^АЗА^СТАН РЕСПУБЛИКАСЫНЫЦ УЛТТЬЩ СТАНДАРТЫ

CYT ЖЭНЕ CYT 0Н1МДЕР1

Тшмдшпт жогары суйыктык хроматографиясы кемеомен курамындагы лактоза мелшерш аныкгау (Ьакылау o/uci)

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ

Определение содержания лактозы с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (Контрольный метод)

Щ* СТ ISO 22662-2013

ISO 22662:2007 Milk and milk products — Determination of lactose content by high performance liquid chromatography (Reference method) (IDT)

Ресми басылым

К^азакстан Республикасы Индустрия жэне жара технологиялар министрлнтнщ Техника лык реттеу жэне метрология комитет!

(Мемстандарт)

Астана ^АЗА^СТАН РЕСПУБЛИКАСЫНЫЦ УЛТТЬЩ СТАНДАРТЫ

CYT Ж0НЕ CYT 0Н1МДЕР1

Тшмдшпл жогары срыцтыц хроматографиясы комепмен ^рамындагы лактоза мелшерш аныкгау (Ьакылау o/uci)

ЦР СТ ISO 22662-2013

ISO 22662:2007 Milk and milk products — Determination of lactose content by high performance liquid chromatography (Reference method) (IDT)

Ресми басылым

К^азакстан Республикасы Индустрия жэне жара технологиялар министрлитнщ Техника лык; реттеу жэне метрология комитет!

(Мемстандарт)

Астана

К? СТ ISO 22662-2013

12 Сынак; хаттамасы

Сынак; хаттамында келеа анпараттар боуы тию:

a)    сынаманьщ тольщ идентификациясы ушш нажет барльщ аппарат;

b)    сынаманы ipixTey пайдаланылган эдюу

c)    осы стандартна сштемелер1 бар пайдаланылган сынак; эдюу

d)    осы стандартта жазылмаган барльщ жумыстык нактылыктар немесе косымша деп есептелетш сынак; нэтижесше эсер ететш кез-келген кактыгыс нактылыктары;

e) найталаагыштьщ тексершген болса сонгы алынган сынак; нэтижест

8

К? СТ ISO 22662-2013

А Ь^осымшасы

(ацпараттыц)

Зертхана аралык зерттеу нэтижелер1

Эртурл! бес елде шшде сепз зертханада етклзшген хальщаральщ б1рлескен сынак Квебек, Канада сут зауыттарынан он сепз сут сынамасында журпзшд1 (суйьщ суттщ алты сынамасы, K'i легенд in алты жэне сут унтагыньщ алты сынамасы). Сынак; жануарлар сут ешмдершщ Талдауы Багдарламасымен уйымдастырылды.

Алынган нэтижелер [2] жэне [3] сэйкес статистикальщ ендеуге ушырады жэне А. 1 -А.З. кестеде келпршгендей статистикальщ мэл1 метке алып келдг коэффицентп езгеруден баска пайызбен айкындалган барльщ мэндер массальщ улес болып табылады.

А.1 кесте - Суйык; сут сынамасын сынау нэтижеа

	Сыналатын сынама
	1	2	3	4	5	6	Орта
Агаттык жойылганнан кешн калган катысатын зертханалар саны	8	8	7	8	7	8
Лактоза масса улесшщ орта мэш, %	4,530	4,466	4,718	4,644	4,364	4,551
Кайталангыштьщтыц стандартты ауыткуы, sn %	0,025	0,023	0,017	0,035	0,011	0,018	0,022
Кайталангыштьщ nieri, г = 2,8 ^ %	0,071	0,065	0,047	0,098	0,031	0,051	0,061
Кайталангыштьщтыц езгеру коэффиценп, %	0,559	0,523	0,360	0,751	0,258	0,397	0,474
Кайталанудыц стандартты ауыткуы, sR, %	0,042	0,056	0,044	0,046	0,030	0,058	0,046
Кайталану шеп, R = 2,8 sR, %	0,118	0,156	0,123	0,128	0,085	0,162	0,129
Кайталанудыц езгеру коэффиценп, %	0,931	1,249	0,929	0,986	0,692	1,273	1,010

А.2 кесте - Кшегей сынамасын сынау нэжижеа

Сыналатын сынама 1 2 3 4 5 6 Орта Агаттык жойылганнан кешн калган катысатын зертханалар саны 8 8 7 8 6 6 Лактоза масса улесшщ орта мэш, % 1,461 3,822 3,686 2,886 3,256 3,103 Кайталангыштьщтыц стандартты ауыткуы, у, % 0,030 0,015 0,025 0,032 0,009 0,007 0,020 Кайталангыштьщ шеп, г = 2,8 Sr, % 0,084 0,041 0,069 0,090 0,026 0,020 0,055 Кайталангыштьщтыц езгеру коэффиценп, % 2,066 0,381 0,672 1,117 0,283 0,224 0,790 Кайталанудыц стандартты ауыткуы, sR, % 0,171 0,108 0,136 0,118 0,134 0,136 0,134 Кайталану шеп, R = 2,8 Sr, % 0,479 0,302 0,380 0,331 0,375 0,382 0,375 Кайталанудыц езгеру коэффиценп, % 11,721 2,824 3,686 4,090 4,113 4,397 5,139

9

А.З кесте - Сут унтагыныц сынамасын сынау нэтижеа

Сыналатын сынама 1 2 3 4 5 6 Орта Ататтьщ жойылтаннан кешн калган катысатын зертханалар саны 6 7 7 6 6 7 Лактоза масса улесшщ орта мэш, % 48,721 36,348 35,087 52,306 46,460 48,171 Кайталантыштыктын стандартты ауьгщуы, s„ % 0,110 0,040 0,111 0,260 0,157 0,118 0,133 Кайталангыштык nieri, г = 2,8 % 0,308 0,111 0,312 0,729 0,440 0,331 0,372 Кайталантыштыктын езгеру коэффиценп, % 0,226 0,109 0,318 0,497 0,339 0,245 0,289 Кайталанудыц стандартты ауыткуы, sR, % 0,130 0,801 0,773 0,709 1,461 1,419 1,049 Кайталану nieri, R = 2,8 Sr, % 3,165 2,241 2,1663 1,986 4,091 3,974 2,937 Кайталанудьщ езгеру коэффицснтй % 2,322 2,202 2,202 1,356 3,145 2,946 2,362

а Сут унтагыньщ сынау нэтижесш тек жеп зертхана усынтан.

10

К? СТ ISO 22662-2013

Библиография

[1]    ISO 707|IDF 50 Milk and milk products - Guidance on sampling(cyT жэне сут ошмдерт Сыналатын сынама бойынша нускаулык).

[2]    ISO 5725-1 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results -Part 1:General principles and definitions(Onniey нэтижеа мен дэлдк эдютер1 (туральщ жэне дэл елшеу) 1 бел1м. Жалпы принциптер мен аньщтамалар).

[3]    ISO 5725-2 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results -Part 2: Basicmethod for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method (Олшеу нэтижеа мен дэлдк эдютер1 (туральщ жэне дэл елшеу) 1 бел1м. Жалпы принциптер мен аньщтамалар).

Стандартты кайталантыш елшеу эд!с! мен кайталантыштьщты аньщтаудыц непзп Sflici).

[4]    BIGGSD.A., SZIJARTO, L. Methodforroutinedeterminationoflactoseinmilk, J. DairySci. 1963, 46, pp. 1196-200 (БиггзД.А., Цижарто Jl. (SZIJARTO), Cyrreri лактозаны стандартты аньщтау эд1 ci. Сут туралы тылым журналы 1963, 46,1196-200 беттер).

[5]    HARVEY, J. A high performance liquid chromatography method for lactose determination in milk.Austral. J. DairyTechnol. 1988, 43, pp. 19-20 (ХарвейДж.А. Суйьщ хроматография жотары руксатымен суттеп лактоза курамын аньщтау эд1 ci. Австрал. Сут технологиялары бойынша. Журнал. 1988, 43, 19-20беттер)

[6]    BRONS, С., OLIEMAN, С. Study of the high-performance liquid chromatographic separation of reducingsugars, applied to the determination of lactose in milk. J. Chromatogr. 1983, 259, pp. 79-86 (Броне,С., Олиман, С. Суйьщ хроматография жотары руксатымен суттеп лактоза курамын аньщтау унйн колданылатын канттыц темендеу1 бойынша зерттеу. Ж. Хроматография. 1983, 259, 79-86 беттер)

[7]    KOOPS, J., OLIEMAN, С. Routine testing of farm milk with the Milko-Scan 203.3. Comparative evaluationof polarimetry, ВЭЖХ, enzymatic assay and reductometry for the determination of lactose. Calibrationfor infra-red analysis of lactose. Calculation of total solids from infra-red measurements, Neth. MilkDairy J. 1985, 39, pp. 89-106 (Купе, Дж., Олиман, С. 203.3. cyrri сканерлеу эд1амен фермерлк cyrri стандартты сынау. Поляриметрд1 салыстырып багалау,СЖТХ, ферментативп талдау жэне лактозаны аньщтауга арналган редуктометрия. Лактозаныц инфракызыл талдауын каибреу.Инфракызыл елшеулерден ортак катты заттардыц ece6i, Нидерланды, Ж. Сут ешмдерц 1985, 39, 89-106 беттер).

11

К? СТ ISO 22662-2013

Э0Ж 637.044    МСЖ    67.100.01

Тушн сездергсут, лактоза курам ы, стерилденген сут, базальщ тузу, косымша батана, стандартты ертнду сыналатын сынама, лактозаньщ удемел1 кезеш.

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ

Определение содержания лактозы с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (Контрольный метод)

СТ РК ISO 22662-2013

ISO 22662:2007 Milk and milk products — Determination of lactose content by highperformance liquid chromatography (Reference method) (IDT)

Издание официальное

Комитет технического регулирования и метрологии Министерства индустрии и новых технологий Республики Казахстан

(Г осстандарт)

Астана

Предисловие

1    ПОДГОТОВЛЕНИ ВНЕСЕНРеспубликанским государственным предприятием «Казахстанский институт стандартизации и сертификации» и Техническим комитетом по стандартизации 44 «Технолог»

2    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Председателя Комитета технического регулирования и метрологии Министерства индустрии и новых технологий Республики Казахстан от 13 ноября 2013 года № 526-од

3    Настоящий стандарт идентичен по отношению к международному стандарту ISO22662:2007 Milk and milk products- Determination of lactose content by high-performance liquid chromatography (Reference method) (Молоко и молочные продукты. Определение содержания лактозы с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (Контрольный метод).

В настоящий стандарт внесены редакционные изменения в связи с особенностями построения государственной системы технического регулирования, которые выделены по тексту курсивом.

Международный стандарт ISO 22662:2007 Milk and milk products- Determination of lactose content by high-performance liquid chromatography (Reference method) разработан Техническим комитетом ISO/TK 34, Пищевые продукты, Подкомитет ПК 5, Молоко и молочные продукты и Международной федерацией молочной продукции

Перевод с английского (еп)

Степень соответствия - идентичная (IDT)

4    СРОК ПЕРВОЙ ПРОВЕРКИ ПЕРИОДИЧНОСТЬ ПРОВЕРКИ

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему Стандарту публикуется в указателе «Нормативные документы по стандартизации», а текст изменений - в ежемесячных информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (отмены) или замены настоящего Стандарта соответствующая информация будет опубликована в информационном указателе «Национальные стандарты»

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Комитета технического регулирования и метрологии Министерства индустрии и новых технологий Республики Казахстан

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ Определение содержания лактозы с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (Контрольный метод)

Дата введения 2014.07.01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает контрольный метод определения содержания лактозыв сыром молоке, стерилизованном молоке, сухоммолоке, а так же сырыхи пастеризованных сливках.

Метод не приемлем к ферментированному молоку и молоку, к которому были добавлены олигосахариды.

2    Нормативные ссылки

Для применения настоящего стандарта необходимы следующие ссылочные нормативные документы:

ISO 648-2008 Laboratory glassware - Single-volume pipettes (Лабораторнаястекляннаяпосуда.Пипеткисоднойметкой).

ISO 3696-1987 Water for analytical laboratory use.Specification and test methods (Водадлялабораторногоанализа.Техническиетребованияиметодыиспытаний).

ПРИМЕЧАНИЕ При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по ежегодно издаваемому информационному указателю «Нормативные документы по стандартизации» по состоянию на текущий год и соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный документ заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться замененным (измененнъш) документом. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссыпку.

3    Терминыиопределения

В настоящем стандарте применяется следующий термин с соответствующим определением:

3.1 Содержание лактозы(1ас1о8есоШ:еп1): Массовая доля вещества, определенная по процедуре, установленной в настоящем стандарте.

ПРИМЕЧАНИЕ Массовая доля может выражаться в процентах.

Издание официальное

4    Сущность метода

Внутренний образец [Т)(+)-мелецитоза] добавляется к взвешенному объему молока и образцам лактозы. Химический реактив (раствор Biggs-Szijarto) добавляется для осаждения жира и протеиновых компонентов молока. Проба фильтруется дважды до введения, сначала через бумажный фильтр и затем через 0,45 мкм нейлоновый фильтр. Лактоза и внутренний образец разделяютсясвинец-катионитнойколонкой и определяются дифференциальным рефрактометром или другим детектором. В качестве подвижной фазы используется вода класса для высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее -ВЭЖХ).

5    Реактивы

Использоватьтолько реактивы квалификации «чистый для анализа».

5.1    Дегазированная вода класса ВЭЖХ.Фильтровать воду класса InoISO 3696, полученную на водоочистной установке (см. 6.9), используя фильтровальную установку (см. 6.10). Для улучшения работы насоса и получения стабильной базовой линии дегазироватьподвижную фазу ежедневно одним из доступных методов, таких как барботажгелия, обработка ультразвуком, вакуумом или системой поточной технологической обработки дегазирования.

5.2    D(+)-pacTBop гидрата мелецитозы, (ДСщНзгОщ'НгО) =    50

мг/мл.Растворитьпорциюраствора гидрата мелецитозыО(+) в воде(см. 5.1), получая конечную концентрацию50 мг/мл безводной формы.

Раствор гидрата мелецитозыО(+) следует хранить при температуре 4°С не более одной недели.

5.3    Моногидрат а-лактозы, С1₂Н₂₂Оц Н₂О.Моногидрат а-лактозы до применения следует высушить при температуре 70°С в течение 4 часов. Затем охладить до комнатной температуры в эксикаторе.

ПРИМЕЧАНИЕ После высушивания лактоза остается в моногидратной форме.

5.4    Раствор Biggs-Szijarto получить растворением25 граммовдигидрата ацетата цинка Zn(CH3C00)₂ 2H₂0 и 12,5 граммов моногидрата фосфорновольфрамовой кислоты (Wi₂C>36 Н3РО4 Н₂0) в 100 мл воды класса ВЭЖХ (см. 5.1) в мерной колбена 200 мл.Добавить 20 мл ледяной уксусной кислоты (СНзСООН). Довести до меткиводой класса ВЭЖХ (см. 5.1) и перемешать. После приготовления раствор может храниться при температуре 4°С не более одной недели.

ПРИМЕЧАНИЕ Выполнять инструкции по безопасности хранения и использования настоящих химикатов.

6    Аппаратура и материалы

При применении настоящего метода используют следующее лабораторное оборудование.

6.1 ВЭЖХ- колонна длиной 300 мм с внутренним диаметром 7,8 мм, заполненная ионообменной смолойсо свинец-катионитом на стирол-дивинилбензольном сополимере со степенью сшитости 8%.

2

CT РК ISO22662-2013

6.2    Предварительная колонна. Для продления срока службы колонны с ионообменной смолой предварительную колонну меняют после 200 введений.

6.3    Фиксатор микрозащитного устройства.

6.4    Нагреватель колонны, способный поддерживать постоянную температуру (85±1)°С.

6.5    Насос ВЭЖХ, способный поддерживать расход от 0 мл/мин до 10 мл/мин.

6.6    Автоматический пробоотборник ВЭЖХ.

ПРИМЕЧАНИЕВозможно также ручное введение.

6.7    Дифференциальный рефрактометрический детектор,высокочувствительный.

ГГРИМЕЧАНИЕВозможно использование других детекторов, например, детектора, измеряющегорассеянный свет.

6.8    Программное обеспечение,для автоматического введения, выполнения,приема данных, обработки и управленияхроматографической информацией.

6.9    Водоочистная установка, дающая воду, соответствующую требованиям класса 1 по ISO 3696, с сопротивлением от 10 МОм-см до 18 МОм-см.

6.10    Фильтровальная установка, включающая источник вакуума, с мембранным фильтром с размером пор 0,45 мкм и диаметром 47 мм.

6.11    Аналитические весы, специального класса I.

6.12    Водяная баня, способная поддерживать температуру от 38°С до 40 °С.

6.13    Точный диспенсер, точная автоматическая пипетка илипипетки с одной меткой, соответствующие требованиям класса A noISO 648, вместимостью 2 мл.

6.14    Фильтр-воронка диаметром 75 мм.

6.15    Фильтровальная бумага диаметром 110 мм, ватман¹^ №1 или эквивалентная.

6.16    Нейлоновый фильтр для шприца, с размером пор 0,45 мкм.

ПРИМЕЧАНИЕВозможно использоватьпроточный фильтр с таким же размером пор.

6.17    Шприцобъемом 5 мл с наконечником Люэра.

6.18    КолбыВЭЖХ с пробками.

6.19    Мерные колбы с одной меткой,вместимостью 10 мл ± 0,02 мл.

ПРИМЕЧАНИЕ 1 Могут использоваться колбы большей вместимости с учетом коэффициента разбавления

ПРИМЕЧАНИЕ2 Допускается использовать аппаратуру, мерную посуду, реактивы, имеющие аналогичные метрологические характеристики или выше. Применяемые средства измерений подлежат испытаниям с целью утверждения типа или метрологической аттестации, поверки средств измерений и внесению в Реестр Республики Казахстан в соответствии с законодательством в области обеспечения единства измерений.

7 Отбор проб

Репрезентативную пробу отправляют в лабораторию. При транспортировке и хранении должна быть исключена возможность ее повреждения или изменения.

Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящем стандарте. Рекомендованный метод отбора проб осуществляетсяпо[1].

3

К? СТ ISO 22662-2013

Алгысез

1    «Казакстан стандарттау жэне сертификаттау институты» Республикальщ мемлекетпк кэсторны мен стандарттау женшдеп 44 «Технолог» техникальщ комитет! Э31РЛЕП ЕНГ13Д1

2    Казакстан Республикасы Индустрия жэне жана технологиялар министрл1п Техникальщ реттеу жэне метрология комитет! Тератасыньщ 2013 жылты 13 карашадаты № 526-од буйрытымен БЕК1ТШ1П КОЛДАНЫСКА ЕНГ131ЛД1

3    Осы стандарт ISO 22662:2007 Milk and milk products- Determination of lactose content by high-performance liquid chromatography (Reference method) (Сут жэне сут ешмдерт Тшмдшп жотары суйьщтьщ хроматографиясы кемепмен курам ындаты лактоза мелшерш аньщтау (бакылау эдю1) хальщаральщ стандартына катынасы бойынша б1рдей.

Осы стандартка мэт!нде курсивпен белшген, Мемлекетпк техникальщ реттеу жуйесшщ курылу ерекшел i KTepi не байланысты редакцияльщ езгертулер енпзшдт

ISO 22662:2007 Milk and milk products- Determination of lactose content by high-performance liquid chromatography (Reference method) хальщаральщ стандартын ISO/TK 34, Тамак ешмдер! техникальщ комитет!, IK 5, Сут жэне сут ешмдер iuiKi комитет! мен Хальщаральщ сут ешмдер! федерациясы (IDF) эз1рледт Аударма атылшын тшнен (еп)

Сэйкест!к дэрежеа - б1рдей (IDT)

4 Б1Р1НШ1 ТЕКСЕРУ MEP3IMI ТЕКСЕРУ KI 3I II II III I

5 АЛЕАШ РЕТ ЕНГВТЛДТ

Осы стандартца енггилетт езгержтер туралы ацпарат «Стандарттау жвтндегi нормативтт к\ лсаттар» ацпараттыц кврсеттштертде жыл сайын, сондай-ац мэтт взгерттер мен тузетулер ай сайын басылатын «¥лттыц стандарттар» ацпараттыц корсеткпшнОе жария emiaedi. Осы стандартты цайта царау (взгертту) жою жагдайында, muicmi хабарлар ай сайын басылатын «¥лттыц стандарттар» ацпараттыц корсеткпшнОе жария emiaeOi».

Осы стандарт Казакстан Республикасы Индустрия жэне жана технологиялар министрлтшщ Техникальщ реттеу жэне метрология комитетшщ руксатынсыз ресми басылым ретшде тольщтай жэне белшектелш басылып шытарыла, кебейтше жэне таратыла алмайды.

^Ватман - это образец подходящей продукции, доступной коммерчески. Эта информация приводится для удобства пользователей настоящим стандартом и не является требованием ISO и IDF.

8    Подготовка испытуемой пробы

Нагреть испытуемую пробу жидкого молока и сливокв водяной бане (см. 6.12) до температурыот 38°С до 40°С. Осторожно смешать испытуемую пробу, постоянно вращая бутылку. Осторожно помешивая пробу,быстро охладить до температуры(20 ± 1)°С непосредственно перед взвешиванием рабочей части (см. 9.2).

9    Методика

9.1    Подготовка стандартного раствора

9.1.1    Для получения раствора с концентрацией 20 мг/мл безводнойа-лактозы взвесить, с точностью до 1 мг, соответствующее количество моногидрата а-лактозы(см. 5.3),количественно перенести в мерную колбу на 10 мл(см. 6.19).

9.1.2    Растворить моногидрат а-лактозы (см. 9.1.1)в 5 мл воды класса ВЭЖХ(см. 5.1). Добавитьв колбу2 мл раствора D (+)-мелецитозыв качествевнутреннегостандарта. Перемешать,вращая колбуи довести до метки водой класса ВЭЖХ (см. 5.1). Выразить конечную концентрацию а-лактозы в миллиграммах безводной формы на миллилитр.

9.1.3    Профильтровать стандартный раствор (см. 9.1.2) через гофрированную фильтровальную бумагу (см. 6.15),используя фильтровальную воронку (см. 6.14). Набрать фильтрат в шприц (см. 6.17). Привинтить нейлоновый фильтр для шприца (см. 6.16) и перелитьнабранную порциюфильтратф в колбуВЭЖХ (см. 6.18). Ввестипорцию стандартного раствора дважды по 9.4.2.

Стандартный раствор, приготовленный таким образом, может обеспечить три комплекта калибровочных растворов. Использовать каждый комплектдля калибровки колонныВЭЖХ следует только один раз. Хранить неиспользованные комплекты стандартного раствора лактозы при температуре 4°С не более одной недели. Перед использованиемохлажденные стандартные растворы довести до температуры 20°С.

Для контроля калибровки ввести стандартный раствор как неизвестную пробу в начале и в конце серии рабочих частей.

9.2 Подготовка рабочей части (пробы)

9.2.1    Для жидкого молокарабочую частьподготовить следующим образом. Взвесить с точностью до 1 мг около 3 мл подготовленной испытуемой пробы (см. Раздел 8),количественно перенестив мерную колбунаЮ мл (см. 6.19). Продолжитьпо 9.3.

9.2.2    Для молочного порошкарабочую частьготовят следующим образом. Взвесить с точностью до 1 мг около 0,300г испытуемой пробы, количественно перенести в мерную колбу на 10 мл (см. 6.19). Добавить около 5 мл воды класса ВЭЖХ (см. 5.1), предварительно подогретой до температуры 50°С - 60°С. Тщательно перемешать до однородного состояния. Охладить испытуемыйраствор до температуры(20 ± 1) °С. Продолжитьпо 9.3.

9.2.3    Для сливокрабочую часть готовят следующим образом. Взвесить с точностью до 1 мг около 1 г подготовленной испытуемой пробы (см. Раздел 8) в мерную колбу на 10 мл (см. 6.19). Продолжитьпо 9.3.

к;азак;стан респуликасыныц улттьщ стандарты

CYT ЖЭНЕ CYT 0Н1МДЕР1 Тшмдшнт жогары суйыктык хроматографиясы комепмен курам ындаты лактоза молшерш аныктау. (Бакылау эдш)»

Енпзшген куш 2014.07.01

1    Колданылу ауматы

Осы стандарт шика сут, стерилденген сут, куртак сут сонымен катар шика жэне пастерленген каймак; курамындаты лактоза курамын аньщтау кезшдеп бакылау эдютерш белгшейдт

Бул эдю курамына олигосахарид косылтан сутке жэне ферменттелген сутке жарамайды.

2    Нормативтж сштемелер

Осы стандартты колдану унии келеа сштеме кужаттары кажет:

ISO 648-2008 Laboratory glassware - Single-volume pipettes (Зертханальщ шыны ыдыстар. Sip белгш тамызтыштар).

ISO 3696-1987 Water for analytical laboratory use.Specification and test methods (Зертханальщ талдаута арналтан су. Сынау эдю1 мен техникальщ талаптар).

ЕСКЕРТПЕ Осы стандартты пайдалану кезтде жыл сайын шыгарылатын агымдагы жылдагы жагдайга «Стандарттау бойынша норматиетт цужаттар» жэне агымдагы жылы жарияланган, ай сайын шыгарылатын ацпараттыц кврсетюштерге сэйкес келетт ацпараттыц кврсеткш бойынша сштемелт стандарттардыц цолданысын тексерген дурыс болады. Егер сытеме цужаты ауыстырылган (взгертыген) болса, онда осы стандартты пайдалану кезтде ауыстырылган (взгертыген) цужатты басшылыща алу керек. Егер сытеме цужаты ауыстырусыз кушт жойган болса, онда оган сытеме берыген ереже осы сытемеге эсер етпейтт бвлтте

3 Терминдер мен аныктамалар

Осы стандартта сэйкес аньщтамалармен келеа терминдер колданылады:

3.1 Лактозы KypaMbi(lactosecontent): Осы стандартта белгшенген шаралар бойынша аньщталтан заттьщ массальщ улест

ЕСКЕРТПЕ Массальщ улес пайыз бойынша кершедт

Ресми басылым

К? СТ ISO 22662-2013

4    Эдк мазмуны

[0(+)-мелецитоз] iiiiKi улпсй суттщ елшенген келемше жэне лактоза улпсй не косылады. ( Biggs-Szijarto epixiнci) химиияльщ реактив майдьщ тунуы унйн жэне суттщ протеин компоненттерше косылады. Енпзшмге дешн сынама ей рет алдымен катаз сузгщен сосын 0,45 мкм нейлон сузпсшен етедт Лактоза мен iniKi улп кортасын катион батанына белшед1 жэне дифференцалды рефрактомермен немесе баска детектормен аньщталады. Козталтыш фаза ретшде судьщ жотары тшмдшклл хроматография класы (ары карай - СЖТХ) колданылады.

5    Реактивтер

«талдау унш таза» квалиыикациялы реактивтер колданылады.

5.1    СЖТХ класты газдан тазалантан су. Су тазалатыш курылтыдан алынтан (6.10 кара) ISO 3696 бойынша 1 класты суды сузедт Сортыштьщ жаксы жумыс icTeyi унйн жэне туракты база сызытын алу унйн кундел1кт1 колжет1мд1 эдютщ б1р1мен, мысалы барботажгелия, ультрадыбыспен ендеу, вакууммен немесе газдан тазалаудьщ технологияльщ ендеу толассыз тезд1к жуйес1.

5.2. D(+) - гидрат мелицитоз ертндкц ^(С^НзгОш'НгО) = 50 мг/мл. D(+) Мелетицоз гидрат ертндюшщ 6ip белЫн суда ерггед1 (5.1 караныз), сусыз соцгы 50 мг/мл алады.

D(+) гидрат мелицитоз ертндюш 4°С 6ip аптадан артьщ емес уакытта сактайды.

5.3 а-лактоза моногидраты С12Н22О11Н2О. а-лактоза моногидратын колданута дей1н 4 сатат бойы 70°С температурасында кепт1ру керек. Одан кешн белме температурасында эксикаторда суытады.

ЕСКЕРТПЕ KcnTipi.ircHHCH кешн лактоза моногидрат формасында калады.

5.4. Biggs-Szijarto ертщцсш алу уш1н 200 мл белпс1 бар кутыда 25 грамм дигидрат ацетат цинк Zn(CH3C00)2'2H₂0 жэне 12,5 грамм моногидрат фосфорновольфрам кынщылын (W12O36 H3PO4 H2O) 100 мл СЖТХ класты суда ертгу аркылы (5.1 караныз) алады. Белпге дей1н СЖТХ класс суын куяды жэне араластырады. Дайын болтан ертнд1 4°С температурасында 6ip апта сакталады.

ЕСКЕРТПЕ Осы химикаттарды сактау жэне Kayinci uiK ережелерш колдануды орындау.

6    Аппаратура и материалдар

Осы эд1ст1 колдантанда келес1 зертханальщ куралдарды пайдаланады.

6.1    СЖТХ- узындыты 300мм iuiKi диаметр! 7,8 мм болатын батан, елшеу кезец1 8%. ион алмаскан шайыр стирол-дивинилбензол кортасын катионы.

6.2    Косымша батан. Ион алмасу шайыр баганыныц кызмет мерз1м1н узарту унйн 200 енпзшмнен кеГйн алмастырады.

6.3    Микро коргау курылгысыныц бектанй.

6.4    Туракты (85±1)°С температураны устап туратын баганды жылыткыш.

6.5    0 мл/мин ден 10 мл/мин дешн шыгынды кетерет!н СЖТХ сорабы.

6.6    Автоматты СЖТХ сынама ipiKTerim.

ЕСКЕРТПЕ Колмсн енпзе де болуы мумин.

6.7    Жотары сез1мтал дифференциалды рефрактометрикалы детектор.

ЕСКЕРТПЕ Баска детектор колданылуы да мумин мысалы, шашыравды жарьщты елшсйтш детектор.

2

К? СТ ISO 22662-2013

6.8    Автоматты енпзу унпн, орындауга, мэл!метп кабылдауга, ендеуге жэне хроматографиялы акпаратты бас кару га арналган багдарламамен камтамасыз ету.

6.9    10 МОм-см ден 18 МОм-см. дешнп кедергшермен ISO 3696 бойынша 1 класс талаптарына сай су тазалайтын курылгы.

6.10    Мембранды сузпш усак тесжтершщ елшем1 0,45 мкм жэне диаметр! 47 мм болатын сузпш курылгы.

6.11    1 Арнайы 1 класты аналитикальщ таразылар.

6.12    38°С ден 40 °С. температураны устап туруга кабшетп су моншасы.

6.13    ISO 648 бойынша А класс талаптарына сэйкес автоматты дэл тамызгыш немесе сыйымдылыгы 2 мл болатын белпа бар тамызгыш.

6.14    Диаметр! 75 мм болатын сузпш.

6.15    Диаметр! 110 мм болатын сузпш кагаз, №1 ватман кагазы немесе баламасы.

6.16    ¥сак тес1к елшемдер! 0,45 мкм болатын шприцке арналган нейлон сузпш.

ЕСКЕРТПЕ Yea к тесак елшемдер1 осындай болатын атыс cy3rici пайдаланылуы мумшн.

6.17    Люэр ушына кипзпнй бар колем! 5 мл шприц.

6.18    СЖТХ тыгындары бар кутылары.

6.19    Сыйымдылыгы 10 мл ± 0,02 мл болатын б!р белпа бар елшеу кутысы.

ЕСКЕРТПЕ 1 Еселеу коэффицентт есептегенде сыйымдылыгы улкен цутылар пайдаланылуы мумкт.

ЕСКЕРТПЕ2 ¥цсас немесе жогары метрологиялыц сипаттамалары бар аппаратураны, влшем ыдыстарын, peaumuemepdi пайдалануга руцеат emmedi. Крлданылатын елшеу цуралдары турш бекту мацеатында немесе метрологиялыц аттестаттауга жатады, салыстырып елшеу цуралдары жэне елшеу б1рлтмен цамтамасыз ету саласында К,азацстан Республикасы Пзтмгне енгЫлуге жатады.

7 Сынаманы ipiKTey

Репрезентативп сынаманы зертханага ж1бередт Тасымалдауда жэне сактауда оныц булшуше жэне езгеруше жол бершмеу! тшс.

Сынаманы ipiKTey осы стандартта белг1ленген эдю бел1г1 болып табылмайды. ¥сынылатын сынаманы ipiKTey эд!с! [1] бойынша жузеге асады.

¹ Ватман - б^л коммерциялык кол жет1мд1л1кке сэйкес келетш ешмнщ \лrici. Бул акпарат осы стандартты колданушыларта ыцтайды болу у™¹¹ кслт1р1лгсн жэне ISO мен IDF талаптары болып табылмайды.

8 Сыналатын сынаманы дайындау

Суйьщ сут пен кшегей сыналатын сынамасын 38°С тан 40°С дей1н су моншасында кыздырады (6.12 караныз) Бетелкен1 жи1 айландыра отырып сыналатын сынаманы абайлап араластырады. Жумыс бел!г1н т1келей елшеу алдында (9.2 караныз) сынаманы араластыра отырып (20 ± 1)°С температурасына дешн тез суытады

3

К? СТ ISO 22662-2013

9 Эдктеме

9.1    Стандартты ертнд1ш дайындау

9.1.1    Концентрациялы ертщцш алу уш1н дэлдт 1 мг болатындай 20 мг/мл сусыз а-лактозаны елшейд1, саны сэйкес моногидрат а-лактоза (5.3 караныз), 10 мл(6.19 караныз) елшеу кутысына ауыстырады.

9.1.2    моногидрат а-лактозасын (9.1.1 караныз) 5 мл СЖТХ класты суда (5.1 караныз) ерггедт Iiiiici стандарт есеб1нде кутыга 2 мл D (+)-мелецитоз ер1т1нд1с1н косады. Кутыны айландыра отырып араластырады белпге дей1н СЖТХ класты сумей толырады(5.1 караныз). а-лактоза сонгы концентрациясын миллиграмда сусыз форма миллилитршде айкындайды.

9.1.3    Стандартты ертщцш (9.1.2 караныз) сузпш куйгышты пайдалана отырып (6.14 караныз). гофрирл1 сузпш кагаздан етк1зед1 (6.15 караныз). Филтратты шприцке сорып алады (6.17 караныз). Нейлон сузпнт шприцке кипзед1 (6.16 карацыз) жэне СЖТХ кутысына (6.18 карацыз) алынган белит куяды. 9.4.2. бой ынша стандартты ертщц белтн еш рет енпзедт

Осындай жолмен дайындалган стандартты ертнд1 калибрл1 ер1т1нд1н1ц уш топтамасын камтамасыз ете алады. Калибрлеу баган СЖТХ угшн эр топтаманы 6ip рет кана пайдалануы ти1с. Стандартты ертндшщ пайдаланылмаган топтамасын 4°С температурада 6ip аптадан артьщ сактауга болмайды. Колданар алдында суытылган стандартты ер1т1нд1лерд1 20°С температурага дей1н жетк1зед1.

Калибрлеуд1 бакылау уш1н стандартты ер1т1нд1н1 белг1с1з сынама рет1нде жумыс белшшщ басы мен соцы ретшде енпзедт

9.2 Жумыс белшш дайындау (сынаманыц)

9.2.1    Суйьщ сут уш1н жумыс белшш келеа улпмен дайындайды. 1 мг дешнп дэлд1кпен 3 мл дайындалган сыналатын сынаманы елшейд1 (8 бел1м карацыз), 10 мл кутыга сандьщ бойынша алмастырады (6.19 карацыз). 9.3. бойынша жалгастырады.

9.2.2    Сут унтагы уш1н жумыс белшш келес1 улп бойынша дайындайды. 1 мг дешнп дэлдште 0,300г сыналатын сынаманы елшеу, сандьщ бойынша 10 мл елшеу кутысына салады (6.19. карацыз). 50°С - 60°С температурасына дей1н кыздырылган СТЖХ класты суын куяды (5.1 карацыз). Б1ртутас калыпка келгенше араластырады. Сыналатын ертщцш (20 ± 1) °С температурага дешн суытады. 9.3. дешн жалгастырады.

9.2.3    Кшегей жумыс белт уш1н келеа улп пайдаланады. 1 мг дешнп дэлд1кпен 1 мл дайындалган сыналатын сынаманы елшейд1 (8 бел1м карацыз) 10 мл (6.19 карацыз). 9.3.бойынша жалгастырады.

9.3    Фильтратты дайындау

9.2.1, 9.2.2 немесе 9.2.3. бойынша алынган 2 мл him стандарт ертщцсш (5.2 карацыз) Б(+)-мелецитоз жэне 1,2 мл Biggs-Szijarto ертнд1с1н куты 1ш1ндепс1не косады. Белпге дешн СЖТХ класты су куяды (5.1 карацыз)

Кутыны бес рет аударыстыра отырып абайлап араластырады. Белме температурасында 10 мин устайды. Араластыруды кайталайды жэне тагы ею мэрте белме температурасында устауды кайталайды.

Куты шшдепсш гофрирленген сузп казаз аркылы суз1п алады (6.14 карацыз). Фильтратты шприцке сорып алады (6.17. карацыз) Шприцке нейлон сузпш жалгайды

К? СТ ISO 22662-2013

(6.16. караныз) жэне фильтратты СЖТХ кутысына куяды (6.18. караныз) Жумыс белЫн 9.4.2. бойынша енпзедт

ЕСКЕРТПЕ Сузттш цагазы аркылы еткен фильтрация кезещ центрифугада айланумен алмастырылуы мумии.

9.4 СЖТХ аныктау

9.4.1    СЖТХ алдын ала дайындайды. Туракты база сызыгын алу унпн талдау басталганша 24 сагатта детекторды косады (6.7. караныз). Iinici температураны 35°С тец болатындай erin орнатады. СЖТХ сорабын (6.5. караныз) 0,2 мл/мин шыгынга 20 минутка орналастырады, ал батана кыздыртышын (6.4. караныз) белые температурасына орналастырады.

Батана кыздыргыш температурасын 85°С дей1н кетередг Осы температурага жеткен кезде шыгынды 0,2 мл/мин тан 0,6 мл/мин га дешн акырындап кетеру керек. Туракты шыгынды базальщ тузул1кт1 алу унпн туракты шыгын 0,6 мл/мин жэне 85°С температурасын 2 сагат бойы устап туруы Tnic.

ЕСКЕРТПЕ Кысымды кундел1кт1 бакылау мен пркеу болатын нормадан ауыткытан езгер1стерд1 айкындауга ксештгш типзедг

9.4.2    Хроматографиялау шарттары 1 Кестеде келт1р1лген

1- кесте

Шарттар	Толыцтыгы
Жылжымалы фаза	СЖТХ класты газдан тазартылган су
Inuci детектор тсмпсратлрасы	35°С
Сацтандыртыш батан температурасы	Коршаган орта температурасы
Батан температурасы	85°С
Шыгын	0,6 мл/мин
Енпзуге арналган колем	20 мкл
Айдалу уацыты	15 минут
0(+)-мслсцито !ы устап туру уацыты	(9 ± 1) минут
Лактозаны устап туру уацыты	(11 ± 1) минут

Сез1мталдык, межен1 белу багасы, туракты уакыт, табалдырьщ елшем1н1н удемел1 кезещ сиякты кабылдау параметрлер1 мен интеграцияны мукият тандайды. Хроматограмма мысалы 1 суретте келт1р1лген.

5

К? СТ ISO 22662-2013

М - Б(+)-мелецитоз;Т - а-лактоза; /r - устап туру уак;ыты; U - потенциалдьщ

айырмашылыгы

1 сурет 1шкч стандартты шика сут улпс1 хроматограммасыныц мысалы

Батан тшмдшпн сонымен 6ipre теоретикальщ тэрелке саны аталатын, N, 6ip аптада 6ip реттен кем емес елшейдт Мэннщ темендеу1 батан тшмдшпн жогалту салдарынан болатын тшменщ удемел1 кезещнщ кецекнмен байланысты. jV(1) формуламен есептейдт

И

rtR - мунда минуттагы лактозаньщ удемел1 кезешн устап туру уак;ыты;

w - лактоза удемел1 кезещнщ еш оньщ 50% бшкпгшде минут шшдеп баламалы уак;ыт интервалы.

Теоретикальщ тэрелке саны алганщы мэннен 25% азайганда баганды ауыстыру усынылады.

ЕСКЕРТПЕ Кей жатдайда теменп тшмдшкпен жумыс жасайтын пайдаланылтан батан кайта жуумен ещцрунп кужатында жазылтан сэйкес келетш регенерацияланатын ертщцмен калпына келпр1лу1 мумюн.

К? СТ ISO 22662-2013

10    Нэтиженщ айкындылыгы мен ece6i

10.1    Есеп

Компьютер есептеуд1 келеа жагдаймен орындайды: алдымен багдарламальщ жасактама лактоза удемел1 кезешнщ A_sk аумакка кисык тэуелдшк катынасын алады, iiiixi стандартты концентрацията кебейтшген iiiixi стандарт ауматы A;_s,, ятни (AJA_K) х Cj_S, лактоза концентрациясынанс_г. Кисык Typi барльщ концентрация интервалында сызьщтьщ болуы керек.

Белпаз сыналатын сынаманыц сандьщ талдауы yniiH пайызбен айкындалтан, сыналатын сынама массасы yniiH сусыз лактоза массальщ улеа yniiH традуирленген кисьщтан алынтан багдарламальщ жасактаманы концентрацияга беледц

10.2    Нэтиженщ айкындылыгы

Сынак нэтижесш уш ондьщ белпге дешнп дэлд1кте керсетедг

11    Дэлдж

11.1    Зертхана аралык сынактар

Сынактыц дэлд1к эдюшщ зертхана аральщ сынак нэтижелер1 А косымшасында келт1ршген.

Осындай зертхана аральщ сынактан алынган мэндер келт1ршгеннен езгелер1 баска концентрация диапазонына жэне матрицага колданыла алмайды.

11.2    Кайталангыштык(¥Ксастык)

Ею тэуелаз жеке сынак нэтижелер1 арасындагы абсолютах айырмашыльщ, 6ip эдют1 колдану аркылы алынган б1рдей сыналатын материалды 6ip зертханада, 6ip оператормен, кыска уакыт мерз1мшде б1рдей курылгыны пайдалану мэн керсетюнпнен 5% артьщ болмауы т и i с:

a)    суйьщ сут yuiiH -0,06%;

b)    кшегей yuiiH-0,06%;

c)    сут унтагы yuiiH - 0,37%.

11.3    Кайталанушылык

Exi тэуелшз жеке сынак нэтижелер1 арасындагы абсолютах айырмашыльщ, 6ip эдют1 колдану аркылы алынган б1рдей сыналатын материалды 6ip зертханада, 6ip оператормен, кыска уакыт мерз1мшде б1рдей курылгыны пайдалану мэн керсеткшшен 5% артьщ болмауы т и i с:

a)    суйьщ сут унпн - 0,13%;

b)    кшегей унпн - 0,38%;

c)    сут унтагы унпн - 2,94%.

7