Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ, СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОМ СЫРЬЕ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Сборник методических указаний МУК 4.1.2062—4.1.2074—06

Издание официальное

Москва. 2009

ББК 51.21 037

037 Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды: Сборник методических указаний.—М: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009 —147с.

1.    Сборник подготовлен Федеральным научным центром гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана (академик РЛМИ, проф. В. Н. РакитскиЙ, проф. Т. В. Юдина); при участии специалистов Федеральной службы по надзору п сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Разрабо тчики методов указаны в каждом из них.

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3.    Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМИ Г. Г. Онищенко.

4.    Введены впервые.

ББК 51.21

Формат 60x88/16    Печ.    л.    9,25

Тираж 100 экз.

Тиражировано отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, телефакс 952-50-89

Навеску масла 2S-S0 г помещают в делительную воронку на 250 см³, приливают 100 см³ ацетонитрила и энергично встряхивают в течение 3 мни. После разделения фаз масло сливают в химический стакан. Ацетонитрильный экстракт фильтруют под вакуумом, используя водоструйный насос, в круглодонную колбу на 1000 см³ через фильтрующую воронку со стеклянной пористой пластинкой (ДОР 160), на которую помещен кружок из фильтра "синяя лента" и слой целита 545 толщиной 2 см, предварительно промытый ацетонитрилом (см. п. 2.5.6.). Если в процессе фильтрации в слое целита образуется воронка, перед следующей фильтрацией слой выравнивают, добавляя небольшое количество целита. Масло снова помещают в делительную воронку. Экстракцию повторяют еще 3 раза порциями ацетонитрила по 100 см³. Ацетонитрил выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 45 °С. Далее проводят очистку экстракта поп. 2.6.2.2.

Z.6.2.2. Очистка экстракта перераспределением между двумя несмешивающими» ся жидкостями

Остаток в колбе растворяют в 5 см³ ацетона, тщательно обмывая стенки колбы. Добавляют 40 см³ 0,4 н раствора аммиака, энергично перемешивают в течение 2 мин и оставляют на 3 мин. Смесь фильтруют в круглодонную колбу на 250 см³ под вакуумом через фильтрующую воровку с пористой стеклянной пластинкой (ПОР 160), на которую помещен бумажный кружок из фильтра ^Нсиняя лента" и слой целита 545 толщиной 1 см, предварительно промытый дистиллированной водой (см. п. 2.5.6.). Слой целита трижды промывают порциями по 5 см³ смеси ацетона и 0,4 н раствора аммиака в соотношении 1:8 по объему. В фильтрате растворяют 10 г хлористого натрия, добавляют 2 см³ концентрированной соляной кислоты, перемешивают содержимое колбы я помещают в делительную воронку на 250 см³. Экстрагируют клетодим и его метаболиты 50 см³ хлороформа, встряхивая 2 мин. После разделения слоев нижнюю хлороформную фракцию фильтруют через фильтр "белая лента" со слоем безводного сульфата натрия толщиной 2 см в круглодонную колбу на 250 см³. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 см³ хлороформа каждый раз. Объединенный экстракт выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 45 *С. Колбу охлаждают до комнатной температуры, остаток растворяют в 3 см³ ацетоне, тщательно обмывая стенки колбы. Проводят метилирование экстракта по п. 2.6.2.3.

2.6.2.3.    Метилирование

К ацетоновому раствору прибавляют 1 см³ эфирного раствора диазометаиа, закрывают колбу пробкой и оставляют при комнатной температуре на 15 мин, периодически встряхивая колбу. Реакционную смесь выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 45 °С. Остаток в колбе растворяют в 25 см³ хлороформа. Полученный раствор переносят в делительную воронку на 100 мл. Стенки колбы обмывают тремя порциями хлороформа по 5 см³, которые присоединяют к основному раствору. Раствор промывают сначала 10 см³ 0,1 к раствора NaOH, встряхивая делительную воронку в течение 1 мин. После разделения слоев хлороформный раствор сливают в ту же колбу, а затем вновь помещают в делительную воронку, водную фракцию отбрасывают. Операцию повторяют с 10 см³ дистиллированной воды. Хлороформный раствор фильтруют в круглодонную колбу на 100 см³ через фильтр "белая лента" со слоем безводного сульфата натрия высотой 2 см. Водный слой отбрасывают. Хлороформ упаривают до объема 2-2 см³ на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 45 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.2 А

2.6.2.4.    Очистка экстракта на колонках с флорнсилом (супелкосилом)

Перед внесением пробы уровень растворителя в колонке понижают почти до верхнего края сорбента. При помощи стеклянной или автоматической пипетки концентрированный

S3

раствор вносят в хроматографическую колонку № 1, дают пробе впитаться. Стенки колбы трижды обмывают порциями хлороформа по 1 см³, которые также вносят в колонку. Пропускают через колонку 5 см³ хлороформа, элюат отбрасывают. Элюируют метилированный клетодим 10 см³ смеси хлороформа с ацетоном а соотношении 9:1 по объему (фрак-* ция 1). Затем элюируют метилированные метаболиты клстодима 15 см³ ацетона (фракция 2) со скоростью 2 слг/мин. Фракции собирают отдельно в круглодонные колбы на 100 см³. Растворители выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 45 °С.

Остаток после упаривания фракции 1 растворяют в 3 см³ ацетонитрила. При помощи пипетки полученный раствор впосят в хроматографическую колонку Кг 2 (при анализе семян) или № 3 (при анализе масла). Стенки холбы обмывают дважды ацетонитрилом порциями no 1 см³, которые также вносят в колонку, дают пробе впитаться. Элюируют пробу через колонку со скоростью 2 см³/мин 15 мл ацетонхлрила (колонка № 2) или 25 см³ ацетонитрила (колонка Кг 3). Весь элюат собирают в круглодшшую колбу на 100 см³. Ацетонитрил выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 45 °С. Сухой остаток растворяют в 1-2 см³ ацетона и 1-5 мм³ полученного раствора вводят в хроматограф для определения содержания клетодима по п. 2.7.2.

Для достижения предела обнаружения клетодима 0.05 мг/кг, сухой остаток растворяют в 0.5 см³ ацетона и 5 мм³ раствора вводят в хроматограф.

Сухой остаток в колбе после упаривания фракц ии 2 растворяют в 1-2 см³ ацетона и 1-5 мм³ подученного раствора вводят в хроматограф для определения содержания клетодим сульфоксида и клетодим сульфона.

2.7» Условия хроматографирования

Газовый хроматограф с пламенно-фотометрическим детектором.

Основной вариант:

Носитель - хромосорб G-AW-DMCS (80-100 меш). Неподвижная фаза - 2% SE-30.

Колонка стехлянная, длиной 1 м и внутренним диаметром 2 мм.

Газ-носитель - азот высокой чистоты. Скорость потока: азота - 50 см³/мин при определении метилированных клетодима и клетодим сульфона и 30 см³/мин при определении метилированного клетодим сульфоксида; водорода - 70 см³/мян; воздуха - 50 см³/мин.

Условия хроматографирования при определении клетодима:

Температура:

начальная термостата колонок 200 °С в течение 2 мин; скорость подъема температуры 4 °С/мин; конечная термостата колонок 220 °С; термостата испарителя 250 °С, термостата детектора 250 °С.

При этих условиях хроматографирования время удерживания метилированного клетодима 5,0+0,3 мин.

Условия хроматографирования при определении клетодим сульфоксида:

Температура:

начальная термостата колонок 90 °С в течение 1 мин; скорость подъема температуры 12 °С/мин; конечная термостата колонок 180 °С; термостата испарителя 200 °С, термостата детектора 200 °С.

При этих условиях хроматографирования время удерживания метилированного клетодим сульфоксида 7,3+0,3 мин.

Температура:

fa

начальная термостата колонок 210 °С в течение 2 мин; скорость подъема температуры 8 ⁰С/мин; конечная термостата колонок 240 °С; термостата испарителя 250 °С, термостата детектора 250 °С.

При этих условиях хроматографирования время удерживания метилированного кле-то дим сульфона 6,7+0,3 мин.

Альтернативный вариант:

Носитель - хромосорб 750 (100-120 меш). Неподвижная фаза - 5% OV-3.

Колонка стеклянная, длиной 1,2 м и внутренним диаметром 2 мм.

Скорость потока:

азота - 50 см³/мин при определении метилированного клетодима и 30 см³/мин при определении метилированного клетодим сульфоксида и клетодим сульфона; водорода - 70 см³/мин; воздуха - 50 см³/мин.

Условия хроматографирования при определении клетодима:

Температура термостата колонок 220 °С; испарителя 250 °С, детектора 250 °С, При этих условиях хроматографирования время удерживания метилированного клетодима б,5+0,3 мин.

Условия хроматографирования при определении клетодим сульфоксида:

Температура:

начальная термостата колонок 80 °С в течение 2 мин; скорость подъема температуры 16 °С/мин; конечная термостата колонок 150 °С; термостата испарителя 200 *С, термостата детектора 200 °С.

При этих условиях хроматографирования время удерживания метилированного клетодим сульфоксида 5,3+0,3 мин.

Условия хроматографирования при определении клетодим сульфона:

Температура:

начальная термостата колонок 230 °С а течение 2 мин; скорость подъема температуры 12 °С/мин; конечная термостата колонок 260 °С; термостата испарителя 250 *С, термостата детектора 300 °С.

При этих условиях хроматографирования время удерживания метилированного клетодим сульфона 6,2+0,3 мин.

Скорость движения ленты самописца (интегратора) - 0,2 см/мин.

Вводимый в хроматограф объем пробы - 1-5 мм*.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту (площадь) пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартные растворы клетодима и его метаболитов с концентрациями 40 мкг/ см³, разбавляют.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание клетодима в пробах (Х„) вычисляют как сумму концентраций клетодима и его метаболитов в пересчете на исходное действующее вещество:

Х_м ^ш Си+Скр'О^б+Сдаф х 1,01; где: С_ад - содержание клетодима в пробе; мг/дм³ (мг/кг);

С_КСо - содержание клетодим сульфоксида в пробе, мг/дм³ (мг/кг);

Сксф • содержание клетодим сульфона в пробе, мг/дм³ (мг/кг);

Содержание клетодима и его метаболитов для каждого в отдельности рассчитывают по формуле:

&

где Ct - концентрация /-го вещества в пробе, мг/дм³ (мг/хг);

* концентрация /-го стандартного раствора, мкг/см³;

- объем /-го стандартного раствора, вводимого в хроматограф, мм³;

V\ - объем анализируемой пробы, см³;

У₂ - объем раствора анализируемой пробы, вводимого в хроматограф, мм³; Уз - масса или объем анализируемой пробы, см³ (г);

К - коэффициент извлечения, определяемый предварительно;

S_t - площадь (высота) пика анализируемого метаболита, мв-сек, (мм);

Sts. * площадь (высота) пика /-го стандартного раствора, мв еек, (мм).

3. Оформление результатов измерений

Результаты измерений содержания клетодяма и его метаболитов в образцах зерна представляют в виде;

Д)мг/кг,

где Д - показатель точности результатов анализа (границы, в которых погрешность любого из совокупности результатов анализа, полученных при реализации методики, находится с принятой вероятностью РЮ.95),

4. Требования техники безопасности

При проведении работы необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12,1005-88).

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа и работе с электро* установками соблюдать правила злектробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12A.Q04-91.

5.    Требования к квалификации оператора

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации газового хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п.б.

6.    Контроль погрешности измерений.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6. 2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

5. Разработчики.

Долженко В.И. (ВИЗР), Маслаков С.Е., Рубанова В.Ф. (СПбНИИЛХ).

а

Содержание

1.    Методические указания по определению остаточных количеств пиридабена в воде,

почве и яблоках методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2062-06.......... 4

2.    Методические указания по определению остаточных количеств триасульфурона в зерне хлебных злаков методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2063-06.............................................................................................15

3.    Методические указания по определению остаточных количеств хизалофоп-п-этила

в зерне гороха, семенах и масле подсолнечника по основному метаболиту хизалофоп-п кислоте методом капиллярной газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2064-06..........22

4.    Методические указания по определению остаточных количеств Калиевой соли

сульфометурон-метила по сульфометурон-метилу в воде и почве методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2065-06..................................................33

5.    Методические указания по определению остаточных количеств тебуконазола в семенах, масле и зеленой массе рапса методом газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2067-06.............................................................................................45

6.    Методические указания по определению остаточных количеств клетодима и его

основных метаболитов клетодим сульфоиа и клетодим сульфоксида в масле сои методом газожидкостной хроматографии, МУК 4.1.2066-06......................................52

7.    Методические указания по определению остаточных количеств Пендиметалина в зерне зерновых колосовых культур, риса, кукурузы, растительных маслах, зеленой массе кукурузы, рисовой соломке методом газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2068-06............................................................................................63

8.    Методические указания по определению остаточных количеств дитианоиа в

винограде, виноградном соке, персиках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2069-06........................................................................77

9.    Методические указания по определению остаточных количеств Диквата в клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2070-06.............................................................................................88

10.    Методические указания по определению остаточных количеств Трифорина

в яблоках, винограде, яблочном и виноградном соках методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2071-06........................................ 99

11.    Методические указания по определению остаточных количеств бифентрина в

воде, огурцах, томатах и бифентрина и малатиона в зерне пшеницы и риса методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2072-06.................................................109

12.    Методические указания по измерению концентраций дикамбы в атмосферном воздухе населенных мест методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2073-06...125

13.    Методические указания по измерению концентраций Бромадиолона в воздухе

рабочей зоны и атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2074-06.....................................................136

3

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия населения, Главней государственный санитарный вра^оссий]жой Федерации

7 Ч^⁷} /ТП Онищенко lOOor.

МУК 4.1.

Дата введения: с /    *.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ по определению остаточных количеств клетодима и еао основных метаболи* тое клетодим сульфона и клетодим сульфоксида в масло сон методом газожидкостной хроматографии

1. Вводная часть

Фирма - регистрант; Ариста Лайф Сайенс С.А.С.

Торговое название препаратов: Селект, Центурион.

Действующее вещество: Клетодим (ISO).

(Е,Е)-(+)-2- {I -[[3-хлоро-2-(пропешш)окси]имино]процил}-5-[2-(этияпго)пропил]-3-гадрокси-2-цшслогексен-1 (IUPAC)

Струетурная формула:

Эмпирическая формула: ct7ttzs^nNUjo Молекулярная масса: 359,92

Химически чистый клетодим представляет собой вязкую жидкость светло-желтого цвета со слабым ароматическим запахом. Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль + пары. Удельная масса технического клетодима - 1140 кг/м³. Давление паров при 25 °С менее 0,013 мПа. Разлагается при температуре ниже точки кипения.

Растворимость в воде 54 мг/дм³ при pH 7. Растворимость в органических растворителях: более 900 г/дм³ в большинстве растворителей. Коэффициент распределения в системе ок-танол - вода 1.5 х 10⁷. Температура вспышки 62°С.

Клетодим нестабилен. Разлагается под действием УФ света, при повышенных температурах и экстремальных значениях pH. В аэробных условиях окисляется и разлагается с пе-

SJL

риодом полураспада от 1 до 3 дней. Относительно устойчив в водных растворах с pH 7-10 при отсутствии солнечного света. Период полураспада в результате гидролиза в водных растворах с pH 7 ирН 9 составляет300 и 310 дней, соответственно.

Основные продукты метаболизма - клетодим сульфон и клетодим сульфоксид.

Основные метаболиты:

Клетодим сульфоксид.

Название по ИСО: клетодим сульфоксид.

Название действующего вещества по ИЮПАК: (Е*Е)*(±)-2-{ 1 -[(3-хлоро-2-{пропенил) окси] имино] прошш} -5-[2Чэтилсульфоксид)пропил]-3-гидрокси-2-циклогексен-1 Структурная формула:

Эмпирическая формула; C17H26CINO4S Молекулярная масса: 375,9.

Химически чистый клетодим сульфоксид представляет собой белое кристаллическое вещество. Растворимость в органических растворителях: хорошо растворим в большинстве органических растворителей.

Является основным метаболитом при разложении клетодима в почве в аэробных условиях, в воде (при условиях способствующих фотолизу) и растениях. Клетодим сульфоксид нестабилен. Период полураспада в почве от 2,5 до 20 дней.

Клетодим сульфон.

Название по ИСО: клетодим сульфон.

Название действующего вещества по ИЮПАК: (Е,Е)-(±)-2-{1-[[3-хлоро-2-(пропенил) окси] ишпю]прошш}-5-[2-(этш1сульфон)пропил]-3-гвдрокси-2-цюслогексен-1.

Структурная формула:

О СН₃

и I

CH₃CH₂-S-CHCH₂

о

Химически чистый клетодим сульфоксид представляет собой белое кристаллическое вещество. Растворимость в органических растворителях: хорошо растворим в большинстве органических растворителей.

Является одним из основных метаболитов при разложении клетодима в почве в аэробных условиях. Клетодим сульфоксид нестабилен. Период полураспада в почве от 1 до 2 дней. Краткая токсикологическая характеристика:

Клетодим относится к малотоксичным веществам. ДДзо для крыс - 1360-1630 г. Малотоксичен для диких животных, птиц и пчел. ЛК₅₀ (8 дней) для перепелов > 6000 мг/кг. CKso (96 ч, мг/л) для форели 56.

Гигиенические нормативы для клетодима:

S3

МДУ в сое (семена и масло) * 0,1 мг/кг.

Область применения препарата: Послевсходовый гербицид для применения на широколистных культурах (свекле, картофеле, моркови, луке, льне, масличных культурах, бобовых и других) для борьбы с одно- и многолетними травами.

2, Методика определения остаточных количеств клетодима и его основных метаболитов клетоднм су л ьф она и клетодим сульфоксида в масле сои методом газожидкостной хроматографии

2.1.    Основные положения

2.1.1.    Область применения и принцип методики

Настоящий документ устанавливает методику определения остаточных количеств клетодима и его основных метаболитов - клетодим сульфоксида и клетодим сульфоиа в масле сои в диапазоне концентраций 0.1 -1.0 мг/кг.

Методика основана на определении клетодима и его основных метаболитов методом газожидкостной хроматографии с использованием пламенно-фотометрического детектора после экстракции из растительного масла органическими растворителями и очистке экстрактов перераспределением в системе двух кесмешивающихся жидкостей, метилировании определяемых соединений диазометаном и очистке экстрактов на колонках с флори-силом. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2.    Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых для борьбы с сорной растительностью, защиты овощных и масличных культур от вредителей и болезней (хлор- и фосфорорганическис пестициды, амиды, тио- и дитиокар-баматы, синтетические пиретроиды).

Избирательность метода обеспечивается селективными детекторами н использованием неподвижных фаз различной полярности.

2.1Л. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика методики измерения концентраций клетодима:

Предел обнаружения - 0,05 мг/кг (Коэффициент извлечения К=0.57).

Диапазон определяемых концентраций - 0,1-1,0 мг/кг.

Среднее значение определения - 75 % (Коэффициент извлечения К®0.75).

Стандартное отклонение 9,3 %. Доверительный интервал среднего 11,4 %.

Минимально детектируемое количество клетодима и его метаболитов в хроматографируемом объеме -5 нг.

Граница суммарной относительной погрешности измерения - 19 %.

Линейный динамический диапазон детектирования 5-100 нг в логарифмической шкале.

Полнота определения клетодима и его метаболитов в масле сои (а^б)

Вводимое вещество	Внесено мг/кг	Определено клетодима, мг/кг	Доверительный интервал по 6»и параллельным определениям, +	Средняя полнота определения, %
Клетодим	0,1	0.060	0,009	60
	0,2 _ ....	0,170	0,022	85
	. 0,4 .........	0,324	0.036	81
	...... 1,0-	0,790	______&0ZS_	79

&

Клетодим сульфоксид

Указанные в таблице значения полноты определения достигаются при выполнении анализов за 4-8 часов в течение одного рабочего дня. При увеличении длительности анализа более 8 часов полнота определения снижается из-за нестабильности определяемых соединений.

2.2. Реактивы, растворы и материалы

Клетодим, аналитический (98 %, Томен Агро Инк., Япония).

Клетодим сульфон, аналитический (98 %, Томен Агро Инк., Япония).

Клетодим сульфоксид, аналитический (98 %, Томен АграИнк,, Япония).

Азот газообразный высокой чистоты, ТУ 301-07-25-89.

Ацетон, осч., ТУ 2633-004*11291058-94.

Ацетонитрил для хроматографии, х.ч., ТУ 6-09-4326-76.

Аммиак водный, ч.д.а., ГОСТ 3760-79,0,4 н раствор аммиака в воде.

Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-82.

Водород газообразный, ГОСТ 3022-80.

Гексан, ч., ТУ 6-09-3513-82.

Гидроокись калия, х.ч., ГОСТ 1439-78, Гидроокись калия, 50 % водный раствор. Гидроокись натрия, х.ч., ГОСТ 4328-77, Гидроокись натрия, 0,1 н водный раствор. Диэтиловый эфир, ч,, ГОСТ 6262-79.

Натрий сернокислый, безводный, ч.д.а, свежепрокалеииый, ГОСТ 4166-76.

Натрий хлористый, ч., ГОСТ 4233-77.

Неподвижная жидкая фаза OV-3 , Супелко Инк., США.

Неподвижная жидкая фаза PS-400, Alltech Associates Inc. США Неподвижная жидкая фаза SE-30, Супелко Инк., США.

N- нитрозометилмочевина, ТУ 6-09-11-1643-82.

Основные стандартные растворы клетодима, клетодим сульфоксида и клетодимсуль-фона с концентрацией 1 мг/см³ и рабочие стандартные растворы с концентрацией 1,2,2,5, 5,10,20,50 мкг/см³ в ацетонитриле.

Раствор хлороформ-ацетон в соотношении 9:1 по объему.

Соляная кислота, х.ч., ГОСТ 3118-77.

Супелкосил (60-100 меш), Супелко Инк, США.

Фильтры бумажные "синяя лента", ТУ 6-09-1678 77.

Фильтры бумажные "белая лента", ТУ 6-09-1678 77.

Флорисил (100-120 меш). Мерк, Германия.

Хлористый натрий, х.ч., ГОСТ 4233-77.

Хлороформ, чда, ГОСТ 20015-84.

Хромосорб 0-AW-DMCS зернением 80-100 меш, Супелко Инк, США.

Хромосорб 750 зернением 100-120 меш, Serva, Германия.

Целит 545 (0,02-0,045 мм), Serva, Германия.

Этанол, о.с.ч., ТУ 6-09-4512-77.

23. Приборы, аппаратура, посуда

Газовый хроматограф, снабженный пламенно-фотометрическим детектором.

J3T

Хроматографические колонки стеклянные длиной 1 м и 1,2 м с внутренним диаметром 2 мм.

Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76 или аналогичная.

Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные, ГОСТ 24104-2001.

Весы технические ВЛКТ-500 или аналогичные, ГОСТ 24104-2001.

Воровки химические, конусные, ГОСТ 25336-82.

Воронки делительные на 100,250 и 500 см³, ГОСТ 8613-75.

Воронки фильтрующие ВФ-2-60-ПОР 160-14/23ХС, ГОСТ 25336-82.

Испаритель вакуумный ротационный ИР-1М или аналогичный, ТУ 25-11917-74.

Колбы круглодонные со шлифом на 50, 100,250 и 500 см³, ГОСТ 25336-82.

Колбы плоскодонные со шлифом вместимостью 250,500, 1000 см³, ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные вместимостью 25,50,100 и 1000 см³, ГОСТ 1770-74,

Колонки хроматографические стеклянные, длиной 250 мм и диаметром 8 мм.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74.

Микрошприц МШ-10, МШ-10М, ТУ 2-833-106.

Насос стеклянный вакуумный водоструйный, ГОСТ 10696*75.

Палочки стеклянные, ГОСТ 25336-82.

Пипетки вместимостью 1,2,5,10 см³, ГОСТ 22292-74.

Стаканы химические, ГОСТ 25336-82Е.

Цилиндры мерные вместимостью 50,100,500 и 1000 см³, ГОСТ 1774-74.

2.4* Отбор и хранение проб

Отбор проб семян и масла сои производится в соответствии с ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб». Масло сои хранят при температуре 0-4°С в холодильнике не более 2-х недель в стеклянной таре темного стекла при отсутствии воздушной прослойки между поверхностью масла и пробкой или получают из семян в лабораторных условиях в день проведения анализа.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1.    Подготовка и кондиционирование колонок для газожидкостной хроматография

Готовую насадку (2% SE-30 на хромосорбе G-AW-DMCS или 5 % OV-3 на хромо-сорбе 750) засыпают в стекляпиую колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и выдерживают в потоке азота (30 см³/мин) при температуре 260°С в течение 8 часов.

2.5.2.    Подготовка растворителей н приготовление растворов

Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют.

Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Для этого 100 см³ растворителя испаряют при помощи вакуумного ротационного испарителя при температуре 40 °С досуха, обмывают стенки колбы 2 см³ растворителя и хроматографируют полученный раствор. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.

50% раствор гидроокиси калия готовят растворением 50 г КОН в 50 см³ дистиллированной воды.

Раствор хлороформ - ацетон в соотношении 9:1. 900 см³ хлороформа смешивают со 100 см³ ацетона.

0,4 н раствор аммиака готовят разбавлением 28 см³ концентрированного 25 % раствора аммиака до 1 дат дистиллированной вод ой.

0,1 и раствор гидроокиси натрия. 4 г гидроокиси натрия помещают в мерную колбу на 1 дм³, растворяют в 100 - 200 см³ дистиллированной воды и доводят до метки водой.

л

Раствор ацетона в 0,4 н NH4OH в соотношении 1:8. Смешивают 10 см³ ацетона с 80 см³ 0,4 н. раствора аммиака.

2.5.3 Приготовление раствора диаэометана в эфире

В круглодонную колбу на 100 см³ помещают 15 см³ 50°/о-ного водного раствора едкого кали и 15 см³ диэти* лового эфира. Смесь охлаждают до 5^СС, затем при взбалтывании прибавляют 5 г ннтрозометилмочевины. Колбу присоединяют к холодильнику, нижний конец которого снабжен аллонжем с отводом» проходящим через резиновую пробку и погруженным в слой эфира (40 см*) на дне приемника, Приемник охлаждают смесью льда и соли. Реакционную колбу погружают в водяную баню, нагревают до 30 °С. Отгонку прекращают, как только перестают идти пузырьки газа через слой эфира в приемнике.

Рис. 1. Прибор для получения диазометана:

1 реакционный сосуд; 2-переходник с капельницей; 3-холдильник; 4—переходник; 5 - насадка о отводом; 6 • приемная колба.

2.5.4. Приготовление стандартных растворов Взвешивают по 50 мг аналитических стандартов клетодима, клетодим сульфоксида и клетодим сульфо-на, переносят в мерные колбы объемом 50 см³ и доводят до метки ацетонитрилом. Концентрация растворов 1 мг/ см³ (осповпые стандартные растворы Ха 1).

Методом последовательного разбавления из растворов Ха 1 готовят стандартные растворы клетодима и его метаболитов в ацетонитриле с концентрацией 2,5; 5; 10; 20; 50 мкг/ см³ для получения рабочих стандартных растворов продуктов реакции метилирования.

Рабочие стандартные растворы метилированных клетодима и его метаболитов готовят следующим. По 1 см³ рабочих стандартных растворов с концентрацией 2,5; 5; 30; 20; 50; мкг/см³ помещают в круглодонные колбы на 50 см . Растворитель выпаривают на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 45 °С. Колбу охлаждают до комнатной температуры, добавляют 3 см³ ацетона, тщательно обмывая стенки колбы. Быстро приливают 1 см* эфирного раствора диазометана. Закрывают колбу пробкой и оставляют при комнатной температуре на 15 мин, периодически встряхивая содержимое колбы. Растворитель выпаривают на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 45 °С. Остаток растворяют в 1 см³ ацетона. Метилирование проводят в день проведения анализа.

Основные и рабочие стандартные растворы клетодима и его метаболитов устойчивы при хранении в диапазоне температур от 0 до +4 °С и отсутствии солнечного света в течение недели, при хранении в диапазоне температур от -3 до -5 °С в течение двух месяцев.

2.5.5. Подготовка флорисила (супелкосила) и хроматографических колонок для очистки экстрактов

Флорисил (супелкосил) прокаливают в муфельной печи при температуре 350-400 °С в течение не менее 16 часов. Остужают в эксикаторе. Сорбент помещают в плоскодонную колбу, добавляют 3% дистиллированной воды (по весу) и встряхивают содержимое колбы на механическом встряхивателе в течение 2 час. Оставляют стоять на 48 часов, периодически встряхивая содержимое колбы (2 раза в сутки по 30 мин).

Колонка Иг 1. В нижний конец стеклянной хроматографической колонки длиной 250 мм и внутренним диаметром 8 мм помещают тампон из стекловаты. Перекрывают кран колонки и заполняют колонку на 1/3 хлороформом. Заполняют колонку сорбентом» добавляя в колонку флорисил (супелкосил) в виде суспензия в хлороформе. Понижают уровень растворителя, приоткрывая кран колонки, и следя за тем, чтобы уровень растворителя не опустился ниже слоя сорбента. Колонку заполняют до получения слоя сорбента высотой 9 см, сверху помещают тампон из стекловаты. Понижают уровень растворителя, чтобы высота слоя растворителя над верхней границей сорбента составляла 0,5-0,7 мм. Через колонку пропускают 10 см³ ацетона, а затем 15 см³ хлороформа.

Колонки № 2 и № 3. В нижний конец стеклянной хроматографической колонки длиной 250 мм и внутренним диаметром 8 мм помещают тампон из стекловаты. Перекрывают кран колонки к заполняют колонку на 1/3 ацетонитрилом. Заполняют колонки сорбентом, добавляя в колонку флорисил (супелкосил) в виде суспензии в ацетонитриле. Понижают уровень растворителя, приоткрывая кран колонки, и следя за тем, чтобы уровень растворителя не опустился ниже слоя сорбента. Колонку заполняют до получения слоя сорбента высотой 5 см (колонка № 2) и 10 см (колонка № 3), сверху помещают тампон из стекловаты. Понижают уровень растворителя, чтобы высота слоя растворителя над верхней границей сорбента составляла 0,5-0,7 мм. Через колонки пропускают 10 см³ ацетонитрила.

Для каждой приготовленной партии флорнсила (супелкосила) проверяют объем удерживания метилированных клетодима и его метаболитов на хроматографических колонках.

2.5.6. Подготовка фильтрующей воронки

Из фильтра "синяя лента" вырезают кружок, по диаметру точно соответствующий диаметру стеклянного пористого фильтра фильтрующей воронки. Помещают кружок на стеклянный пористый фильтр, смачивают дистиллированной водой и плотно прижимают к фильтру. В воронку помещают целит 545 слоем 1-2 см. Собирают фильтровальную установку, состоящую из круглодонной колбы, переходника и фильтрующей воронки с це-литом. Подсоединяют установку к водоструйному насосу и промывают целит 50 см³ дистиллированной воды или ацетопитршга, которые затем отбрасывают.

2.5.7.    Построение калибровочных графиков

Рабочие стандартные растворы метилированных клетодима и его метаболитов с концентрацией 2,5; 5; 10; 20; 50 мкг/см³ хроматографируют, а затем на основании данных хроматографирования строят калибровочные графики, откладывая по оси ординат высоты (площади) пиков, на оси абсцисс - количество клетодима или его метаболитов.

Осуществляют не менее 5-ти параллельных измерений для каждой концентрации. Находят среднее значение высоты (площади) пика для каждой концентрации. Строят градуировочные графики зависимости высоты в мм (площади в мв х с) хроматографического пика от концентрации клетодима или его метаболитов в растворе (мкг/мл).

При калибровке для метода газожидкостной хроматографии зависимость высоты (площади) пика от концентрации рабочих стандартных растворов линейна в логарифмической шкале координат. Зависимость имеет вид у - х¹¹, где у - высота (площадь) хроматографического пика, х - концентрация стандартного раствора, п - безразмерный параметр, принимающий значения от 1,5 до 2.

2.5.8.    Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения производится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.

2.6. Описание измерения

2.6.2.1. Экстракция

st