешать и разлить в пробирки для тестирования. Стерилизовать автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин. Остудить среду в наклонном положении при комнатной температуре для формирования скоса и столбика высотой 2,5 см.

5. Отбор и подготовка проб пищевых продуктов для анализа

5.1. Общие положения по отбору и подготовке проб Отбор и подготовку проб продукции производят в соответствии с ГОСТ 26668-85 «Методы отбора проб для микробиологических анализов», ГОСТ 26669-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка

18

МУК 4.2.2321—08

проб для микробиологических анализов», МУК 4.2.577—96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов», ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218—96), а также в соответствии с действующими ГОСТ и НД на конкретные виды продуктов.

Масса или объем отбираемых проб должны быть достаточными для проведения исследования и минимально вдвое превышать размер аналитического^) образца(ов).

Учитывая, что кампилобактерии чрезвычайно чувствительны к воздействию факторов окружающей среды, таких как высушивание, снижение pH, нагревание, воздействие УФ лучей и длительное хранение, при отборе проб пищевых продуктов на наличие бактерий рода Campylobacter необходимо соблюдать следующие правила:

•    отбор проб и их доставку в лабораторию для исследования проводят в максимально короткие сроки, по возможности не более 1 часа;

•    отбор проб твердых пищевых продуктов осуществляют в стерильные газонепроницаемые пакеты, удаляют избыток воздуха, герметизируют путем перекручивания свободных краев пакета и фиксации при помощи обхвата. Пробы жидких продуктов отбирают в герметично закрывающуюся стерильную стеклянную посуду;

•    доставку проб в лабораторию осуществляют в термоконтейнере с охлаждающими вкладышами (сумке-холодильнике);

•    до проведения анализа пробы сохраняют в защищенном от света месте, при температуре (5 ± 1) °С. Пробы замороженных продуктов размораживают в защищенном от света месте при температуре (5 ± 1) °С в течение не более 18 ч, или в течение 1 ч при температуре (19 ±1) °С;

•    после вскрытия упаковки пробы подвергают исследованию немедленно, приготовление объединенной пробы, навесок продукта и посев осуществляют в максимально короткие сроки. Для приготовления объединенной пробы продукт измельчают, но активное перемешивание измельченной пробы не рекомендуется.

5.2. Отбор и подготовка проб мяса птицы и птицепродуктов, мяса, мясных полуфабрикатов, колбасных изделий и других мясопродуктов

Отбор и подготовку проб мяса птицы и птицепродуктов, мяса, мясных полуфабрикатов, колбасных изделий и других мясопродуктов проводят по ГОСТ Р 50396.0-92 «Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям».

19