МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МУКА, ХЛЕБ И ХЛЕБОБУЛОЧНЫЕ ИЗДЕЛИЯ ПШЕНИЧНЫЕ ВИТАМИНИЗИРОВАННЫЕ
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА В, (ТИАМИНА)
Группа 1139
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МУКА, ХЛЕБ И ХЛЕБОБУЛОЧНЫЕ ИЗДЕЛИЯ ПШЕНИЧНЫЕ ВИТАМИНИЗИРОВАННЫЕ
Метод определения витамина В, (тиамина)
Wheat vitaminized Hour, bread and baked products. Method for vitamin B| (tiamin) determination
MKC 67.060 ОКСТУ 9109. 9209
ГОСТ 29138-91 С. 2
Воронки лабораторные диаметром 35 и 75 мм но ГОСТ 25336.
Стаканы химические типов В и Н. исполнений 1, 2. вместимостью 25 см3 по ГОСТ 25336.
Палочки стеклянные но ГОСТ 21400.
Пинетки исполнений 4. 5. вместимостью 1 и 2 см3 по ГОСТ 29227.
Пипетки исполнений 6. 7. вместимостью 5 и 10 см3 по ГОСТ 29227.
Склянки из темного стекла с притертыми пробками вместимостью 300—1000 см3.
Тиамин хлорид по ФС 42—2413.
Амилоризин Г110Х по ОСТ 64—037.
Кислота соляная по ГОСТ 3118. х. ч. или ч. д. а., раствор концентрации 0.1 моль/дм3.
Спирт изобутиловый по ГОСТ 9536. х. ч. или бутиловый по ТУ 09—664.
Толуол по ГОСТ 5789. ч. д. а.
Калий железосинеродистый по ГОСТ 4206. х. ч. или ч. д. а., раствор концентрации 0.01 г/см3; хранят в темной склянке не более 2 суг.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328. х. ч. или ч. д. а., раствор концентрации 0.3 г/см3.
Натрий уксуснокислый по ГОСТ 199. х. ч. или ч. д. а., насыщенный водный раствор.
Уголь активный осветляющий древесный по ГОСТ 4453.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ
3.1. Бараночные изделия и сухари измельчают на лабораторной мельнице так. чтобы весь размолотый продукт прошел при просеивании через решетное полотно с отверстиями диаметром 1.1 мм.
Хлебные изделия разрезают на четыре части по двум взаимно перпендикулярным направлениям. Затем берут две диаметрально противоположные четверти, которые разрезают ножом на небольшие ломтики. Последние пропускают через мясорубку или тщательно измельчают ножом.
Измельченную пробу тщательно перемешивают.
3.2. Приготовление основного стандартного раствора тиамина
Навеску тиамина хлорида массой 0.126 г1 помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3.
доводят объем дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают, переносят в склянку из темного стекла с притертой пробкой и добавляют 0,5 см3 толуола.
Концентрация основного стандартного раствора тиамина составит 100 мкг/см3.
Раствор хранят в холодильнике нс более 2 мсс.
3.3. Приготовление рабочего стандартного раствора тиамина
3—5 см3 основного стандартного раствора тиамина помешают в химический стакан и выдерживают до приобретения раствором комнатной температуры.
Затем 1 см3 основного стандартного раствора тиамина, отобранного пипеткой вместимостью 1 см3, переносят в мерную колбу вместимостью 500 см3, доводят объем дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают.
Концентрация рабочего стандартного раствора тиамина составит 0.2 мкг/см3.
Раствор готовят в день проведения анализа.
3.4. Г1 р и готовленис окислительной смеси
К 2 см3 раствора железосинеродистого калия концентрации 0.01 г/см3 прибавляют 10 см3 раствора гидроокиси натрия концентрации 0.3 г/см3 и тщательно перемешивают. Смесь пригодна к употреблению в течение 2—3 ч.
3.5. Очистка бутилового и и з о б у т и л о в о г о спиртов
Перед проведением анализа измеряют флюоресценцию используемых спиртов в сравнении с дистиллированной водой. При наличии флюоресценции спирт очищают.
Дли этого к 1 дм3 спирта прибавляют навеску активного угля массой от 15 до 20 г. встряхивают в течение 30 мин на смесителе-качалке, оставляют на сутки, затем декантируют, фильтруют и перегоняют на глицериновой или песчаной бане при температуре 117 ’С (бутанол) и 108 1С (изобутанол).
После очистки проверяют отсутствие флюоресценции спирта в сравнении с дистиллированной водой.
С. 3 ГОСТ 29138-91
4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
4.1. Тиамин определяют и двух пархыельных навесках продукта.
4.2. Г и д р о л и з
Навеску продукта массой 10.0 г2 помешают в колбу вместимостью 250 см3 и приливают 150 см’ раствора соляной кислоты концентрации 0.1 моль/дм3.
Гидролиз осуществляют на кипящей водяной бане в течение 40 мин. закрыв горло колбы воронкой диаметром 35 мм.
Содержимое колбы следует периодически перемешивать, особенно в первые 5 мин.
По окончании гидролиза колбу охлаждают до комнатной температуры и с помощью насыщенного водного раствора уксуснокислого натрия доводят pH гидролизата до 4.5:0.1 (потен циометри-чески).
Посте этого к гидролизату добавляют навеску амилоризина массой 0.10 г. 2—3 капли толуола и затем колбу помещают в термостат на 14—16 ч при температуре 37 2С. После этого гидролизат охлаждают, доводят обьем до 250 см3 дистиллированной водой и фильтруют. В фильтрате определяют содержание тиамина.
Если имеется необходимость прервать анализ на 1—2 дня. то перед доведением объема до 250 см3 гидролизат кипятят 5 мин. охлаждают, доводят обьем до 250 см3 и фильтруют. До проведения анализа фильтрат хранят в холодильнике в плотно закрытой колбе.
4.3. Очистка фильтрата от примесей, мешающих определению
В день проведения испытания 25 см3 фильтрата переносят в делительную воронку вместимостью 250 см3, добавляют 25 см’ бутилового или изобут илового спирта. Воронку встряхивают в течение 1 мин и после отстаивания для разделения слоев водный стой (нижний) собирают в колбу вместимостью 100 см3.
Аналогичным образом поступают с приготовленным рабочим стандартным раствором тиамина.
4.4. Окисление тиамина в т и о х р о м
В гри конические колбы отмеривают по 5 см3 очищенного гидролизата. Затем в две из них добавляют но 1,2 см3 окислительной смеси, а в третью — 1.2 см3 раствора гидроокиси натрия концентрации 0.3 г/см3 (контрольный раствор к испытуемому раствору). Все колбы энергично встряхивают. прибавляют по 10 см3 изобутилового спирта и снова энергично встряхивают в течение 1 мин для извлечения тиохрома. Водный и спиртовой слои разделяют отстаиванием в темном месте. Затем спиртовой слой (верхний) сливают в кюветы для измерения интенсивности флюоресценции.
Аналогичным образом поступают с очищенным рабочим стандартным раствором тиамина.
Время с момента начала экстракции тиохрома до измерения его флюоресценции не должно превышать 30 мин.
4.5. Измерение флюоресценции тиохрома
При работе на флюорометре марки ЭФ-ЗМА устанавливают светофильтры для В,, стрелка прибора выводится на нулевое деление но воздуху, затем на деление 50 единиц — по экстракту тиохрома из рабочего стандартного раствора.
При работе на флюорометре марки ФМ-Ц-2 устанавливают светофильтры, дающие длины волн возбуждения 360 нм и флюоресценции — 420 нм.
Измерение интенсивности флюоресценции растворов осуществляют по отношению к бутило-вому или изобутиловому спирту.
При работе на флюорометрах других марок интенсивность флюоресценции тиохрома измеряют при светофильтрах, дающих диапазон длин волн возбуждения в области 360—390 нм и флюоресценции — 400—450 нм.
5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
5.1. Массовую долю тиамина (А), мг на 100 г продукта, вычисляют по формуле
JT- или JT- iA-V .
т 10 (В-В:)-2
где А — интенсивность флюоресценции испытуемого раствора, среднее из двух параллельных определений. ед. прибора;
ГОСТ 29138-91 С. 4
Av — интенсивность флюоресценции контрольного раствора к испытуемому раствору, ед. прибора: В — интенсивность флюоресценции стандартного раствора тиамина, среднее из двух параллельных определений, ед. прибора;
Вх — интенсивность флюоресценции контрольного раствора к стандартному раствору тиамина, ед. прибора;
Ху — массовая доля тиамина в используемом дли окислении тиамина в тиохром объеме стандартного раствора, мкг; т — масса пробы продукта, используемая дли испытании, г;
V— общий объем гидролизата, см3;
Уу — объем испытуемого раствора, используемый для окислении тиамина в тиохром. см3;
10 — коэффициент пересчета из мкг/г в мг/100 г продукта;
2 — коэффициент, включающий иостоинные величины: А”,*! мкг; /я=10 г; 1^=250 см3; Уу=5 см3 и коэффициент пересчета =10.
5.2. Вычислении проводит до третьего десятичного знака с последующим округлением до второго десятичного знака.
Полученный результат должен быть в диапазоне 0.25—1.00 мг/100 г продукта. В противном случае испытание повторяют с уточненной навеской продукта (см. п. 4.2).
5.3. За окончательный результат испытании принимают среднеарифметическое значение (X) результатов двух параллельных определений, допускаемое расхождение (</) между которыми в мг/100 г не должно превышать 0.15 X.
5.4. При контрольных определениях допускаемое расхождениемежду контрольным и первоначальным определениями в мг/100 г не должно превышать 0.42 X (X — среднеарифметическое значение результатов контрольного и первоначального определений).
При контрольном определении за окончательный результат испытании принимают результат первоначального определения, если расхождение между результатами контрольного и первоначального определений не превышает допускаемого значения; если расхождение превышает допускаемое значение, то за окончательный результат испытаний принимают результат контрольного определения.
С. 5 ГОСТ 29138-91
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН ВИНО «Зернопродукт. РАЗРАБОТЧИКИ
Г.С. Зелинский, канд. тсхн. наук; К.Л. Чурусов, канд. техн. наук (руководитель темы); А.Ф. Шухнов, канд. техн. наук; А.М. Каменецкая, канд. техн. наук; Н.А. Игорянова, канд. техн. наук; А.И. Быстрова; Jl.11. Гусева, канд. биол. наук; Е.Н. Степанова, канд. с.-х. наук
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 29.11.91 № 1835
3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ 3
1
Данная навеска тиамина хлорида соответствует 0.100 г основного биологически активною вещества (тиамина).
2
Масса навески должна обеспечить концентрацию тиамина в измеряемом растворе в диапазоне 0.10—0,40 мкг/см', что при данных навеске и разведениях будет соответствовать содержанию тиамина в продукте 0.25—1.00 мг/100 г.
3
ПЕРЕИЗДАНИЕ
