4.1. Методы контроля. Химические факторы
Методические указания МУК 4.1.1979-05
"Измерение концентраций протиоконазола в воздухе
рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005
г.)
Дата введения: 1 июля
2005 г.
Введены
впервые
Настоящие методические указания устанавливают метод
высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей
зоны массовой концентрации протиоконазола в диапазоне
0,05 - 1,0 мг/м3.
2-[(RS)-2-гидрокси-2-(1-хлорциклопропил)-3-(2-хлорфенил)пропил]-2Н-1 ,2,4-триазол-3(4Н)-тион(IUPAC).
Структурная формула:
Эмпирическая формула: C14H15Cl2N3OS.
Молекулярная масса: 344,3.
Белое или светло-бежевое твердое вещество без запаха.
Температура плавления: 139,1 - 144,5 °С. Давление паров при 20 °С: <<
4×10-7 Па. Коэффициент распределения н-октанол/вода:
Kow logP = 4,16
(рН 4), 3,82 (рН 7) и 2,0 (рН 9). Растворимость (г/ дм3) при 20 °С: ацетон - более 250, этилацетат - более 250, дихлорметан - 88, ацетонитрил -
69; растворимость в воде - 0,005 (рН 4), 0,3 (рН 8) и 2,0 (рН 9).
Вещество стабильно при хранении на воздухе, а также в кислой (DT50
= 120 дней) и щелочной (DT50
> 1 года) средах. В присутствии света в водных фотолитических
условиях протиоконазол достаточно быстро деградирует
с периодом полураспада 47,7 часа.
Агрегатное состояние в воздухе рабочей зоны - аэрозоль.
Краткая токсикологическая характеристика
Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс -
более 6 200 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для крыс -
более 2 000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс - более 4 990
мг/м3 воздуха.
Протиоконазол не оказывает
раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз.
Гигиенические нормативы
ОБУВ в воздухе рабочей зоны 1,0 мг/м3.
Область применения препарата
Протиоконазол - фунгицид
системного действия из группы ингибиторов синтеза эргостерина. Вещество
обладает защитным, искореняющим и лечебным действием.
1. Погрешность измерений
Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью
(δ), не превышающей ±25 %, при доверительной вероятности 0,95.
2. Метод измерения
Измерения концентраций протиоконазола
выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на
обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.
Концентрирование протиоконазола из
воздуха осуществляют на бумажные фильтры "синяя лента", экстракцию с
фильтра проводят ацетонитрилом.
Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1 нг.
Определению не мешают тебуконазол,
основной метаболит протиоконазола - протиоконазол-дестио и компоненты препаративной
формы.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
3.1. Средства измерений
Жидкостный
хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирмы Perkin-Elmer, США)
|
Номер Госреестра 15945-97
|
Весы
аналитические ВЛА-200
|
ГОСТ
24104
|
Пробоотборное устройство ОП-442ТЦ (ЗАО "ОПТЭК",
г. Санкт-Петербург) или аспирационное устройство ЭА-1
|
ТУ
25-11-1414-78
|
Барометр-анероид
М-67
|
ТУ
2504-1797-75
|
Термометр
лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1 °С,
пределы измерения 0 - 55 °С
|
ТУ
215-73Е
|
Колбы
мерные вместимостью 100 и 1000 см3
|
ГОСТ
1770
|
Пипетки градуированные 2 класса точности вместимостью 1,0;
2,0; 5,0; 10 см3
|
ГОСТ
29227
|
Пробирки градуированные вместимостью 5 или 10 см3
|
ГОСТ
1770
|
Цилиндры
мерные 2 класса точности вместимостью 500 и 1000 см3
|
ГОСТ
1770
|
Цилиндры
мерные 2 класса точности с пришлифованной пробкой вместимостью 25 см3
|
ГОСТ
1770
|
Допускается использование средств измерения с аналогичными
или лучшими характеристиками.
|
3.2. Реактивы
Протиоконазол
с содержанием действующего вещества 99,8 % (Байер, Германия)
|
|
Ацетонитрил
для хроматографии, хч
|
ТУ-6-09-4326-76
|
Вода бидистиллированная, деионизованная
или перегнанная над KMnO4
|
ГОСТ 6709
|
Кислота ортофосфорная, ч, 85 %
|
ГОСТ 6652
|
Допускается использование реактивов иных производителей с
аналогичной или более высокой квалификацией.
|
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Бумажные
фильтры "синяя лента", обеззоленные
|
ТУ 6-09-2678-77
|
Воронки
конусные диаметром 30 - 37 и 60 мм
|
ГОСТ
25336
|
Груша
резиновая
|
|
Мембранные
фильтры капроновые, диаметром 47 мм
|
|
Насос
водоструйный
|
ГОСТ 10696
|
Пробирки
центрифужные
|
ГОСТ
25336
|
Ротационный
вакуумный испаритель ИР-1М или
|
ТУ 25-11-917-74
|
ротационный
вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария
|
|
Стаканы
химические, вместимостью 100 см3
|
ГОСТ
25336
|
Стекловата
|
|
Стеклянные
палочки
|
|
Установка
для перегонки растворителей
|
|
Набор
для фильтрации растворителей через мембрану
|
|
Холодильник
водяной, обратный
|
ГОСТ
9737
|
Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см,
внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Кромасил
100 С18, зернением 8 мкм
|
|
Шприц
для ввода образцов для жидкостного хроматографа, вместимостью 50 -
100 мм3
|
|
Допускается применение хроматографических
колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими
характеристиками.
|
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать
требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ
12.1.007, требования электробезопасности при
работе с электроустановками по ГОСТ
12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на
жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ
12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ
12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм,
установленных ГН
2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ
в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности
труда по ГОСТ
12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих
квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном
хроматографе.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к
анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности
не более 80 %.
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в
условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Перед выполнением измерений проводят очистку ацетонитрила (при необходимости), подготовку подвижной фазы
для ВЭЖХ, приготовление растворов, кондиционирование хроматографической
колонки, установление градуировочной характеристики,
отбор проб.
7.1. Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил кипятят с обратным
холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1
часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом
калия.
7.2. Приготовление 0,02 М раствора ортофосфорной кислоты
Для приготовления 0,02 М раствора ортофосфорной кислоты в
мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 1,36 см3
ортофосфорной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.
7.3. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
В мерную колбу вместимостью 1 000 см3 помещают
400 см3 0,02 М ортофосфорной кислоты, добавляют 600 см3 ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
7.4. Кондиционирование хроматографической колонки
Промывают колонку подвижной фазой (п. 7.3) в течение 30 мин при скорости подачи растворителя
1,0 см3/мин до установления стабильной базовой линии.
7.5. Приготовление градуировочных растворов
7.5.1. Исходный раствор протиоконазола
для градуировки (концентрация 500 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью
100 см помещают 0,05 г протиоконазола
доводят до метки ацетонитрилом, тщательно
перемешивают. Раствор хранится в холодильнике не более 2 недель.
Растворы № 1 - 5 готовят объемным методом путем
последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.
7.5.2. Раствор № 1 протиоконазола
для градуировки (концентрация 10 мкг/см3). В мерную колбу
вместимостью 100 см3 помещают 2 см3 исходного раствора протиоконазола с концентрацией 500 мкг/см
(п. 7.5.1), разбавляют ацетонитрилом до метки. Раствор
хранится в холодильнике в течение 10 дней.
7.5.3. Рабочие растворы № 2 - 5 протиоконазола для градуировки (концентрация 0,05 - 1,0
мкг/см3) В 4 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают
по 0,5; 1,0; 5,0 и 10,0 см3 раствора № 1 с концентрацией 10 мкг/см3
(п. 7.5.2), доводят до метки подвижной фазой (подготовленной по п. 7.3), тщательно перемешивают, получают
рабочие растворы №№ 2 - 5 с концентрацией протиоконазола
0,05; 0,1; 0,5 и 1,0 мкг/см3, соответственно.
Растворы хранятся в холодильнике в течение суток.
7.6. Отбор проб
Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ
12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху
рабочей зоны". Воздух с объемным расходом 5 дм3/мин аспирируют через бумажный фильтр "синяя лента",
помещенный в фильтродержатель.
Для измерения концентрации протиоконазола
на уровне 0,05 мг/м3 необходимо отобрать 50 дм воздуха. Срок
хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильной
камере при 4 °С - 3 дня.
7.7. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику,
выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от
концентрации протиоконазола в растворе (мкг/см3),
устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки №№
2 - 5.
В инжектор хроматографа вводят по 20 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.7.1. Осуществляют не менее 3-х
параллельных измерений. Устанавливают площадь пика протиоконазола.
7.7.1. Условия хроматографирования
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором
Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:
Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,0 мм,
содержащая кромасил 100 С18, зернением 8 мкм.
Температура колонки: комнатная
Подвижная фаза: 0,02 М ортофосфорная кислота-ацетонитрил
(40:60, по объему)
Скорость потока элюента: 1,0 см3/мин
Рабочая длина волны: 213 нм
Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу
Объем вводимой пробы: 20 мм3
Ориентировочное время выхода протиоконазола:
9,6 - 9,8 мин
Линейный диапазон детектирования: 1 - 20 нг.
Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный
раствор протиоконазола с концентрацией 1,0 мкг/см3,
разбавляют подвижной фазой (подготовленной по п. 7.3).
Градуировочный график проверяют
ежедневно по анализу 2 растворов для градуировки различной концентрации. Если
значения площади отличаются более, чем на 9 % от
данных, заложенных в градуировочную характеристику,
ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для
градуировки.
8. Выполнение измерений
Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан
вместимостью 100 см3, заливают 15 см3 ацетонитрила,
помещают в темное место, периодически встряхивая в течение 10 минут.
Растворитель сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой, в цилиндр с
пришлифованной пробкой вместимостью 25 см3. Фильтр обрабатывают
новой порцией ацетонитрила объемом 10 см3,
экстракты объединяют.
Общий объем экстракта в цилиндре доводят до 25 см3
ацетонитрилом, тщательно перемешивают. Отбирают аликвоту объемом 2 см3, переносят в
градуированную пробирку, добавляют 2 см подвижной фазы, приготовленной по п. 7.3, перемешивают и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.7.1.
Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают
площадь пика, с помощью градуировочного графика
определяют концентрацию протиоконазола в хроматографируемом растворе.
Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование
холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированного фильтра.
9. Обработка результатов измерений
Массовую концентрацию протиоконазола
в пробе воздуха рабочей зоны X, мг/м3, рассчитывают по формуле:
где
С
- концентрация протиоконазола
в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;
2 - коэффициент,
учитывающий разбавление аликвоты экстракта перед хроматографированием.
W - объем
экстракта, подготовленного для хроматографирования,
см3;
V20 - объем пробы
воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °С) условиям
где
Т - температура
воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), град. С,
Р
- атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.
u
- расход воздуха при отборе пробы, дм3/мин,
t - длительность отбора пробы, мин.
Примечание: идентификация и расчет концентрации протиоконазола в пробах могут быть проведены с помощью
программ обработки хроматографических данных с применением
компьютера, включенного в аналитическую систему.
10. Оформление результатов измерений
За результат анализа () принимается среднее арифметическое результатов двух
параллельных определений X1 и X2 , расхождение между которыми не превышает значений норматива
оперативного контроля сходимости (d): |X1 - X2|
≤ d.
мг/м3,
где
d
- норматив оперативного контроля сходимости, мг/м3;
dотн.
- норматив оперативного контроля сходимости, % (равен 15 %).
Результат количественного анализа представляют в виде:
- результат анализа (мг/м3),
характеристика погрешности δ, %, Р = 0,95 или
мг/м3, Р = 0,95, где
мг/м3
Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд,
что и погрешность.
11. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости
измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002 "Точность
(правильность и прецизионность) методов и результатов
измерений".
12. Разработчики
Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н. (Федеральный научный
центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, г. Мытищи Московской
обл.); Брагина И.В. (Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора).
Руководитель
Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
|
Г.Г.
Онищенко
|