Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской Федерации_
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Метод микробиологического измерения концентрации Komagataella (Piс hi и) pastoris БРЦ ВКПМ Y-4394 в атмосферном воздухе городских и сельских поселений
Методические указании МУК 4.2.3566—19
Издание официальное
Москва * 2020
Федеральная служба по надзору в сфере зашиты нрав потребителей и благополучия человека
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Метод микробиологического измерения концентрации Komagatuella (Picltia) pastoris БРЦ ВКПМ Y-4394 в атмосферном воздухе городских и сельских поселений
Методические указания МУК 4.2.3566—19
ББК 51.21 М54
М54 Метод микробиологического измерения концентрации Komagatael/u (Pi chid) pastoris БРЦ ВКПМ Y-4394 в атмосферном воздухе городских и сельских поселений: Методические указания.—М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2020.— 8 с.
ISBN 978 5 7508
1. Разработаны и подготовлены ФГБОУ ВО РИММУ им. II.И. Пирогова Минздрава России (д.б.н. П. М. Шеина).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Л. Ю. Поповой 24 окгябри 2019 г.
3. Введены впервые.
ЬЬК 51.21
Компьютерная верстка Н. В. Ломановой
I (отписано в печать 28.01.2020 Формат 60x88/16 Псч л. 0.5
Тираж 100 >кз. Закат 3
Федеральная елчжба по нал юру в сфере танины прав потребителей и благополучия человека 127994. Москва. Валковскнй пер., л. 18. стр 5. 7
Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован Феморальным Петром ihihciim и ) п идем поло iни Росно требнадтора 117105. Москва. Варшавское иг. 19а Реалитаиия печатных изданий, тел./факс: 8 (495)633-86-59
£■ Рое по гребна. пор, 2020
УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации
А. Ю. Попова
24 октября 2019 г.
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГ И Ч ЕСКИ Е ФА К ГОРЫ
Метол микробиологическою измерения концентрации Komagataella (Pic/tia) pastoris БРЦ BKI1M Y-4394 в атмосферном воздухе городских и сельских поселений
Методические указании МУК 4.2.3566—19
Штамм растет также на агаризованных средах: глюкозо-пептон-лрожжевом агаре (YPD). глниерин-пептон-дрожжевом агаре (YPG), мя-сопептонном агаре (МПА), АГВ среде, картофельный агаре (КА).
При росте на агаризованной среде образуются гладкие, округлые колонии с матовой поверхностью светло-бежевого цвета, край ровный. При росте в жидкой среде клетки образуют ровную интенсивную муть, пристеночных пленок не образуют, наблюдается белый осадок, коагуляция отсутствует.
На среде YPD штамм образует клетки округлой, слегка овальной формы размером 3-4 мкм, клетки почкуются, почкование многостороннее, истинного мицелия не образуют.
Штамм Komagataella (Pichia) pastoris депонирован в Биоресурс ном Центре Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером БРЦВКПМ Y-4394.
Штамм Komagataella (Pichia) pastoris БРЦ ВКПМ Y-4394 относится к микроорганизмам, непатогенным для человека согласно классификации микроорганизмов, приведенных в санитарных правилах1. Работа со штаммом Komagataella (Pichia) pastoris БРЦ ВКПМ Y-4394 не требует специальных мер предосторожности.
Предельно допустимая концентрация (Г1ДК) Komagataella (Pichia) pastoris в атмосферном воздухе установлена в гигиенических нормативах'.
III. Пределы измерений
3.1. Методика обеспечивает выполнения измерении количества клеток в атмосферном воздухе городских и сельских поселений в диапазоне конценграций от 5 до 5000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительной вероятности 0,95.
IV. Методы измерений
4.1. Метод основан на аспирации из атмосферного воздуха городских и сельских поселений клеток псевдомицслия и подсчета количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам.
V. Средства измерений, вспомогательные устройст ва, реактивы и материалы
5.1. При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.
Средства измерений
|
Таблица 1 |
|
1 ^именование средств измерения |
1 (азвания документов (ГОСТ, ТУ) |
|
Карометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5—790 мм рт. ет. и с пределом допустимой погрешности ± 2.5 мм рт. ст. |
ТУ 2504-1799 |
|
Весы лабораторные, аналитические, наибольший предел взвешивания 110 г. предел допустимой 110-1 ре ш ноет и ± 0.2 мг |
ГОСТ 1» 53228 |
|
Колбы мерные 2-100-2. 2-250-2. 2-1000-2 |
ГОСТ 1770 |
|
Пипсгки 1 радуйрованные 2-го класса точности вмес-гимостью 1.0. 2.0, 5,0, 10 см3 |
ГОС Г 29227 |
|
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25 и 50 см |
ГОС Г 1770 |
|
Термометр лабораторный шкальный, пределы измерения 0—55 °С |
ТУ 25-2021.003 |
|
Прибор для микробиологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)
Имнактор воздуха микробиологический «Флора-100» |
ТУ 64-12791—77 ТУ 64-098-33—95 |
|
|
Примечание. Допускается использование средств измерения е аналогичными или лучшими характеристиками. |
|
Таблица 2
Вспомогательные устройства и материалы |
|
Наименование аппаратуры и материалов |
11азвания документов (ГОСТ, ГУ) |
|
1 |
2 |
|
Шкаф сушильный стерилизационный, позволяющий поддерживать температуру (160 ± 5)°С |
ГУ 9452-010-00141798 |
|
Термостаты, позволяющие поддерживать рабочую температуру (28 ± 2) °С и (37 ± 2)°С |
ГУ 9452-002-00141798 |
|
Л втекла в электрнч ее кий |
ГОСТ 9586 |
|
Стерилизаторы паровые медицинские |
ГОСТ!» КП 13060; ГОСТ Р 51935 |
|
Дистиллятор |
ГУ 4952-007-33142130 |
|
Облучатель бактерицидный настенный |
ТУ 9444-015-03965956 |
|
Холодильник бы твой |
ГОСТ 26678 |
|
Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа Виолам |
ГОСТ 28489 |
|
Чашки биологические (Петри) или одноразовые из полимерных материалов |
ГОСТ 23932 |
|
Воронки конусные диаметром 40—45 мм |
ГОСТ 25336 |
|
|
Продолжение табл. 2 |
|
1 |
2 |
|
1 руша резиновая |
ГУ 9398-005-0576 |
|
11етля бактсриоло! ическая |
- |
|
Марля медицинская |
ГОСТ 9412 |
|
Вата медицинская гигроскопическая |
ГОСТ 25556 |
|
Кум аза фидьгронадыия лабораюриая |
ГОСТ 12026 |
|
|
Примечание. Допускается применение обору локация с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. |
|
Таблица 3
Реактивы и питательные среды |
|
|
|
Примечание. Допускается использование друз их питательных сред и диагностических препаратов с аналогичными характеристиками. |
VI. Требования безопасности
6.1. Измерение концентрации клеток г риба в атмосферном воздухе юродских и сельских поселений осуществляется в соответствии с санитарными правилами’. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами регламентируются ГОСТ 12.1.005, электробезопасность при работе с электроустановками - ГОСТ 12.1.019 и инструкцией-по эксплуатации прибора.
6.2. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованным бактерицидными лампами.
VII. Требования к квалификации операторов
7.1. К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним профессиональным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований. 2
VIII. Условия измерений
8.1. Поиготовление сред, подготовку к анализу проводят в следующих условиях:
темпеоатура воздуха (20 ± 5) °С:
- атмоссЬеоное давление 760 ± 20 мм рт. ст.;
- влажность воздуха не более 80 %.
IX. Приготовление глкжозо-пептон-дрожжевого агара (YPD)
9.1. Для приготовления глкжозо-пептон-дрожжевого агара используют отдельные компоненты среды следующего состава (г/1 ООО см2): пептон - 10,0 г. глюкоза - 10,0 г, дрожжевой экстракт - 10,0 г. агар-агар -15,0 г, дистиллированная вода - 1 000 см ’.
Сухие компоненты растворяют в I 000 см2 дистиллированной воды, тщательно перемешивают и нагревают до полного растворения агара.
Приготовленную среду разливают в стерильные колбы по 250— 500 см’ и автоклавируют при 121 °С в течение 15 мин.
Готовую среду хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше 8 °С не более 10 дней.
X. Проведение измерения
Отбор проб вон)уха
10.1. Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02 и Г ОСТ Р 8.563.
Для этого воздух аспирируют при помощи пробоотборника на поверхность плотной питательной среды в соответствии с технической документацией (инструкцией) на прибор. Время аспирации и объем отбираемого воздуха зависит от предполагаемой концентрации микроорганизма.
Аппарат перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают 96° этиловым спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо (количество питательной среды в чашки вносят в соответствии с Инструкцией к прибору). После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.
Выполнение а шиит
10.2. При выполнении анализа воздуха стерильную агаризованную среду (YPD) расплавляют, остужают до 50 60 °С и разливают в чашки Петри.
Контроль чистоты розлива проводят в соответствии с методическими указаниями4. Для этого чашки с застывшей средой помещают в
1 Пункт 7 I I МУК422316—08«Методы контроля бактериологических питательных сред».
термостат при температуре 37 °С не менее чем на 18 часов. Проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха. Разлитую в чашки питательную среду хранят при температу ре (2—8) °С не более 10 дней.
После отбора проб воздуха чашки Петри помешают в термостат с температурой (28±2)°С. Через 1—3 суток производят подсчет выросших колоний по культу рально-морфологическим признакам.
Ростовые свойства используемой питательной среды должны быть проверены до проведения анализа воздуха в соответствии методическими указаниями . Для этого эталонный музейный штамм Komagataella (Pi chia) past oris БРЦ ВКПМ Y-4394 высевается на 2—3 чашки используемой среды.
Лиофилизованную культуру музейного штамма необходимо использовать 2 3 пассажа во избежание потери им заданных ростовых свойств.
XI. Вычисление результатов измерен и н
11.1. Расчет концентрации клеток производят по формуле:
К ® (/7 х 1 ООО) / С х Т, кл./м \ где К - концентрация штамма в воздухе, кл./м ;
//- количество типичных колоний, выросших на чашке Петри; 1000 - коэффициент пересчета на 1 м воздуха;
С - скорость аспирации возду ха, л/мин:
7 - время аспирации, мин.
XII. Оформление результатов измерений
12.1. По окончании измерения и расчета концентрации клеток микроорганизма в возду хе должен быть составлен протокол (отчет), в котором представлена необходимая информация:
-о месте отбора пробы (название и адрес организации, производство. технологическая стадия, точка отбора пробы);
-о марке пробоотборника, который использовался исследователями. питательной среде и времени инкубации;
о лицах, производивших отбор проб воздуха, идентификацию штамма и расчет концентрации штамма.
Основные качественные и количественные параметры измерения представляются в виде табл. 4.
Таблица 4
|
Основные качественные и количественные параметры итмерения |
|
Дата проведения |
S'!
пробы |
Характеристика выросших колоний(количество ТИПИЧНЫХ КОЛОНИЙ) |
Концентрация. кл./м |
Соотношение с величиной 11ДК |
|
|
|
|
|
|
|
|
’ МУК42.2316—08«Метолы контроля бактериологических питательных срел». |
1
СП I 3.2322- 4)8 «Безопасность раГимы с микроор! ани тчами III—IV групп наго1Синос1и (опасности) и возбу ли (елями пара пиарных болезней».
: ГП 2.1.6.3537—18 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) микроорглннзчов-продуцентов, бактериальных препаратов и их komhoiiciiior в атмосферном воздухе юродских и сельских поселений»
2
СП 1.3.2322—OS «Безопасность работы с микроорганизмами III—IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
