4.1. Методы контроля. Химические факторы
Методические указания МУК 4.1.1967-05
"Определение остаточных количеств крезоксим-метила
в огурцах, томатах, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005
г.)
Дата введения: 1 июля 2005
г.
Введены впервые
1. Вводная часть
Действующее вещество: крезоксим-метил
(BAS 490 F).
(Е)-метил-2-метоксиимино-2-/2-(о-толилокси-метил)фенил/ацетат (ИЮПАК).
Структурная формула:
Эмпирическая формула: C18H19NO4.
Молекулярная масса: 313,4.
Белое кристаллическое вещество со слабым запахом.
Температура плавления: 97,2 - 101,7 °С
Давление паров при 20 °С: 2,3
× 10-3 мПа
Растворимость (г/л) при 20 °С: вода
- 0,002, гептан - 1,7, толуол - 111, дихлорметан - 939,
метанол - 14,9, ацетон - 217, этилацетат - 123.
Стабильность к гидролизу при 20 °С:
DT50 = 34 дня
(рН 7), 7 часов (рН 9)
В биологически активных почвах в аэробных условиях крезоксим-метил быстро разрушается: DT90 = менее 3 дней.
Краткая токсикологическая характеристика
Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс - более
5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для крыс - более
2000 мг/кг. Крезоксим-метил не оказывает раздражающего
действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика, не обладает мутагенными и сенсибилизирующими
свойствами.
Крезоксим-метил нетоксичен
для пчел, дождевых червей, полезных насекомых и птиц.
Гигиенические нормативы
ВМДУ в огурцах, томатах и винограде - 0,5 мг/кг.
Область применения препарата
Крезоксим-метил - синтетический фунгицид
из класса стробилуринов, являющихся
продуцентами гриба Strobilurus tenacellus.
Вещество эффективно против широкого круга грибных патогенов
хлебных злаков, овощных, кормовых, технических и плодовых культур. Обладает защитным,
лечебным и искореняющим действием.
2. Методика определения остаточных количеств крезоксим-метила
в огурцах, томатах, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на газохроматографическом определении крезоксим-метила на неподвижной фазе OV-17 с использованием
электронозахватного детектора (ЭЗД) после экстракции препарата из сока гексаном, из растительного материала водным ацетоном, предварительной
очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и
окончательной очистки экстрактов на колонке с силикагелем.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
2.1.2. Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов,
применяемых при возделывании огурцов, томатов и винограда.
2.1.3. Метрологическая характеристика метода
Таблица
Метрологические параметры метода
Анализируемый объект
|
Метрологические параметры, Р
= 0,95, n = 20
|
предел обнаружения, мг/дм3, мг/кг
|
диапазон определяемых концентраций, мг/дм3,
мг/кг
|
среднее значение определения, %
|
стандартное отклонение S, %
|
относительное отклонение DS, %
|
доверительный интервал среднего, %
|
Огурцы
|
0,1
|
0,1 - 1,0
|
91,8
|
2,3
|
1,0
|
±2,1
|
Томаты
|
0,1
|
0,1 - 1,0
|
90,7
|
2,3
|
1,0
|
±2,1
|
Виноград
|
0,1
|
0,1 - 1,0
|
90,0
|
3,3
|
1,5
|
±3,1
|
Сок
|
0,1
|
0,1 - 1,0
|
92,4
|
2,8
|
1,2
|
±2,6
|
2.2. Реактивы, растворы и материалы
Крезоксим-метил,
аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,9 % (БАСФ, Германия)
|
|
Ацетон, чда
|
ГОСТ 2603-79
|
Вода дистиллированная
|
ГОСТ 7602-72
|
Гексан,
ч
|
ТУ 6-09-3375-78
|
Дихлорметан
|
ГОСТ
12794-80
|
Калий углекислый, хч
|
ГОСТ 4221-76
|
Калия перманганат, хч
|
ГОСТ
20490-75
|
Кальция хлорид, хч
|
ГОСТ 4161-77
|
Натрия гидроксид,
хч
|
ГОСТ 4328-77
|
Натрия сульфат безводный, хч
|
ГОСТ
4166-76
|
Натрий двууглекислый, хч
|
ГОСТ 83-79
|
Натрия хлорид, хч
|
ГОСТ
4233-77
|
Этилацетат
|
ГОСТ
22300-76
|
Элюент № 1 для колоночной
хроматографии: смесь гексан-этилацетат (9:1, по
объему)
|
|
Элюент № 2 для колоночной
хроматографии: смесь гексан-этилацетат (8:2, по
объему)
|
|
Азот газообразный, осч
|
ГОСТ 0203-74
|
Силикагель (0,063 - 0,2 мм) для
адсорбционной хроматографии (Вельм, Германия) I
степени активности или силикагель КСК (60-100 меш)
|
|
Стекловата
|
|
Целит 535 (2 - 15 мкм) /Серва, Германия/ или аналогичный
|
|
Фильтры бумажные, синяя лента
|
ТУ 6-09-1678
|
2.3 Приборы, аппаратура, посуда
Хроматограф
газовый "Кристалл 2000 М" с электронозахватным детектором с
пределом детектирования по линдану не выше 3,18
× 10-14 г/с или аналогичный
|
|
Колонка хроматографическая,
набивная, стеклянная, 1500 × 2 мм, неподвижная фаза - 3 % OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм)
|
|
Колонка хроматографическая,
набивная, стеклянная, 2000 × 2 мм, неподвижная фаза - 5 % SE-30 на Инертоне N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм)
|
|
Колонка капиллярная для ГЖХ ZB-1,
длина 30 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, неподвижная
фаза SE-30, фирма Phenomenex, США или аналогичная
|
|
Микрошприц
емкостью 10 мкл МШ-10Ф
|
ТУ 64-1-2850
|
Весы аналитические типа ВЛР-200
|
ГОСТ
19401-74
|
Водоструйный насос
|
ГОСТ 10696-75
|
Гомогенизатор или аналогичный
|
МРТУ 42-1505-63
|
Прибор для перегонки при
атмосферном давлении
|
|
Ротационный испаритель тип ИР-1М
|
ТУ 25-11-917-76
|
Баня водяная
|
ТУ 46-22-603-75
|
Воронка Бюхнера
|
ГОСТ 0147-73
|
Воронки делительные, вместимостью
100 мл
|
ГОСТ
25336-82
|
Воронки для фильтрования,
стеклянные
|
ГОСТ 8613-75
|
Колба Бунзена
|
ГОСТ 5614-75
|
Колбы круглодонные
на шлифе, вместимостью 10 и 100 мл
|
ГОСТ 9737-70
|
Колбы мерные, вместимостью 25, 50
и 100 мл
|
ГОСТ
1770-74
|
Пипетки мерные, вместимостью 1, 2,
5 и 10 мл
|
ГОСТ 20292-74Е
|
Пробирки
градуированные с притертыми пробками, вместимостью 5 и 10 мл
|
ГОСТ 10515-75
|
Стаканы стеклянные емкостью 400 мл
|
ГОСТ 6236-72
|
Цилиндры мерные, вместимостью 50,
100 и 250 мл
|
ГОСТ
1770-74
|
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными
правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов
окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов"
(от 21.08.79 № 2051-79). Отобранные пробы огурцов, томатов и винограда хранят в
стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более двух дней; при длительном
хранении (не более трех месяцев) пробы замораживают и хранят в морозильной камере
при температуре -18 °С. Перед анализом ягоды и плоды измельчают.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Органические растворители перед началом работы очищают, сушат
и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан
и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты
до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители
последовательно промывают водой, 2,5 %-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона
10 г KMnO4
и 2 г K2CO3).
Этилацетат промывают равным объемом 5 %-го раствора двууглекислого
натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом
очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера
через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем
высушивают при температуре 130 °С в течение 3 ч.
2.5.2. Подготовка и кондиционирование колонки
Готовую насадку (3 % OV-17 на Хромосорбе
W/HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают
в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота
при температуре 270 °С в течение 8 - 10 ч.
2.5.3. Приготовление стандартных растворов
Основной стандартный раствор крезоксим-метила
с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,9
% д.в., в этилацетате в мерной
колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
Рабочие растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл
готовят из основного стандартного раствора крезоксим-метила
соответствующим последовательным разбавлением этилацетатом. Рабочие растворы хранят
в холодильнике не более трех дней.
При изучении полноты открывания крезоксим-метила
в модельных матрицах используются ацетоновые растворы вещества.
2.5.4. Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа
вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора крезоксим-метила
с концентрацией 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных
измерений и находят среднее значение площади хроматографического
пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ × с
от концентрации крезоксим-метила
в растворе в мкг/мл.
2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром
1,2 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля
в 10 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края
сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку
последовательно промывают 25 мл смеси гексан-этилацетат
(9:1, по объему) и 20 мл гексана со скоростью 1 -
2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
2.5.6. Проверка хроматографического поведения крезоксим-метила на колонке с силикагелем
В круглодонную колбу емкостью 10 мл
отбирают 1 мл стандартного раствора крезоксим-метила с
концентрацией 1 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют
в 3 мл смеси гексан-этилацетат (95:5, по объему) и наносят
на колонку. Промывают колонку 40 мл смеси гексан-этилацетат
(9:1, по объему) и затем 50 мл смеси гексан-этилацетат
(8:2, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая,
упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл этилацетата и анализируют на содержание
крезоксим-метила по п. 2.7.1.
Фракции, содержащие крезоксим-метил,
объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл этилацетата и вновь анализируют
по п. 2.7.1. Рассчитывают содержание крезоксим-метила в элюате, определяют
полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем
элюента.
Примечание: профиль вымывания крезоксим-метила может меняться
при использовании новой партии сорбента и растворителей.
2.6. Описание определения
2.6.1. Экстракция крезоксим-метила и очистка экстракта
2.6.1.1. Огурцы, томаты, виноград. К навеске (25 г) измельченного
материала добавляют 100 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему), гомогенизируют 3
минуты при 10000 об/мин. Добавляют
2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок
на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему). Из объединенного
экстракта отбирают аликвоту раствора (около 30 мл), эквивалентную
5 г растительного материала, и упаривают ее до водной фазы на
роторном вакуумном испарителе при температуре 40 °С. Водный остаток переносят
в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 10 мл насыщенного раствора хлорида
натрия и 20 мл гексана. Смесь встряхивают в течение 1
мин и после ее расслоения отделяют гексановый слой, который
пропускают через стеклянный фильтр, заполненный безводным сульфатом натрия, в грушевидную
колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию водной фракции гексаном
повторяют еще два раза (по 20 мл). Объединенный гексановый
экстракт, содержащий крезоксим-метил, выпаривают на роторном испарителе досуха при температуре 30 °С. Дальнейшую
очистку экстракта проводят по п. 2.6.3.
2.6.1.2. Виноградный сок. К 10 мл свежевыжатого
сока добавляют 20 мл насыщенного раствора хлорида натрия
и содержимое переносят в делительную воронку емкостью 100 мл. В воронку добавляют
20 мл гексана и смесь встряхивают
в течение 1 мин. После разделения слоев собирают органическую фракцию, а водную
фазу обрабатывают гексаном еще два раза (по 20 мл). Объединенный
гексановый экстракт пропускают через слой безводного сульфата
натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре
30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.3.
2.6.3. Очистка на колонке с силикагелем
Остаток в колбе, полученный при упаривании экстрактов растительного
материала (из п. 2.6.1.1 и 2.6.1.2), количественно переносят тремя 1-мл порциями
смеси гексан-этилацетат (95:5, по объему) в подготовленную
хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Промывают колонку
30 мл смеси гексан-этилацетат (9:1), которые отбрасывают.
Крезоксим-метил элюируют 35
мл смеси гексан-этилацетат (8:2), собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой
остаток экстракта сока растворяют в 10 мл, а экстрактов огурцов, томатов
и винограда в 5 мл этилацетата и анализируют на содержание крезоксим-метила
по п. 2.7.1.
2.7. Условия хроматографирования
2.7.1. Метод ГЖХ с насадочными колонками
Хроматограф газовый "Кристалл - 2000 М" с электронозахватным
детектором (Ni63)
с пределом детектирования по линдану не выше 3,18 ×
10-14 г/см3.
Колонка хроматографическая, набивная,
стеклянная, 1 500 × 3 мм; неподвижная фаза - 3 % OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм).
Температура детектора 300 °С, инжектора
270 °С, термостата колонки 240 °С.
Скорость потока газа-носителя (азота) - 30 мл/мин; поддув - 25
мл/мин.
Объем вводимой пробы - 2 мкл.
Время удерживания крезоксим-метила
- 3 мин 10 с.
Предел детектирования - 0,1 нг.
Линейный диапазон детектирования - 0,1 - 1,0 нг.
Альтернативная неподвижная фаза: 5 % SE-30 на Инертоне N-AW DMCS (0,16 - 0,20 мм); колонка стеклянная 2000
× 2 мм; условия хроматографирования те же.
Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют
среднюю площадь хроматографического пика крезоксим-метила.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией
1,0 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.
2.7.2. Метод ГЖХ с капиллярными колонками
Хроматограф газовый "Кристалл 2000 М" с электронозахватным
детектором.
Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, 30 м × 0,32 мм ×
0,5 мкм (SE-30).
Температура термостата испарителя - 250 °С,
детектора - 300 °С, термостата колонки в программируемом режиме: 120 °С - 1 мин;
20°/мин до 250 °С; выдержка - 5 мин.
Газовый режим: газ-носитель - азот, общий расход - 33 мл/мин;
газ для поддува в детектор - азот, расход - 30 мл/мин.
Деление потока: 1:5.
Абсолютное время удерживания крезоксим-метила:
9 мин 34 с.
Объем вводимой пробы - 2 мкл.
Линейный диапазон детектирования: 0,02 - 0,5 нг.
Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю
площадь хроматографического пика крезоксим-метила.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией
0,2 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.
2.8. Обработка результатов анализа
Содержание крезоксим-метила рассчитывают
методом абсолютной калибровки по формуле:
где
Х - содержание крезоксим-метила в пробе, мг/кг или мг/дм3;
H1 - площадь пика образца,
мВ × с;
H0 - площадь пика стандарта,
мВ × с;
А - концентрация стандартного
раствора крезоксим-метила, мкг/мл;
V - объем экстракта,
подготовленного для хроматографирования, мл;
m
- объем (мл) или масса (г) анализируемой части образца (для сока 10 мл; для плодов
и ягод - 5 г).
3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе
с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами
и сжатыми газами.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости
измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний
контроль качества результатов количественного химического анализа.
5. Разработчики
Дубовая Л.В., Талалакина
Т.Н., Макеев А.М.
ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.
Руководитель
Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
|
Г.Г.
Онищенко
|