МУК 4.1.1918-04
Определение остаточных количеств Пропетамфоса в молоке и мясе методом газожидкостной хроматографии

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека

Сборник
методических документов, необходимых
для обеспечения применения
Федерального закона от 12 июня 2008 г. № 88-ФЗ
«Технический регламент на молоко
и молочную продукцию»

Часть 3

В сборник включены методические документы, содержащие правила и методы исследований (испытаний) и измерений, а также правила отбора образцов для проведения исследований (испытаний) и измерений, в соответствии с постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации Г.Г. Онищенко от 08.12.2008 № 67.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств
Пропетамфоса в молоке и мясе
методом газожидкостной хроматографии

Методические указания
МУК 4.1.1918-04

1. Разработаны Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» (авторы В.А. Калинин, Т.С. Калинина, Н.В. Устименко).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко.

3. Введены впервые.

4.3. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств Пропетамфоса
в молоке и мясе методом газожидкостной
хроматографии

1. Вводная часть

Фирма производитель: Каллиопе С.А.С.

Торговое название: Блотик.

Название действующего вещества по ИСО: Пропетамфос.

Название действующего вещества по ИЮПАК: Е-О-2-изопропоксикарбонил-1-метилвинил-О-метилэтилфосфорамидотиоат.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₁₀H₂₀NO₄PS

Молекулярная масса: 281,3

Физическое состояние технического продукта - желтоватая маслянистая жидкость.

Давление насыщенного пара 1,9 мПа при 20 °С.

Температура кипения: 87 - 89 °С.

Плотность при 20 °С: 1,1294 г/мл.

Коэффициент перераспределения октанол/вода: logK_ow = 3,82.

Растворимость: в воде - 110 мг/л; хорошо смешивается с ацетоном, этанолом, метанолом, гексаном, диэтиловым эфиром, диметилсульфоксидом, хлороформом и ксиленом.

Стабилен при хранении и на свету. Гидролитическая стабильность: DT₅₀ 11 дней при pH 3; 1 год при pH 6 и 41 день при pH 9. В водной среде не разлагается в течение 70 ч.

рКа 13.67.

В почве сохраняется в течение 2 - 3 месяцев.

Краткая токсикологическая характеристика: Пропетамфос относится к веществам, опасным по острой пероральной (ЛД₅₀ крысы - 59,5 - 119,0 мг/кг) и ингаляционной токсичности (ЛД₅₀ крысы - 4 ч - 690 - 1500 мг/м³), но умеренно опасным по дермальной (ЛД₅₀ крысы - 2260 - 2850 мг/кг).

В России гигиенические нормативы не установлены.

Область применения препарата. Пропетамфос - инсектицид контактного и кишечного действия из группы органических соединений фосфора с длительным защитным эффектом. Он эффективно подавляет развитие синантропных насекомых (тараканы, мухи, моли, муравьи, комары) и эктопаразитов животных (личинки оводов, клещи и др.). Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Блотик для применения в качестве ветеринарного препарата.

2. Методика определения Пропетамфоса в молоке и мясе методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении Пропетамфоса методом газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора на фосфор после экстракции из анализируемой пробы ацетоном, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями и/или на колонке с силикагелем.

Идентификация проводится по времени удерживания. Количественное определение - методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1.

Таблица 1

2.1.3. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в ветеринарии.

2.2. Реактивы, материалы, приборы, оборудование

2.2.1. Реактивы, растворы и материалы

2.2.2. Посуда и оборудование

2.3. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.79), утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР. Пробы воды и масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °С; пробы яблок, зеленой массы рапса, а также клубней картофеля в полиэтиленовой таре - в морозильнике при температуре -18 °С; пробы зерна, семян рапса в бумажных или тканевых мешочках - в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор Пропетамфоса с концентрацией 100 мкг/мл готовят растворением 0,0010 г вещества в мерной колбе на 100 мл в этилацетате. Раствор хранится при комнатной температуре в течение 10 дней.

Рабочие стандартные растворы Пропетамфоса с концентрацией 0,05; 0,1; 0,25 и 0,50 мкг/мл готовят из раствора, содержащего 100 мкг/мл вещества, соответствующим последовательным разбавлением этилацетатом. Растворы хранятся при комнатной температуре в течение 10 дней.

2.4.2. Построение градуировочного графика

В испаритель хроматографа вводят по 1 мкл рабочего стандартного раствора Пропетамфоса с концентрацией 0,05; 0,1; 0,25 и 0,50 мкг/мл. Строят градуировочный график зависимости высоты хроматографического пика (мм) от содержания Пропетамфоса в хроматографическом объеме (нг).

2.4.3. Приготовление колонки

Суспензию 5 г безводного сульфата натрия в 20 мл гексана заливают в колонку с уложенной на дне ватой. После оседания сульфата натрия добавляют в колонку 6 г силикагеля и 5 г сульфата натрия. Промывают колонку 20 мл гексана, не допуская осушения верхнего слоя сорбента.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Молоко. Навеску молока 50 г интенсивно перемешивают в стакане на гомогенизаторе или высокоскоростной мешалке с 200 мл ацетона в течение 3 мин или встряхивают в течение 30 мин. Экстракт переносят в центрифужный стакан и центрифугируют в течение 5 мин при 3000 об./мин. Супернатант переносят в концентратор. Осадок в стакане экстрагируют путем встряхивания с 50 мл ацетона. Экстракты объединяют в концентраторе и упаривают ацетон. Оставшуюся жидкость переносят в делительную воронку и экстрагируют Пропетамфос гексаном три раза по 20 мл. Гексановую фракцию пропускают через безводный серно-кислый натрий и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 5 - 10 мл этилацетата и аликвоту 3 - 5 мкл хроматографируют.

2.5.2. Мясо. Навеску измельченного на мясорубке мяса 20 - 100 г помещают в стакан гомогенизатора, добавляют 20 г целита 545 и 200 мл ацетона и гомогенизируют при максимальной скорости в течение 3 мин. Переносят экстракт на воронку Бюхнера с бумажным фильтром и фильтруют под вакуумом. Остаток на фильтре возвращают в стакан гомогенизатора, добавляют 150 мл ацетона и гомогенизируют еще 2 мин. Встряхивают дополнительно субстрат на механическом встряхивателе 30 мин и фильтруют экстракт через воронку Бюхнера. Экстракты объединяют и упаривают ацетон на ротационном испарителе при t° = 40 °С.

Остаток в концентраторе переносят 100 мл петролейного эфира в делительную воронку объемом 250 мл. Обмывают концентратор двумя порциями по 25 мл ацетонитрила, содержащего 5 % воды. Смыв переносят в делительную воронку. Встряхивают воронку 30 мин, дают жидкостям расслоиться и нижнюю фракцию сливают в концентратор. Повторяют экстракцию ацетонитрилом еще 3 раза (50 + 50 + 50 мл). Ацетонитрильные экстракты объединяют и упаривают досуха на ротационном испарителе при t° = 40 °С.

Растворяют остаток в 10 мл н-гексана и переносят на заранее подготовленную колонку с силикагелем. Обмывают концентратор дважды 15 мл н-гексана, перенося гексановый экстракт на колонку. Гексановые экстракты, прошедшие через колонку, отбрасывают.

Элюируют Пропетамфос из колонки 80 мл смеси толуола с диэтиловым эфиром (75:25). Элюат из колонки собирают и упаривают досуха при t° = 40 °С. Остаток растворяют в 10 мл толуола или этилацетата и хроматографируют, вводя в хроматограф 2 - 5 мкл раствора.

2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов

2.6.1. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф «Цвет-550» или «Цвет-600» с термоионным детектором.

Неподвижная фаза: Инертон-супер с 3 % OV-17 (0,16 - 0,20 мм).

Колонка стеклянная длиной 2 м, внутренним диаметром 3 мм.

Температура термостата колонки - 200 °С;

испарителя - 240 °С;

детектора - 340 °С.

Скорость газа-носителя (азота) - 50 мл/мин.

Скорость водорода - 17 мл/мин.

Скорость воздуха - 200 мл/мин.

Показания аттенюатора - 16×10⁹ Ом.

Скорость движения диаграммной ленты - 240 мм/ч.

Хроматографируемый объем - 1 - 5 мкл.

Абсолютное время удерживания - 2 мин 27 с.

Линейный диапазон детектирования - 0,05 - 0,5 нг.

Пробы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют этилацетатом или толуолом.

Альтернативная хроматографическая фаза: Инертон-супер с 5 % ХЕ-60 (0,16 - 0,20 мм).

Колонка стеклянная длиной 2 м, внутренним диаметром 2 мм.

Температура термостата колонки - 180 °С.

испарителя - 250 °С;

детектора или

переходной камеры - 360 °С.

Скорость газа-носителя (азота) - 35 мл/мин.

Скорость водорода - 11 мл/мин.

Скорость воздуха - 140 мл/мин.

Показание аттенюатора - 16×10⁹.

Хроматографируемый объем - 1 - 5 мкл.

Абсолютное время удерживания - 3 мин 45 с.

Линейный диапазон детектирования - 0,05 - 0,5 нг.

Пробы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

2.6.2. Обработка результатов анализа

Содержание Пропетамфоса в пробах молока и мяса рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

X - содержание Пропетамофоса в пробе, мг/кг;

Н₁ - высота пика в образце, мм;

Н₀ - высота пика Пропетамфоса в стандарте, мм;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

m - масса или объем анализируемого образца, г или мл;

Р - содержание Пропетамфоса в аналитическом стандарте.

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

Содержание