ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

Соки фруктовые и овощные

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ САХАРОЗЫ

CoKi з садавшы i агародшны

МЕТАД ВЫЗНАЧЭННЯ САХАРОЗЫ

(ГОСТ Р 51938-2002, ЮТ)

Издание официальное

О

CN

CSI

1лБ

УДК 663.813:543.635(083.74X476)    МКС    67.080.01    КП    03    ЮТ

Ключевые слова: сок фруктовый, сок овощной, нектар, напиток сокосодержащий, сахароза, D-глюкоза, спектрофотометрия

ОКП РБ 15.23.10

Предисловие

Цели, основные принципы, положения по государственному регулированию и управлению в области технического нормирования и стандартизации установлены Законом Республики Беларусь «О техническом нормировании и стандартизации».

1    ПОДГОТОВЛЕН научно-производственным республиканским унитарным предприятием «Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации» (БелГИСС)

ВНЕСЕН Госстандартом Республики Беларусь

2    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ постановлением Госстандарта Республики Беларусь от 28 декабря 2006 г. № 65

3    Настоящий стандарт идентичен национальному стандарту Российской Федерации ГОСТ Р 51938-2002 «Соки фруктовые и овощные. Метод определения сахарозы», разработанному на основе национального стандарта Германии ДИН ЕН 12146:96 «Соки овощные и фруктовые. Энзиматическое определение общего содержания сахарозы. Спектрометрический метод с NADP».

Разработан Московским государственным университетом пищевых производств.

Дополнительные требования, отражающие потребности экономики страны, выделены курсивом.

Официальные экземпляры национального стандарта Российской Федерации, на основе которого подготовлен настоящий государственный стандарт, и стандартов, на которые даны ссылки, имеются в БелГИСС.

Степень соответствия - идентичная (ЮТ)

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Настоящий стандарт не может быть воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта Республики Беларусь

Издан на русском языке

Приложение А

(справочное)

Содержание сахарозы в природных фруктовых и овощных соках [6]

Таблица А.1

Наименование сока или сока-пюре Единица измерения содержания сахарозы в природных фруктовых и овощных соках г/дм3 г/кг Апельсиновый сок 10-50 - Грейпфрутовый сок 5-40 - Яблочный сок 5-30 - Виноградный сок (красный и белый) Отсутствует Ананасовый сок 25-80 - Лимонный сок Не более 7,0 - Сок маракуйи 10-45 - Грушевый сок/пюре - Следы - 15 Абрикосовый сок/пюре - Следы - 55 Томатный сок Не более 1,0 - Сок черной смородины Отсутствует Вишневый сок/пюре Отсутствует Малиновый сок/пюре Отсутствует Клубничный (земляничный) сок/пюре - Не более 10,0 Персиковый сок/пюре - 12-60

8

С ТБ ГОСТ Р 51938-2006

Приложение Б

(справочное)

Медленнотекущие реакции

Медленнотекущие реакции возникают вследствие присутствия в матрице пробы ферментов, не указанных в стандарте, а также вследствие взаимодействия побочных компонентов матрицы с реактивами, участвующими в ферментативной реакции.

При проведении запланированной ферментативной реакции оптическая плотность через 10-20 мин принимает постоянное значение, которое зависит от скорости специфичной ферментативной реакции. При появлении медленнотекущей реакции оптическая плотность раствора пробы в кювете меняется стечением времени.

В случае возникновения медленнотекущей реакции проводят повторные определения оптической плотности раствора пробы в кювете через каждые 2-5 мин. После выполнения 5-6 повторных определений и при условии достижения постоянного изменения оптической плотности за единицу времени (AA/At= const) фотометрические измерения прекращают.

По полученным данным строят график зависимости оптической плотности А от времени t.

Для определения окончательного значения оптической плотности, используемого при расчете массовой концентрации испытуемого вещества, экстраполируют кривую на момент внесения фермента в реакционную систему (f₀, рисунок Б.1). Для получения достоверных результатов испытания пробы разность конечного A_f и начального Д значений оптических плотностей должна быть не менее 0,040.

Рисунок Б.1

9

Приложение В

(справочное)

Статистические результаты кругового испытания

При проведении в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-2 круговых испытаний получены следующие характеристики точности метода, приведенные в таблице В.1.

Испытание проведено под руководством Общества пищевой химии (г. Франкфурт, Германия).

В.1 Стандартная методика подготовки пробы

Год проведения кругового испытания - 1983.

Число участвовавших лабораторий - 22.

Количество проб - 3.

Таблица В.1

Значение для пробы сока Величина, характеризующая круговое испытание апельсинового яблочного виноградного (красного) Число лабораторий, оставшихся после исключения тех, в которых полученные результаты были забракованы 19 17 18 Число исключенных лабораторий 3 5 4 Число принятых результатов 99 881 90 Среднеарифметическое значение рч, г/дм3 10,2 22,9 63,6 Среднеквадратичное отклонение результатов определений sr, г/дм3 0,6656 1,1355 1,3803 Относительное среднеквадратичное отклонение результатов определений RSDr, % 6,5 5,0 2,2 Сходимость г, г/дм3 1,9 3,2 3,9 Среднеквадратичное отклонение результатов измерений SR, Г/ДМ3 1,1257 2,0084 2,4636 Относительное среднеквадратичное отклонение результатов измерений RSDr, % 8,7 8,8 3,9 Воспроизводимость R, г/дм3 3,2 5,6 6,9

В.2 Модифицированная методика подготовки пробы

Год проведения кругового испытания - 1983.

Число участвовавших лабораторий -11.

Количество проб - 4 (с добавкой сахарозы).

Таблица В.2

Величина, характеризующая круговое испытание Значение для пробы сока виноградного (красного) виноградного (белого) томатного вишневого Число лабораторий, оставшихся после исключения тех, в которых полученные результаты были забракованы 10 9 11 9 Число исключенных лабораторий 1 2 - 2 Число принятых результатов 50 45 55 45 Среднеарифметическое значение рч, г/дм3 2,6 4,8 4,1 2,2 Среднеквадратичное отклонение резуль- татов определений sr, г/дм3 0,1005 0,1750 0,1631 0,0895

Продолжение таблицы В.2

Величина, характеризующая круговое испытание Значение для пробы сока виноградного (красного) виноградного (белого) томатного вишневого Относительное среднеквадратичное откло- нение результатов определений RSDr, % 2,9 3,6 4,0 4,1 Сходимость г, г/дм3 0,3 0,5 0,5 0,3 Среднеквадратичное отклонение резуль- татов измерений sR, г/дм3 0,3957 0,2919 0,3350 0,1211 Относительное среднеквадратичное откло- нение результатов измерений RSDr, % 15,2 6,1 8,2 0,3 Воспроизводимость R, г/дм3 1,1 0,8 0,9 0,3

11

СТБ ГОСТ Р 51938-2006

Приложение Г

(справочное)

Библиография

[1]    Bestimmung der Saccharose; Enzymatisch: Nr. 56, 1985. - In: Analysen / [Sammlung] Internationale FruchtsaftUnion. - Loseblattausgabe, Stand 1996. Zug: Schweizerischer Obstverband (Определение содержания сахарозы; Энзиматический метод: № 56, 1985 г. - В: исследования / [сборник] международного объединения в области фруктовых соков. - Журнал с несброшюро-ванными листами, Издание 1996 г. Составители: - Швейцарское объединение овощеводов)

[2]    Boehringer Mannheim. Methoden der enzimatischen BioAnalytik und Lebensmitteleanalytikmit Test-Combmationen, 1995 r.

(Берингер Мангейм. Методы применения энзиматического биологического анализа и анализа пищевых продуктов с комбинированными испытаниями, 1995 г.)

[3]    Untersuchung von Lebensmitteln: Bestimmung von Saccharose in Fruchtsaeften: L31.00 - 13, 1984 -11. - In: Amtliche Sammlung von Untersuchungsverfahren nach §35 LMBG: Verfahren zur Probenahme und Untersuchung von Lebensmitteln, Tabakerzeugnissen, kosmetischen Mitteln und Bedarfsgegenstaenden/Bundesinstitut fuer gesundheitlichen Verbraucherschutz und Veterinaer-medizin - Loseblattausgabe, Stand 31.1.1995, Bd. I. - Berlin, Koeln: Beuth Verlag GmbH (Исследование пищевых продуктов: определение сахарозы во фруктовых соках: L31.00-13, 1984-11. - В: Сборник государственных методов исследования согласно § 35 LMBG: Метод отбора проб и исследование пищевых продуктов, табачных изделий, косметических средств и предметов первой необходимости/ Федеральный институт по защите здоровья потребителей и ветеринарии - Журнал с несброшюрованными листами. Издание 31.1.1995 г. Том 1 - Берлин, Кельн: Издательство Beuth GmbH)

[4]    Номенклатура ферментов. Рекомендации Международного биохимического союза по номенклатуре и классификации ферментов, а также единицам ферментов и символам кинетики ферментативных реакций. М. 1979 г.

[5]    ТУ 64-13329-81 Дозаторы пипеточные

[6]    Code of Practice. Association of the Industry of Juices and Nectars from Fruits and Vegetables of the European Economic Community/A.I.J.N. 1996 r.

(Кодекс практики. Ассоциация производителей соков и нектаров из фруктов и овощей Европейского экономического сообщества/AIJN, 1996 г.)

12

Ответственный за выпуск В.Л. Гуревич

Сдано в набор 30.01.2007. Подписано в печать 06.03.2007 Формат бумаги 60x84/8. Бумага офсетная. Гарнитура Ариал. Печать ризографическая. Уел. печ. л. 1,86 Уч,-изд. л. 0,73 Тираж    экз.    Заказ

Издатель и полиграфическое исполнение НП РУП «Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации» (БелГИСС) Лицензия № 02330/0133084 от 30.04.2004.

220113, г. Минск, ул. Мележа, 3.

С ТБ ГОСТ Р 51938-2006

Содержание

1    Область применения..............................................................................................................................1

2    Нормативные ссылки.............................................................................................................................1

3    Определение, обозначения и сокращения...........................................................................................1

4    Сущность метода....................................................................................................................................2

5    Реактивы..................................................................................................................................................2

6    Аппаратура..............................................................................................................................................3

7    Проведение испытания..........................................................................................................................4

8    Выражение результатов........................................................................................................................6

9    Точность определения...........................................................................................................................6

10    Отчет об испытании..............................................................................................................................7

Приложение А (справочное) Содержание сахарозы в природных фруктовых и

овощных соках [6]............................................................................................................8

Приложение Б (справочное) Медленнотекущие реакции......................................................................9

Приложение В (справочное) Статистические результаты кругового испытания...............................10

Приложение Г (справочное) Библиография..........................................................................................12

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

Соки фруктовые и овощные МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ САХАРОЗЫ

Сок1 з садавшы i агародншы МЕТАД ВЫЗНАЧЭННЯ САХАРОЗЫ

Fruit and vegetable juices.

Method for determination of sucrose content

Дата введения 2007-06-01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения сахарозы.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 195-77 Реактивы. Натрий сернистокислый. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3652-69 Реактивы. Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия

ГОСТ 3769-78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4159-79 Реактивы. Йод. Технические условия

ГОСТ 4201-79 Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия

ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 4232-74 Реактивы. Калий йодистый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 4523-77 Реактивы. Магний сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие технических нормативных правовых актов в области технического нормирования и стандартизации (далее - ТИПА) по каталогу, составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году.

Если ссылочные ТИПА заменены (изменены), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться замененными (измененными) ТИПА. Если ссылочные ТИПА отменены без замены, то положение, в котором дана ссылка на них, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Определения, обозначения и сокращения

В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:

3.1 массовая концентрация сахарозы во фруктовых и овощных соках, нектарах и сокосодержащих напитках: Массовая концентрация сахарозы, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в граммах на кубический дециметр.

Издание официальное

3.2 В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения:

-    АТФ - аденозин-5'-трифосфат;

-    АДФ - аденозин-5'-дифосфат;

-    НАДФ - р-никотинамидадениндинуклеотидфосфат;

-    НАДФН - р-никотинамидадениндинуклеотидфосфат (восстановленная форма);

-    Г-6-Ф - глюкозо-6-фосфат;

-    ГК - гексокиназа;

-    Г6Ф-ДГ - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа;

-    ФЗ - р-фруктозидаза;

-    Е - международная единица, определяющая количество (активность) фермента, который служит

катализатором для превращения 1 мкмоля вещества в минуту при 25 °С.

4    Сущность метода

4.1    Сущность метода

В основе метода [1], [2], [3] лежит реакция ферментативного гидролиза сахарозы с помощью ФЗ с образованием равных количеств D-глюкозы и D-фруктозы. В последующей реакции, катализируемой ферментом ГК с участием АТФ, D-глюкоза (общая глюкоза), которая образовалась при гидролизе сахарозы, и D-глюкоза, содержащаяся в исходной пробе (свободная глюкоза), подвергаются фосфорилированию по шестому атому углерода с образованием Г-6-Ф. Под действием НАДФ Г-6-Ф в присутствии Г6Ф-ДГ преобразуется в глюконат-6-фосфат и НАДФН. Массовая концентрация образовавшегося НАДФН эквивалентна массовой концентрации преобразованной D-глюкозы (4.2). Количественное измерение НАДФН осуществляется спектрофотометром (фотометром).

Массовая концентрация сахарозы пропорциональна разности оптических плотностей растворов НАДФН, полученных преобразованием исходной пробы (свободная глюкоза) и пробы, в которой проведен ферментативный гидролиз сахарозы (общая глюкоза).

В соках, нектарах и сокосодержащих напитках с низкой массовой концентрацией сахарозы - менее 5 г/дм³ (содержание сахарозы в природных фруктовых и овощных соках приведено в приложении А) -и высокой массовой концентрацией D-глюкозы перед количественным определением сахарозы проводят йодное окисление избытка глюкозы в щелочной среде.

4.2    Реакции, происходящие при определении сахарозы

Сахароза + Н₂0 —>■ D-глюкоза + D-фруктоза,    (1)

D-глюкоза + АТФ —^ Г-6-Ф + АДФ,    (2)

Г-6-Ф + НАДФ⁺ Г6Ф~^ДГ > глюконат-6-фосфат + НАДФН + Н⁺.    (3)

При необходимости в развитие настоящего стандарта разрабатываются в установленном порядке методики выполнения измерений.

5    Реактивы

5.1    Общие требования

При проведении анализа используют реактивы х.ч или ч.д.а и дистиллированную воду по ГОСТ 6709.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения сахарозы при условии, что качество реактивов не ниже указанного в настоящем стандарте.

Препараты триэтаноламингидрохлорида, динатриевой соли р-никотинамидаденин-динуклеотидфосфата (р-НАДФ-Ыа₂) и динатриевой соли аденозин-5'-трифосфата (АТФ-Ыа₂Н₂ * х ЗН₂0) должны содержать не менее 90 % основного вещества.

5.2    Растворы гидроокиси натрия

Готовят растворы гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярных концентраций с (NaOH) = = 5 моль/дм³, с (NaOH) = 4 моль/дм³ и с (NaOH) = 2 моль/дм³.

5.3    Цитратный буферный раствор активной кислотностью 4,6 pH

Растворяют 6,9 г моногидрата лимонной кислоты (С₆Н₈0₇ * Н₂0) по ГОСТ 3652 и 9,1 г дигидрата натрия лимоннокислого трехзамещенного (C₆H₅Na₃0₇ * 2Н₂0) [1] в 150 см³ дистиллированной воды. ¹

С ТБ ГОСТ Р 51938-2006

Доводят активную кислотность раствора до 4,6 pH, добавляя раствор гидроокиси натрия с (NaOH) = 2 моль/дм² по 5.2. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 200 см². Буферный раствор устойчив при температуре 4 °С не менее 12 мес.

5.4    Раствор ФЗ

0,01 г ФЗ (ЕС 3.2.1.26) [4] массовой концентрации 0,005 г/см² и удельной активности не менее 750 Е/см² [2] растворяют в 2 см² цитратного буферного раствора по 5.3. Раствор ФЗ устойчив при 4 °С не менее одной недели.

5.5    Буферный раствор триэтаноламингидрохлорида активной кислотностью 7,6 pH

14,0 г триэтаноламингидрохлорида [2] и 0,25 г сернокислого магния по ГОСТ 4523 растворяют в 80 см² дистиллированной воды. Устанавливают активную кислотность раствора, равной 7,6 pH, добавляя приблизительно 5 см² раствора гидроокиси натрия молярной концентрации с (NaOH) = 5 моль/дм². Объем раствора доводят дистиллированной водой до 100,0 см². Буферный раствор устойчив при температуре 4 °С не менее 1 мес.

5.6    Раствор НАДО

0,06 г динатриевой соли р-никотинамидадениндинуклеотидфосфата (р-НАДФ-Ыа₂) [2] растворяют в 6 см² дистиллированной воды. Раствор устойчив при температуре 4 °С не менее 1 мес.

5.7    Раствор АТФ

0,3 г динатриевой соли аденозин-5'-трифосфата (АТФ-Ма₂Н₂ х ЗН₂0) [2] и 0,3 г кислого углекислого натрия по ГОСТ 4201 растворяют в 6 см² дистиллированной воды. Раствор устойчив при температуре 4 °С не менее 1 мес.

5.8    Суспензия ферментов ГК и Г6Ф-ДГ

Раствор ГК (ЕС 2.7.1.1) [4] массовой концентрации 0,002 г/см² и удельной активности не менее 280 Е/см² (проверка активности по глюкозе в качестве субстрата в присутствии АТФ) и раствор Г6Ф-ДГ (ЕС 1.1.1.49) [4] массовой концентрации 0,001 г/см² и удельной активности не менее 140 Е/см² (проверка активности по Г-6-Ф в качестве субстрата) смешивают с раствором сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации с ((NH₄)₂S0₄) = 3,2 моль/дм². Суспензия устойчива при температуре 4 °С не менее 12 мес.

5.9    Раствор йода

130 г йода по ГОСТ 4159 и 150 г йодистого калия по ГОСТ 4232 растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см² в 300 см² дистиллированной воды. После полного растворения реактивов объем раствора доводят до метки дистиллированной водой.

5.10    Раствор серной кислоты

Готовят раствор серной кислоты (H₂S0₄) молярной концентрации с (H₂S0₄) = 0,5 моль/дм² из концентрированного раствора серной кислоты по ГОСТ 4204.

5.11    Растворы сернистокислого натрия

Готовят насыщенный раствор сернистокислого натрия (Na₂S0₃) по ГОСТ 195 массовой концентрации 28,3 г/100 см² в дистиллированной воде при 80 °С.

Для приготовления разбавленного раствора сернистокислого натрия к одной части насыщенного раствора добавляют десять частей дистиллированной воды.

5.12    Раствор фенолфталеина

Готовят раствор фенолфталеина массовой концентрации 0,5 г/100 см² в растворе этилового спирта массовой долей спирта 96 % по ГОСТ Р 51652.

6 Аппаратура

Обычная лабораторная аппаратура, а также:

6.1 Дозаторы пипеточные объемами доз 0,02; 0,05; 0,10; 0,50; 1,0; 2,0; 5,0 и 10 см² относительной погрешностью дозирования ±1 % [5] и ТИПА или пипетки градуированные номинальной вместимостью 0,02; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 и 2,0 см², 2-го класса точности, по ГОСТ 29227.

6.2    Кюветы фотометрические из оптического стекла или пластмассы толщиной поглощающего слоя 1 см для измерений при длинах волн 334, 340 или 365 нм.

6.3    Шпатели пластиковые или палочки стеклянные оплавленные длиной от 10 до 15 см для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.

6.4    Спектрофотометр или фотометр фотоэлектрический для измерений при длинах волн 334, 340 или 365 нм, допускаемой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания ± 1 %.

6.5    Весы лабораторные общего назначения наибольшим пределом взвешивания 20 г и допускаемой погрешностью ± 0,0001 г по ГОСТ 24104.

6.6    Колбы мерные номинальной вместимостью 50, 100, 200 и 1000 см³, 2-го класса точности по ГОСТ 1770.

7 Проведение испытания

7.1    Подготовка пробы к испытанию

7.1.1    Стандартная методика

Сок, нектар или сокосодержащий напиток разбавляют дистиллированной водой до концентрации сахарозы и глюкозы от 0,1 до 1,5 г/дм³. Разбавленная проба не нуждается в особых методах подготовки к испытаниям. Результаты испытаний по настоящей методике выражают в граммах на кубический дециметр.

Испытания концентрированных продуктов проводят после их разбавления дистиллированной водой до получения значения относительной плотности разбавленного продукта согласно рецептуре натурального сока, нектара или сокосодержащего напитка. При этом относительную плотность разбавленной пробы выражают в граммах на кубический дециметр.

Результаты испытаний концентрированного продукта могут быть также выражены в граммах на килограмм. При расчете результата испытаний учитывают массу пробы концентрированного продукта и фактор разбавления.

При испытании продуктов высокой вязкости и/или с очень большим содержанием мякоти результаты выражают в граммах на килограмм продукта.

Продукты с мутной взвесью перед испытанием хорошо перемешивают. Мутные пробы низкой массовой концентрации сахарозы осветляют центрифугированием или ультрафильтрацией через фильтр.

7.1.2    Модифицированная методика (для проб с высокой концентрацией глюкозы)

Если массовая концентрация свободной глюкозы в продукте превосходит массовую концентрацию сахарозы более чем в 10 раз, пробоподготовку проводят по следующей методике.

Осветленный центрифугированием или фильтрацией по 7.1.1 сок, нектар или сокосодержаший напиток разбавляют в 5 раз дистиллированной водой. 10 см³ разбавленной пробы переносят в коническую колбу вместимостью 50 см³, в которую последовательно добавляют 10 см³ раствора йода по 5.9 и 2,5 см³ раствора гидроокиси натрия молярной концентрации с (NaOH) = 4 моль/дм³ по 5.2. Содержимое колбы перемешивают. Колбу выдерживают 10 мин в темноте. В колбу добавляют 10 см³ раствора серной кислоты по 5.10. Для удаления избыточного йода в колбу добавляют разбавленный и (или) насыщенный раствор сернистокислого натрия по 5.11 и интенсивно перемешивают содержимое до исчезновения желто-коричневого окрашивания. Устанавливают активную кислотность раствора в интервале от 8 до 9 pH, титруя его раствором гидроокиси натрия молярной концентрации с (NaOH) = 4 моль/дм³ по 5.2 в присутствии индикатора фенолфталеина по 5.12 до появления устойчивого слабого розового окрашивания. Раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см³. Объем раствора в колбе доводят дистиллированной водой до метки.

7.2    Определение

7.2.1 Общие требования

Определение проводят при постоянной температуре от 20 °С до 25 °С. Допускается проводить испытание при постоянной температуре от 25 °С до 37 °С при условии получения равноценных результатов.

При использовании спектрофотометра с переменной длиной волны измерения проводят при длине волны 340 нм, при использовании спектрофотометра на ртутной лампе - при длине волны 334 или 365 нм.

С ТБ ГОСТ Р 51938-2006

Буферные растворы, растворы проб, ферментов и коферментов дозируют градуированными пипетками или автоматическими дозаторами.

Для контроля точности результатов определения используют стандартный раствор сахарозы.

7.2.2    Контрольный раствор, применяемый при определении общей глюкозы

В фотометрическую кювету вносят 0,20 см³ цитратного буферного раствора по 5.3 и 0,02 см³ раствора ФЗ по 5.4. Растворы перемешивают, осторожно встряхивая кювету, выдерживают 15 мин. Добавляют 1,00 см³ буферного раствора триэтаноламингидрохлорида по 5.5, 1,7 см³ дистиллированной воды, 0,10 см³ раствора НАДФ по 5.6 и 0,10 см³ раствора АТФ по 5.7. Содержимое кюветы перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора А₁ относительно оптической плотности воздуха.

7.2.3    Контрольный раствор, применяемый при определении свободной глюкозы

В фотометрическую кювету вносят 1,00 см³ буферного раствора триэтаноламингидрохлорида по 5.5, 1,92 см³ дистиллированной воды, 0,10 см³ раствора НАДФ по 5.6 и 0,10 см³ раствора АТФ по 5.7. Содержимое кюветы перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора А₂ относительно оптической плотности воздуха.

7.2.4    Раствор пробы, применяемый при определении общей глюкозы

В фотометрическую кювету вносят 0,20 см³ цитратного буферного раствора по 5.3, 0,1 см³ подготовленной пробы по 7.1.1 и 0,02 см³ раствора ФЗ по 5.4. Растворы перемешивают, осторожно встряхивая кювету, затем выдерживают 15 мин. В кювету вносят 1,00 см³ буферного раствора триэтаноламингидрохлорида по 5.5, 0,10 см³ раствора НАДФ по 5.6, 0,10 см³ раствора АТФ по 5.7 и 1,60 см³ дистиллированной воды. Растворы перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора А₃ относительно оптической плотности воздуха.

7.2.5    Раствор пробы, применяемый при определении свободной глюкозы

В фотометрическую кювету вносят 0,1 см³ подготовленной пробы по 7.1.1, 1,00 см³ буферного раствора триэтаноламингидрохлорида по 5.5, 0,10 см³ раствора НАДФ по 5.6, 0,10 см³ раствора АТФ по 5.7 и 1,82 см³ дистиллированной воды. Растворы перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора А_л относительно оптической плотности воздуха.

7.2.6    Раствор пробы, из которой удалена глюкоза, применяемый при определении общей глюкозы

Контрольный раствор готовят по 7.2.2. Опытный раствор готовят по следующей методике.

В фотометрическую кювету вносят 0,20 см³ цитратного буферного раствора по 5.3, 0,1 см³ подготовленной пробы по 7.1.2 и 0,02 см³ раствора ФЗ по 5.4. Растворы перемешивают, осторожно встряхивая кювету, затем выдерживают 15 мин. В кювету вносят 1,00 см³ буферного раствора триэтаноламингидрохлорида по 5.5, 0,10 см³ раствора НАДФ по 5.6, 0,10 см³ раствора АТФ по 5.7 и 1,60 см³ дистиллированной воды. Раствор перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора А₅ относительно оптической плотности воздуха.

7.2.7    Ферментативная реакция и количественное определение

Каждый из подготовленных растворов по 7.2.2 - 7.2.6 используют для определения сахарозы по следующей методике.

В кюветы вносят по 0,02 см³ суспензии ГК и Г6Ф-ДГ по 5.8, перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой и выдерживают от 10 до 15 мин. Затем измеряют оптические плотности растворов (А₆ - раствора, подготовленного по 7.2.2, А₇ - по 7.2.3, А_а - по 7.2.4, Ад - по 7.2.5 и А_ю -по 7.2.6) относительно оптической плотности воздуха.

Окончание реакции проверяют повторным считыванием показаний спектрофотометра через 2 мин. Если ферментативная реакция не завершилась через 15 мин и оптическая плотность растворов увеличивается стечением времени, то окончательное значение оптической плотности определяют методом экстраполяции на момент внесения суспензии ферментов ГК и Г6Ф-ДГ по 5.8.

Примечание - При появлении побочных, так называемых «медленнотекущих», реакций расчет окончательных значений оптической плотности проводят по методике, приведенной в приложении Б.

С ТБ ГОСТ Р 51938-2006

10 Отчет об испытании

В отчете об испытании должны быть указаны:

-    информация, которая необходима для идентификации пробы (вид пробы, данные изготовителя, описание пробы);

-    обозначение настоящего стандарта;

-дата и способ отбора пробы (если возможно);

-    дата доставки пробы;

-    результаты испытания и наименования единиц измерений, в которых они приводятся;

-    дата испытания;

-    информация о выполнении условий сходимости метода;

-    замечания об особенностях проведения испытания;

-    особые условия проведения испытания, которые не учтены настоящим стандартом, но могли бы оказать влияние на результаты испытания. ³

1

2

3