Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1 

105 страниц

580.00 ₽

Купить МУ 2.3.2.2789-10 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Методические указания устанавливают требования к микро- биологической, биохимической, молекулярно-генетической и гигиенической оценке штаммов, используемых в качестве стартовых культур для изготовления пробиотических заквасок, включая закваски прямого внесения, бактериальных концентратов и микробной биомассы для производства пробиотических пищевых продуктов и биологически активных добавок к пище, и необходимые методы лабораторных исследований для ее осуществления. Методические указания предназначены для юридических лиц и индивидуальных предпринимателей, деятельность которых связана с разработкой, производством и обращением биотехнологической продукции, а также для испытательных лабораторных центров, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов и БАД к пище и аккредитованных в установленном порядке на данный вид деятельности.

 Скачать PDF

Оглавление

Введение

1. Область применения

2. Общие положения

3. Нормативные ссылки

4. Термины и определения

5. Методы исследования таксономической принадлежности пробиотических штаммов

     5.1. Микробиологические исследования фенотипических свойств штаммов

     5.2. Биохимические исследования фенотипических свойств штаммов

     5.2.1. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда, реактивы и питательные среды

     5.2.2. Методика проведения биохимической идентификации штамма

     5.3. Молекулярно-генетическое подтверждение таксономического статуса штаммов, установленного на основании фенотипических свойств

     5.3.1. Методика молекулярно-генетического анализа таксономической принадлежности бифидобактерий

     5.3.2. Методика молекулярно-генетического анализа таксономической принадлежности лактобактерий

6. Методы исследования биологических свойств пробиотических штаммов

     6.1. Основные методы исследования безопасности штаммов в тестах in vitro

     6.1.1. Определение фенотипического профиля

     6.1.2. Определения отсутствия трансмиссивных генов антибиотикорезистентности

     6.1.3. Определение отсутствия (наличия) плазменного материала

     6.1.4. Определение профиля органических продуктов (кислот, биогенных аминов, аммиака, пероксида водорода), продуцируемых штаммом

     6.1.5. Определение способности к деконъюгации желчных солей

     6.1.6. Определение способности к гидролизу муцина

     6.1.7. Определение способности пробиотических штаммов ингибировать представителей нормофлоры кишечника in vitro

     6.1.8. Определение степени иммуномодуляции

     6.1.8.1. Методы скрининга пробиотических штаммов в отношении их иммуномодулирующей активности

     6.2. Основные Методы исследования безопасности штаммов в тестах in vitro

     6.2.1. Определение способности к гидролизу мукозного слоя стенки кишечника

     6.2.2. Способность к транслокации у иммунодефицитных животных

     6.2.3. Изучение фагоцитарной активности штаммов

     6.3. Дополнительные методы исследования безопасности штаммов

     6.3.1. Тестирование in vitro

     6.3.1.1. Определение гемолитической активности

     6.3.2. Тестирование in vitro

     6.3.2.1. Определение безвредности штаммов бифидобактерий и лактобацилл

     6.4. Основные методы исследования пробиотического потенциала штаммов

     6.4.1. Тестирование in vitro

     6.4.1.1. Исследование антагонистической активности Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp., в отношении тест-культур патогенных и условно-патогенных микроорганизмов различных групп методом отсроченного антагонизма

     6.4.1.2. Определение антагонистической активности штаммов к тест-культурам энтеропатогенных микроорганизмов

     6.4.1.3. Определение антагонистической активности бифидобактерий в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов методом развивающихся смешанных популяций

     6.4.1.4. Тестирование кислотоустойчивости штаммов (к действию желудочного сока)

     6.4.1.5. Тестирование устойчивости штаммов к желчи и способности к деструкции холестерина, триглицеридов

     6.5. Дополнительные методы исследования пробиотического потенциала штаммов

     6.5.1. Тестирование in vitro

     6.5.1.1. Изучение антиадгезивных свойств штаммов на клеточных моделях

     6.5.1.2. Исследование адгезивности на клеточных моделях

     6.5.2. Тестирование in vitro

     6.5.2.1. Определение адгезивности

7. Методы исследования технологических свойств пробиотических штаммов

     7.1. Определение постокислительной активности штаммов молочнокислых бактерий

     7.2. Определение способности к образованию экзополисахаридов

     7.3. Тестирование хранимоспособности

     7.3.1. Определение числа жизнеспособных бифидобактерий и лактобацилл методом конечных разведений

     7.3.2. Количественное определение ацидофильных лактобацилл

     7.3.3. Контроль микробной культуры на наличие посторонней микрофлоры

     7.3.4. Изучение морфологии клеток

     7.3.5. Определение активности кислотообразования

8. Библиография

Приложение 1, Микробиологический и молекулярно-генетический паспорт штамма микроорганизма

Приложение 2. Пограничные значения чувствительности к антимикробным веществам лактобактерий в микрометоде серийных разведений

Сокращения

 
Дата введения06.12.2010
Добавлен в базу12.02.2016
Актуализация01.02.2020

Этот документ находится в:

Организации:

06.12.2010УтвержденГлавный государственный санитарный врач Российской Федерации
ИзданРоспотребнадзор2011 г.
РазработанООО Бактотех
РазработанВНИМИ РАСХН
РазработанГОУ ВПО Тверская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации
РазработанУчреждение Российской академии наук Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН
РазработанФГУН Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского Роспотрребнадзора
РазработанФГБУ Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им Н.Ф. Гамалеи Минздравсоцразвития России
РазработанНаучно-исследовательский институт питания РАМН
РазработанМГУ им. М.В. Ломоносова
Нормативные ссылки:
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16
Стр. 17
стр. 17
Стр. 18
стр. 18
Стр. 19
стр. 19
Стр. 20
стр. 20
Стр. 21
стр. 21
Стр. 22
стр. 22
Стр. 23
стр. 23
Стр. 24
стр. 24
Стр. 25
стр. 25
Стр. 26
стр. 26
Стр. 27
стр. 27
Стр. 28
стр. 28
Стр. 29
стр. 29
Стр. 30
стр. 30

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

2.3.2. ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ И ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ

Методические указания по санитарно-эпидемиологической оценке безопасности и функционального потенциала пробиотических микроорганизмов, используемых для производства пищевых продуктов

Методические указания МУ 2.3.2.2789—10

Издание официальное

Москва • 2011

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека

2.3.2. ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ И ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ

Методические указания по санитарно-эпидемиологической оценке безопасности и функционального потенциала пробиотических микроорганизмов, используемых для производства пищевых продуктов

Методические указания МУ 2.3.2.2789—10

ББК51.23

M54

M54 Методические указания по санитарно-эпидемиологической оценке безопасности и функционального потенциала пробиотических микроорганизмов, используемых для производства пищевых продуктов: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011.—104 с.

ISBN 978—5—7508—0698—4

1.    Авторский коллектив: Научно-исследовательский институт питания РАМН (В. А. Тутельян, С. А. Шевелёва, С. А. Хотимченко, В. А. Исаков, И. Я. Конь, В. К. Мазо, Н. Р. Ефимочкина, Э. Н. Трушина, С. Ю. Батищева, А. В. Черкашин, А. В. Булахов); Учреждение Российской академии наук Институт общей генетики им. Н. И. Вавилова РАН (Н. К. Янковский,

В. Н. Даниленко, С. Г. Ботина О. В. Аверина); ФГУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Габричевского» Роспотребнадзора (В. А. Алешкин, Б. А. Шейдеров, А. М. Амер-ханова, О. Г. Жиленкова, А. В. Алёшкин, М. С. Бляхер, И. М. Федорова,

Е. А. Воропаева, Ю. В. Черепанова); ФГБУ Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика РАМН Н. Ф. Гаматеи Мин здрав соцразвития России (А. Л. Гинибург, Ю. В. Ананьина, Б. С. Народицкий, Н. А. Зигаигирова, Л. Н. Нестеренко, И. А. Шаги-нян, М. Ю. Чернуха, А. А. Ховасв); ГОУ ВПО Тверская государственная медицинская академия «Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации» (В. М. Червинец,

Ю. В. Червинец); Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова (В. В. Зинченко, Е. А. Карбышева); при участии ВНИМИ РАСХН (В. Д. Харитонов, В. Ф. Семснихина, И. В. Рожкова,

В. Г. Будрик), ООО «Бактотех» (А. И. Туркин).

2.    Рекомендованы Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, (протокол от 14.10.2010 №2).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 6 декабря 2010.

4.    Введены в действие с момента утверждения.

5.    Введены впервые.

ББК 51.23

© Роспотребнадзор, 2011 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011

МУ 2.3.2.2789—10

Содержание

Введение...............................................................................................................6

1.    Область применения........................................................................................7

2.    Общие положения............................................................................................7

3.    Нормативные ссылки.....................................................................................11

4.    Термины и определения................................................................................12

5.    Методы исследования таксономической принадлежности

пробиотических штаммов.............................................................................13

5.1.    Микробиологические исследования фенотипических

свойств штаммов.....................................................................................14

5.2.    Биохимические исследования фенотипических

свойств штаммов.....................................................................................14

5.2.1.    Аппаратура, материалы, лабораторная посуда, реактивы

и питательные среды................................................................15

5.2.2.    Методика проведения биохимической идентификации

штамма.......................................................................................18

5.3. Молекулярно-генетическое подтверждение

таксономического статуса штаммов, установленного на основании фенотипических свойств..................................19

5.3.1.    Методика молекулярно-генетического анализа

таксономической принадлежности бифидобактерий............19

5.3.2.    Методика молекулярно-генетического анализа

таксономической принадлежности лактобактерий................26

6.    Методы исследования биологических свойств пробиотических

штаммов.........................................................................................................29

6.1. Основные методы исследования безопасности штаммов в тестах

in vitro.......................................................................................................29

6.1.1.    Определение фенотипического профиля...................................29

6.1.2.    Определения отсутствия трансмиссивных генов

антибиотикорезистентности....................................................34

6.1.3.    Определение отсутствия (наличия) плазмидного

материала...................................................................................36

6.1.4.    Определение профиля органических продуктов (кислот,

биогенных аминов, аммиака, пероксида водорода), продуцируемых штаммом........................................................41

6.1.5.    Определение способности к деконъюгации желчных

солей...........................................................................................49

6.1.6.    Определение способности к гидролизу муцина........................49

3

МУ 2.3.2.2789—10

6.1.7.    Определение способности пробиотических штаммов

ингибировать представителей нормофлоры кишечника in vitro.........................................................................................51

6.1.8.    Определение степени иммуномодуляции..................................53

6.1.8.1.    Методы скрининга пробиотических штаммов в отношении их иммуномодулирующей активности..............53

6.2.    Основные методы исследования безопасности штаммов

в тестах in vivo.........................................................................................55

6.2.1.    Определение способности к гидролизу мукозного слоя

стенки кишечника.....................................................................55

6.2.2.    Способность к транслокации у иммунодефицитных

животных...................................................................................56

6.2.3.    Изучение фагоцитарной активности штаммов..........................56

6.3.    Дополнительные методы исследования безопасности штаммов........58

6.3.1.    Тестирование in vitro...................................................................58

6.3.1.1.    Определение гемолитической активности.....................58

6.3.2.    Тестирование in vivo....................................................................62

6.3.2.1.    Определение безвредности штаммов

бифидобактерий и лактобацилл...................................62

6.4.    Основные методы исследования пробиотического

потенциала штаммов...............................................................................62

6.4.1. Тестирование in vitro...................................................................62

6.4.1.1.    Исследование антагонистической активности

Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp. в отношении тест-культур патогенных и условно-патогенных микроорганизмов различных групп методом отсроченного антагонизма.............................................62

6.4.1.2.    Определение антагонистической активности

штаммов к тест-культурам энтеропатогенных микроорганизмов............................................................64

6.4.1.3.    Определение антагонистической активности

бифидобактерий в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов методом развивающихся смешанных популяций..................................................69

6.4.1.4.    Тестирование кислотоустойчивости штаммов (к

действию желудочного сока)............................................70

6.4.1.5.    Тестирование устойчивости штаммов к желчи и

способности к деструкции холестерина, триглицеридов................................................................70

4

МУ 2.3.2.2789—10

6.5. Дополнительные методы исследования пробиотического

потенциала штаммов...............................................................................74

6.5.1.    Тестирование in vitro...................................................................74

6.5.1.1.    Изучение антиадгезивных свойств штаммов

на клеточных моделях....................................................74

6.5.1.2.    Исследование адгезивности на клеточных моделях.....78

6.5.2.    Тестирование in vivo....................................................................83

6.5.2.1.    Определение адгезивности.......................................................83

7.    Методы исследования технологических свойств пробиотических

штаммов.........................................................................................................86

7.1.    Определение постокислительной активности штаммов

молочнокислых бактерий.......................................................................86

7.2.    Определение способности к образованию экзополисахаридов..........86

7.3.    Тестирование хранимоспособности......................................................87

7.3.1.    Определение числа жизнеспособных бифидобактерий и

лактобацилл методом конечных разведений..........................87

7.3.2.    Количественное определение ацидофильных

лактобацилл...............................................................................88

7.3.3.    Контроль микробной культуры на наличие посторонней

микрофлоры...............................................................................89

7.3.4.    Изучение морфологии клеток.....................................................90

7.3.5.    Определение активности кислотообразовамия..........................90

8.    Библиография.................................................................................................91

Приложение 1. Микробиологический и молекулярно-генетический

паспорт штамма микроорганизма................................................................96

Приложение 2. Пограничные значения чувствительности к антимикробным веществам лактобактерий в микрометоде

серийных разведений [по I.KIare    et al., 2007]..............................................98

Сокращения......................................................................................................103

5

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

6 декабря 2010 г.

Дата введения: с момента утверждения

2.3.2. ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ И ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ

Методические указания по санитарно-эпидемиологической оценке безопасности и функционального потенциала пробиотических микроорганизмов, используемых для производства пищевых продуктов

Методические указания _МУ    2.3.2.2789—10_

Введение

Опыт широкого применения пробиотиков в пищевой промышленности в целом подтверждает историю безопасного употребления в пищу человека микроорганизмов-симбионтов кишечной микрофлоры, к которым относится большинство пробиотиков, и отсутствие у них способности обусловливать у потребителей заболевания инфекционного и инвазионного характера. В то же время, как признают эксперты ФАО-ВОЗ, пробиотики потенциально могут быть ответственны за ряд побочных эффектов (септические инфекции, избыточная метаболическая активность, гиперстимуляция факторов локального иммунитета, передача генов представителям нормофлоры организма человека). Наибольшую актуальность в этом аспекте на сегодняшний день приобретает требование к контролю отсутствия у штаммов трансмиссивных генов, прежде всего антибиотикорезистентности.

Накопленные в области нутрициологии и микробиологии данные также свидетельствуют о штаммоспецифичности благоприятного воздействия пробиотиков на здоровье человека. В связи с этим, согласно международным требованиям таксономическая принадлежность про-6

МУ 2.3.2.2789—10

биотических штаммов должна устанавливаться с использованием современных воспроизводимых молекулярно-генетических методов. Подтверждение пробиотического потенциала стартерных культур пробиотиков должно быть основано на научной доказательной базе.

Настоящие методические указания разработаны с целью обеспечения единого, научно-обоснованного подхода к оценке качества и безопасности штаммов пробиотических микроорганизмов (далее - штаммов), предназначенных для производства пробиотических заквасок прямого внесения, бактериальных концентратов и микробной биомассы, являющейся компонентом пробиотических пищевых и биологически активных добавок или используемых для обогащения традиционных пищевых продуктов и биологически активных добавок; совершенствования нормативной базы, регулирующей оборот продукции, выработанной с использованием живых пробиотических микроорганизмов.

1. Область применения

1.1.    Методические указания устанавливают требования к микробиологической, биохимической, молекулярно-генетической и гигиенической оценке штаммов, используемых в качестве стартовых культур для изготовления пробиотических заквасок, включая закваски прямого внесения, бактериальных концентратов и микробной биомассы для производства пробиотических пищевых продуктов и биологически активных добавок к пище, и необходимые методы лабораторных исследований для её осуществления.

1.2.    Методические указания предназначены для юридических лиц и индивидуальных предпринимателей, деятельность которых связана с разработкой, производством и обращением биотехнологической продукции, а также для испытательных лабораторных центров, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов и БАД к пище и аккредитованных в установленном порядке на данный вид деятельности.

2. Общие положения

2.1. Санитарно-эпидемиологическая оценка штаммов, отобранных по специфическим функциональным пробиотическим свойствам, включает в себя комплекс микробиологических, биохимических, молекулярно-генетических и гигиенических исследований для подтверждения их безопасности (безвредности), а также наличия у них свойств, обусловливающих пробиотический эффект в организме, и поэтому пригодных

7

МУ 2.3.2.2789—10

для создания пробиотических продуктов питания и биологически активных добавок к пише.

2.2.    Положения, изложенные в настоящих методических указаниях, применяются при разработке технической документации на продукцию, а также на этапе предрегистрационных испытаний (исследований) впервые разрабатываемой или впервые ввозимой на территорию Российской Федерации продукции.

2.3.    В составе пробиотических заквасочных культур, бактериальных концентратов и микробной биомассы для производства пробиотических пищевых продуктов и биологически активных добавок к пище, содержащих живые микроорганизмы, могут использоваться отдельные штаммы (или консорциумы штаммов), принадлежащие к родам бифидобактерий {Bifidobacterium spp.), лактобацилл {Lactobacillus spp.), пропио-новокислых бактерий {Propionibacterium spp.) и др., за исключением родов и видов микроорганизмов, перечисленных в СанПиН 2.3.2.2567—09 «Дополнение 15 к СанПиН 2.3.2. 1078—01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов».

2.4.    Для обеспечения безопасности и пригодности пробиотических пищевых продуктов и биологически активных добавок к пище, содержащих живые микроорганизмы, штаммы для производства должны отвечать следующим требованиям:

2.4.1)    должны быть преимущественно изолированы (без применения каких-либо биотехнологических воздействий на штамм) из представителей симбиотической резидентной микрофлоры желудочно-кишечного тракта здоровых людей. В иных случаях и в случаях, когда потенциальная пробиотическая культура изолирована из пищевого продукта, организма животного или другого объекта окружающей среды, наряду с происхождением штамма, должен быть известен способ селекции (индуцированный мутагенез, адаптация к определенным факторам, генно-инженерные манипуляции, в том числе самоклонирование, и др.) этих микроорганизмов;

2.4.2)    таксономическая принадлежность должна быть установлена до уровня штамма путем изучения широкого спектра фенотипических характеристик и подтверждена с использованием воспроизводимых молекулярно-генетических методов;

2.4.3)    номенклатурное название штамма должно приводиться в соответствии с кодами современной международной классификации (по Approval Lists of Bacterial Names in International Journal of Systematic Bacteriology, 1980, v. 30, 225—420 http://www.bacterio.cici.frf) или Vali-

8

МУ 2.3.2.2789—10

dation Lists in the International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology) и включать обозначение рода, вида и штамма;

2.4.4)    должны быть задепонированы в национальных или международных коллекциях микробных культур Российской Федерации на условиях контрольного хранения (для отечественных производителей — ВКПМ ФГУП ГосНИИгенетика или ФГУН МНИИЭМ им. Г. Н. Габричевского, Москва; для зарубежных - международная коллекция микроорганизмов при ВКПМ ФГУП ГосНИИгенетика), сопровождаться справкой о депонировании и паспортом штамма с указанием подробной таксономической характеристики, источника и даты выделения, анатомической области изоляции, присущих штамму фенотипических и генетических характеристик, в т. ч. наличия внехромосомного генетического материала. Форма паспорта на штамм и перечень включаемых в него характеристик приведены в прилож. 1;

2.4.5)    должны принадлежать к видам, имеющим документированную историю применения в пищу человеку, не должны обладать факторами патогенности, токсигенности и не вызывать заболеваний у людей и теплокровных животных;

2.4.6)    должны иметь изученный профиль антибиотикорезистентно-сти в отношении современных применяемых в медицине антибиотиков и не обладать антибиотикорезистентностью трансмиссивного типа;

2.4.7)    должны иметь стабильные фенотипические, генотипические и технологические характеристики; иметь изученный профиль внехро-мосомных элементов (плазмид, транспозонов, бактериофагов и др.), при наличии внехромосомных элементов их функциональная роль должна быть охарактеризована и доказана неспособность к генному трансферу;

2.4.8)    не должны обладать способностью к транслокации в лимфоузлы, паренхиматозные органы, кровь у человека и теплокровных животных, обладающих иммунодефицитностью;

2.4.9)    не должны обладать способностью к иммуносупрессии или избыточной иммуностимуляции, а также генерации провоспалительного эффекта in vitro и in vivo;

2.4.10)    не должны обладать способностью образовывать новые метаболические продукты или избыток известных продуктов, в количествах, способных вызывать побочные эффекты;

2.4.11)    не должны ингибировать рост представителей нормальной резидентной микрофлоры желудочно-кишечного тракта человека и теплокровных животных.

9