ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
СОК ЯБЛОЧНЫЙ КОНЦЕНТРИРОВАННЫЙ И НАПИТКИ, СОДЕРЖАЩИЕ
Метод определения содержания патулина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии
ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП)
ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 «Продукты переработки плодов и овощей»
2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. № 590-ст
3 Стандарт содержит аутентичный текст международного стандарта ИСО 8128-1—93 «Сок яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок. Определение содержания патулина. Часть 1. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии», кроме приложения «Библиография»
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5 ПЕРЕИЗДАНИЕ
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта России
188
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
сок яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки,
СОДЕРЖАЩИЕ ЯБЛОЧНЫЙ СОК
Метод определения содержания патулина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии
Apple juice, apple juice concentrates and drinks containing apple juice. Method for determination of patulin content using high performance liquid chromatography
Дата введения 2001—01—01
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания патулина в яблочном соке, концентрированных яблочных соках и напитках, содержащих яблочный сок, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Предел обнаружения патулина настоящим методом составляет 10 мкг/дм3 при условии, что взятый для анализа объем пробы готового к употреблению сока составляет 5 см3.
2 Сущность метода
Метод основан на экстракции патулина из исследуемой пробы этилацетатом, очистке экстракта перераспределением в водный раствор карбоната натрия и количественном и качественном анализе экстракта с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием спектрофотометрического детектора в ультрафиолетовой области.
3 Реактивы
Используют реактивы аналитической чистоты и воду квалификации «для ВЭЖХ».
3.1 Растворитель: этилацетат.
3.2 Подвижная фаза — раствор ацетонитрила в воде объемной концентрации 10 %.
3.3 Экстрагирующий раствор — водный раствор безводного карбоната натрия концентрации 14 г/дм3.
3.4 Ацетатный буфер, pH 4.
Смешивают 16,4 см3 уксусной кислоты [с (СН3СООН) = 0,2 моль/дм3] с 3,6 см3 раствора ацетата натрия [с (CH3COONa) = 0,2 моль/дм3].
3.5 Уксусная кислота, ледяная.
3.6 Стандартный раствор патулина (С7Н604).
3.6.1 Приготовление стандартного раствора
Навеску патулина массой 10,0 мг, взятую с точностью до 0,1 мг, растворяют в мерной колбе с одной отметкой вместимостью 100 см3 в ацетатном буфере (3.4). Объем содержимого в колбе доводят до метки ацетатным буфером.
Пипеткой переносят 10,0 см3 приготовленного раствора в другую мерную колбу с одной отметкой вместимостью 100 см3, объем содержимого в колбе доводят до метки ацетатным буфером. Массовая концентрация патулина в приготовленном стандартном растворе составляет около 10 мкг/см3.
Измеряют оптическую плотность стандартного раствора при длине волны 276 нм на подходящем спектрофотометре с использованием кварцевых кювет рабочей длиной 10 мм.
Издание официальное
3.6.2 Расчет концентрации стандартного раствора патулина
Концентрацию стандартного раствора патулина (3.6.1) рр s, мкг/см3, вычисляют по формуле
А М1000 С
^276
где А — оптическая плотность стандартного раствора патулина;
А276 — молярный показатель поглощения раствора патулина при длине волны 276 нм, дм3 • моль-1- см-1 (Л276 = 14600);
М— молярная масса патулина, г/моль;
С — постоянная прибора (обычно С = 1).
4 Приборы и лабораторное оборудование
Перед использованием лабораторное оборудование промывают раствором гипохлорита натрия концентрации 10 г/дм3.
Обычное лабораторное оборудование, в частности следующее:
4.1 Жидкостный хроматограф, снабженный спектрофотометрическим детектором в ультрафиолетовой области (пригодным для работы при длине волны 276 нм) и самописцем или интегратором.
4.2 Обращенно-фазовая колонка ODS'1 или другая аналогичная колонка со следующими параметрами:
- эффективность не менее 35000 теоретических тарелок на метр;
- длина 250 мм;
- внутренний диаметр 4,6 мм;
- неподвижная фаза размером частиц 5 мкм.
5 Отбор проб
Проба, поступающая в лабораторию, должна быть представительной и без следов порчи или изменения свойств продукта при транспортировании и хранении.
6 Проведение испытаний
6.1 Приготовление испытуемого раствора
При испытаниях концентрированных яблочных соков их разводят водой 1:5 по объему. Дальнейшую процедуру проводят для всех продуктов одинаково, как описано ниже.
6.1.1 Пробу объемом 5,0 см3 экстрагируют порцией этилацетата объемом 5,0 см3 (3.1) в течение не менее 1 мин. Экстракцию повторяют еще два раза новыми порциями этилацетата объемом по 5,0 см3. Этилацетатные фазы объединяют и эктрагируют раствором карбоната натрия (3.3) объемом 2,0 см3.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Экстракцию раствором карбоната натрия проводят как можно быстрее, например в течение 1—2 мин, из-за нестабильности патулина в щелочной среде.
6.1.2 Карбонатную фазу (6.1.1) экстрагируют свежей порцией этилацетата объемом 5,0 см3, экстракт объединяют с предыдущими порциями. Карбонатную фазу отбрасывают. К экстракту добавляют 5 капель уксусной кислоты (3.5), смесь перемешивают и упаривают на ротационном испарителе до объема 1—2 см3.
6.1.3 Полученный таким образом раствор количественно переносят во флакон вместимостью около 5 см3 с помощью нескольких порций этилацетата объемом около 1 см3 каждая. Раствор упаривают досуха в токе азота при температуре 40 °С. Остаток растворяют в 0,5 см3 подвижной фазы (3.2) или ацетатного буфера (3.4).
6.2 Построение градуировочного графика
Порции стандартного раствора патулина (3.6.1) объемом 1,0; 2,0; 3,0; 5,0 и 7,5 см3 переносят пипеткой в пять мерных колб с одной отметкой вместимостью 10 см3, объем содержимого в колбах доводят до метки ацетатным буфером (3.4); получают градуировочные растворы.
Устанавливают скорость потока подвижной фазы через колонку жидкостного хроматографа около 1см3/мин. Чувствительность детектора хроматографа устанавливают таким образом, чтобы оптической плотности 0,01 соответствовал сигнал величиной на полную шкалу регистрирующего устройства.
ODS — октадецилсилан.
190
ГОСТ Р 51435-99
В хроматограф (4.1) вводят от 0,010 до 0,030 см3 каждого градуировочного раствора. Градуировочный график строят, откладывая по оси абсцисс концентрацию патулина в микрограммах на кубический сантиметр, по оси ординат — соответствующие величины высоты или площади пиков.
6.3 Проведение определения
В хроматограф вводят от 0,010 см3 до 0,030 см3 испытуемого раствора (6.1.3) при тех же условиях, что и при построении градуировочного графика.
Идентификацию пика патулина в испытуемом растворе проводят сравнением с пиками патулина в градуировочных растворах. Следует отличать пик патулина от пика оксиметилфурфурола (ОМФ).
7 Обработка результатов
Концентрацию патулина в испытуемом растворе определяют непосредственно по градуировочному графику (6.2). Содержание патулина в продукте рр , мкг/дм3, вычисляют по формуле
р, = ^103, (2)
у2
где t — концентрация патулина в испытуемом растворе, определенная по градуировочному гра-фику, мкг/см3.
Vx — объем, до которого сконцентрирован этилацетатный экстракт, см3;
V2 — объем пробы продукта, взятый для экстракции, см3.
8 Точность метода
8.1 Сходимость результатов
г = 41,9 мкг/дм3; sr = 14,9 мкг/дм3,
где г — предел сходимости;
sr — среднеквадратическое отклонение сходимости.
8.2 Воспроизводимость результатов
R = 47,5 мкг/дм3; SR = 22,6 мкг/дм3,
где R — предел воспроизводимости;
SR — среднеквадратическое отклонение воспроизводимости.
9 Протокол испытаний
В протоколе испытаний указывают:
- метод испытаний;
- результат испытаний;
- окончательный результат с оценкой сходимости, если была проверена сходимость результатов.
Также следует отметить особенности проведения испытаний, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как несущественные, с побочными обстоятельствами, способными повлиять на результат испытаний.
Протокол испытаний должен содержать информацию, необходимую для полной идентификации образца.
191
ОКС 67.160.20 Н59 ОКСТУ 9109
Ключевые слова: яблочный сок, концентрированный яблочный сок, напитки, содержащие яблочный сок, патулин, определение содержания, высокоэффективная жидкостная хроматография
192