ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

ПРЕМИКСЫ

Метод определения содержания витамина К₃

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2009

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0 — 2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (ОАО «ВНИИКП»)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 4 «Комбикорма, белково-витаминно-минеральные концентраты, премиксы»

3    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 8 декабря 2008 г. № 364-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены наспюящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ. 2009

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

II

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРЕМИКСЫ

Метод определения содержания витамина К₃

Premixes.

Method for determination of vitamin K₃

Дата введения — 2010—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на премиксы и устанавливает фотометрический метод определения витамина К₃.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ Р 51419-99 (ИСО 6498—98) Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Подготовка испытуемых проб

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 83-79 Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 1942-86 1,2-Дихлорэтан технический. Технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 3760-79 Реактивы. Аммиак водный. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13496.0-80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648—77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Издание официальное

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Диапазоны измерений содержания витамина К₃ и метрологические характеристики метода

Диапазоны измерений содержания витамина К₃ и значения показателей повторяемости, воспроизводимости и точности при вероятности Р= 0.95 приведены в таблице 1.

Таблица 1

Диапазон измерений, г/т Показатель повторяемости (относительное среднеквадратичное отклонение повторяемости) <*„ % Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратичное отклонение воспроизводимости) о#. % Показатель точности (границы относительной ГЧХрСЦ.нОСТИ) i 6. % От 0до 100 8ХЛЮЧ. 4.8 7.1 14 Св. 100 до 500 » 2.9 5.1 10 » 500 »1000 » 2.7 4.9 9.6

4    Требования техники безопасности

4.1    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004, ГОСТ 12.1.018 и электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019.

4.2    Помещение, в котором проводится выполнение измерений, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу с реактивами необходимо проводить в вытяжном шкафу.

4.3    При работе с концентрированными кислотами и щелочами необходимо использовать резиновые перчатки.

5    Отбор и подготовка проб к выполнению анализа

5.1    Отбор проб — поГОСТ 13496.0.

Допускается отбирать пробы премиксов, упакованных в бумажные мешки, мешочным щупом с последующим заклеиванием отверстия.

5.2    Подготовка пробы канализу — по ГОСТ Р 51419.

6    Определение содержания витамина К₃

Сущность метода заключается в извлечении витамина К3 из исследуемой пробы этиловым спиртом. реэкстракции 1.2-Дихлорэтаном и фотометрировании продукта цветной реакции его с (2.4-Динитрофенил )-гидразином при длине волны 635 нм.

6.1 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы

Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более г 0.0001 г.

Фотоэлектроколориметр с рабочим спектральным диапазоном от 315 до 980 нм с основной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1 % или спектрофотометр типа СФ.

Аппарат для встряхивания жидкости типа АВУ-1.

Центрифуга лабораторная ЦЭ-2 с числом оборотов 3000 об/мин.

Баня водяная с регулятором нагрева.

ГОСТ Р 53027-2008

Колбы конические К_м-2-(250)-(34.40) ТХС по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 1(2)-2-25(100) по ГОСТ 1770.

Пипетки градуированные 2(3)-1(2)-2-0.5(1.0:2.0:5.0:10:25) по ГОСТ 29227.

Пипетки с одной меткой 1(2)-2-2(10,20.25,50) по ГОСТ 29169.

Цилиндры 1 (3)-50( 100) по ГОСТ 1770.

Воронки лабораторные В-36(56.75>*50(80.110) ХС по ГОСТ 25336.

Воронки делительные ВД-1-250 ХС по ГОСТ 25336.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026 или фильтры «красная лента» по техническому документу И].

Аммиак водный по ГОСТ 3760.

(2.4-Динитрофенил)-гиДразин по техническому документу (2).

Спирт этиловый по ГОСТ Р 51652.

Кислота соляная по ГОСТ 3118.

Витамин К₃ менадион (2-метил-1,4-нафтохинон) фирмы Supelko

1,2-Дихлорэтан по ГОСТ 1942.

Натрий углекислый по ГОСТ 83. раствор с массовой долей углекислого натрия 10 %.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Примечания

1    Допускается применение средств измерений, вспомогательного оборудования с аналогичными метроло-тическими и техническими характеристиками, а также материалов и реактивов, по качеству не ниже указанных.

2    Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.

6.2 Подготовка к выполнению анализа

6.2.1    Приготовление раствора (2,4-Динитрофенил)-гидразина

80 мг (2.4-Динитрофенил) - гидразина, взвешенногос погрешностью не более г 0.01 мг. помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют при нагревании до 70 °С на водяной бане в 80 см³ этилового спирта, охлаждают до комнатной температуры, добавляют 2 см³ соляной кислоты и доводят содержимое в колбе до метки этиловым спиртом, тщательно перемешивают.

6.2.2    Приготовление раствора этилового спирта с массовой долей 40 %

В стеклянную емкость вносят 40 см³ этилового спирта, приливают 56 см³ дистиллированной воды, перемешивают.

6.2.3    Приготовление стандартного раствора витамина К₃

Навеску витамина К₃ массой 10 мг. взвешенную с погрешностью не более г 0,1 мг. переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³, приливают до метки этиловый спирт с массовой долей 40 % и тщательно перемешивают.

Затем 10 см³ полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³, доводят до метки этиловым спиртом с массовой долей 40 % и перемешивают.

25 см³ полученного раствора отбирают в делительную воронку вместимостью 250 см³, добавляют 50 см³ 1,2-Дихлорэтана, 20 см³ раствора углекислого натрия с массовой долей 10 % и перемешивают в течение 0.5—1.0 мин. Раствор отстаивают до разделения фаз. Затем фазу, содержащую 1,2-Дихлорэта-на (нижнюю), переносят в другую делительную воронку, добавляют 20 см³ дистиллированной воды и перемешивают 0,5 мин. После перемешивания раствор снова отстаивают до фазоразделения и фазу, содержащую 1,2-Дихлорэтана, фильтруют через бумажный беззольный фильтр. Получают стандартный раствор витамина К₃. в 1 см³ которого содержится 5 мкг витамина К₃.

6.2.4    Построение градуированного графика

В десять мерных колб вместимостью по 25 см³ приливают стандартный раствор витамина К₃ (см. 6.2.3) в объемах, указанных в таблице 2.

Таблица 2 — Растворы сравнения

Наименование показателя Номера колб 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Обьем стандартного раствора, см5 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 Масса витамина К,, мкг/25 см3 2.5 5 10 15 20 25 30 35 40 45

В каждую из десяти колб приливают по 7.5 см³ раствора (2.4-Динитрофенил)-гидразина и помещают их в водяную баню одновременно с испытуемыми и контрольным растворами (см. 6.2.5) на 2 ч при температуре (70 ± 2) °С. периодически перемешивая содержимое колб. После этого растворы в колбах охлаждают до комнатной температуры, приливают в каждую колбу по 7,5 см¹ смеси этилового спирта и водного аммиака в объемном соотношении 1:1, перемешивают, доводят объемы в колбах до метки этиловым спиртом, тщательно перемешивают и измеряют оптические плотности растворов сравнения в порядке возрастания их концентраций на спектрофотометре при длине волны 635 нм или фотоэлектроколориметре с красным светофильтром при длине волны (625 ± 25) нм в кювете толщиной поглощающего свет слоя 10 мм относительно контрольного раствора.

По полученным данным строят градуировочный график, откладывая на оси ординат значения оптической плотности растворов сравнения, на оси абсцисс — содержание витамина К₃ в мкг/25 см³ раствора.

6.2.5 Приготовление контрольного раствора

5 см³1.2-Дихлорэтана отбирают в мерную колбу вместимостью 25 см³, приливают 7,5см³ раствора (2,4-Динитрофенил)-гидразина. Колбу помещают в водяную баню одновременно с испытуемыми пробами и растворами сравнения, далее проводят ту же самую обработку, что и с испытуемой пробой по 6.3.2 и 6.3.3.

6.3 Проведение анализа

6.3.1    Навеску премикса массой от 5 до 10 г. взвешенную с погрешностью не более г 0.01 г, помещают в колбу вместимостью 250 см³, приливают 100 см³ этилового спирта с массовой долей 40 %. встряхивают на аппарате в течение 15 мин и центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об/мин. Центрифугат фильтруют для устранения случайно оставшихся взвешенных частиц. Отбирают от 5 до 25 см³ фильтрата. в зависимости от предполагаемого содержания витамина К₃ в испытуемом образце премикса, в делительную воронку вместимостью 250 см³, приливают 50 см³ 1.2-Дихлорэтана и 20 см³ раствора углекислого натрия с массовой долей 10 % и перемешивают в течение 0.5—1.0 мин.

Раствор отстаивают до разделения фаз. Затем фазу, содержащую 1.2-Дихлорэтана, в полном объеме переносят в другую делительную воронку, приливают в нее 20 см³ дистиллированной воды и перемешивают 0,5 мин.

После этого раствору снова дают отстояться до фазоразделения и фазу, содержащую 1,2-Дихлор-этана. фильтруют через бумажный беззольный фильтр.

6.3.2    5 см² 1,2-Дихлорэтанового экстракта испытуемых проб отбирают в мерную колбу вместимостью 25 см³, приливают 7.5 см¹ раствора (2,4-Динитрофенил )-гидразина (см. 6.2.1), колбу помещают в водяную баню и выдерживают ее 2 ч при температуре (70 г 2) °С. периодически перемешивая содержимое колбы.

6.3.3    По истечении указанного времени содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры, приливают 7,5 см³ смеси этилового спирта и водного аммиака в объемном соотношении 1:1. доводят объем в колбе этиловым спиртом до метки, тщательно перемешивают и измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 635 нм или фотоэлектроколориметре с красным светофильтром при длине волны (625 г 25) нм в кювете толщиной поглощающего свет слоя 10 мм относительно контрольного раствора (см. 6.2.5).

7 Обработка результатов анализа

7.1 Содержание витамина К₃ в премиксе X. г/т, вычисляют по формуле

у _ cvv₂

mvp j-10⁶’

где с — масса витамина К₃, найденная по градуировочному графику, мкг; v — объем спиртового экстракта, см³; v₂ — объем 1,2-Дихлорэтана, взятый для экстракции, см¹;

10⁶ — коэффициент перевода микрограмм в граммы; т — масса навески премикса, г;

V, — объем фильтрата спиртового экстракта, взятый для экстрагирования 1.2-Дихлорэтаном, см³; v₃ — объем 1,2-Дихлорэтанового экстракта, взятый для окрашивания, см³;

10® — коэффициент перевода граммов в тонны.

7.2 Вычисления выполняют с точностью до второго десятичного знака с последующим округлением до первого десятичного знака.

ГОСТ Р 53027-2008

8 Оформление результатов анализа

При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения, начиная со взятия навески испытуемой пробы. Если расхождение между результатами параллельных определений не превышает допустимое |Х, — Х₂| £ 0.01гХ (X,. Х₂. X — результаты первого и второго параллельных определений и их среднеарифметическое значение соответственно), то среднеарифметическое значение принимают за результат анализа. 8 противном случае получают еще два результата определений и вычисляют окончательный результат анализа пробы по ГОСТ Р ИСО 5725-6 (подраздел 5.2).

Значения предела повторяемости (г) и предела воспроизводимости (R) приведены в таблице 3.

Таблица 3

Диапазон измерений, г/т Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных определений) г, % Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях) R. % От Одо 100 ВКЛЮЧ. 13 20 Св. 100 » 500 » 8 14 » 500 » 1000 » 8 14

По полученному результату анализа и значению относительной погрешности (6) (см. таблицу 1) рассчитывают абсолютную погрешность по формуле

Д=0.016Х,    (4)

где X — среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений.

Результат анализа представляют в виде (X ± Д), %. Допускается представление результата в виде (X ; д„). %, где Д_П — значение характеристики погрешности результатов анализа, установленное при реализации методики в конкретной лаборатории и обеспечиваемое контролем стабильности результатов анализа, при условии д_л £ д.

Библиография

[1)    ТУ 6-09-1678—86 Филыры обеззоленные («белая, красная, синяя ленты»)

(2)    ТУ 6-09-2394—77 (2.4-Динитрофенил)-гидразин ²

УДК 636.085.55:006.354    ОКС    65.120    С19    ОКСТУ9209

Ключевые слова: премиксы, витамин К₃, метод, оптическая плотность, спектрофотометр, фотоэлектроколориметр

Редактор Л В Коретт/кова Технический редактор В Н Прусакова Корректор B E Нестерова Компьютерная верстка И А Налейкиной

Сдано в набор 24 12 2008 Подписано в печать 16 02 2009 Формат 60 * 84 Бумата офсетная Гарнитура Ариал Печать офсетная Услпечл. 0.93 Уч-издлО.60 Тирах 223 экз За* 82

ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ». 123995 Москва. Гранатный пер . 4 Mwwgosbnforu infc>@gosbnfo ru Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип «Московский печатник», 105062 Москва. Лялин пер . 6

1

2