МУК 4.1.1918-04
Определение остаточных количеств Пропетамфоса в молоке и мясе методом газожидкостной хроматографии

ГОСУДАРСТВЕННОЕ

САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ НОРМИРОВАНИЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

регламент ж. на молоко и молочную продукцию»

Федеральная служба но надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Сборник

методических документов, необходимых для обеспечения применения Федерального закона от 12 июня 2008 г. № 88-ФЗ «Технический регламент на молоко и молочную продукцию»

Часть 3

ББК 51.23 С23

С23 Сборник методических документов, необходимых для обеспечения применения Федерального закона от 12 июня 2008 г. № 88-ФЗ «Технический регламент на молоко и молочную продукцию».—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009.—71 с.

ISBN 5—7508—0771—1

ББК 51.23

В сборник включены методические документы, содержащие правила и методы исследований (испытаний) и измерений, а также правила отбора образцов для проведения исследований (испытаний) и измерений, в соответствии с постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации Г. Г. Онищенко от 08.12.2008 № 67.

Формат 60x88/16

Технический редактор Г. И. Климова Подписано в печать 25 02.09 Тираж 200 экз.

Псч. л. 4,5 Заказ 14

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д 18/20

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш , 19а Отделение реализации, тсл./факс 952-50-89

© Роспотребнадзор, 2009 © Федеральный центр гигиены н

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств Пропетамфоса в молоке и мясе методом газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.1918—04

1.    Разработаны Московской сельскохозяйственной академией им. К. А. Тимирязева, Учебно-научным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» (авторы В. А. Калинин, Т. С. Калинина, Н. В. Устименко).

2.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко.

3.    Введены впервые.

64

МУК 4.1.1918—04

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы ло надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

3 августа 2004 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств Пропетамфоса в молоке и мясе методом газожидкостной хроматографии

Методические указанна МУК 4.1.1918—04

1. Вводная часть

Фирма производитель: Каллиопе С.А.С.

Торговое название: Блотик.

Название действующего вещества по ИСО: Пропетамфос.

Название действующего вещества по ИЮПАК:    £-0-2-

изо пропоксикарбонил-1-метилвинил-О-метилэтил фосфорам идотиоат. Структурная формула:

ОСН3

н s=p-nhch₂ch₃

(СНзЬСНО^Х^О

II

О СН₃

Эмпирическая формула: C10H20NO4PS Молекулярная масса: 281,3

Физическое состояние технического продукта - желтоватая маслянистая жидкость.

Давление насыщенного пара 1,9 мПа при 20°С.

Температура кипения: 87—89 °С.

Плотность при 20 °С: 1,1294 г/мл.

65

Коэффициент перераспределения октанол/вода: logKo* - 3,82.

Растворимость: в воде - 110 мг/л; хорошо смешивается с ацетоном, этанолом, метанолом, гексаном, диэтиловым эфиром, диметилсульфок-сидом, хлороформом и ксиленом.

Стабилен при хранении и на свету. Г пиролитическая стабильность: DT50 П дней при pH 3; 1 год при pH 6 и 41 день при pH 9. В водной среде не разлагается в течение 70 ч.

рКа 13.67.

В почве сохраняется в течение 2—3 месяцев.

Краткая токсикологическая характеристика: Пропетамфос относится к веществам, опасным по острой пероральной (ЛД50 крысы -59,5—119,0 мг/кг) и ингаляционной токсичности (ЛД5₀ крысы - 4 ч -690—1 500 мг/м³), но умеренно опасным по дермальной (ЛД50 крысы -2 260—2 850 мг/кг).

В России гигиенические нормативы не установлены.

Область применения препарата. Пропетамфос - инсектицид контактного и кишечного действия из группы органических соединений фосфора с длительным защитным эффектом. Он эффективно подавляет развитие синантропных насекомых (тараканы, мухи, моли, муравьи, комары) и эктопаразитов животных (личинки оводов, клещи и др.). Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Блотик для применения в качестве ветеринарного препарата.

2. Методика определения Пропетамфоса в молоке и мясе методом газожидкостной хроматографии

2. /. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении Пропетамфоса методом газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора на фосфор после экстракции из анализируемой пробы ацетоном, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями и/или на колонке с силикагелем.

Идентификация проводится по времени удерживания. Количественное определение - методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1.

МУК 4.1.1918—04

Таблица 1

Метрологические параметры, р ~ 0,95, п - 20

Анали

зируемый

объект

Предел обнаружат», мг/кг (мг/л)

Диапазон

определяемых

концентраций,

мг/кг

Среднее

значение

определения,

%

Стандартное

отклонение,

S

Доверительный интервал среднего результата, %, ±

Молоко

0,01

0,01—0,50

85,3

1,322

85,30 ±0,62

Мясо

0,02

0,02—0,50

78,6

1,164

78,60 ±0,54

2Л.З. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в ветеринарии.

2.2. Реактивы, материалы, приборы, оборудование

2.2.1. Реастивы, растворы и материалы

Пропетамфос (фирма Каллиопе С.А.С.)

Азот, осч

Ацетон, чда

Ацетонитрил, чда

Водород газообразный из баллона

н-Гексан, чда

Насадки для набивных хроматографических колонок:

Инертон-супер с 3 % OV-17 (0,16—0,20 мм) Инертон-супер с 5 % ХЕ-60 (0,12—0,16 мм) Натрий серно-кислый, безводный, хч Натрий хлористый, хч

Силикагель-60, для колончатой хроматографии

Толуол, чда

Целит 545

Этилацетат, чда

Эфир диэтиловый, чда

Эфир петролейный

ГОСТ 9203-74 ГОСТ 6006-78 ТУ 6-09-3534—87 ГОСТ 3022-80 ТУ 6-09-3375—78

ГОСТ 4166-76 ГОСТ 4233-77

ГОСТ 5789-78

ГОСТ 22300-76 ГОСТ 6265-74 ТУ МХП-1867—48

2.2.2. Посуда и оборудование

Весы аналитические    ГОСТ 24104-80

Воронки делительные объемом 250 мл    ГОСТ 25336—82Е

Воронки для фильтрования стеклянные    ГОСТ 8613-75

67

Встряхиватель механический

Испаритель ротационный вакуумный ИР-1М

Колбы мерные, вместимостью 100 мл

Колонки хроматографические стеклянные,

длиной 2 м, внутренним диаметром 2—3 мм

Концентраторы грушевидные (конические)

НШ29 КГУ-100-14/19, ТС

Микрошприц МШ-1А

Палочки стеклянные

Пипетки мерные на 0,1; 1,0; 5,0; 10,0 мл

Пипетки мерные, вместимостью 0,1,1,0 и 5,0 мл

Стаканы стеклянные, емкостью 500 мл

Фильтры бумажные «красная лента»

Хроматограф газовый «Цвет-600» с термоионным

ТУ 64-1-1081—73 ТУ 25-11-917—74 ГОСТ 1770-74

ГОСТ 10394-72 ГОСТ 20292—74Е

ГОСТ 20292-74 ГОСТ 20292-74 ГОСТ 25336—82Е ТУ 6-09-016-78—86

детектором с пределом детектирования по фосфору (в метафосе) не ниже 8 х 10³ А/мг/с или аналогичный

2.3. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051—79 от 21.08.79), утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР. Пробы воды и масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °С; пробы яблок, зеленой массы рапса, а также клубней картофеля в полиэтиленовой таре - в морозильнике при температуре -18 °С; пробы зерна, семян рапса в бумажных или тканевых мешочках -в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор Пропетамфоса с концентрацией 100мкг/мл готовят растворением 0,0010 г вещества в мерной колбе на 100 мл в этилацетате. Раствор хранится при комнатной температуре в течение 10 дней.

Рабочие стандартные растворы Пропетамфоса с концентрацией 0,05; 0,1; 0,25 и 0,50 мкг/мл готовят из раствора, содержащего 100 мкг/мл вещества, соответствующим последовательным разбавлени-

МУК 4.1.1918—04

ем этилацетатом. Растворы хранятся при комнатной температуре в течение 10 дней.

2.4.2. Построение градуировочного графика

В испаритель хроматографа вводят по 1 мкл рабочего стандартного раствора Пропетамфоса с концентрацией 0,05; 0,1; 0,25 и 0,50мкг/мл. Строят градуировочный «рафик зависимости высоты хроматографического пика (мм) от содержания Пропетамфоса в хроматографическом объеме (нг).

2.4.3. Приготовление колонки

Суспензию 5 г безводного сульфата натрия в 20 мл гексана заливают в колонку с уложенной на дне ватой. После оседания сульфата натрия добавляют в колонку 6 г силикагеля и 5 г сульфата натрия. Промывают колонку 20 мл гексана, не допуская осушения верхнего слоя сорбента.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Молоко. Навеску молока 50 г интенсивно перемешивают в стакане на гомогенизаторе или высокоскоростной мешалке с 200 мл ацетона в течение 3 мин или встряхивают в течение 30 мин. Экстракт переносят в центрифужный стакан и центрифугируют в течение 5 мин при 3 000 об./мин. Супернатант переносят в концентратор. Осадок в стакане экстрагируют путем встряхивания с 50 мл ацетона. Экстракты объединяют в концентраторе и упаривают ацетон. Оставшуюся жидкость переносят в делительную воронку и экстрагируют Пропетамфос гексаном три раза по 20 мл. Гексановую фракцию пропускают через безводный серно-кислый натрий и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 5—10 мл этилацетата и аликвоту 3—5 мкл хроматографируют.

2.5.2 .Мясо. Навеску измельченного на мясорубке мяса 20—100 г помещают в стакан гомогенизатора, добавляют 20 г целита 545 и 200 мл ацетона и гомогенизируют при максимальной скорости в течение 3 мин. Переносят экстракт на воронку Бюхнера с бумажным фильтром и фильтруют под вакуумом. Остаток на фильтре возвращают в стакан гомогенизатора, добавляют 150 мл ацетона и гомогенизируют еще 2 мин. Встряхивают дополнительно субстрат на механическом встряхивателе 30 мин и фильтруют экстракт через воронку Бюхнера. Экстракты объединяют и упаривают ацетон на ротационном испарителе при t° « 40 °С.

МУК 4.1.1918—04

Остаток в концентраторе переносят 100 мл петролейного эфира в делительную воронку объемом 250 мл. Обмывают концентратор двумя порциями по 25 мл ацетонитрила, содержащего 5 % воды. Смыв переносят в делительную воронку. Встряхивают воронку 30 мин, дают жидкостям расслоиться и нижнюю фракцию сливают в концентратор. Повторяют экстракцию ацетонитрилом еще 3 раза (50 + 50 + 50 мл). Ацетонитрильные экстракты объединяют и упаривают досуха на ротационном испарителе при t° = 40 °С.

Растворяют остаток в 10 мл н-гексана и переносят на заранее подготовленную колонку с силикагелем. Обмывают концентратор дважды 15 мл н-гексана, перенося гексановый экстракт на колонку. Гексановые экстракты, прошедшие через колонку, отбрасывают.

Элюируют Пропетамфос из колонки 80 мл смеси толуола с диэти-ловым эфиром (75 :25). Элюат из колонки собирают и упаривают досуха при t° = 40 °С. Остаток растворяют в 10 мл толуола или этилацетата и хроматографируют, вводя в хроматограф 2—5 мкл раствора.

2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов

2.6.1. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф «Цвет-550» или «Цвет-600» с термоионным детектором.

Неподвижная фаза: Инертон-супер с 3 % OV-17 (0,16—0,20 мм). Колонка стеклянная длиной 2 м, внутренним диаметром 3 мм. Температура термостата колонки - 200 °С; испарителя - 240 °С; детектора - 340 °С.

Скорость газа-носителя (азота) - 50 мл/мин.

Скорость водорода - 17 мл/мин.

Скорость воздуха - 200 мл/мин.

Показания аггегаоатора - 16 х 10⁹ Ом.

Скорость движения диаграммной ленты - 240 мм/ч. Хроматографируемый объем - 1—5 мкл.

Абсолютное время удерживания - 2 мин 27 с.

Линейный диапазон детектирования - 0,05—0,5 нг.

Пробы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют этилацетатом или толуолом.

Альтернативная хроматографическая фаза: Инертон-супер с 5 % ХЕ-60 (0,16-0,20 мм).

МУК 4.1.1918—04

Колонка стеклянная длиной 2 м, внутренним диаметром 2 мм. Температура термостата колонки - 180 °С. испарителя - 250 °С; детектора или

переходной камеры - 360 °С.

Скорость газа-носителя (азота) - 35 мл/мин.

Скорость водорода - 11 мл/мин.

Скорость воздуха - 140 мл/мин.

Показание аттенюатора - 16 х 10⁹.

Хроматографируемый объем - 1—5 мкл.

Абсолютное время удерживания - 3 мин 45 с.

Линейный диапазон детектирования - 0,05—0,5 нг.

Пробы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/мл, разбавляют этил ацетатом.

2.6.2. Обработка результатов анализа

Содержание Пропетамфоса в пробах молока и мяса рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

_х_ Н_ГАУ И₀т-100

Р, где

X - содержание Пропетамофоса в пробе, мг/кг;

Я/ - высота пика в образце, мм;

И₀ - высота пика Пропетамфоса в стандарте, мм;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;

К объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; т - масса или объем анализируемого образца, г или мл;

Р - содержание Пропетамфоса в аналитическом стандарте.

3. Требовании техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

МУК 4.1.1481—03; МУК 4.1.1912—-04; МУК 4.1.1918—04

Содержание

Определение массовой концентрации йода в пищевых продуктах, продовольственном сырье, пищевых и биологически активных

добавках вольтамперомстрическим методом: МУК 4.1.1481—03_____

Определение остаточных количеств левоминетина

(Хлорамфеникола, Хлормицетина) в продуктах животного происхождения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и иммуноферментного анализа: МУК 4.1.1912—04 Определение остаточных количеств Пропетамфоса в молоке и мясе методом газожидкостной хроматографии: МУК 4.1.1918—04.........