ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ
НАЦИОНАЛЬНЫЙ
СТАНДАРТ
РОССИЙСКОЙ
ФЕДЕРАЦИИ
ПРОПОЛИСМетод определения флавоноидных соединений
Издание официальное
Москва Стандарти нформ 2014
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением «Научно-исследовательский институт пчеловодства» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ НИИ пчеловодства Россельхо-
закадемии)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 432 «Пчеловодство»
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. № 1580-ст
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0-2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (gost.ru)
© Стандартинформ, 2014
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИПРОПОЛИСМетод определения флавоноидных соединений
Propolis. Method for determination offlavonoid compositions
Дата введения — 2014—01—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на прополис и устанавливает метод определения флавоноидных соединений.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения
ГОСТ Р 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия ГОСТ Р 52001-2002 Пчеловодство. Термины и определения
ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования.
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 12.4.103-83 Система стандартов безопасности труда. Одежда специальная защитная, средства индивидуальной защиты ног и рук. Классификация
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки ижарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 28886-90 Прополис. Технические условия
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и
Издание официальное
по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте приведены термины по ГОСТ Р ИСО 5725-1, ГОСТ Р 52001.
4 Отбор и подготовка пробы
4.1 Отбор проб — по ГОСТ 28886 (подраздел 3.1).
4.2 Прополис в комках, брикетах измельчают. Анализируемую пробу прополиса тщательно перемешивают не менее 3 мин.
5 Сущность метода
Метод основан на спектрофотометрическом определении оптической плотности комплексов, образующихся при взаимодействии флавоноидов, входящих в состав продуктов пчеловодства, схпори-дом алюминия. В качестве стандарта служит рутин. Определение массовой доли суммы флавоноидов в продуктах пчеловодства в пересчете на рутин следует проводить в интервале длин волн 408—420 нм.
6 Требования безопасности проведения работ
6.1 При проведении измерений необходимо соблюдать требования электробезопасности при работе с приборами по ГОСТ Р 12.1.019.
6.2 Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения поГОСТ 12.4.009.
6.3 При выполнении анализов необходимо выполнять требования безопасности при работе с реактивами по ГОСТ 12.4.103.
6.4 К проведению анализов допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже среднего технического образования, владеющие навыками проведения анализов и изучившие инструкции по эксплуатации используемой аппаратуры.
7 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы
7.1 Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания+0,001 г по ГОСТ Р 53228.
7.2 Спектрофотометр, позволяющий проводить измерение оптической плотности при длине волны 390—420 нм.
7.3 Кюветы кварцевые с толщиной слоя раствора, поглощающего свет, равной 1 см.
7.4 Горелка газовая, электроплитка или колбонагреватель по ГОСТ 14919.
7.5 Колбы мерные наливные 2-25-1,2-50-1,2-100-1 по ГОСТ 1770.
7.6 Колбы конические Кн-1-100-14/23, Кн-1-250-14/23 по ГОСТ 25336.
7.7 Воронки В-36-60 или В-36-80 по ГОСТ25336.
7.8 Механические дозаторы 1-канальные с варьируемыми объемами дозирования 100-1000 мкп, 1—5 см31-го класса точности.
7.9 Пипетки 2-1-1-1,2-2-25,2-2-5 по ГОСТ 29227.
7.10 Баня водяная лабораторная с электрическим или огневым подогревом.
7.11 Цилиндры мерные 1-100 поГОСТ 1770.
7.12 Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
7.13 Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652, с массовой долей 96 %.
7.14 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
7.15 Алюминий хлористый 6-водный [А1С13 • 6Н20], с содержанием основного вещества не ниже 99 %, Пика, каталожный номер 7784-13-6.
7.16 Рутин, ГСО.
2
Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.
8 Подготовка к выполнению измерений8.1 Приготовление 5 % раствора хлористого алюминия в 60 %-ном этаноле
В коническую колбу вместимостью 250 см3 по ГОСТ25336 взвешивают (5,000 ± 0,001) гхлористого алюминия, растворяют в (50,0 ± 0,5) г 60 %-ного этанола, массу раствора доводят до (100,00 ± 0,01) г 60 %-ным этанолом и тщательно перемешивают. Срок хранения раствора — не более одного года.
8.2 Приготовление раствора ГСО рутина
(0,050 ± 0,001) г ГСО рутина взвешивают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3 по ГОСТ 1770, добавляют 40 см3 60 %-ного этанола, нагревают до 50 °С—60 °С и выдерживают до полного растворения рутина. Затем охлаждают до комнатной температуры, доводят до метки 60 %-ным этанолом и тщательно перемешивают.
8.3 Построение калибровочного графика
В две мерные колбы вместимостью 25 см3 по ГОСТ 1770 дозатором вносят по 0,2 (0,4; 0,6; 0,8,1,0 и 1,2) см3 раствора рутина по 6.7.2.2 концентрацией 1 мг/см3; в одну колбу добавляют 4 см3 раствора хлористого алюминия по 6.7.2.1 (рабочий раствор), доводят до метки обе колбы 60 %-ным этанолом и тщательно перемешивают. Через 30 мин измеряют оптическую плотность рабочих растворов относительно растворов сравнения (рутин без хлористого алюминия) при длине волны максимума поглощения в интервале 390—420 нм в кюветах с толщиной оптического слоя 1 см.
При построении калибровочного графика на оси абсцисс откладывают количество рутина в миллиграммах, содержащегося в 25 см3 рабочего раствора, а по оси ординат — максимальное значение оптической плотности в указанном диапазоне.
Калибровочный график должен быть линейным и проходить через начало координат.
9 Проведение измерений9.1 Подготовка пробы
(1,000 + 0,001) г прополиса взвешивают в конической колбе вместимостью 10 см3 по ГОСТ 25336, добавляют (30,0 + 0,5) см3 60 %-ного этанола, колбу присоединяют кобратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин, периодически встряхивая для смывания частиц прополиса со стенок. Надосадочную жидкость фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 см3 так, чтобы частицы прополиса не попали на фильтр.
Экстракцию флавоноидов повторяют еще дважды в описанных выше условиях, прибавляя костат-ку по (30,0 + 0,1) см3 60 %-ного этанола. Фильтраты объединяют, охлаждают до (20 + 3) °С и доводят до метки (100,00 + 0,01) см3 60 %-ным этанолом.
9.2 Проведение испытания
В две мерные колбы вместимостью 25 см3 дозатором вносят по (5,00 + 0,01) см3 экстракта по 6.7.2.4. В одну колбу (анализируемый раствор) добавляют (4,0 + 0,1) см3 раствора хлористого алюминия по 6.7.2.1, обе колбы доводят до метки 60 %-ным этанолом и тщательно перемешивают. Через 30 мин измеряют оптическую плотность анализируемого раствора относительно раствора сравнения (экстракт без хлористого алюминия) при длине волны максимума поглощения в интервале 390—420 нм в кюветах с толщиной оптического слоя 1 см.
По калибровочному графику, зная оптическую плотность анализируемого раствора, находят количество рутина в мг в 25 см3 раствора.
10 Обработка и представление результатов испытаний
10.1 Массовую долю флавоноидных соединений (в пересчете на рутин) Х1, %, вычисляют по формуле
Xi = С-100'100 • /Т7 • 5, (1)
где С — количество рутина в 25 см3, найденное по калибровочному графику, мг;
3
100 — объем экстракта, см3;
100 — пересчет в проценты, %; т — масса прополиса, взятого для анализа, г;
5 — объем экстракта, взятого для анализа, см3.
10.2 За окончательный результат определения флавоноидных соединений принимают среднеарифметическое значение двух параллельных измерений, полученных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости, рассчитанное по формуле
|Х-Х2|<Г, (2)
гдеХ, иХ2 — результаты двух параллельныхопределений флавоноидных соединений кислот, полученных в условиях повторяемости, %; готн — значение предела повторяемости, приведенное в таблице 1,%.
10.3 Расхождение между результатами определения флавоноидных соединений, полученными в двух лабораториях в условиях воспроизводимости, должно соответствовать условию приемлемости по формуле
|Х| — Х2| < R, (3)
гдеХ1 иХ2 — результаты двухопределений флавоноидных соединений, полученных в условиях воспроизводимости, %;
Я?отн — значение предела воспроизводимости, приведенное в таблице 1, %.
Таблица 1 —Диапазоны измерений, показатели точности и прецизионности метода определения флавоноидных соединений при доверительной вероятности Р = 0,95 |
Наименование показателя |
Диапазон
измерений |
Предел
повторяемости
'отн’ % |
Предел
воспроизводимости
Roth. % |
Показатель точности (границы относительной погрешности) + 8, % |
Массовая доля флавоноидных соединений (в пересчете на рутин) |
0,1 до 10 |
2 |
8 |
6 |
|
10.4 Форма представления результатов
Результат содержания флавоноидных соединений (в пересчете на рутин) в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде
(Хср + А) %, при Р = 0,95,
где Д— абсолютная погрешность результатов измерений, %, вычисляемая по формуле
Д= 5Хср • 0,01 или А = 5- /Сср • 0,01, (4)
где 5 — относительная погрешность измерений флавоноидных соединений по таблице 1, %.
10.5 Результаты испытаний оформляют протоколом.
4
УДК 638.178:006.354 ОКС 65.140 С52
Ключевые слова: прополис, флавоноидные соединения, в пересчете на рутин, метрологические характеристики
5
Редактор Л.В. Коретникова Технический редактор Е.В. Беспрозванная Корректор Р.А. Ментова Компьютерная верстка И.А. Налейкиной
Сдано в набор 20.06.2014. Подписано в печать 04.07.2014. Формат 60 х 84^. Гарнитура Ариал. Уел. печ. л. 0,93. Уч.-изд. л. 0,60. Тираж 106 экз. Зак. 2509.
Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru info@gostinfo.ru