ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

РЫБА

Метод определения остаточного содержания производных бензоилмочевины с помощью сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-спектрометрическим детектором высокого разрешения

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2016

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 300 «Рыбные продукты пищевые, кормовые. технические и упаковка»

3    УТВЕРЖДЕН приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 августа 2016 г. Ns 913-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 16 Федерального закона к О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

© Стандартинформ. 2016

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

II

8.1.2    Разделение проводят в режиме градиентного элюирования (приготовление растворов элю-ентов в соответствии с 6 2.1).

8.1.3    Хроматографическое разделение в отрицательном режиме ионизации

8.1.3.1 Условия хроматографического разделения в отрицательном режиме ионизации приведены в таблице 3.

Таблица 3 — Условия хроматографического разделения в отрицательном режиме ионизации

Время, мин Подвижная фаза «А,». % Подвижная фаза «Б,». % 0.0 50 50 1.0 50 50 4,0 — 100 о со — 100 8,1 50 50 15,0 50 50

8.1.3.2    Параметры настройки масс-слектрометрического детектора в отрицательном режиме ионизации:

-    напряжение в источнике — 400 В;

-    напряжение на капилляре — 1000 В;

-    давление азота в распылителе — 400 кПа;

-    скорость газа осушения — 4 дм³/мин;

-    температура газа осушения — 200 °С;

-    температура распылителя — 350 °С;

-    высокочастотное напряжение на воронке — 400 В;

-    амплитуда напряжения ВЧ — 400 В:

-    амплитуда напряжения ВЧ ячейки соударений — 550 В.

8.1.3.3    Параметры источника электрораспыления в отрицательном режиме ионизации приведены в таблице 4.

Таблица 4 — Параметры источника электрораспыления

Временной интервал, мин Амплитуда напряжения ВЧ охладителя ионов. Vpp Время транспортирования, МКС Время накопления ионов, мкс Скорость сканирования режим сканирования 0.5-7,0 45—55 1/1 35—40 1/1 12 2 Гц/ЬЬСЮ

8.1.3.4 Параметры воздействия на ионы в режиме широкодиапазонного соударения индуцированных диссоциаций (ЬЬСЮ) приведены в таблице 5.

Таблица 5 — Параметры работы масс-спектрометра в режиме ЬЬСЮ

Аналит Ион предшественник. m/z Дочерние ионы, m/z Время удерживания, мин Энергия соударений. эВ Тефлубенэурон 378,967 338,957/358,964 4.3 ±0.2 13-101/1 Дифлубензурон 309,024 289,019 3.6 ± 0.2 13-101/1 Дифлубензурон-04 313,024 293.044 3.6 ± 0.2 13-10 1/1

Примечание — Приведенные выше параметры хроматографического разделения и масс-слектрометрического детектирования могут отличаться в зависимости от используемой аппаратуры 8

ГОСТ P 57024—2016

8.1.4 Хроматографическое разделение в положительном режиме ионизации

8.1 4 1 Условия хроматографического разделения в положительном режиме ионизации приведены в таблице б.

Таблица 6 — Условия хроматографического разделения в положительном режиме ионизации

время, мин Подвижная фаза кА2». % Подвижная фаза «Б:». % 0.0 70 30 1.0 70 30 1.1 20 80 2.0 20 80 3.0 — 100 7.0 — 100 7.1 70 30 15.0 70 30

8.1    4 2 Параметры настройки масс-спектрометрического детектора в положительном режиме ионизации по 8.1.3.2 кроме параметра:

- амплитуда напряжения ВЧ ячейки соударений — 600 В

8.1    4.3 Параметры источника электрораспыления в положительном режиме ионизации приведены в таблице 7.

Таблица 7 — Параметры источника электрораспыления

Временной интервал, мин Амплитуда напряжения ВЧ охладителя ионов, Vpp Время транспортирования, мкс Время накопления ионов, мкс Скорость сканироеанил'режим сканирования 0.5-7 50—150 1/1 45—65 1/1 13 ЗГц/ЬЬСЮ

8.1 4 4 Параметры воздействия на ионы в режиме широкодиапазонного соударения индуцированных диссоциаций (ЬЬСЮ) приведены в таблице 8.

Таблица 8 — Параметры работы масс-спектрометра в режиме ЬЬСЮ

Акал ит Иои-лредшественник. т£ Дочерние ионы, nvz Время удерживания. МММ Mfwl Энергия соударений, эВ Эмамектин 886.531 152.119/302.195 3.95 ± 0.20 45/50/55 цикл Эприномектин 936.508 490.276/352,171 4.35 ± 0,20

Примечание — Приведенные выше параметры хроматографического разделения и масс-спектрометрического детектирования могут отличаться в зависимости от используемого оборудования

8.1.5 Контроль чувствительности масс-спектрометра осуществляют введением 10 мм³ градуировочного раствора G₄ (6.3.5) в инжектор хроматографа. Полученное соотношение сигнал/шум для каждого аналита должно быть не менее 50.

8.2 Построение градуировочной характеристики

Построение и расчет градуировочной характеристики проводят методом внутреннего стандарта в каждой серии анализов с помощью программного обеспечения масс-спектрометра в автоматическом режиме.

8.2.1 Проводят измерения не менее трех градуировочных растворов, приготовленных по 6.3.5. в порядке возрастания их концентраций.

9

8.2.2    В целях контроля стабильности градуировочной характеристики вместе с градуировочными растворами проводят дополнительное измерение «чистой» пробы с добавкой анализируемых соединений на градуировочном уровне 6₅

8.2.3    Вычисление площади пика проводят для наиболее интенсивного, дочернего иона анализируемых соединений и их внутренних стандартов. Для подтверждения наличия рассчитывают отношения площади пика двух дочерних ионов для каждого аналита в градуировочном растворе.

8.2.4    При построении градуировочной характеристики используют линейную регрессию вида у = ах. при этом коэффициент корреляции должен быть не менее 0,98.

8.2.5    Построение линейного градуировочного графика и расчет концентрации производных бен-зоилмочевины в анализируемых пробах выполняется системой обработки данных в автоматическом режиме.

8.3 СВЭЖХ-ВПМС/МС-измерение

8.3.1    Для определения остаточного содержания производных бензоилмочевины проводят СВЭЖХ-ВПМС/МС-анализ в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации применяемого оборудования в условиях хроматографических измерений с параметрами, указанными в 8.1.

8.3.2    СВЭЖХ-ВПМС/МС-анализ выполняют в виде серии измерений, включающей следующие образцы:

-    экстракты «чистых» проб, приготовленных по 7.2;

-    градуировочные растворы (см. 6.3.5);

-    экстракты анализируемых проб, приготовленных по 7.2.

Результаты измерений округляют до первого десятичного знака и выражают в микрограммах на килограмм.

8.3.3    Время удерживания производных бензоилмочевины определяют при анализе градуировочных растворов.

8.3.4    Отклонения относительных ионных интенсивностей в анализируемой пробе от относительных ионных интенсивностей, полученных при анализе градуировочных растворов, не должны превышать значений, указанных в таблице 9.

Таблица 9 —Допустимые отклонения относительных ионных интенсивностей

Относительная ионная интенсивность %, от основного пика Максимально допустимые отклонения для СВЭЖХ-МС/МС-детегтирования, % Св 50 ±20 Се 20 до 50 вклюм ±25 Се 10до20включ ±30 Менее 10 ±50

9 Обработка результатов измерений

9.1    В соответствии с данными, полученными при анализе градуировочных растворов, проводят обработку хроматограмм с использованием программного обеспечения, получая значения концентрации аналитов в анализируемой пробе.

9.2    Содержание ьго аналита Х_г мкг/кг, вычисляют по формуле:

-С_ГУ,

т,

где С, — концентрация аналита в анализируемой пробе, найденная по градуировочному графику, нг/см³; V/ — объем, до которого разбавлена проба, см³; т_t — масса анализируемой пробы, г.

9.3 За окончательный результат измерений содержания производных бензоилмочевины принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, выполненных в

Ю

ГОСТ P 57024—2016

условиях повторяемости, округленное до первого десятичного знака и выраженное в микрограммах на килограмм (мкг/кг).

10 Метрологические характеристики

Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение измерений содержания производных бензоилмочевины с расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата к = 2. указанной в таблице 10.

Таблица 10 — Показатели точности методики при проведении измерений содержания производных бензоилмочевины

Аналит Диапазон измерений содержания соединений. МКГ/КГ Значение относительной раширенной неопределенности t U при коэффициенте охвата к « 2. % Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости) аг % Показатель воспроизводимости (относительное стандартное отклонение воспроизводимости) ая. % Предел повторяемости г. % (при Р = 0.95. п • 2) Дифлубемзурол От 0.5 до 5.0 включ 25 5 10 14 Св 5.0 до 20,0 включ 20 3 8 8 Тефлубемэурол От 1.0 » 5.0 включ 70 26 33 72 Св 5.0 до 20.0 включ 33 10 15 28 Эмамектин От 5.0 до 100,0 ВКЛЮЧ 80 32 46 73 Св 100,0 до 200.0 ВКЛЮЧ 55 14 26 39

11 Оформление результатов измерений

Содержание г- го производного бензоилмочевины. мкг/кг, представляют в виде:

Х±0.01ЦХ.    (3)

где X — среднее арифметическое значение вычислений двух параллельных измерений содержания но аналита в анализируемой пробе по 9 2, 9.3. мкг/кг;

U — значение относительной расширенной неопределенности содержания но аналита для соответствующего диапазона измерений. % (в соответствии с таблицей 10).

12 Контроль стабильности результатов измерений

Контроль стабильности результатов измерений в пределах лаборатории осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6 с использованием контрольных карт Шухарта.

и

УДК 639.38:614.31:543.06:006.354

Ключевые слова: рыба, производные бензоилмочевины. сверхвысокоэффективная жидкостная хроматография с времяпролетным масс-спектрометрическим детектором высокого разрешения, дифлубен-зурон, тефлубензурон, эмамектин

Редактор Н Н Мигунова Корректор Е Р. Ароян Компьютерная верстка Ю В Поповой

Сдано в набор 22 08 2016    Подписано в печать 12 09 2016 Формат 60 « &4’/₈ Гарнитура Ариал

Уел пен л. 1,86

Набрано в ИД «Юриспруденция». 115419. Москва, ул Ордхоникидае. 11 wwwjunsizdat ru y-feook@mai ги

Издано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ». 123995. Мосжва. Гранатный пер . 4 www postinfo ru infoQgostmfo ru

ГОСТ Р 57024-2016

Содержание

1    Область применения..................................................................1

2    Нормативные ссылки..................................................................1

3    Сущность метода.....................................................................2

4    Требования безопасности и условия выполнения измерений.................................2

5    Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы............................2

6    Подготовка к проведению измерений....................................................4

6.1    Подготовка лабораторной посуды и реактивов.........................................4

6.2    Приготовление растворов..........................................................4

6.3    Приготовление градуировочных растворов производных бензоилмочевины.................4

7    Отбор и подготовка проб...............................................................6

7.1    Отбор проб......................................................................6

7.2    Подготовка проб..................................................................6

8    Порядок выполнения анализа..........................................................7

8.1    Условия хроматографических измерений.............................................7

8.2    Построение градуировочной характеристики..........................................9

8.3    СВЭЖХ-ВПМС/МС-измерение.....................................................10

9    Обработка результатов измерений.....................................................10

10    Метрологические характеристики.....................................................11

11    Оформление результатов измерений..................................................11

12    Контроль стабильности результатов измерений..........................................11

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

РЫБА

Метод определения остаточного содержания производных бензоилмочевины с помощью сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-спектрометрическим детектором высокого разрешения

Fish.

Method for determination of the residual content of denvatives benzoylureas using ultra highly liquid chromatography — quadrupole-time-of-flight mass spectrometry

Дата введения — 2017—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на рыбу и устанавливает метод сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-спектрометрическим детектором высокого разрешения (далее — СВЭЖХ-ВПМС/МС) для определения остаточного содержания производных бензоилмочевины в диапазоне измерений для дифлубензурона (ДФБ) от 0.5 до 20.0 мкг/кг. тефлубензурона (ТФБ) от 1 до 20 мкг/кг. эмамектина (Эма) от 5 до 200 мкг/кг.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ OIML R 76-1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования Испытания

ГОСТ 1770 (ИСО 1042, ИСО 4788) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2603 Реактивы Ацетон. Технические условия ГОСТ 5848 Реактивы Кислота муравьиная Технические условия ГОСТ 6709 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 6995 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 31339 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ Р ИСО 5725-6 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячно издаваемого информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год

Издание официальное

Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия) Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку

3    Сущность метода

Количественное определение остаточного содержания производных бензоилмочевины (анали-тов) проводят методом внутреннего стандарта по площадям пиков идентифицированных соединений с помощью градуировочной характеристики сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-спектрометрическим детектированием высокого разрешения в режиме широко-диапазонного соударения индуцированных диссоциаций (СВЭЖХ-ВПМС/МС).

4    Требования безопасности и условия выполнения измерений

4.1    Применяемые в работе реактивы относятся к веществам 1-го и 2-го классов опасности по ГОСТ 12.1.007, при работе с ними необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.

4.2    Помещения, в которых проводят подготовку и анализ проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией.

4.3    Приготовление градуировочных растворов проводят в вытяжном шкафу

4.4    К выполнению измерений методом СВЭЖХ-ВПМС/МС допускаются лица, владеющие техникой СВЭЖХ-ВПМС/МС и изучившие инструкции по эксплуатации применяемой аппаратуры.

4.5    При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    температура окружающего воздуха.......от 20 до 30 °С;

-    атмосферное давление................ от 84 до 106 кПа;

- напряжение в питающей электросети ____от 200 до 240 В;

-    частота переменного тока.............. от 49 до 51 Гц;

-    относительная влажность воздуха........от 40 до 80 %.

5    Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы

5.1 Для определения остаточного содержания производных бензоилмочевины применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и посуду:

-    весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с пределами допускаемой погрешности ± 0,001 г;

-    весы микроаналитические с наибольшим пределом взвешивания 80 г, пределом абсолютной допускаемой погрешности не более ± 0,01 мг;

-    масс-спектрометр с времяпролетным детектором высокого разрешения и диапазоном измерений от 50 до 3000 атомных единиц массы (а. е. м ). массовым разрешением не менее 3000, точностью измерения массы не менее 0.5 а. е. м., режимом получения ионов фрагментов;

-    баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 Гц и объемом не менее 1 дм³;

-    встряхиватель (шейкер) вортексного типа с вставкой для одной пробирки и диапазоном скорости от 150 до 2500 об/мин;

-    встряхиватель (шейкер) переворачивающий орбитального типа с адаптером для пробирок и диапазоном скорости от 20 до 100 об/мин;

-    измельчитель-гомогенизатор лабораторный;

-    камеру лабораторную морозильную с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от минус 20 °С до минус 40 °С;

-    колонку хроматографическую длиной 50 мм и диаметром 1 мм с обращеннофазным сорбентом, диаметром частиц сорбента не более 1,7 мкм;

ГОСТ P 57024—2016

-    компьютер с установленным программным обеспечением для управления масс-спектрометром и обработки результатов измерений;

-    компрессор воздушный;

-    систему сверхвысокоэффективную жидкостную хроматографическую, состоящую из бинарного насоса со смесителем, термостата хроматографической колонки, обеспечивающего температуру нагрева до (50 ± 1) °С;

• систему получения деионизованной воды высокой чистоты;

-    систему упаривания растворителей закрытого типа, обеспечивающую поддержание температуры не менее 50 °С;

-    устройство вакуумное для твердофазной экстракции;

-    холодильник бытовой с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от 0 до 5 °С;

-    центрифугу лабораторную рефрижераторную со скоростью вращения не менее 15 ООО об/мин и диапазоном температур от 4 до 25 °С. с адаптерами для пробирок вместимостью 15 см^{1 2} и микроцен-трифужных пробирок вместимостью 1.5 см²;

-    шкаф сушильный лабораторный с рабочим диапазоном температур от 50 до 200 °С;

-    картриджи для твердофазной экстракции вместимостью не менее 3 см², заполненные 60 мг сбалансированного гидрофильно-липофильного сорбента с размерами частиц от 30 до 60 мкм;

-    пробы, не содержащие производных бензоилмочевины. подготовленные и проанализированные ранее в соответствии с требованиями разделов 7 и 8 («чистые» пробы)¹);

-    фильтры нейлоновые мембранные с размером диаметра пор не более 0.2 мкм;

-    виалы (флаконы) стеклянные для автоматического устройства ввода проб вместимостью 2 см² с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками 9 мм;

-    колбы 1 -10(1000)-1 по ГОСТ 1770;

-    пипетки одноканальные переменной вместимости 20—100 мм², 200—1000 мм²,500—5000 мм² с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ± 1 %;

-    пробирки полипропиленовые вместимостью 15 см². 50 см² с завинчивающимися крышками;

-    конические микроцентрифужные пробирки с крышкой вместимостью 1.5 см²;

-    шприцы одноразовые вместимостью 2 см²;

-    цилиндры 1-25 (500.1000)-1 по ГОСТ 1770.

5.2    При определении остаточного содержания производных бензоилмочевины применяют следующие реактивы:

-    ацетон по ГОСТ 2603;

-    ацетонитрил для ВЭЖХ-МС с массовой долей основного вещества не менее 99,9 %;

-    кислоту муравьиную по ГОСТ 5848, ч. д. а.;

-    метанол по ГОСТ 6995, х. ч.;

-    оксид алюминия, нейтральный для колоночной хроматографии с размером зерна от 0.050 до 0.2 мм;

-    воду деионизованную для ВЭЖХ. полученную с использованием системы производства ультра-чистой воды из дистиллированной воды по ГОСТ 6709.

5.3    При определении остаточного содержания производных бензоилмочевины в качестве образцов сравнения применяют следующие соединения;

1)    Для приготовления исходных растворов с массовой долей основного вещества:

-    дифлубензурон — не менее 98 %;

-    тефлубензурон — не менее 90 %;

-    эмамектин — не менее 95 %.

2)    Для приготовления исходных растворов внутренних стандартов с массовой долей основного вещества:

-    дифлубензурон-04 — не менее 95 %;

-    эприномектин — не менее 90 %.

5.4    Допускается применение других средств измерений и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также аппаратуры, реактивов и материалов, по качеству не хуже вышеуказанных.

6 Подготовка к проведению измерений

6.1    Подготовка лабораторной посуды и реактивов

6.1.1    Мойку и сушку посуды проводят в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо использовать отдельные сушильные шкафы

6.1.2    Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с последующей последовательной промывкой органическими растворителями: метанолом (однократно), ацетоном (дважды).

6.1.3    Процедуру промывки органическими растворителями следует проводить в вытяжном шкафу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105 до 110 °С.

6.1.4    Каждую новую партию реактивов проверяют на отсутствие контаминации анализируемыми соединениями путем проведения холостого опыта в соответствии с процедурой анализа.

6.2 Приготовление растворов

6.2.1    Приготовление подвижных фаз А, и Б, для СВЭЖХ при отрицательном режиме ионизации

6.2.1.1    В качестве подвижной фазы А, используют деионизованную воду.

6.2.1.2    В качестве подвижной фазы Б, используют ацетонитрил.

6.2.2    Приготовление подвижных фаз Aj и Б₂ для СВЭЖХ при положительном режиме ионизации

6.2.2.1 Для приготовления подвижной фазы А₂ в мерную колбу вместимостью 1000 см³ приливают 999 см³ деионизованной воды, добавляют 1 см³ муравьиной кислоты, перемешивают.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 1 мес.

6.2.2    2 Для приготовления подвижной фазы Б2 в мерную колбу вместимостью 1000 см³ приливают 499 см³ ацетонитрила, 500 см³ метанола, добавляют 1 см³ муравьиной кислоты.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 6 мес.

6.2.3    Приготовление вспомогательного раствора метанола с деионизованной водой в объемном соотношении 1 :1 (ВР1)

В полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см³ вносят 25 см³ метанола и 25 см³ деионизованной воды, перемешивают.

6.2.4    Приготовление вспомогательного раствора ацетонитрила с деионизованной водой в объемном соотношении 1 :1 (ВР2)

В полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см³ вносят 25 см³ ацетонитрила и 25 см³ деионизованной воды, перемешивают.

Срок хранения вспомогательных растворов при комнатной температуре — не более 1 нед.

6.3 Приготовление градуировочных растворов производных бензоилмочевины

Для приготовления исходных растворов веществ С₀ с концентрацией 500 мкг/см³ рассчитывают навеску т, эквивалентную 5,0 мг дифлубензурона, тефлубензурона и эмамектина, исходя из массовой доли в исходном веществе по формуле (1), после чего переносят каждое вещество по отдельности в мерные колбы вместимостью 10 см³. Доводят до метки метанолом, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин.

Mq-100%

Мс

где т₀ — масса основного вещества, г;

Mq — молярная масса соли анализируемого соединения (для анализируемых соединений, растворы которых готовят из солей), г/моль;

М — молярная масса анализируемого соединения, г/моль; с — массовая доля анализируемого соединения в исходном веществе, %.

6.3.1 Приготовление исходных растворов С₀ дифлубензурона, тефлубензурона, эмамекти-

^на (^С0Дфб' ^С0Тфб> ^С0Эма)

Для приготовления исходных растворов С₀ концентрации 500 мкг/см³ берут навески дифлубензурона. тефлубензурона, эмамектина в пересчете на 5 мг чистого вещества по формуле 1.

4

ГОСТ P 57024—2016

Каждое вещество переносят по отдепьности в мерные колбы вместимостью 10 см³, дифлубензу-рон и тефлубензурон доводят до метки ацетоном, а эмамектин — метанолом, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

Срок хранения растворов при температуре от минус 30 °С до минус 40 °С — не более 1 года.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

6.3.2 Приготовление рабочих растворов дифлубензурона, тефлубензурона, эмамектина

6.3.2.1    Приготовление рабочих растворов С_1Дфб . С_1Тфб. С_1Эма

Для приготовления рабочих растворов C_1flt()6, C_1T(>6, С_1Эма концентрации 50 мкг/см³ в мерные колбы вместимостью 10 см³ вносят по отдепьности по 1 см³ Сод^. С_0Тфб. С_0Эма и доводят до метки колбы с С_1Дфб, С_1Тф0 — ацетоном, колбу с С_1Эма — метанолом. Перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

6.3.2.2    Приготовление рабочего раствора С₂

В мерную колбу вместимостью 10 см³ вносят по 1 см³ С_1Дфб и C_1T<J>6. доводят до метки ацетоном, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

Концентрация дифлубензурона. тефлубензурона в растворе С₂ — 5 мкг/см³.

6.3.2.3    Приготовление рабочего раствора С₃

В мерную колбу вместимостью 10 см³ вносят 0.2 см³ С₂ (см. 6.3.2.2) и 0.2 см³ С_1Эыа (см. 6.3.2.1). доводят до метки метанолом, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

Концентрация дифлубензурона. тефлубензурона в растворе С₃ — 0.1 мкг/см³. эмамектина — 1 мкг/см³.

6.3.2    4 Приготовление рабочего раствора С₄

В мерную колбу вместимостью 10 см³ вносят 1 см³ раствора С₃ (см. 6.3.2.3). доводят до метки метанолом, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

Концентрация дифлубензурона. тефлубензурона в растворе С₄ — 0.01 мкг/см³. эмамектина — 0.1 мкг/см³.

Растворы хранят при температуре от минус 30 ^вС до минус 40 °С.

Срок годности растворов С_1Дфб. С_1Тфб . С_1Эма — не более 1 года. С₂—С₄ — не более 6 мес.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

6.3.3    Приготовление исходных растворов О₀ внутренних стандартов дифлубензурона-04 и эприномектина (О_0Диф, О_0Эпр)

Для приготовления исходных растворов внутренних стандартов О₀ концентрации 500 мкг/см³ взвешивают 0.005 г дифлубензурона-04. 0.005 г эприномектина. Каждое вещество переносят по отдельности в мерные колбы вместимостью 10 см³. Дифлубензурон-04 доводят до метки ацетоном, элри-номектин — метанолом, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

Срок хранения растворов при температуре от минус 30 °С до минус 40 °С — не более 1 года.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

Внутренние стандарты для производных бензоилмочевины выбирают в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1 — Соответствие между аналогами и внутренними стандартами

Наименование аналита Наименование внутреннего стандарта Дифлубензурон Дифлубензурон-04 Тефлубензурон Эмамектин Эприномектин

6.3.4    Приготовление рабочих растворов внутренних стандартов

6.3.4.1    Приготовление рабочих растворов 0_1Диф. 0_1Эпр

Для приготовления рабочих растворов 0_1Диф и 0_1Эпр концентрации 50 мкг/см³ в мерные колбы вместимостью 10 см³ вносят по отдельности по 1 см³О₀д_иф. О₀э_пр (см. 6.3.3) и доводят до метки колбу с 0_1Диф — ацетоном, колбу с 0_1Эпр — метанолом. Перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

6.3.4.2    Приготовление рабочего раствора 0_2Диф

Для приготовления рабочего раствора 0_2Диф концентрации 5 мкг/см³ в мерную колбу вместимостью 10 см³ вносят 1 см³£)_1Диф (см. 6.3.4.1) и доводят до метки метанолом. Перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

6.3.4.3    Приготовление рабочего раствора D₃

Для приготовления рабочего раствора 0₃ в мерную колбу вместимостью 10 «л³ вносят 0.2 см³ 0_2Диф(см. 6.3.4.2) и 1.6 см³ 0_1Эпр (см. 6.3.4.1), доводят до метки метанолом. Перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

Растворы хранят при температуре от минус 30 °С до минус 40 °С.

Срок хранения растворов D, д^. 0_1Эпр не более 1 года, растворов D_{2 Диф}. 0₃ — не более 3 мес.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

6.3.5    Приготовление матричных градуировочных растворов G, — G₆

Матричные градуировочные растворы G, — G₆ готовят в полипропиленовых пробирках вместимостью 15 см³ из чистых проб массой 1.0 г. в которые вносят рабочий раствор внутренних стандартов и рабочий раствор определяемых аналитов в соответствии с таблицей 2.

Таблица 2 — Приготовление матричных градуировочных растворов G, — Ge

Обозначение и массовая концентрация приготовляемого матричного градуировочного раствора (в соотношении Дфб.ТфбЭма) Вносимый объем рабочего раствора, см3 (бЙ.З) Од (6324) Оэ (6343) G, (20/200 нг/см3) 0.2 — 0.05 G2 (10/100 мг/см3) 0.1 — 0.05 G3(5/50 нг/см3) 0.05 — 0.05 G4 (2/20 нг/см3) 0.02 — 0.05 <35 (1/10 нг/см3) — 0.1 0.05 Ge (0.5/5 нг/см3) — 0.05 0.05

Пробирки встряхивают в шейкере 1 мин. и проводят последующую обработку образца согласно разделу 7.

Растворы G, — G₆ хранят при температуре от 2 до 4 °С. Срок хранения — не более 1 сут.

7 Отбор и подготовка проб

7.1    Отбор проб

7.1.1    Отбор проб рыбы — по ГОСТ 31339.

7.1.2    Отобранные пробы при отсутствии возможности испытания в день отбора замораживают и хранят при температуре минус 25 °С до проведения исследования, но не более 90 сут.

7.2    Подготовка проб

7.2.1 Экстракция проб

Пробу мышечной ткани измельчают на гомогенизаторе. Далее обработку проводят в соответствии с рисунком 1.

6

Взвешивают 1,00 г гомогенизированной ткани и помещают в полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см³ Вносят 0.05 см³ рабочего раствора внутренних стандартов О_э (6 3 4 3), перемешивают в шейкере 5 с и выдерживают в темноте при комнатной температуре 5 мин

Приливают 6 см³ ацетонитрила, закрывают крышкой и устанавливают на 30 мин на переворачивающий шейкер для экстракции при 45 об/мин.

Центрифугируют при 4000 об/мин и температуре 20 °С в течение 15 мин

В новую полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3 вносят 1,0 г оксида алюминия и приливают над осад емкую жидкость

Экстрагируют на переворачивающем шейкере при 45 об/мин в течение 5 мин. Затем центрифугируют при 4000 об/мин и температуре 10 °С в течение 10 мин

Органический слой, расположенный сверху, переносят в новую полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3, упаривают до 1 см3 в токе азота при температуре 40 °С

К остатку добавляют 2 см³ деионизованной воды, перемешивают на шейкере в течение 10 с и центрифугируют при 4750 об/мин и температуре 10 °С в течение 15 мин

Верхний слой раствора очищают методом твердофазной экстракции (ТФЭ) по 7 2 2

Рисунок 1 — Экстракция проб

7.2.2 Очистка подготовленных проб методом ТФЭ

Для очистки подготовленных проб используют картридж, установленный в блок вакуумного устройства, предварительно активированный 2 см³ метанола и уравновешенный 2 см³ деионизированной воды. Пропускают через картридж пробу, полученную в соответствии с 7.2.1. Промывают картридж, последовательно пропуская 2 см³ деионизированной воды. 3 см³ вспомогательного раствора ВР1 (6.2.3) и сушат его в вакууме компрессора. Элюируют определяемые вещества в полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см³ с помощью 3 см³ ацетонитрила. Упаривают элюат досуха при температуре 40 °С. Перерастворяют в 1 см³ вспомогательного раствора ВР2 (6.2.4), перемешивают на шейкере вортексного типа, помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин. и снова перемешивают.

Содержимое переливают в микроцентрифужную пробирку и центрифугируют в течение 20 мин. при 15000 об/мин при температуре 10 °С. При необходимости фильтруют шприцем через мембранный фильтр в виалу для СВЭЖХ-ВПМС/МС-анализа.

8 Порядок выполнения анализа

8.1    Условия хроматографических измерений

8.1.1    Масс-спектрометр включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры, рекомендуемые изготовителем хроматографических колонок. Например, для колонки диаметром 1 мм, длиной 50 мм, с обращеннофазным сорбентом и размером частиц 1,7 мкм применяют следующие хроматографические условия:

-    температура колонки — 30 °С;

-    скорость потока подвижной фазы — 0.1 см³/мин;

-    обьем вводимой пробы — 10 мм³;

-    температура в отсеке устройства ввода проб — 20 °С.

7

1

¹¹ Срок хранения «чистых» проб при температуре от минус 20 °С до минус 40 °С — не более 3 мес

2