Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование ____Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств этабоксама в воде, почве, ботве и клубнях картофеля, ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методическое указания МУК 4.1.2403—08

Издание официальное

Москва • 2009

Федеральная служба по надзору в сфере защиты пржв потребителей

и благополучия человека

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Определение остаточных количеств этабоксама в воде, почве, ботве и клубнях картофеля, ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания

МУК 4.1.2403-08

МУК 4.1.2403-08

него значения площади пика от концентрации этабоксама в градуировочном растворе (мкг/см³).

2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помешают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 30 см³ смеси гексан - диэтиловый эфир (50:50, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают 30 см^л элюента №2 и 30 см³ элюента №1 со скоростью 1-2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.5.6. Проверка хроматографического поведения этабоксама на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 см³ отбирают 0,1 см³ стандартного раствора этабоксама с концентрацией 10 мкг/см³. Отдувают растворитель током теплого воздуха (температура не выше 40°С), остаток растворяют в 5 см³ элюента №1 и наносят на колонку. Колбу обмывают еще 5 см³ элюента №1 и также вносят на колонку. Промывают колонку 30 см³ элюента №1, которые отбрасывают, затем 100 см³ элюента № 2 со скоростью 1-2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 см³ каждая, выпаривают, остаток растворяют в 2 cm^j подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.3.) и анализируют на содержание этабоксама (п. 2.6.5).

Фракции, содержащие этабоксам, объединяют, выпаривают досуха, остаток растворяют в 2 cm^j подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют (п. 2.6.5.). Рассчитывают содержание этабоксама в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.

Примечание: параметры удерживания этабоксама и сопутствующих экстрактивных веществ могут меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.6. Проведение определения

2.6.1. Извлечение этабоксама из проб воды и виноградного сока Перед проведением анализа пробу виноградного сока объёмом 50 см³ доводят до объёма 100 см’ дистиллированной водой. Пробу воды или разбавленного сока объёмом 100 см³ помещают в коническую колбу емкостью 250 см³ и экстрагирую! этабоксам диэтиловым эфиром трижды порциями по 50 см³, встряхивая смесь каждый раз в течение

МУК 4.1.2403-08

2-3 мин и собирая верхний эфирный слой.* Объединённый экстракт промывают в делительной воронке 0.025М раствором NaOH дважды порциями по 25 см³, встряхивая смесь каждый раз в течение 2-3 мин и собирая верхний эфирный слой. Экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10-15 см³ диэти-лового эфира. После этого экстракт выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40°С. При необходимости проводят дополнительную очистку экстракта на колонке с силикагелем по пункту 2.6.4.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ и 50 мм³ раствора вводят в жидкостный хроматограф.

Внимание! Отделение водного слоя следует производить только после полного расслоения жидкостей в делительной воронке.

2.6.2. Извлечение этабоксама из проб ягод винограда

Гомогенизированные пробы ягод винограда массой 50 г помещают в коническую колбу емкостью 250 см³ и экстрагируют этабоксам 50 см³ 75%-ного водного ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр "красная лента". Осадок с фильтра количественно переносят назад в колбу. Экстракцию проводят ещё дважды. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40°С до полного удаления ацетона (объем 50-60 см³). Объём экстракта доводят до 100 см³ добавлением дистиллированной воды. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр "красная лента". Раствор помещают в делительную воронку объёмом 250 см³ и экстрагируют этабоксам диэтиловым эфиром трижды порциями по 50 см³, встряхивая смесь каждый раз в течение 2-3 мин и собирая верхний эфирный слой.* Объединённый экстракт промывают в делительной воронке 0.025М раствором NaOH дважды порциями по 25 см³, встряхивая смесь каждый раз в течение 2-3 мин и собирая верхний эфирный слой. Экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10-15 см³ диэтилового эфира. После этого экстракт выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40°С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пункту 2.6.4.

Внимание' Отделение водного слоя следует производить только после полного расслоения жидкостей в делительной воронке.

II

МУК 4.1.2403-08

2.6.3. Извлечение этабоксама га проб почвы, ботвы и клубней картофеля Гомогенизированные пробы клубней картофеля, воздушно-сухой почвы массой 20 г или ботвы картофеля массой 10 г помещают в коническую колбу емкостью 250 см³ и экстрагируют этабоксам 50 см³ 50%-ного водного ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр "красная лента". Осадок с фильтра количественно переносят назад в колбу. Экстракцию проводят ещё дважды. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе при температуре бани нс выше 40°С до полного удаления ацетона (объем 70-75 см³). Объём экстракта доводят до 100 см³ добавлением дистиллированной воды. Раствор помещают в делительную воронку объёмом 250 см³ и экстрагируют этабоксам диэти-ловым эфиром трижды порциями по 50 см³, встряхивая смесь каждый раз в течение 2-3 мин и собирая верхний эфирный слой.* Объединённый экстракт промывают в делительной воронке 0.025М раствором NaOH дважды порциями по 25 см³, встряхивая смесь каждый раз в течение 2-3 мин и собирая верхний эфирный слой. Экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10-15 см³ диэтилового эфира. После этого экстракт выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40°С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пункту 2.6.4.

Внимание! Отделение водного слоя следует производить только после полного расслоения жидкостей в делительной воронке.

* В случае образования сравнительно стойких эмульсий для сокращения времени расслоения (на стадии персэкстракции из водного раствора в диэтиловый эфир) в делительную воронку можно добавить насыщенный раствор хлорида натрия (15-20 см³).

2.6.4. Очистка на колонке с силикагелем Сухой остаток в колбе, полученный по п.п. 2.6.1-3, количественно переносят двумя порциями по 5 cm^j смеси гексан - диэтиловый эфир (50:50, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п.2.5.5). Промывают колонку 30 cm^j элюента № 1, который отбрасывают. Этабоксам элюируют 75 cm^j элюента № 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 250 см³. Раствор выпаривают досуха в вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40°С. Сухой остаток растворяют в 2 см' подвижной фазы для ВЭЖХ и 50 мм³ раствора вводят в жидкостный хроматофаф.

МУК 4.1.2403-08

2.6.5. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы «Waters» с УФ детектором (Waters 2487), снабжённый дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки или другой с аналогичными характеристиками.

Колонка Symmetry Cl8 (250x4.6) мм, зернение 5 мкм (Waters, USA) или аналогичная.

Температура колонки 30±1°С.

Предколонка Symmetry Cl8 для защиты аналитической колонки.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 0.025М ортофосфорная кислота в объемном соотношении 25:75.

Скорость потока элюента: 1 см³/мин.

Рабочая длина волны 235 нм.

Объем вводимой пробы 50 мм³.

Время удерживания этабоксама 11.6 i 0.2 мин.

Линейный диапазон детектирования 0.1 - 2.00 мкг/см³.

2.6.6. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки, содержание этабоксама в образцах, воды, почвы, ботвы и клубней картофеля, ягод ах винограда и виноградном соке (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

S₂CV

S, Р

где Sг площадь пика этабоксама в стандартном растворе, мм;

S₂- площадь пика этабоксама в анализируемой пробе, мм;

V - объём пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см³;

Р - навеска анализируемого образца, г, для воды и виноградного сока - объём в см³;

С - концстрация стандартного раствора этабоксама, мкг/см³.

Содержание остаточных количеств этабоксама в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор этабоксама 2 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

13

3. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости(1):

2- |Х_ГХ₂! • 100 -------------<_г (1)

(X i+X₂)

где Xi, Х₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

г - значение предела повторяемости (г = 2.8о_г).

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

4. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

__    (X    ±    А)    мг/кг    при    вероятности Р=0.95,

где X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг,

А - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

А = 6*Х /100,

Ь — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций). %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» (например: менее 0.005 мг/кг*, где *-0.005 мг/кг - предел обнаружения).

5. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

5.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед

МУК 4.1.2403-08

проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

5.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок. Величина добавки С* должна удовлетворять условию:

Q - А я.х + Дд.х ,

где ± Д л,х (± Дл.х ) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом:

Д д = ± 0.84 Д _§

где Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

Д = 5*Х /100,

5 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Результат контроля процедуры К* рассчитывают по формуле:

К« ~ X¹ - X - Са,

где X', X, Со - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п.4) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концензрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

К = V Д²д,х ⁺ Д^х Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К«) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

|К«|<К,    (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняю» причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

15

ББК 51.21 0-60

0-60 Определение остаточных количеств этабоксама в воде, почве, ботве и клубнях картофеля, ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009.'— 16 с.

1.    Разработаны сотрудниками Всероссийского НИИ защиты растений (В.И. Долженко, И.А. Цибульская, О.С. Юзихин).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия населения (протокол № 2 от 03.07.2008 г.)

3    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору • сфере защиты прав потребителей н благополучия населения. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 17 июля 2008 Г.

4    Введены впервые.

ББК 51.21

Формат 60x88/16    Печ.    л.    1,0

Тираж 200 эю.

Федеральная служба по надзору • сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, ВадковскиЙ пер., д. 18/20.

Тиражировано отделом издательскою обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш , 19а Отделение реализации, тел./факс 952-50-89.

© Роспотребнадзор, 2009 © Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009

МУК 4.1.2403-08

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

17 июля 2008 г.

Дата введения: 1 сентября 2008 г.

4.1.Методы контроля. Химические факторы

Определение остаточных количеств этабоксама в воде, почве, ботве н клубнях картофеля, ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2403-08

1. Вводная часть

Торговое наименование: LGC-30473.

Фирма производитель: Саммит Агро Европа, Лимитед. Действующее вещество: Этабоксам.

Структурная формула:

(Л5)-<а-циано-2-тиэнил)-4-этил-2-(этиламино)-1,3-тиазол-5-карбоксамид (IUPAC)

^(1шано-2-тисиш1метил)-4-этил-2-(этапамино)-5 тиазолкарбоксамид (CAS)

Мол. масса: 320,4 Брутто формула: ChH|6N₄OS_{2 ¹}

Химически чистый этабоксам представляет собой белый кристаллический порошок с температурой плавления 185 °С, давлением паров 8.1 х 10'² мРа (25°С).

Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода Ko_W IgP^ 2.89 (20°С, pH 7).

Растворимость в воде 4.8 мг/дм¹ (20°С), 5.2 мг/дм¹ (25°С, pH 7). PacTBopitMOCTb в органических растворителях (г/дм¹, 20°С): н-гептан - 0.000392; ксилол - 0.136; 1,2-дихлорэтан - 2.90; метанол -17.6; н-октанол - 0.374; ацетон - 39.7; этилацетат - 10.6. Стабилен в водных растворах при pH 4-9.

LDjo для крыс >5000 мг/кг. Не ирритант для кожи и глаз (кролики). Ингаляционная активность LCso>4.89 мг/дм¹. Не показал мутагенной активности в микробиологических тестах и тестах на животных.

Область применения: профилактический, лечебный, трансламинарный и системный фунгицид, применяется для контроля оомицетов, таких, как пушистая плесень на винограде и картофеле с нормой расхода 125 - 250 г/га. Ингибитор роста и спороношения грибов.

Гигиенические нормативы для этабоксама в России не установлены.

2. Методика определения этабоксама в воде, почве, ботве и клубнях картофеля, ягодах винограда и виноградном соке методом ВЭЖХ

2.1. Основные положения

2.1.1. Область применения и принцип метода Настоящий документ устанавливает методику определения остаточных количеств этабоксама в воде в диапазоне концентраций 0.002-0.02 мг/кг, почве - 0.01-0.1 мг/кг, ботве картофеля - 0.02-0.2 мг/кг, клубнях картофеля - 0.01-0.1 мг/кг, ягодах винограда - 0.004-0.04 мг/кг, виноградном соке - 0.004-0.04 мг/кг.

Методика основана на определении этабоксама методом ВЭЖХ с использованием УФ детектора после его извлечения из образцов органическим растворителем с последующей очисткой перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями и на колонке с силикагелем.

2. / 2. Метрологическая характеристика метода При соблюдении всех регламентированных условий проведения ²

МУК 4.1.2403-08

анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р=0.95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Объект анализа Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности), ±6, % Стандартное отклонение повторяемости, о„ % Предел повторяемости, г, % Предел воспроизводимости, R, % Вода 0 002-0 01 100 52 14 6 22 6 Вода 0 01-0 02 50 50 140 21 7 Почва 0 01-0 1 50 57 160 24 8 Виноград (ягоды) 0 004 0 005 100 56 157 24 3 Виноград (ягоды) 0 005-0 04 50 52 14 6 22 6 Виноград (<**) 0 004-0 005 100 55 15 4 23 9 Виноград (сок) 0 005-0 04 50 5 1 14 3 22 2 Картофель (ботва) 0 02-0 1 50 53 14 8 22 9 Картофель (ботва) 0 1-0 2 25 52 14 6 22 6 Картофель (кл\'бни) 001-0 1 50 5 1 14 3 222

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (п=20) приведены в таблице 2

Таблица 2

Анализи руемый объект Предел об наружения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения % Стандартное отклонение, S,% Доверительный интервал среднего ре зультата, ±, % Вола 0 002 0 002-0 02 87 3 4 4 40 Почва 001 001 0 1 85 4 4 8 44 Виноград (я голы) 0004 0 004 0 04 83 0 43 39 Виноград (сок) 0004 0 004-0 04 85 6 4 7 43

5

МУК 4.1.2403-08

Картофель (ботва) 0.02 0.02-0.2 80.5 4.5 4.1 Картофель (клубни) 0.01 0.01-0.1 83.0 4.3 3.9

2.1.3. Избирательность метода Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографического анализа.

2.2. Реактивы и материалы

Ацетон, осч, ТУ 6-09-3513-86.

Ацетонитрил для ВЭЖХ, "В-230НМ".

Бумажные фильтры "красная лента", ТУ 6.091678-86.

Вода бидистиллированная, деионизированная, ГОСТ 6709-79. Диэтиловый эфир, ч., ОСТ 84-2006-88.

Железо (II) сернокислое, х.ч., ГОСТ 4148-78.

Калий углекислый, х.ч., ГОСТ 4221-76.

Калия перманганат, ГОСТ 20490-75.

Кальция хлорид, х.ч., ГОСТ 4161-77.

Кислота ортофосфорная, имп. (Ferak, Германия) или хч, ГОСТ 6552-80; 2М и 0.025М водные растворы.

Кислота серная, х.ч., ГОСТ 4204-77.

Натрий сернокислый безводный, ч., ГОСТ 4166-76, свежепрока-ленный.

Натрий хлористый, ч.д.а., ГОСТ 4233-77.

Натрия гидроксид, хч., ГОСТ 4328-77. н-Гсксан, х.ч., ТУ 2631-003-05807999-98, свсжеперсгнанный. Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил - 0.025М ортофосфорная кислота (25:75, по объему).

Силикагель для колоночной хроматографии 60 (0.040-0.063 mm) (Merck, Германия).

Стекловата.

Фосфора пентоксид, ч., МРТУ 6-09-5759-69.

Элюент № 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан - диэтиловый эфир (50: 50, по объему).

Элюент № 2 для колоночной хроматографии: смесь гексан - диэтиловый эф]ф (25:75, по объему).

Этабоксам, аналитический стандарт с содержанием д.в. 98%.

МУК 4.1.2403-08

Z3. Приборы и посуда

Жидкостный хроматограф "Альянс'' фирмы "Waters" с УФ детектором (Waters 2487) с дегазатором и автоматическим пробоотборником или аналогичный.

Колонка Symmetry С-18 (250x4.6) мм, 5 мкм (Waters, USA) или аналогичная.

Предколокка Waters Symmetry С-18.

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 24104-2001 или аналогичные.

Гомогенизатор, МРТУ 42-1505-63.

Установка ультразвуковая «Серыв», ТУ 3.836 008.

Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74 или аналогичный

Бидистиллятор.

pH-метр универсальный ЭВ-74, ГОСТ 22261-76.

Насос водоструйный, МРТУ 42 861-64.

Колбы плоскодонные на шлифах K111500 29/32 ТС, ГОСТ 10384-72.

Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС, ГОСТ 10384-72.

Воронки лабораторные В-75-110, ГОСТ 25 336-82.

Воронки делительные ВД-3-250, ГОСТ 8613-75.

Цилиндры мерные на 100, 250 и 1000 см³, ГОСТ 1774-74.

Колбы мерные на 25,50, 100 и 1000 см³, ГОСТ 1770-74.

Пипетки на 1,2,5, 10 см³, ГОСТ 22292-74.

Колонки стеклянные (25х 1) см.

2.4. Отбор и хранение проб

Отбор проб почвы производится в соответствии с ГОСТ 28168-89 «Почвы Отбор проб»; воды - ГОСТ Р 51592-2000 «Вода Общие требования к отбору проб»; картофеля - ГОСТ 7194-81 «Картофель свежий Правила приемки и методы определения качества»; винограда - ГОСТ 25896-83 «Виноград свежий столовый Технические условия» Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Пробы ботвы и

МУК 4.1.2403-08

клубней картофеля, ягод винограда хранят до анализа в морозильной камере при температуре не выше -18°С в течение месяца. Перед анализом их гомогенизируют. Пробы воды и виноградного сока хранят в холодильнике при температуре 0-4°С в течение недели.

2.5. Подготовка к определению

2.5. 1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 см³ растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре +40°С до объема 1,0 см³ и хроматофафируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками. Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания свежей порции кислоты, затем промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют. Диэтиловый эфир (1 дм³) предварительно встряхивают с 20 см³ свежеприготовленного раствора железного купороса (30 г сульфата железа в 55 см³ воды с добавлением

1.5    г концетрированной серной кислоты). Затем диэтиловый эфир последовательно промывают 0,5 %-ным раствором перманганата калия, 5 %-ным раствором тдроксида натрия и водой, после чего сушат над хлористым кальцием и перегоняют. Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 дм³ ацетона 10 г KJMnC>4 и 2 г К.2СО3).

2.5.2. Кондиционирование колонки Перед началом анализа колонку (Symmetry С-18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (I см7мин) до стабилизации нулевой линии в течение 1-2 часов.

2.5.3. Приготовление растворов Для приготовления 2М раствора ортофосфорной кислоты 200 г 98% (или 225 г 87%) кристаллической Н3РО4 помещают в мерную колбу объемом 1000 см³, растворяют в 600 см^-" дистиллированной воды и доводят объем до метки дистиллированной водой.

Для приготовления 0.025М раствора ортофосфорной кислоты

12.5    см³ 2М раствора Н3РО4 вносят в мерную колбу на 1000 см³ и доводят до метки деионизированным бидистиллятом.

МУК 4.1.2403-08

Для получения 50%-го водного ацетона в колбе емкостью 1дм³смешивают 500 см³ ацетона с 500 см³ дистиллированной воды.

Для получения 25%-го водного ацетона в колбе емкостью 1 дм³сметивают 250 см³ ацетона с 750 см³ дистиллированной воды.

Для приготовления насыщенного раствора хлорида натрия 380 г NaCl растворяют при нагревании в 1 л дистиллированной воды, полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр "красная лента".

Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0.025М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 25:75 по объёму, используя мерные цилиндры.

Для приготовления элюента Х°1 в колбе на 1000 см³ смешивают 500 см³ н-гсксана и 500 см"* диэтилового эфира.

Для приготовления элюента Js«2 в колбе на 1000 см³ смешивают 250 см³ н-гексана и 750 см³ диэтилового эфира.

Приготовление стандартного и градуировочных растворов:

Берут точную навеску этабоксама (50 мг), переносят в мерную колбу на 100 см³, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 0.5 мг/ см³). Градуировочные растворы с концентрациями 0.1, 0.2, 0.5, 1.0 и 2.0 мкг/см³ готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрил - 0.025М ортофосфорная кислота (25:75, по объему).

Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0-4°С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.

При изучении полноты открывания этабоксама в воде, почве, ботве и клубнях картофеля, ягодах винограда и виноградном соке используют ацетонитрильные растворы вещества. Растворы внесения с концентрациями 0.1 и 1.0 мкг/см¹ готовят из стандартного раствора с концентрацией 0.5 мг/см³ методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.

2.5.4. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация этабоксама в растворе) в хроматограф вводят по 50 mm^j градуировочных растворов (нс менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют площади пиков и строят график зависимости сред-

1

2