В стандарте приводится горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli в продуктах, предназначенных для потребления человеком в пищу, или в продуктах, предназначенных для корма животных. В нем используется методика подсчета колоний при температуре 44 °С на плотной питательной среде, содержащей хромогенный компонент для обнаружения фермента бета-глюкуронидазы.
Идентичен ISO 16649-2:2001, IDT
Переиздание. Декабрь 2019 г.
1 Область применения
2 Нормативные ссылки
3 Термины и определения
4 Сущность метода
5 Разбавитель и питательная среда
6 Оборудование и стеклянная посуда
7 Отбор проб
8 Подготовка анализируемой пробы
9 Методика
10 Обработка результатов
11 Протокол испытания
Приложение ДА (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов межгосударственным стандартам
Библиография
13 страниц
Дата введения | 01.07.2017 |
---|---|
Добавлен в базу | 01.02.2017 |
Актуализация | 01.01.2021 |
30.01.2015 | Утвержден | Межгосударственный Совет по стандартизации, метрологии и сертификации | 74-П |
---|---|---|---|
29.08.2016 | Утвержден | Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии | 955-ст |
Разработан | БелГИМ | ||
Издан | Стандартинформ | 2016 г. | |
Издан | Стандартинформ | 2019 г. |
Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
(МГС)
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION
(ISC)
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
СТАНДАРТ
ГОСТ
ISO 16649-2-2015
МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ
И КОРМОВ
Горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli (кишечная палочка)
Методика подсчета колоний при температуре 44 °С с применением 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-О-глюкуронида
(ISO 16649-2:2001,
Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the enumeration of p-glucuronidase-positive Escherichia coli. Part 2. Colony-count technique at 44 °C using 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-p-0-glucuronide,
IDT)
Издание официальное
Москва
Стандартинформ
2016
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия. обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Республиканским унитарным предприятием «Белорусский государственный институт метрологии» (БелГИМ) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии международного стандарта, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 января 2015 г. № 74-П)
За принятие проголосовали: | ||||||||||||||||||||||||
|
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 августа 2016 г. № 955-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 16649-2-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 16649-2:2001 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаза-по-ложительных Escherichia coli (кишечная палочка). Часть 2. Методика подсчета колоний при температуре 44 °С с применением 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-0-глюкуронида» («Microbiology of food and animal feeding stuffs Horizontal method for the enumeration of (t-glucuronidase-positive Escherichia coli. Part 2. Colony-count technique at 44 *C using 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-|*-D-glucuronide», IDT).
Международный стандарт разработан подкомитетом SC 9 «Микробиология» Технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 «Пищевые продукты» Международной организации по стандартизации (ISO).
Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий государственный стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии.
Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования международного стандарта с целью применения обобщающего понятия в наименовании стандарта в соответствии с ГОСТ 1.5-2001.
В стандарт внесены следующие редакционные изменения: единица измерения миллилитр (мл) заменена на кубический сантиметр (см3); 5.2.1 и 5.2.2 дополнены примечаниями.
В разделе «Нормативные ссылки» ссылки на международные стандарты актуализированы.
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА
Приложение ДА (справочное)
Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов межгосударственным
стандартам
Таблица ДА 1 | ||||||||||||
|
7
Библиография
[11 Blazko N Evaluation of the |i-glucuron>dase substrate 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-|*-D-glucuronide in a 24 hour direct plating method for Eschenchia coh J. Food Protection. 51. p 402
(Бпазко H Оценка субстрата 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-0-глюкуронида для фермента бета-глюкуроиидаэы методом прямого 24-часового посева на чашках Петри для Eschenchia coli J Food Protection. 51. c. 402)
[2] Damare J M . Campbell O F and Johnson R W Simplified direct plating method for enhanced recovery of Escherichia coli in food Journal of Food Science. 50.1985, pp 1736—1737.1746
(Дамаре ДжМ. КэкЛелл ДФ и Джонсон РВ Упрощенным метод прямого посева на чашках Петри для ускоренного восстановления Eschenchia cob в гищевых продуктах Journal of Food Science. S0. 1985 r. c 1736—1737.1746)
[3J DelisJe G L and Ley A Rapid detection of Escherichia coli in unne samples by a new chromogenic ^-glucuronidase assay J Clin Microbiol. 27. 1989, pp 778—779
(Делизл ГЛ и Ли А Ускоренное обнаружение Eschenchia colt в пробах мочи посредством нового хромо генного количественного анализа бета-глюкуронидазы J Clm Microbiol. 27.1989 г. с 778—779)
[4] Kilian М and Bulow Р Rapid diagnosis of Enterobactenaceae Detection of bactenal glycosidases Acta Pathol Microbiol Scand. Sect B. 84. 1976. pp 245—251
(Кильян M и Булоу П Ускоренная диагностика энтеробактерий Обнаружение бактериальных глюкоэидаэ Acta Pathol Microbiol Scand. раздел В. 84. 1976 г. с. 245—251)
[5] Kilian М and Bulow Р Rapid identification of Enterobactenaceae Use of a (^glucuronidase detecting agar medium (PGUA agar) for the identification of Eschenchia coli in pnmary cultures of urine samples Acta Pathol Microbiol Scand Sect B. 87. 1979. pp 271—276
(Кильян M и Булоу П Ускоренная идентификация энтеробактерий Использование агариэованной среды для обнаружения бета-гпюкуронидазы (агар PGUA) для идентификации Eschenchia coli в первичных культурах проб мочи Ada Pathol Microbiol Scand. раздел В. 87. 1979 г. с 271—276)
[6] Ley AN, Bowers R J and Wolfe S lndoxyl-|i-D-glucuronide, a novel chromogenic reagent for the specific detection and enumeration of Eschenchia coli in environmental sample Canadian Journal of Microbiology 34,1988. pp 690—693
(Ли АН., Бауэрс P Дж и Ульф С Индоксил-бета-О-глюкуронид. новый хромогенный реагент для специфического обнаружения и подсчета Eschenchia с oh в пробе из окружающей среды Canadian Journal of Microbiology. 34. 1988 г. с. 690—693)
[7] Manafi М and Kneifel W A combined chromogenic-fluorogenic medium for the simultaneous detection of total colifonns and E coh in water Zentralbl Hyg. 189. 1989. pp 225—234
(Манафи M и Нифель В Комбинированная хромогенно-флуорогенкая среда для одновременного обнаружения общего содержания бактерий группы кишечной палочки и Eschenchia coli в воде Zentralbl Нуд . 189,1989 г. с. 225—234)
[8] Ogden I D and Watt A J An evaluation of fluorogenic and chromogenic assays for the direct enumeration of Eschenchia cob Letters in Applied Microbiology, 13. 1991. pp 212—215
(Огден ИД и Ватт А Дж Оценка флуоро генного и хромогенного анализов для прямого подсчета Eschenchia coli Letters т Applied Microbiology. 13.1991 r. c 212—215)
[9] Restaino L . Frampton E W and Lyon R H Use of chromogenc substrate 5-brorrx>-4-chloro-3-indolyl-|4)-glucuronide (X-GLUC) for enumeration of Eschenchia coh on 24 hours from ground beef J Food Protection 53 (6). 1990. pp 508—510
(Рестэйио Л . Фрэмптон ИВ и Лайон РХ Использование хромо генного субстрата 5-бром-4-хлор-3-иидопил-бета-О-гпюкуронида (X-GLUC) для подсчета Eschenchia coh в течение 24 ч в говяжьем фарше J Food Protection. 53 (6), 1990 г. с 508—510)
[10] Watkins WD . Rippey S.C.. Clavet С R Kelly-Reitz D J and Burkhardt W Novel compound for identifying Eschenchia cob Applied Environmental Microbiology. 54. 1988. pp 1874—1875
(Уоткинс В Д. Рипли С К.. Клавет К Р. Келли-Ритз Д Дж и Берхард В Новые соединения для идентификации Eschenchia coh Applied Environmental Microbiology. 54.1988 r. c 1874—1875)
УДК 579.67.087.1:006.35 МКС 67.100.30 ЮТ
Ключевые слова: микробиология, пищевая продукция, корма, горизонтальный метод
Редактор Н Н Мигунова Технический редактор В Ю Фотиева Корректор ЕД Дульнееа Компьютерная верстка Л А Круговой
Сдано в набор 31 08 2016 Подписано в печать 13 09 2016 Формат 60 *841/в. Гарнитура Ариал Уел печ л 1.40 УЧ-иэд л 1.10 Тираж 35экз Зак 2148 Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта
Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ». 123995 Москва. Гранатный пер , 4 www gostinfo.ru info@gostinfo ru
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
© Стандартинформ. 2016
В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
Международный стандарт ISO 16649 состоит из следующих частей под общим наименованием «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli (кишечная палочка)»:
- часть 1. Методика подсчета колоний при температуре 44 °С с применением мембран и 5-бром-4-хлор-3-инд ол и л-бета-О-глюкуронида;
- часть 2. Методика подсчета колоний при температуре 44 °С с применением 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-О-глюкуронида;
- часть 3. Метод наиболее вероятного числа с применением 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-0-глюкуронида.
В данном стандарте описаны два горизонтальных метода (ISO 16649-1 и ISO 16649-2) для подсчета бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli (кишечная палочка).
Пользователь может выбрать либо ISO 16649-1. либо ISO 16649-2. Каждая часть предназначена для общего применения. Однако необходимо использовать ISO 16649-1 для пищевой продукции, которая может содержать микроорганизмы, подвергшиеся шоковому воздействию.
IV
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ И КОРМОВ
Горизонтальный метод подсчета бета-тюкуронидаза-положительных Escherichia coli
(кишечная палочка)
Часть 2
Методика подсчета колоний при температуре 44 °С с применением 5-бром-4-хлор-3-индолил-
бета-О-гл юку рон и да
Microbiology of food and animal feeding stuffs Horizontal method for the enumeration of (Vglucuromdase-positive Escherichia coli Part 2 Colony-count technique at 44 *C using 5-bromo-4-chloro-3-mdolyl-p-0-glucuromde
Дата введения — 2017—07—01
В настоящем стандарте приводится горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаза-лоло-жительных Escherichia coli в продуктах, предназначенных для потребления человеком в пищу, или в продуктах, предназначенных для корма животных. В нем используется методика подсчета колоний при температуре 44 С на плотной питательной среде, содержащей хромогенный компонент для обнаружения фермента бета-глюкуронидазы.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Штаммы Escherichia coli, которые не растут при 44 °С, в частности бета-глюкуронидаза-отрицательные, такие как Escherichia coli О 157, не будут обнаружены.
В настоящем стандарте использованы ссылки на межгосударственные стандарты, которые являются обязательными. Для датированных ссылок применяют только указанное издание, для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного стандарта (включая все его изменения):
ISO 6887-1:1999 Microbiology of food and animal feeding stuffs. Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination. Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка образцов для испытания, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила подготовки исходной суспензии и десятичных разведений)
ISO 7218:2007 Microbiology of food and animal feeding stuffs. General rules for microbiological examinations (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям)
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1 бета-глкжуронидаза-положительные Escherichia coli fll-glucuronidase-positive Escherichia coli): Бактерии, которые при температуре 44 °С образуют типичные колонии синего цвета в среде с триптоном, солями желчных кислот и Х-глюкуронидом (ТВХ) в условиях, описанных в настоящем стандарте.
Издание официальное
3.2 подсчет бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli (enumeration of (i-glucuronidase-positive Escherichia coli): Определение количества колониеобразующих единиц (КОЕ) бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli на кубический сантиметр или грамм образца, когда испытание и вычисления проводятся в соответствии с настоящим стандартом.
4.1 Заданное количество исследуемого образца или исходной суспензии засевают в две параллельные чашки Петри со средой с триптоном. солями жетных кислот и Х-глюкуронидом (ТВХ).
При таких же условиях ка>кдое последующее десятичное разведение образца или исходной суспензии засевают в две чашки Петри со средой ТВХ.
Чашки инкубируют в течение 18—24 ч при температуре (44 ± 1) °С. затем исследуют на наличие колоний, типичных для бета-глюкуронидаза-лоложительных Escherichia coli.
4.2 Рассчитывают количество КОЕ бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli на грамм или кубический сантиметр образца (см. пункт 10).
См. действующую лабораторную практику в ISO 7218.
5.1 Разбавитель
См. ISO 6887-1 или соответствующий стандарт, касающийся подлежащего исследованию продукта.
5.2 Питательная среда: среда с триптоном, солями желчных кислот и Х-глюкуронидом (ТВХ)
5.2.1 Состав
Ферментативный гидролизат казеина |
20,0 г |
Соли желчных кислот № 3 |
1.5 г |
5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-0-глюкуроновая кислота (ВСЮ) |
144 МКМОЛЬ*) |
Диметилсульфоксид (DMSO)M |
Зсм3 |
Агар |
от 9 до 18 г с> |
Вода |
1000 см3 |
а* Например. 0.075 г соли циклогексиламмония Ь) Диметилсульфоксид вреден при вдыхании и контакте При работе с ним рекомендуется использовать вытяжной шкаф Ввиду токсичности можно использовать рекомендованный изготовителем разбавитель с> В зависимости от прочности агарового геля | |
Примечание — Используемые реактивы должны быть признанного аналитического качества и пригодными для микробиологических исследований |
5.2.2 Подготовка
Растворяют ВСЮ в диметилсульфоксиде или в рекомендованном изготовителем разбавителе. Растворяют все компоненты в воде и нагревают до кипения.
При необходимости отрегулировать pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (7,2 ± 0.2) при температуре 25 °С.
Производят стерилизацию в автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин. Сразу же охлаждают среду в водяной бане (6.3) при температуре от 44 °С до 47 °С.
Обычное микробиологическое лабораторное оборудование (см. ISO 7218):
2
6.1 Устройство для суховоздушной стерилизации (печь) или паровой стерилизации (автоклав)
6.2 Инкубаторы, способные поддерживать температуру (44 ± 1) “С.
6.3 Водяная баня, способная поддерживать температуру от 44 °С до 47 °С.
6.4 Пробирки, бутылки или колбы необходимой вместимости.
6.5 Пипетки или микропипетки с одной меткой (выдувные), с широкими отверстиями и номинальной вместимостью 1 и 10 см1, с ценой деления 0.1 и 0.5 см1 соответственно.
6.6 Чашки Петри диаметром приблизительно 90 мм.
6.7 pH-метр, способный проводить измерения с точностью до ±0.1 ед. pH.
Его минимальный порог измерения должен составлять 0.01 ед. pH. pH-метр должен быть оснащен устройством ручного или автоматического выравнивания температуры.
Очень важно, чтобы лаборатория получила, представительную, не поврежденную и не измененную во время транспортировки или хранения, пробу.
Отбор проб не является частью метода, описанного в настоящем стандарте. Если соответствующий стандарт отсутствует, рекомендуется, чтобы заинтересованные стороны пришли к определенному соглашению по данному вопросу.
Подготовку анализируемой пробы проводят в соответствии со стандартом, подходящим для рассматриваемого продукта. Если соответствующий стандарт отсутствует, рекомендуется, чтобы заинтересованные стороны пришли к определенному соглашению по данному вопросу.
9.1 Исследуемая часть пробы, исходная суспензия и разведения
См. ISO 6887-1 и любой соответствующий стандарт, подходящий для рассматриваемого продукта.
9.2 Посев и инкубация
9.2.1 Используя стерильные пипетки или микропипетки (6.5), внести в стерильную чашку Петри (6.6) 1 см1 исследуемой пробы (в случае с жидкостью) или 1 см1 исходного разведения (10-1) в случае с другими продуктами.
Засевают по две чашки Петри для каждого разведения.
При необходимости повторяют процедуру с последующими десятичными разведениями, используя новую стерильную пипетку для каждого разведения.
9.2.2 Заливают в каждую чашку Петри приблизительно 15 см1 среды ТВХ (5.2). предварительно охлажденной до температуры от 44 °С до 47 °С на водяной бане (6.3).
Аккуратно смешивают инокулят со средой и дают застыть, разместив чашки Петри на прохладной горизонтальной поверхности.
Промежуток времени от момента распределения инокулята в чашке и до внесения среды не должен превышать 15 мин.
9.2.3 Переворачивают засеянные чашки (9 2.2) дном вверх и помещают их в инкубатор (6.2). настроенный на температуру (44 ± 1) °С. на 18—24 ч. Общее время инкубации не должно превышать 24 ч.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Если есть предположение о присутствии подвергшихся шоковому воздействию клеток, вначале следует производить инкубацию в течение 4 ч при температуре (37 ± 1) °С, а затем повышать температуру инкубации до (44 ± 1) °С в течение 18—24 ч. Температура инкубации не должна превышать 45 °С.
9.3 Подсчет колоний (КОЕ)
После заданного периода инкубации (9.2.3) подсчитывают типичные колонии (КОЕ) бета-глюку-ронидаза-положительных Escherichia coli в каждой чашке, содержащей менее 150 типичных колоний (КОЕ) и менее 300 общих (типичных и нетипичных) колоний (КОЕ).
Чашки, не содержащие типичных колоний (КОЕ), должны быть учтены при вычислениях, приведенных в пункте 10.
10.1 Общие положения
В ходе вычисления, описанного в 10.2. принимаются во внимание случаи, наиболее часто встречающиеся при проведении испытаний в соответствии с надлежащей лабораторной практикой. Могут возникать некоторые особые, маловероятные случаи (например, сильно различающиеся количества колоний КОЕ в двух чашках из одного разведения или пропорции, сильно отличающиеся от пропорции коэффициента разведения в чашках из двух последовательных разведений). В таком случае результаты подсчета должны быть переданы компетентному микробиологу для изучения, толкования и возможного отклонения.
10.2 Подсчет колоний
Для того чтобы результат был достоверным, необходимо подсчитать количество колоний КОЕ по крайней мере в одной чашке, содержащей не менее 15 типичных колоний КОЕ.
Рассчитывают количество КОЕ бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli. присутствующих в исследуемой пробе, на кубический сантиметр или на грамм N как средневзвешенное из двух последовательных разведений, используя следующую формулу:
N =
У(л, +0,1л2р'
где 1а — сумма типичных колоний КОЕ во всех чашках, выбранных для подсчета из двух последовательных разведений, из которых хотя бы одна содержит не менее 15 типичных колоний (КОЕ); л, — количество чашек, выбранных для подсчета из первого разведения;
V — объем инокулята, внесенного в каждую чашку, см3; п2 — количество чашек, выбранных для подсчета из второго разведения;
d — коэффициент разведения, соответствующий первому выбранному разведению \d = 1 в случае (жидкие продукты), когда исследовался неразведенный жидкий продукт].
Округляют результаты до двух значащих цифр (см. ISO 7218).
За результат принимают количество бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli на кубический сантиметр (жидкие продукты) или на грамм (другие продукты), выраженное как целое число, округленное до двух значащих цифр (если ниже 100), или как число менаду 1,0 и 9.9. умноженное на 10 в соответствующей степени.
10.3 Расчет малых количеств
10.3.1 Если в двух чашках (с исследуемой пробой (жидкие продукты) или исходной суспензией (другие продукты) или первым засеянным разведением отсутствуют типичные колонии (КОЕ)] содержится менее 15 типичных колоний КОЕ. рассчитывают количество колоний (КОЕ) бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli. присутствующих в испытуемой пробе. А/е. как среднее арифметическое количество колоний в двух параллельных чашках, используя следующую формулу:
N* =
V п d'
(2)
где 1с — сумма типичных колоний КОЕ. подсчитанных в двух чашках;
V — объем инокулята, внесенного в каждую чашку, см3; п — количество выбранных для подсчета чашек (п = 2 в данном случае);
d — коэффициент разведения, соответствующий первому выбранному разведению \d= 1 в случае (жидкие продукты), когда исследовался неразведенный жидкий продукт].
4
Округляют результаты до двух значащих цифр (см. ISO 7218).
Выражают результаты следующим образом:
- рассчитанное количество бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli на кубический сантиметр (жидкие продукты) или на грамм (другие продукты): NE = У.
10.3.2 Если в двух чашках (с исследуемой пробой (жидкие продукты) или исходной суспензией (другие продукты), или первым засеянным или сохраненным разведением) отсутствуют типичные колонии КОЕ, результаты выражают следующим образом:
- менее 1/d бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli на кубический сантиметр (жидкие продукты) или на грамм (другие продукты), где d — коэффициент разведения, соответствующий первому выбранному разведению (d = 1 в случае (жидкие продукты), когда исследовался неразведенный жидкий продукт).
10.3.3 Если для двух чашек из первого разведения d, общее количество типичных и нетипичных колоний КОЕ превышает 300 с видимыми типичными колониями КОЕ и если для двух чашек из последующего разведения d2, содержащих менее 300 колоний, не могут быть подсчитаны типичные колонии КОЕ, выражают результаты следующим образом:
- менее 1/d2 и более 1/с/1 бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli на кубический сантиметр (жидкие продукты) или на грамм (другие продукты), где d, и d2 — коэффициенты разведения, соответствующие первому и второму выбранным разведениям.
10.3.4 Если для двух чашек из первого разведения d, общее количество типичных и нетипичных колоний КОЕ превышает 300 без видимых типичных колоний КОЕ и если для двух чашек из последующего разведения d2, содержащих менее 300 колоний, не могут быть подсчитаны типичные колоний. КОЕ. выражают результаты следующим образом:
- менее Ш2 колоний КОЕ бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli на кубический сантиметр (жидкие продукты) или на грамм (другие продукты), где d2 — коэффициент разведения, соответствующий второму разведению.
10.4 Метод подсчета
10.4.1 В случае, когда количество типичных колоний КОЕ превышает 150 для двух чашек из первого разведения d, и когда количество типичных колоний КОЕ не превышает 15 для двух чашек из последующего разведения d2:
- если количество типичных колоний КОЕ в каждой из двух чашек из разведения d, находится в диапазоне от 167 до 150 (верхняя часть доверительного интервала средневзвешенного значения, равного 150 КОЕ), следует использовать метод расчета для общего случая (10.2):
- если количество типичных колоний КОЕ в каждой из двух чашек из разведения d1 превышает 167 (верхний предел доверительного интервала средневзвешенного значения, равного 150 КОЕ), следует принять во внимание только результат подсчетов разведения d2 и произвести подсчет малых чисел (10.3).
10.4.2 Если в ходе подсчета типичных колоний КОЕ в каждой чашке из всех засеянных разведений получено число, превышающее 150. результат выражают следующим образом:
- более 150/d колоний КОЕ бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli на кубический сантиметр (жидкие продукты) или на грамм (другие продукты), где d—коэффициент разведения последнего засеянного разведения.
1*
V п d'
Л/' =
(3)
10.4.3 Если только в двух чашках из наименьшего разведения (самая высокая концентрация) содержится менее 150 типичных колоний КОЕ. следует рассчитать количество бета-глюкуронидаза-лоло-жительных Escherichia coli, присутствующих в анализируемой пробе. /V'. как среднее арифметическое число колоний, подсчитанных в двух чашках, используя следующую формулу:
где 1с — сумма типичных колоний КОЕ. подсчитанных в двух чашках, в одной из которых содержится как минимум 15 типичных колоний КОЕ;
V — обьем инокулята, примененного в каждой чашке, см3;
п — количество сохраненных чашек (п = 2 в данном случае);
d — коэффициент разведения, соответствующий сохраненному разведению.
Округлить результаты до двух значащих цифр (см. ISO 7218).
5
10.5 Границы доверительного интервала
См. ISO 7218.
В протоколе испытания необходимо указать:
- всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;
- использованный метод отбора проб, если известен;
- использованный метод испытания со ссылкой на настоящий стандарт;
- все рабочие детали, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные. вместе с деталями касающихся всех особых случаев, которые могли оказать влияние на результат(ы);
- полученный(е) результат(ы). четко указывающий(е) на использованный для его выражения метод;
- окончательный результат с учетом воспроизводимости, если она оценивалась.
6
1