4.1. Методы контроля. Химические факторы
Методические указания МУК 4.1.1965-05
"Определение остаточных количеств флутриафола в
плодах яблони, ягодах и соке винограда методом газожидкостной
хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005
г.)
Дата введения: 1 июля
2005 г.
Введены впервые
1. Вводная часть
Действующее вещество: флутриафол.
Структурная формула:
СА: (±)-α-(2-фторфенил)-α-(4-фторфенил)-1Н-1,2,4-триазол-1-этанол.
Эмпирическая формула: C16H13F2N3O.
Мол. масса:
301,3.
Твердое белое кристаллическое вещество.
Температура плавления: 130 °С. Давление паров при 20 °С 7,1
× 10-6 mPa.
Коэффициент распределения н-октанол/вода:
KowlogP = 2,3 (20 °С).
Растворимость (20 °С) в воде 130 мг/л, хорошо растворим в
ацетоне 190 г/л, дихлорметане 150 г/л, метаноле 69
г/л, слабо растворим в гексане
0,3 г/л.
В почве период полураспада DT50 65 - 125 дней.
Оральная токсичность (LD50) для крыс 1480 мг/кг.
Гигиенические нормативы
МДУ (мг/кг) виноград - н.д., яблоки - 0,05*.
Область применения
Фунгицид широкого спектра действия для борьбы с болезнями
листа и колоса зерновых культур, также применяется для защиты плодовых,
зернобобовых и других культур. Используется для борьбы с почвенными, семенными
и аэрогенными инфекциями.
2. Методика определения флутриафола в плодах
яблони, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод определения флутриафола в
винограде и яблоках основан на экстракции пестицида органическими
растворителями, очистке перераспределением между двумя несмешивающимися
растворителями и, при необходимости, на колонке с флорисилом.
Количественное определение проводят методом газожидкостной хроматографии с
использованием детектора электронного захвата (ДЭЗ).
2.1.2. Избирательность метода
Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий
подготовки проб и хроматографирования. Присутствие
других пестицидов, близких по химическому строению и области применения,
определению не мешает.
2.1.3. Метрологическая характеристика метода
Метрологическая характеристика метода представлена в
таблице.
Таблица
Метрологическая характеристика метода
Объект анализа
|
Предел обнаружения, мг/кг
|
Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг
|
Среднее значение определения, % (n = 24)
|
Стандартное отклонение S, %
|
Доверительный интервал среднего, % n = 24, Р = 0,95
|
яблоня,
плоды
|
0,05
|
0,05 - 0,5
|
85,8
|
5,40
|
4,95
|
виноград,
ягоды
|
0,025
|
0,025 - 0,5
|
83,4
|
5,75
|
4,15
|
виноград,
сок
|
0,025
|
0,025 - 0,5
|
83,0
|
5,95
|
4,15
|
2.2. Реактивы, материалы
Флутриафол,
аналитический стандарт
|
|
Ацетон, осч
|
ТУ 2633-039-4493179-00
|
Ацетон, чда
|
ГОСТ 2603-79
|
Вода дистиллированная
|
ГОСТ 7602-76
|
н-Гексан,
хч
|
ТУ 6-09-3375-78
|
Натрий серно-кислый безводный, чда
|
ГОСТ
4166-76
|
Натрия хлорид, хч
|
ГОСТ
4233-77
|
Стекловата
|
|
Серная кислота ОСЧ 11-5
|
ГОСТ
14262-78
|
Флорисил
150 - 250 мкм (Merck, Германия)
|
|
Хлористый метилен, чда
|
ТУ-2631-020-11291058-96
|
2.3. Приборы и посуда
Газовый хроматограф Кристалл 2000М
или аналогичный с ДЭЗ
|
|
Колонка кварцевая капиллярная 30 м
× 0,32 мм с неподвижной фазой НР-1 (0,25 мкм)
|
|
Весы аналитические ВЛА-200 или
аналогичные
|
ГОСТ 34104-80Е
|
Весы технические ВЛКТ-500
|
ГОСТ 24104-80
|
Установка ультразвуковая
"Серьга"
|
ТУ 3.836.008
|
Ротационный испаритель вакуумный
ИР-1М или аналогичный
|
ТУ 25-11-917-74
|
Микрошприц
МШ-10, МШ-10М
|
ТУ 2-833-106
|
Насос водоструйный
|
МРТУ 42 861-64
|
Колбы плоскодонные на шлифах КШ500
29/32 ТС
|
ГОСТ 10384-72
|
Колбы круглодонные
на шлифах КШ50 29-32 ТС
|
ГОСТ 10384-72
|
Воронки лабораторные В-75-110
|
ГОСТ 25 336-82
|
Воронки делительные на 500, 1000
мл ВД-3-500
|
ГОСТ 8613-75
|
Цилиндры мерные на 100 см3,
500 см3
|
ГОСТ 1774-74
|
Колбы мерные на 100 см3
|
ГОСТ
1770-74
|
Пипетки на 1, 2, 5, 10 см3
|
ГОСТ 22292-74
|
Стаканы химические
|
ГОСТ
25336-82Е
|
Колонка стеклянная хроматографическая длиной 30 см, диаметром 10 мм
|
|
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,
пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (от 21.08.79 № 2051-79).
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Растворители, используемые для анализа, специальной
подготовки не требуют.
Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей.
Для этого 100 мл растворителя упаривают на вакуумном ротационном испарителе до
объема 1 мл и хроматографируют. При обнаружении
примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми
методами.
2.5.2. Кондиционирование колонки
Перед началом анализа колонку, не присоединяя к детектору,
кондиционируют в токе инертного газа (азот) при температуре 250 °С в течение 8 - 10 часов.
2.5.3. Приготовление стандартного и градуировочных растворов
Для приготовления стандартного раствора с концентрацией 100
мг/мл количественно переносят 20 мг аналитического стандарта флутриафола в мерную колбу на 200 мл и растворяют навеску в
ацетоне. Из полученного раствора готовят градуировочные
растворы с концентрациями 5, 10, 25, 50 мкг/мл методом последовательного разбавления
ацетоном.
Для внесения в образец при определении полноты извлечения
используют соответствующий стандартный раствор флутриафола
в ацетоне.
2.5.4. Построение градуировочного графика
Для построения градуировочного
графика зависимости высоты (площади) пика от концентрации флутриафола
в растворе в хроматограф вводят по 1 мкл градуировочных
растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее
4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади
пиков и строят график зависимости среднего значения высоты, мм (площади, мВ x с) пика от концентрации флутриафола
в градуировочном растворе
(мкг/мл).
2.5.5. Подготовка колонки с флорисилом для
очистки экстракта
В нижнюю часть колонки помещают тампон из стекловаты, затем
слой 0,5 см безводного сульфата натрия и заполняют через воронку суспензией 5 г
флорисила в 25 мл гексана
при открытом кране колонки. Затем вносят слой 1 см безводного сульфата натрия и
подключают выход колонки к водоструйному насосу для уплотнения слоя сорбента.
После этого колонку промывают 15 мл гексана, затем
смесью гексан-ацетон в соотношении 2:3 и закрывают
кран, когда уровень растворителя достигнет верхнего края сорбента. Колонка
готова к работе.
2.5.6. Проверка хроматографического поведения флутриафола на колонке с флорисилом
В подготовленную колонку пипеткой вносят 1 мл стандартного
раствора флутриафола и дают впитаться. После этого
вносят 10 мл смеси гексан-ацетон (2:3), элюат отбрасывают. Элюирование флутриафола
проводят 40 мл смеси гексан-ацетон (1:5), отбирая
фракции по 5 мл, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют фракции, содержащие флутриафол,
объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют. Рассчитывают содержание флутриафола в элюате, определяют
полноту извлечения препарата из колонки и необходимый для этого объем элюирующей смеси.
Примечание: профиль вымывания флутриафола
может измениться при использовании флорисила другой
партии.
2.5.7. Подготовка приборов и средств измерения
Установка и подготовка всех приборов и средств измерения
проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.
2.6. Проведение определения
2.6.1. Экстракция и очистка экстрактов
2.6.1.1. Плоды яблони. Навеску измельченных плодов 50 г
помещают в коническую колбу объемом 250 мл и экстрагируют флутриафол
150 мл ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Надосадочную жидкость фильтруют через складчатый фильтр
"красная лента" в делительную воронку объемом 1000 мл. Экстракцию
повторяют дважды порциями по 100 мл ацетона. После третьей экстракции осадок
переносят на фильтр, колбу ополаскивают 20 мл ацетона и вносят в делительную
воронку через фильтр с осадком. К объединенному экстракту добавляют 100 мл
дистиллированной воды и промывают 20 мл гексана,
встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения слоев
верхний гексановый слой отбрасывают и промывку
повторяют дважды порциями по 20 мл гексана. Промытый гексаном водно-ацетоновый экстракт концентрируют на
роторном испарителе до объема 130 - 150 мл и переносят в делительную воронку,
ополаскивая концентратор. Переэкстрагируют флутриафол в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл,
встряхивая воронку в течение 2 мин. Нижний органический слой фильтруют через
слой безводного сульфата натрия, затем промывают осушитель 10 мл хлористого
метилена. Объединенный дихлорметановый экстракт
упаривают досуха и проводят очистку на колонке с флорисилом
по п. 2.6.2.
2.6.1.2. Ягоды винограда. Навеску размолотых ягод 50 г помещают
в коническую колбу объемом 500 мл и экстрагируют флутриафол
150 мл ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Экстракт фильтруют
через складчатый фильтр "красная лента" в делительную воронку объемом
1000 мл. Экстракцию повторяют дважды порциями экстрагента
по 150 мл, после чего остаток переносят на фильтр, колбу и осадок промывают 20
- 30 мл ацетона. К объединенному экстракту в делительную воронку добавляют 20
мл гексана и встряхивают в течение 2 мин. После
полного разделения фаз 90 % нижнего водно-ацетонового слоя отделяют. После
этого эмульсию пограничного слоя разбивают внесением в него малого количества
хлористого натрия. Остатки водно-ацетонового слоя собирают, гексановый
слой отбрасывают. Объединенный водно-ацетоновый экстракт упаривают на роторном
испарителе до объема 150 - 180 мл и переносят в делительную воронку. Флутриафол переэкстрагируют в
хлористый метилен трижды порциями по 50 мл, встряхивая делительную воронку в
течение 2 мин. Нижние органические слои собирают, фильтруя через безводный
сульфат натрия. Объединенный экстракт выпаривают досуха на роторном испарителе.
Далее проводят очистку на колонке с флорисилом по п.
2.6.2.
2.6.1.3. Сок винограда. 50 мл сока помещают в делительную
воронку объемом 500 мл, добавляют 50 мл смеси гексан-ацетон
в соотношении 1:9 и встряхивают в течение 2 - 3 мин. Гексановый
слой отбрасывают. К собранному водно-ацетоновому слою добавляют 5 мл гексана и интенсивно встряхивают в делительной воронке.
После полного разделения фаз собирают водно-ацетоновый слой, гексановый слой отбрасывают. Объединенный экстракт
переносят в чистую делительную воронку, добавляют 25 - 30 мл дистиллированной
воды и переэкстрагируют флутриафол
в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл. Дихлорметановый
экстракт фильтруют через безводный сульфат натрия и выпаривают досуха на
роторном испарителе. Далее проводят очистку на колонке с флорисилом
по п. 2.6.2.
2.6.2. Очистка экстрактов на колонке с флорисилом
Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси гексан-ацетон
(3:2). Пипеткой количественно вносят анализируемую пробу в хроматографическую
колонку. Колбу ополаскивают еще 2 мл той же смеси и раствор вносят в хроматографическую колонку, затем открывают кран и дают
раствору впитаться в сорбент. После этого в колонку вносят 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 2:3, элюат
отбрасывают. Флутриафол элюируют
10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 1:5, элюат собирают и выпаривают досуха. Сухой остаток
растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют.
2.6.3. Условия хроматографирования
Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с ДЭЗ или
аналогичный. Колонка кварцевая капиллярная 30 м × 0,32 мм с неподвижной
фазой НР-1 (0,25 мкм).
Температура колонки программируется от 200
°С (4 мин) до 220 °С со скоростью 10 °С/мин.
Температура испарителя 250 °С,
детектора 280 °С.
Скорость газа-носителя (азот) через колонку 3 см3/мин.
Объем вводимой пробы 2 мкл. Время удерживания флутриафола 10 мин 29 ± 2 с.
2.6.6. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят методом абсолютной
калибровки, содержание флутриафола в пробе (X, мг/кг)
вычисляют по формуле:
где
H1 - высота (площадь)
пика флутриафола в стандартном растворе, мм (мВ
× с);
H2 - высота (площадь)
пика флутриафола в анализируемой пробе, мм (мВ
× с);
V - объем
экстракта, подготовленного для хроматографирования,
мл;
Р
- навеска анализируемого образца, г;
С
- концентрация флутриафола в
стандартном растворе, мкг/мл;
V1 и V2 - дозируемые в хроматограф объемы стандартного
и анализируемого растворов, мкл.
Концентрацию флутриафола
в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор флутриафола 50 мкг/мл, разбавляют.
3. Требования техники безопасности
При проведении работы необходимо соблюдать требования Инструкции
"Основные правила безопасной работы в химической лаборатории",
общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями,
токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации газового хроматографа
и электрооборудования до 400 В.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости
результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ
2335-2003. "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов
количественного химического анализа".
5. Разработчики
Долженко В.И., Цибульская
И.А., Карпова Л.М.
Всероссийский научно-исследовательский институт защиты
растений, г. Санкт-Петербург.
Руководитель
Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
|
Г.Г.
Онищенко
|