ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

РЫБА, МОРСКИЕ МЛЕКОПИТАЮЩИЕ, МОРСКИЕ БЕСПОЗВОНОЧНЫЕ И ПРОДУКТЫ ИХ ПЕРЕРАБОТКИ

Методика измерения массовой доли аммиака в рыбе

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2010

I 1редисловие

1    РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом прудового рыбного хозяйства (ВНИИ ПРХ)

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 300 «Рыбные продукты нишевые, кормовые, технические и упаковка»

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 10 января 1996 г.

№ 12

3    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4    ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июнь 2010 г.

© И П К И здатсл ьство стандартов, 1996 © СТАНДАРТИНФОРМ. 2010

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства но техническому регулированию и метрологии II    206

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

РЫБА, МОРСКИЕ МЛЕКОПИТАЮЩИЕ, МОРСКИЕ БЕСПОЗВОНОЧНЫЕ И ПРОДУКТЫ ИХ ПЕРЕРАБОТКИ

Методика измерения массовой доли аммиака в рыбе

Fish, sea mammals, sea invertebrates and products of their treatment.

Methods of measuring ammonia mass fraction in fish

Дата введения 1997—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на рыбное сырье и рыбную продукцию (рыба холодного копчения и соленая) и устанавливает методы измерения массовой доли аммиака: фотометрический и обратного титрования избытка трихлоруксусной кислоты.

Данная методика предназначена для производственных лабораторий и лабораторий Службы лабораторного контроля Комитета Российской Федерации по рыболовству.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3769-78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия ГОСТ 4108-72 Реактивы. Барий хлорид 2-водный. Технические условия ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия пироокись. Технические условия

ГОСТ 4517-87 Реактивы. Методы приготовлении вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 7631-2008 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Мелоды определения органолептических и физических показателей.

ГОСТ 7636-85 Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Методы анализа

ГОСТ 12026— 76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 21239-93 Инструменты хирургические. Ножницы. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 21240-89 Скальпели и ножи медицинские. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 21241-89 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний ГОСТ 21400-75 Стекло химико-лабораторное. Технические требования. Методы испытаний ГОСТ 22180-76 Кислота щавелевая. Технические условия

ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

• С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001 (На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008).

11 мание официальное

ГОСТ29227—91 (ИСО835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть (.Общиетребования

ГОСТ 31339-2006 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб

3    Отбор проб

3.1    Отбор проб на анализ проводится по ГОСТ 7631. ГОСТ 31339.

3.2    Пробы рыб отбирают в разных местах холодильной камеры, включая участки, близко расположенные к месту утечки аммиака. В местах складирования пробы отбирают с внешних поверхностей блока, бурта, штабеля. В месте взятия пробы отбирают несколько рыб обшей массой 300 г.

3.3    Отбор проб проводят с помощью ножей, пинцетов и другого инвентаря.

3.4    Подготовка к анализу средней пробы проводится по ГОСТ 7636.

3.5    Пробы помещают в герметично закрываемые стеклянные банки, снабженные этикеткой с указанием:

-    даты отбор;» пробы;

-    номера холодильной камеры или места взятия пробы;

-    наименования рыбного сырья или продукции;

-    количества проб;

-    предназначения проб;

-    должности, фамилии, имени и отчества лиц, отбиравших пробы на анализ.

3.6    Этикетки пишут на пергаментной бумаге простым карандашом и дублируют в журнале отбора

проб.

3.7    Контрольную (не подвергшуюся воздействию паров аммиака) пробу отбирают массой 300 г по 3.3-3.6.

3.8    Пробы рыбного сырья и рыбной продукции, если они не могут быть проанализированы сразу, хранят при температуре от 0 до 4 *С. Срок хранения — не более двух суток.

4    Фотометрический метод

4.1    Аппаратура, материалы, реактивы

Бюксы стеклянные с притертой пробкой вместимостью 50 см' но ГОСТ 25336.

Банки стеклянные широкогорлые с крышкой вместимостью 1000 см’ по ГОСТ 25336.

Весы аналитические 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

Воронки химические диаметром 3. 5. 7 см по ГОСТ 25336.

Колбы мерные вместимостью 50. 100, 1000 см’ с шлифом по ГОСТ 1770.

Пробирки градуированные вместимостью 10 см' по ГОСТ 25336.

Пипетки вместимостью I. 2. 5. 10 см’ по ГОСТ 29227.

Палочки стеклянные диаметром 2—4 мм разной длины но ГОСТ 21400.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

Ножницы по ГОСТ 21239.

Пинцеты по ГОСТ 21241.

Скальпели по ГОСТ 21240.

Микроизмельчитель тканей РТ-2.

Фотоэлектроколорнметр любой марки.

Вола дистиллированная по ГОСТ 6709.

Кислота серная но ГОСТ 4204.

Аммоний сернокислый но ГОСТ 3769.

Реактив Нссслера по ГОСТ 4517.

Все реактивы должны быть х.ч. или ч.д.а. Допускается использование других средств измерений, материалов и реактивов, по своим характеристикам не уступающих указанным выше.

4.2    Сущность метода

Метод основан на способности аммиака образовывать окрашенное в желто-коричневый цвет соединение с реактивом Нссслера 1. Интенсивность окраски раствора, пропорциональная массовой доле аммиака, измеряют на фотоэлектрическом колориметре при длине волны 400—440 нм. Минимально определяемое значение массовой доли аммиака в рыбе составляет 0.05 %.

ГОСТ Р 50846-96

4.3 Подготовка к измерениям

4.3.1    Приготовление безаммиачной дистиллированной воды

Дисти/'ишрованную волу проверяют на содержание аммиака. Для этою к 5 см' воды прибавляют 0.1см* реактива Нссслсра. При обнаружении аммиаюМпоявляегся желтоватоеокрашиванне) дистиллированную воду пропускают через колонку с активированным углем марки БАУ. катионитом в Н'-форме или кипятят в колбе до уменьшения объема на •/, и снов;» проверяют на отсутствие аммиака.

Эту воду используют для приготовления реактивов и разбавления пробы.

4.3.2    Применяют готовый реактив Несслера или готовят его по ГОСТ 4517 с помощью безаммиачной воды.

4.3.3    Приготовление основного стандартного раствора

0.236 г сернокислого аммония (NH₄),S0₄. предварительно высушенною до постоянной массы при температуре 105 *С. растворяют в мерной колбе вместимостью 500 см* в небольшом количестве безаммиачной дистиллированной воды и доводят водой до метки. В 1 см’ этого раствора содержится 0.1 мг азота. Раствор хранят в склянке из темного стекла в течение полугола, если нет помутнения, хлопьев, осадка.

4.4    Построение градуировочного графика

В шесть мерных колб вместимостью 50 см* каждая вносят: 0; 0,25; 0.5; 1.0; 1.5; 2.0 см* стандартного раствора, добавляют 25—30 см* дистиллированной воды и 4 см’ реактива Несслера. доводят объем дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают и через 10 мин колориметри-руют на фотоэлектроколориметре в кюветах с толщиной поглощающего слоя 20 мм при длине волны 440 нм. Полученные растворы содержат 0; 0.025; 0.05; 0.1; 0.15; 0.20 мг азота в 1 см*. По полученным результатам строят градуировочный график, откладывая по оси абсцисс массовые дат аммиака, мг/см*. а по оси ординат — соответствующие им значения оптической плотности. График да1жен иметь прямолинейный характер.

4.5    Проведение измерений

Из каждой отобранной пробы взвешивают три навески костно-кожно-мышечного препарата массой 1.0 г. округляя с точностью до 0.0001 г. Навески заливают 10 см’ 0.1 н. раствор;» серной кислоты и гомогенизируют на микроизмельчителе РТ-2 в течение 30 с. Полученные гомогенаты фильтруют через бумажные фильтры в градуированные пробирки. Количество фильтрата в каждой пробирке доводят 0.1 н. раствором серной кислоты до 10 см’. Затем из каждой пробирки беруг 1 см’ фильтрата и переносят в соответствующие мерные казбы объемом 50 см’. В каждую мерную колбу добавляют по 20 — 30 см’ дистиллированной воды и 4 см’ реактива Несслера. После чего объем содержимого колб доводят дистиллированной водой до метки. Раствор тщательно перемешивают и через 10 мин казори-метрируют на фотоэлектроколориметре в кюветах с таз щи ной оптического слоя 20 мм при длине ва»ны 440 нм.

Раствором сравнения служит смесь из 4 см’ реактив;! Несслера и дистгьзлиро ванной воды, приготовленная в мерной колбе объемом 50 см*.

Аналогично проводят измерение массовой доли аммиака в контрарных (не подвергшихся воздействию паров аммиака) пробах.

4.6    Обработка результатов

Сначала рассчитывают массовые дали азота /V, и А,, %, в контрарной (не подвершгейся воздействию паров аммиака) и опытной (подвергшейся воздействию паров аммиака) пробах по формулам:

я, • Y Ар • 100. Му 1000    ^;

п₂ ■ У АГ_р • 100 ^:    М₂ 1000

—    копнен грации азота в опытной и контрольной пробах, найденные по градуировочному графику, мг/см’;

—    объем фильтрата, см’;

—    ко:эффицисн 1 разведения;

—    массы опытной и контрольной проб, г;

—    коэффициент пересчета миллшраммов в граммы.

209

По разности массовых долей азота в опытной и контрольной пробах рассчитывают массовую долю аммиака, поглощенною мясом рыбы. А. %. по формуле

A = (N_l-N_i)- 1,21    (3)

где yv, и N, — см. формулы 1 и 2;

1,21 — коэффициент пересчета массовой доли азота на массовую долю аммиака.

За результат измерений принимают среднеарифметическое значение трех измерений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 10 %. Вычисления проводят с точностью до второю десятичного знака.

Границы интервала абсолютной iioipeuiHocin измерений массовой доли аммиака при доверительной вероятности /*=0.95 рассчитывают по формуле

Д= ± (0.018 + 0.077 А).    (4)

где А — результат измерений массовой доли аммиака.

5 Метол обратного титрования избытка трихлоруксусной кислоты

5.1    Аппаратура, материалы, реактивы

Бюксы стеклянные с притертой пробкой вместимостью 50 см* по ГОСТ 25336.

Бюретки вместимостью 50 см’ но ГОСТ 25336.

Весы аналитические 2-ю класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

Воронки химические по ГОСТ 25336.

Колбы мерные вместимостью 50. 100 и 1000 см' по ГОСТ 1770.

Цилиндры мерные вместимостью 25 и 50 см' но ГОСТ 1770.

Пробирки фадуированные вместимостью 10 см' по ГОСТ 25336.

Микроизмельчитель тканей РТ-2.

Ножницы по ГОСТ 21239.

Пинцеты по ГОСТ 21241.

Скальпели по ГОСТ 21240.

Фильтры бумажные по ГОСТ 12026.

Бария хлорид по ГОСТ 4108.

Кислота серная по ГОСТ 4204.

Кислота трихлоруксусная |2|.

Кислота щавелевая 0.1 н. по ГОСТ 22180.

Натрия гидроксид по ГОСТ 4328.

Фенолфталеин |3|.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Кальции хлорид 111.

Все реактивы должны быть х.ч. или чд.а. Допускается использование других средств измерений, материалов и реактивов, по своим характеристикам не уступающих указанным выше.

5.2    Сущность метода

Метод основан на способности трихлоруксусной кислоты (ТХУК) связывать свободный аммиак. И збыток ТХУК оггитровывают 0.1 н. раствором шдроксида натрия в присутствии индикатора фенолфталеина.

Минимально измеряемое значение массовой доли аммиака в рыбе составляет 0.6 %.

5.3    Подготовка к измерениям

5.3.1    Приготовление безаммиачной диспилированной воды См. 4.3.1.

5.3.2    Приготовление 5 %-ного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУК)

5.0 г трихлоруксусной кислоты растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см’ в небольшом количестве безаммиачной диет, тированной воды и доводят объем водой до метки.

210

ГОСТ Р 50846-96

5.3.3    Приготовление 0.1 н. раствора пирокаш натрия

Гранулы гидроксила натрия помещают в стакан и обмывают 2—3 раза небольшими порциями дистиллированной волы, каждый раз сливая ее и заменяя свежей. При этом большая часть соды, содержащейся на поверхности гранул, растворится. Посте этого быстро взвешивают на технических весах требуемое количество гранул. Во избежание порчи весов при взвешивании гранулы помещают на кусок полиэтиленовой пленки. Навеску гранул помещают в мерную колбу вместимостью I дм*.

Для приготовления 1 дм⁵ 0,1 н. раствора гидроксида натрия нужно 4 г гранул, но с учетом содержащейся в них воды необходимо взять 4.5 г. Гранулы помешают в мерную колбу, растворяют дистиллированной водой и доводят объем водой до метки.

К полученному раствору добавляют 10—15 см' 2 н. раствора хлорида бария до появления осадка.

который отстаивают в течение суток. После этою проверяют полноту осаждения ионов СО '5. мешающих титрованию. Для этого к 1 —2 см' прозрачного раствора гидроксида натрия приливают 1—2 см' раствора серной кислоты. Образование мути свидетельствует о том, что ионы СО осаждены полностью.

Полученный раствор гидроокиси натрия защищают от поглощения СО. из воздуха с помощью прокаленного хлорида кальция, помешенного в хлоркальциевую трубку.

5.3.4    Определение поправочного коэффициента раствора гидроксида натрия но щавелевой кислоте.

В три колбы вместимостью 100 см' каждая помещают по 25 см' 0.1 н. раствора щавелевой кислоты, приготовленного из фиксанала. прибавляют 8—10 капель фенолфталеина и оттитровывают раствором гидроксида натрия. Появляющаяся при этом розовая окраска раствора должна быть устойчивой в течение 30 с.

Поправочный коэффициент К 0.1 н. раствора гидроксида натрия рассчитывают по формуле

- 25 V '

где V— объем раствора гидроксида натрия, израсходованный на титрование 25 см’ 0.1 н. раствора щавелевой кислоты, см’.

Результат рассчитывают как среднеарифметическое значение грех определений. Вычисления производят с точностью до второго десятичного знака.

5.4    Проведение измерений

Из каждой отобранной пробы взвешивают три навески костно-кожно-мышечного препарата массой 1.0 г, округляя с точностью до 0,0001 г. Навески заливают 10 см' 5 %-ного раствора три хлору к-сусной кислоты и гомогенезируют на микроизмельчителе РТ-2 в течение 30 с. Полученные гомогенаты фильтруют через бумажные фильтры в градуированные пробирки. Объем фильтрата в каждой пробирке доводят 5 %-ным раствором трихлоруксусной кислоты до 10 см’.

В коническую колбу вместимостью 100 см’ отбирают но 2 см' фильтрата каждой из анализируемых проб, добавляю! 2 капли I %-ного раствора фенолфталеина и титруют 0.1 н. раствором шдроксчиа натрия до появления неисчезаюшей розовой окраски.

Аналогично проводят определение массовой доли аммиака в контрольных (нс подвергшихся воздействию паров аммиака) пробах.

5.5    Обработка результатов

Сначала рассчитывают массовые дали аммиака 4, и 4„ %. в опытной (подверниейся воздействию паров аммиака) и контрольной (не подверштейся воздействию паров аммиака) пробах по формулам:

(К₀ -V.) К -0.0017 V . 100.

4=^—¹—щ-•

(К₀ - У₂) ■ К -0.0017 • V 100

^ =-¹-щ,-•    <⁷>

где V₀ — объем 0.1 н. раствора гидроксида натрия, израсходованный на титрование 2 см¹ 5 %-ного раствора ТХУК. см’;

211

V_x и V_} — объем 0.1 н. раствора гидроокиси натрия, израсходованный на титрование 2 см’ фильтрата опытной и контрольной проб, см⁵;

К — поправочный коэффициент концентрации гидроксида натрия;

0.0017 — коэффициент пересчета на аммиак;

V — объем фильтрата, см⁵;

2 — объем фильтрата анализируемых проб, взятый для титрования, см';

А/, и Л/, — навески опытной и контрольной проб. г.

По разнице массовых долей аммиака в опытной и контрольной пробах рассчитывают массовую долю аммиака, поглощенного мясом рыбы. А, %. по формуле

А = Л,- А_}.    (8)

где А_х и А, см. формулы 6 и 7.

За результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов трех измерений. допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 30%. Вычисления производят с точностью до второго десятичного знака.

Границы интервала абсолютной погрешности измерений массовой доли аммиака при доверительной вероятности Р= 0.95 рассчитывают по формуле

Д = ± (0.45 + 0.44 А ).    (9)

где А — результат измерений массовой доли аммиака.

Результат расчета погрешности округляют до второю десятичною знака.

6 Меры предосторожности при работе с зараженными пробами

Все работы но определению аммиака в пробах рыбы осуществляют в действующем вытяжном шкафу, скорость тяги воздуха в котором должна быть не менее 1.0 м/с при подъеме половины штор на высоту 35 см.

Работу с зараженными пробами выполняют в халате из плотной ткани, в фартуке из полимерной пленки или прорезиненной ткани, в резиновых перчатках и нарукавниках из полимерной пленки.

После работы перчатки, не снимая с рук. тщательно обмывают водой с мылом, затем снимают и моют руки.

Каждый работник лаборатории должен иметьподогнанный и проверенный личный противогаз, снабженный коробкой марки КД.

Для нейтрализации рыбных отходов, зараженных аммиаком, используют 1—20 %-ные растворы соляной, серной, азотной и других кислот, а также воду.

212

УДК 664.951.2:006.354    ОКС    67.120.30    Н29    ОКСТУ9209

71.040.10

Ключевые слова: аммиак, фотометрический метод, серная кислота, реактив Несслера, титрование, трнхлоруксусная кислота, фенолфталеин

214