Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

14 страниц

396.00 ₽

Купить ГОСТ 31767-2012 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на маточное пчелиное адсорбированное молочко (далее - адсорбированное молочко), предназначенное для использования в пищевых целях.

Требования, обеспечивающие безопасность адсорбированного молочка, изложены в 4.1.3, требования к качеству адсорбированного молочка - в 4.1.1-4.1.3, требования к маркировке - в 4.2

 Скачать PDF

Изменение № 1 пока не опубликовано. С текстом можно ознакомиться по ссылке.

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Термины и определения

4 Технические требования

5 Правила приемки

6 Методы контроля

7 Транспортирование и хранение

8 Требования безопасности проведения работ

Библиография

Нормативные ссылки:
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

ГОСТ 31/бв-

го^

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

МЕД НАТУРАЛЬНЫЙ

Методы определения гидроксиметилфурфураля

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2014

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением «Научно-исследовательский институт пчеловодства» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ«НИИП» Россельхозакаде-мии) и Обществом с ограниченной ответственностью «Аналитический центр Апис»

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстан-

дарт)

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 15 ноября 2012 г. № 42)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК(ИСО 3166)004—97

Код страны по МК (ИСО 3166) 004—97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Молдова

MD

Молдова-Стандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Т аджикстандарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. № 1664-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31768-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.

5    Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 52834-2007

6    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

©Стандартинформ, 2014

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Таблица 6 —Диапазон измерений, значения пределов повторяемости и воспроизводимости при доверительной вероятности Р = 0,95

Диапазон измерений содержания ГМФ, мг/кг

Предел повторяемости (для двух результатов параллельных определений) г, % отн.

Предел воспроизводимости (значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях) R, % отн.

1,0—85,0

10

30

3.2.6 Форма представления результата

Результат измерения в документах, предусматривающихего использование, представляют в виде

ср + Д), мг/кг, Р = 0,95,

где + Д— границы характеристик абсолютной погрешности результатов измерения для данного содержания ГМФ, мг/кг;

+ Д = + 5Мср/100, значение относительной погрешности + 5представлено в таблице 5.

3.3 Определение содержания гидроксиметилфурфураля (ГМФ) по методу Винклера

Метод основан на колориметрическом определении окраски, полученной в результате взаимодействия ГМФ с барбитуровой кислотой и п-толуидином, относительно раствора сравнения. Диапазон измерений содержания ГМФ в меде от 1,0 до 85 мг/кг.

3.3.1    Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

3.3.1.1    Колориметр фотоэлектрический, снабженный светофильтром с максимумом пропускания при длине волны (540 + 10) нм.

3.3.1.2    Кюветы кварцевые с толщиной поглощающего слоя 1 см.

3.3.1.3    Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом абсолютной погрешности однократного взвешивания+0,1 мг.

3.3.1.4    Баня водяная.

3.3.1.5    Секундомер.

3.3.1.6    Электроплитка, шкаф сушильный по ГОСТ 14919.

3.3.1.7    Термометр ртутный стеклянный лабораторный до 100 °С по ГОСТ28498.

3.3.1.8    Колбы мерные исполнений 1, 2, вместимостью 50, 100 см3, 2-го класса точности по ГОСТ 1770.

3.3.1.9    Стаканы стеклянные исполнения 1 вместимостью 50 см3 по ГОСТ 25336.

3.3.1.10    Пробирки стеклянные с притертой пробкой вместимостью 10 см3 по ГОСТ 25336.

3.3.1.11    Пипетки 2-2-1-1,2-2-1-2,2-2-1-5 по ГОСТ29227, ГОСТ 29228.

3.3.1.12    Пипетки по 2-2-10,2а-2-20,2а-2-50 по ГОСТ 29169.

3.3.1.13    Фильтры обеззоленные.

3.3.1.14    Барбитуровая кислота.

3.3.1.15    п-толуидин.

3.3.1.16    Изопропиловый спирт по ГОСТ 9805.

3.3.1.17    Кислота уксусная ледяная, х. ч., поГОСТ61.

3.3.1.18    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709, освобожденная от кислорода путем кипячения.

3.3.1.19    Калий железистосинеродистый 3-водный [K4Fe(CN)6 ЗН20],х. ч., по ГОСТ 4207.

3.3.1.20    Цинкуксуснокислый2-водный[2п(СН3СОО)2-2Н20],х. ч., по ГОСТ5823.

3.3.1.21    Спирт этиловый технический поГОСТ 17299.

Допускается использование других средств измерений, вспомогательного оборудования по метрологическим, техническим характеристикам не хуже указанных в настоящем стандарте.

Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.

3.3.2 Подготовка к испытанию

3.3.2.1    Отбор проб — по ГОСТ 19792.

3.3.2.2    Подготовка пробы — по 3.1.4.

3.3.2.3    Приготовление раствора барбитуровой кислоты

(0,500 + 0,01) г барбитуровой кислоты (см. 3.3.1.14), высушенной в сушильном шкафу (см. 3.3.1.6) при 105 °С в течение 1 ч, быстро смешивают с 70 см3 дистиллированной воды (см. 3.3.1.18), количественно переносят в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см3, растворяют при нагревании на водяной бане, охлаждают до 20 °С и доводят до метки дистиллированной водой. Раствор хранят в

9

холодильнике — не более 1 мес. В случае образования кристаллов раствор нагревают на водяной бане примерно до 60 °С до полного растворения кристаллов.

3.3.2.4    Приготовление раствора п-толуидина

(10,00 + 0,1) г п-толуидина (см. 3.3.1.15) растворяют в 50 см3 изопропилового спирта (см. 3.3.1.16) при температуре 44 °С—45 °С на водяной бане, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 с небольшим количеством изопропилового спирта, охлаждают до 20 °С и смешивают с 10 смледяной уксусной кислоты (см. 3.3.1.17), доводят до метки изопропиловым спиртом. Раствор ставят в темное место и используют через 24 ч после приготовления. Срок хранения в прохладном темном месте — 1 мес.

3.3.2.5    Приготовление растворов Карреза I и II

Приготовление растворов Карреза I и II — по 3.1.5.4 и 3.1.5.5.

3.3.2.6    Приготовление раствора меда

(10,00 + 0,1) г меда, подготовленного по 3.1.4, растворяют в 20 см3 свежепрокипяченной и остывшей дистиллированной воды (см. 3.3.1.18), количественно переносят в мерную колбу по ГОСТ 1770

вместимостью 50 см3.

Добавляют пипеткой три капли (~ 0,1 см3) раствора Карреза I по 3.1.5.4, перемешивают, добавляют пипеткой три капли (~ 0,1 см3) раствора Карреза II по 3.1.5.5, перемешивают и доводят до метки дистиллированной водой. В случае пенообразования пипеткой добавляют одну каплю этанола (см. 3.3.1.21).

Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр (см. 3.3.1.13), первые 10 см3 фильтрата отбрасывают. Раствор используют немедленно. Хранению не подлежит.

3.3.3    Проведение испытания

В две пробирки (см. 3.3.1.10) наливают по 2,0 см3 раствора меда и 5,0 см3 раствора п-толуидина по 3.3.2.4. В первую пробирку (раствор сравнения) добавляют 1,0 см3 дистиллированной воды (см. 3.3.1.18), перемешивают, во вторую пробирку приливают 1,0 см3 раствора барбитуровой кислоты по 3.3.2.3, осторожно перемешивают. Смешивание растворов проводят быстро в течение 1—2 мин.

Измерение оптической плотности анализируемого раствора проводят на фотоэлектроколориметре (см. 3.3.1.1) при длине волны 550 нм относительно раствора сравнения ежеминутно (или чаще) втече-ние 6 мин. Наибольшая интенсивность окраски достигается через 3—4 мин после добавления барбитуровой кислоты.

3.3.4    Обработка результатов

Содержание гидроксиметилфурфураля в анализируемом меде МШФ, мг/кг, рассчитывают по формуле


А4гмФ-


Л • 192 • 10 • 0,8


(6)


т


меда


где А — максимальное значение оптической плотности;

192 — постоянный коэффициент, учитывающий фактор разбавления и коэффициент экстинкции, вычисляемый по формуле


192 =


126Ю00-50-8 Ю00 1-13125-2ЮЮ00


(7)

где 126 — молекулярный вес ГМФ, г/моль;

1000 — перевод г в мг, мг/г;

50 — объем, в котором растворена анализируемая проба, см3;

8 — объем анализируемого раствора, см3;

1000 — перевод г меда в кг, г/кг;

1    — толщина слоя раствора в кварцевой кювете, см;

13125 — коэффициент молярной экстинкции водного раствора при Х= 550 нм, см2/ммоль;

2    — объем раствора меда, взятый для анализа, см3;

10 — теоретическая номинальная масса пробы меда, г;

1000 — перевод ммоль в моль, моль/моль;

0,8 — поправочный коэффициент; тмеДа — масса анализируемой пробы меда, г.

Вычисления проводят до второго десятичного знака с последующим округлением до первого знака. За результат принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, если выполняется условие приемлемости

|Л4Гмф,1 - Л4Гмф,2 \^г, г= 2,8 аг 0,01 /Ц-мФср-


10


ГОСТ 31768-2012
3.3.5 Точность метода

Статистический анализ результатов испытаний по оценке точности метода проводят в соответствии с требованиями ГОСТ ISO 5725-1 и ГОСТ ISO 5725-6.

3.3.5.1    Повторяемость результатов

Абсолютное расхождение между результатами двух измерений МШФ1 и МШФ 2, которые получены в условиях повторяемости (одна и та же методика, идентичный объект испытания, одна и та же лаборатория, один и тот же оператор, одно и то же оборудование, короткий промежуток времени), не должно превышать предела повторяемости г=2,8 стг 0,01 Мгмфср. Значения г и аг представлены в таблицах 7 и 8.

3.3.5.2 Воспроизводимость результатов    _    _

Абсолютное расхождение между результатами двух независимых измерений МШФ1 иМГМФ 2, которые получены в условиях воспроизводимости (одна и та же методика, идентичный объект испытания, разные лаборатории, разные операторы, различное оборудование), не должно превышать предела воспроизводимости

|Мгмф,1 — Мгмф,2| <R, R - 2,8 or 0,01 МгмФср.

Значения R и aR представлены в таблицах 7 и 8.

3.3.5.3 При соблюдении всех регламентируемых методикой условий проведения измерений характеристики погрешности результата измерения с вероятностью Р = 0,95 не должны превышать значений, приведенных в таблицах 7 и 8.

Таблица 7 — Диапазон измерений, значения характеристик погрешности и ее составляющих при доверительной вероятности Р = 0,95

Диапазон измерений содержания ГМФ, мг/кг

Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости) аг, %

Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости) aR, %

Показатель точности (границы относительной погрешности) + 5, %

1,0—85,0

6,0

12,0

28,0

Таблица 8 — Диапазон измерений, значения пределов повторяемости и воспроизводимости при доверительной вероятности Р = 0,95

Диапазон измерений содержания ГМФ, мг/кг

Предел повторяемости (для двух результатов параллельных определений) г, % отн.

Предел воспроизводимости (значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях) R, % отн.

1,0—85,0

11

29

3.3.6 Форма представления результата

Результат измерения в документах, предусматривающихего использование, представляют в виде

ср ± А), мг/кг, Р = 0,95,

где + Д— границы характеристик абсолютной погрешности результатов измерения для данного содержания ГМФ, мг/кг;

+ Д = +5 Мср/100, значение относительной погрешности + 5представлено в таблице 7.

3.4 Реакция Селиванова-Фиге на гидроксиметилфурфураль (ГМФ)

Метод основан на образовании в кислой среде продукта взаимодействия ГМФ с резорцином, окрашенного в вишнево-красный цвет.

Диапазон определения массовой доли ГМФ в меде: не более 25,0 мг/кг — реакция отрицательная, не менее 25,0 мг/кг — реакция положительная.

3.4.1    Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

3.4.1.1    Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания+0,1 мг.

3.4.1.2    Ступки фарфоровые диаметром 70 мм с пестиком по ГОСТ 9147.

3.4.1.3    Чашки фарфоровые диаметром 50 мм по ГОСТ 9147.

3.4.1.4    Эфир для наркоза стабилизированный.

11

3.4.1.5    Резорцин по ГОСТ 9970.

3.4.1.6    Кислота соляная концентрированная, х. ч., поГОСТ3118.

3.4.2 Подготовка к испытанию

3.4.2.1    Приготовление раствора резорцина

(1,00 + 0,10) г резорцина (см. 3.4.1.5) растворяют в 100 см3 концентрированной соляной кислоты (см. 3.4.1.6). Раствор должен быть бесцветным. Раствор хранят в прохладном месте в склянке из оранжевого стекла с притертой пробкой.

3.4.2.2    Проведение испытания

(3,00 + 0,10) г меда, подготовленного по 3.1.3, и 15 см3 эфира (см. 3.4.1.4) тщательно перемешивают пестиком в сухой фарфоровой ступке (см. 3.4.1.2) в течение 2—3 мин. Эфирную вытяжку переносят в сухую фарфоровую чашку по 3.4.1.3. В фарфоровую ступку добавляют 15 см3 эфира и повторяют перемешивание меда с новой порцией эфира. Эфирные вытяжки объединяют, эфиру дают испариться под тягой при комнатной температуре. К остатку добавляют две-три капли раствора резорцина по 3.4.2.1 и наблюдают изменение окраски в течение 5 мин.

Зеленовато-желтое, желтое или темно-желтое окрашивание свидетельствует о содержании гид-роксиметилфурфураля не более 25 мг/кг. Реакция отрицательная.

Вишневое окрашивание свидетельствует о содержании гидроксиметилфурфураля не менее 25 мг/кг — реакция положительная.

12

УДК 638.16:006.354    МКС    67.180.10    С52

Ключевые слова: мед натуральный, гидроксиметилфурфураль, высокоэффективная жидкостная хроматография, спектрофотометрический метод по Уайту, фотоколориметрический метод по Винклеру, реакция Селиванова-Фиге

13

Редактор Л.В. Коретникова Технический редактор Е.В. Беспрозванная Корректор Е.Д. Дульнева Компьютерная верстка И.А. Налейкиной

Сдано в набор 17.08.2014. Подписано в печать 23.10.2014. Формат 60x84}^. Гарнитура Ариал. Уел. печ. л. 1,86. Уч.-изд. л. 1,27. Тираж 93 экз. Зак. 4382.

Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru    info@gostinfo.ru

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕД НАТУРАЛЬНЫЙ Методы определения гидроксиметилфурфураля

Natural honey. Methods for determination of hydroxymethylfurfural

Дата введения — 2013—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на натуральный мед (далее — мед) и устанавливает следующие методы определения гидроксиметилфурфураля:

-    высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) (диапазон измеряемого содержания гидроксиметилфурфураля от 1,0 до 85,0 мг/кг);

-    спектрофотометрический по Уайту (диапазон измеряемого содержания гидроксиметилфурфураля от 1,0 до 85,0 мг/кг);

-    фотоколориметрический по Винклеру (диапазон измеряемого содержания гидроксиметилфурфураля от 1,0 до 85,0 мг/кг);

-    реакция Селиванова-Фиге на гидроксиметилфурфураль.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 4207-75 Калий железистосинеродистый 3-водный. Технические условия ГОСТ ISO 5725-1-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ ISO 5725-6-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ 5823-78 Цинк уксуснокислый 2-водный. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия ГОСТ 9805-84 Спирт изопропиловый. Технические условия ГОСТ 9970-74 Резорцин технический. Технические условия

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 17299-78 Спирт этиловый технический. Технические условия

ГОСТ 19792-2001 Мед натуральный. Технические условия

ГОСТ 24104-2001* Весы лабораторные. Общие технические требования

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».

Издание официальное

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648—77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29228-91 (ИСО 835-2—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 2. Пипетки градуированные без установленного времени ожидания

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Методы определения содержания гидроксиметилфурфураля (ГМФ)

Методы позволяют определять содержание гидроксиметилфурфураля [б-(гидроксиметил-)-фуран-2-карбальдегида (ГМФ)] в натуральном меде.

3.1    Определение содержания гидроксиметилфурфураля (ГМФ) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

Метод основан на применении обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Содержание ГМФ фиксируется спектрофотометрическим детектором в ультрафиолетовой области спектра.

Метод включает следующие этапы:

-    построение калибровочной прямой;

-    растворение навески меда в дистиллированной воде;

-    добавление к раствору меда растворов Карреза I и II для осаждения протеинов и стабилизации ГМФ в водном растворе;

-    фильтрацию полученного раствора;

-    определение содержания ГМФ на жидкостном хроматографе, снабженном УФ-детектором. Диапазон определения содержания ГМФ в анализируемом меде от 1,0 до 85,0 мг/кг.

Метод применяют при возникновении разногласий в оценке качества продукции.

3.1.1    Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

3.1.1.1    Хроматограф для жидкостной хроматографии, состоящий:

-    из градиентного насоса высокого давления с подачей элюента от 0,1 до 5,0 см3/мин;

-    термостата колонок;

-    инжектора или автосемплера;

-    спектрофотометрического УФ-детектора;

-    системы для сбора и обработки данных.

3.1.1.2    Колонка хроматографическая с силикагелем (С18) с привитыми октадецил ьными группами типа Eclipse XDB-C18 с размером частиц 5 мкм, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм.

3.1.1.3    Предколонка с картриджем Phenomenex С18 (ODS) 4x3 мм.

3.1.1.4    Спектрофотометр, позволяющий проводить измерение оптической плотности при длине волны 210—380 нм.

3.1.1.5    Кюветы кварцевые с толщиной слоя раствора, поглощающего свет, равной 1 см.

3.1.1.6    Микрошприцы вместимостью от 10 до 50 мкл для жидкостной хроматографии (в случае использования инжектора).

3.1.1.7    Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6С.

3.1.1.8    Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +1,0 мг.

3.1.1.9    Система получения воды квалификации для ВЭЖХ МММроге Simplicity или аналогичная.

3.1.1.10    Колбы мерные наливные 2-50-1,2-100-1 поГОСТ 1770.

3.1.1.11    Пипетки 2-1-1-1 по ГОСТ 29227, ГОСТ 29228.

2

ГОСТ 31768-2012

3.1.1.12    Пипетки 2-2-25 по ГОСТ 29169.

3.1.1.13    1-канальные механические дозаторы с варьируемыми объемами дозирования 10—100 мкл, 100—1000 мкл, 1—5 см3 1-го класса точности.

3.1.1.14    Фильтр нейлоновый импортный на шприце с размером пор 0,45 мкм (13 mm Nylon 0,45 pm (Waters)).

3.1.1.15    Баня водяная или шкаф сушильный по ГОСТ 14919.

3.1.1.16    Сито лабораторное из металлической сетки.

3.1.1.17    Шпатель лабораторный.

3.1.1.18    Ацетонитрил для жидкостной хроматографии.

3.1.1.19    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.1.1.20    Вода для лабораторного анализа категории 1.

3.1.1.21    Калий железистосинеродистый 3-BOflHbm[K4Fe(CN)6 -3H20],x. ч., поГОСТ 4207.

3.1.1.22    Цинк уксуснокислый 2-водный [Zn(CH3COO)2 • 2НгО], х. ч., по ГОСТ 5823.

3.1.1.23    5-Гидроксиметилфурфураль (ГМФ) с содержанием основного вещества не ниже 99 %, Aldrich, каталожный номер № Н4080-7.

Допускается использование других средств измерений, вспомогательного оборудования по метрологическим, техническим характеристикам не хуже указанных в настоящем стандарте.

Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.

3.1.2    Условия хроматографического анализа:

-    колонка Eclipse XDB-C18,5 мкм, 150 х 4,6 мм по 3.1.1.2;

-    предколонка с картриджем PhenomenexС18 (ODS) 4x3 мм по 3.1.1.3;

-    температура — (30 ± 1) °С;

-    элюирование (градиент):

-    0—7 мин — вода/ацетонитрил 97/3,

-    7,0—7,5 мин — вода/ацетонитрил 97/3 — вода/ацетонитрил 0/100,

-    7,5—12,0 мин — вода/ацетонитрил 0/100,

-    12,0—12,5 мин — вода/ацетонитрил 0/100-вода/ацетонитрил 97/3,

-    12,5—17,0 мин — вода/ацетонитрил 97/3;

-    скорость потока — 1,0 см3/мин;

-    объем вводимой пробы — 20 мкл;

-    детектор — диодная матрица: диапазон одновременно детектируемых длин волн 210—380 нм с шагом 2 нм, рабочая длина волны — 283 нм;

-    время удерживания ГМФ (7,0 + 0,3) мин.

3.1.3    Отбор проб

3.1.3.1    Отбор проб — по ГОСТ 19792.

3.1.4    Подготовка пробы меда к испытанию

3.1.4.1    Закристаллизованный мед предварительно размягчают на водяной бане или в сушильном шкафу (см. 3.1.1.15) при температуре не выше 40 °С и продавливают шпателем (см. 3.1.1.17) через металлическое сито (см. 3.1.1.16).

3.1.4.2    Сотовый мед распечатывают и отделяют от сот при помощи металлического сита без нагревания.

Анализируемую пробу меда тщательно перемешивают не менее 3 мин. При перемешивании обращают внимание на то, чтобы в мед попало меньше воздуха.

3.1.5    Подготовка к проведению анализа

3.1.5.1    Приготовление основного стандартного раствора ГМФ массовой концентрацией 500 мкг/см3 (раствор А)

(0,050 ± 0,001) г ГМФ (см. 3.1.1.23) взвешивают и растворяют в воде для лабораторного анализа по 3.1.1.20, количественно переносят в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см3, доводят до метки водой для лабораторного анализа и тщательно перемешивают. Получают раствор А. Срок хранения раствора А в холодильнике при температуре 4 °С — не более 3 мес.

3.1.5.2    Приготовление рабочего стандартного раствора ГМФ массовой концентрацией 2 мкг/см(раствор Б)

Аликвоту 0,2 см3 раствора А переносят в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 50 см3, доводят до метки водой для лабораторного анализа и тщательно перемешивают. Получают раствор Б, который используют при калибровке хроматографа.

Срок хранения раствора Б при комнатной температуре — не более 1 сут.

3

3.1.5.3 Определение точной массовой концентрации ГМФ в растворе Б

Определение точной массовой концентрации ГМФ в растворе Б проводят с помощью УФ-спектро-фотометра (см. 3.1.1.4), измеряя оптическую плотность при длине волны 285 нм, раствором сравнения служит вода для лабораторного анализа (см. 3.1.1.12).

Точную массовую концентрацию гидроксиметилфурфураля в рабочем стандартном растворе С, мг/дм3 или мкг/см3, рассчитывают по формуле

с _ 7Ш-1000 _ /4-1000 LE 1-133,57’

где Л — оптическая плотность раствора;

М — молекулярная масса ГМФ (М = 126 г/моль);

10ОО — коэффициент пересчета мг в мкг;

L — толщина слоя раствора в кварцевой кювете (см. 3.1.1.5), равная 1 см;

Е — коэффициент молярной экстинкции для водного раствора (Е = 16830 см2/ммоль).

Значение относительной погрешности определения массовой концентрациии ГМФ в растворе с помощью УФ-спектрофотометрии не должно превышать 5% при вероятности Р= 0,95.

3.1.5.4    Приготовление раствора Карреза I

В мерной колбе вместимостью 100 см3 растворяют в дистиллированной воде (см. 3.1.1.19) (15,00 + 0,01) г калия железистосинеродистого 3-водного (см. 3.1.1.21), доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают. Срокхранения при комнатной температуре — 6 мес.

3.1.5.5    Приготовление раствора Карреза II

В мерной колбе вместимостью 100 см3 растворяют в дистиллированной воде (30,00 + 0,01) г цинка уксуснокислого 2-водного (см. 3.1.1.22), доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают. Срокхранения — 6 мес.

3.1.5.6    Построение калибровочного графика

В мерных колбах вместимостью 50 см3 готовят растворы ГМФ массовой концентрацией 0,02; 0,1; 0,5; 1,0; 1,5 и 2,0 мкг/см3 путем доведения до метки водой для лабораторного анализа соответствующих количеств раствора Б в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1

Концентрация калибровочного раствора, мкг/см3

0,02

0,1

0,5

1,0

1,5

2,0

Объем раствора Б, см3

0,5

2,5

12,5

25,0

37,5

50,0

Каждый раствор хроматографируют не менее трех раз. При построении калибровочного графика на оси абсцисс откладывают концентрацию рабочего стандартного раствора в мкг/см3, а по оси ординат — средние значения площадей пиков. Калибровочный график должен быть линейным в заданном диапазоне концентраций с коэффициентом корреляции 0,99. Воспроизводимость результатов проверяют следующим образом: вводят не менее пяти инжекций раствора ГМФ с концентрацией 0,5 мкг/см3, относительная среднеквадратичная ошибка Sr(x) не должна превышать 2 %.

3.1.5.7 Подготовка пробы

(1,000 ± 0,001) г меда, подготовленного по 3.1.4, взвешивают в стакане по ГОСТ 25336 и растворяют в 25 см3 воды для лабораторного анализа, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3, тщательно перемешивают до растворения и вносят последовательно по 10 мкл растворов Карреза I и II по 3.1.5.4, 3.1.5.5, каждый раз перемешивая смесь. Доводят до метки водой для лабораторного анализа и тщательно перемешивают. Полученную смесь фильтруют через нейлоновый фильтр с размером пор 0,45 мкм (см. 3.1.1.14). Срокхранения пробы при комнатной температуре — 8 ч.

3.1.6 Выполнение измерений и обработка результатов анализа

3.1.6.1 Выполнение измерений

Фильтрованный раствор пробы, приготовленный по 3.1.5.7, хроматографируют не менее трех раз. Хроматограмма раствора меда, содержащего ГМФ, представлена на рисунке 1.

Разрешение между соседними с ГМФ пиками рассчитывают по формуле

2 (ff?2 ^R1) W2 -И/j ’


(2)


Rs =


где fR1 и tR2 — время удерживания веществ, мин; 4


ГОСТ 31768-2012

и W2 — ширина пиков у основания, мин;

Rs должно быть не менее 1,0.

Сигнал детектора

Рисунок 1 —Хроматограмма раствора меда, содержащего ГМФ


По калибровочному графику, зная площадь пика ГМФ, находят концентрацию ГМФ в анализируемой пробе меда.

3.1.6.2 Обработка результатов анализа

СгМФ ~Ч)6р

тмеда


Мгмф-


(3)


Содержание гидроксиметилфурфураля в анализируемом меде МШФ, мг/кг, рассчитывают по формуле

где СГМФ — концентрация ГМФ, найденная по калибровочному графику, мкг/см3;

Vo6p — объем, в котором растворена анализируемая проба, см3; тмада — масса анализируемой пробы меда, г.

Примечание — Объемы инжекции раствора пробы меда и калибровочного раствора ГМФ должны быть одинаковыми.

Вычисления проводят с записью результата до второго десятичного знака. Окончательный результат записывают с точностью до первого десятичного знака.

За окончательный результатопределения принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, если выполняется условие приемлемости

Мгмф,1 — Мгмф,2^ г, г = 2,8 аг0,01 /ИгмФср .

3.1.7 Точность метода

Статистический анализ результатов испытаний по оценке точности метода проводят в соответствии с требованиями ГОСТ ISO 5725-1 и ГОСТ ISO 5725-6.

3.1.7.1 Повторяемость результатов

Абсолютное расхождение между результатами двух измерений МШФ1 и МШФ 2, которые получены в условиях повторяемости (одна и та же методика, идентичный объект испытания, одна и та же лаборатория, один и тот же оператор, одно и то же оборудование, короткий промежуток времени), не должно превышать предела повторяемости стг=2,8стг0,01 МШФср. Значения г и аг представлены в таблицах 2 и 3.

5

3.1.7.2 Воспроизводимость результатов    _    _

Абсолютное расхождение между результатами двух независимых измеренийМГМФ1 иМГМФ2, которые получены в условиях воспроизводимости (одна и та же методика, идентичный объект испытания, разные лаборатории, разные операторы, различное оборудование), не должно превышать предела воспроизводимости \МШФ/[ШФ 21 <R, R = 2,8 aR 0,01 Мгмфср.

Значения R и <тк представлены в таблицах 2 и 3.

3.1.7.3    При соблюдении всех регламентируемых методикой условий характеристики погрешности результата измерения с вероятностью Р = 0,95 не должны превышать значений, приведенных в таблицах 2 и 3.

Таблица 2 — Диапазон измерений, значения характеристик погрешности и ее составляющих при доверительной вероятности Р = 0,95

Диапазон измерений содержания ГМФ, мг/кг

Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости)

%

Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости) aR, %

Показатель точности (границы относительной погрешности) + 5, %

1,0—85,0

4

11

25

Таблица 3 — Диапазон измерений, значения пределов повторяемости и воспроизводимости при доверительной вероятности Р = 0,95

Диапазон измерений содержания ГМФ, мг/кг

Предел повторяемости (для двух результатов параллельных определений) г, % отн.

Предел воспроизводимости (значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях) R, % отн.

1,0—85,0

10

30

3.1.8 Форма представления результата

Результат измерения в документах, предусматривающих его использование, представляют в

виде:

ср ± А), мг/кг, Р = 0,95,

где + А — границы характеристик абсолютной погрешности результатов измерения для данного содержания ГМФ, мг/кг;

+ д= + 5Л4ср/100, значение относительной погрешности + 8представлено в таблице 2.

3.2 Спектрофотометрический метод определения содержания гидроксиметилфурфураля (ГМФ) по Уайту

Метод основан на определении оптической плотности ГМФ в УФ-диапазоне при длине волны 1= 284 нм. Чтобы исключить влияние других компонентов в данной области спектра, определяют:

-    оптическую плотность водного раствора меда по сравнению с таким же раствором после добавления в него 0,2 %-ного раствора бисульфита натрия при длине волны 284 нм;

-    оптическую плотность техже растворов при длине волны 336 нм.

Содержание ГМФ вычисляют после вычитания оптической плотности фона, измеренной при длине волны 336 нм.

3.2.1    Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

3.2.1.1    Спектрофотометр, позволяющий проводить измерения при длинах волн 284 и 336 нм с допустимой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1 %.

3.2.1.2    Кюветы кварцевые с толщиной поглощающего слоя 1 см.

3.2.1.3    Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±1,0 мг.

3.2.1.4    Стаканы стеклянные исполнения 1 вместимостью 50 см3 по ГОСТ 25336.

3.2.1.5    Пипетки 2-1-1-1 по ГОСТ 29227, ГОСТ29228.

3.2.1.6    Пипетки 1-1-5,2-2-25 по ГОСТ29169.

3.2.1.7    Фильтры обеззоленные.

3.2.1.8    Колбы мерные исполнения 1 вместимостью 50 и 100 см3 по ГОСТ 1770.

ГОСТ 31768-2012

3.2.1.9    Пробирки вместимостью 15 см3 по ГОСТ 1770.

3.2.1.10    Баня водяная.

3.2.1.11    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.2.1.12    Калий железистосинеродистый 3-водный [K4Fe(CN)6 • ЗН20], х. ч., по ГОСТ 4207.

3.2.1.13    Цинкуксуснокислый 2-водный [Zn(CH3COO)2 • 2Н20], х. ч., по ГОСТ5823.

3.2.1.14    Натрия бисульфит [NaHS03] с содержанием основного вещества не ниже 99 %, Acros Organics, каталожный номер № 7631-90-5.

3.2.1.15    Спирт этиловый технический поГОСТ 17299.

Допускается использование других средств измерений, вспомогательного оборудования по метрологическим, техническим характеристикам не хуже указанных в настоящем стандарте.

Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.

3.2.2 Отбор и подготовка проб

3.2.2.1    Отбор проб — по ГОСТ 19792.

3.2.2.2    Подготовка проб — по 3.1.4.

3.2.3 Приготовление рабочих растворов

3.2.3.1    Приготовление растворов Карреза I и II

3.2.3.2    Приготовление растворов Карреза I и II осуществляют по 3.1.5.4,3.1.5.5.

3.2.3.3    Приготовление раствора бисульфита натрия

В мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см3 переносят (0,20 + 0,01) г бисульфита натрия (см. 3.2.1.14), добавляют 20—30 см3 дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения. Объем доводят до метки дистиллированной водой. Раствор готовят перед началом определения.

3.2.4 Проведение анализа и обработка результатов анализа

3.2.4.1 Проведение анализа

(5,00 + 0,1) г меда, подготовленного по 3.1.4, взвешивают в стакане (см. 3.2.1.4) вместимостью 50 см3, растворяют в 25 см3 свежекипяченой и остывшей дистиллированной воды и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3. Пипеткой добавляют две капли (~ 0,05 см3) раствора Карреза I по 3.1.5.4, перемешивают, добавляют две капли (~ 0,05 см3) раствора Карреза II по 3.1.5.5, перемешивают и доводят до метки дистиллированной водой. Для подавления пенообразования пипеткой можно добавить одну каплю этанола (см. 3.2.1.15). Затем раствор фильтруют через бумажный фильтр (см. 3.2.1.7), первые 10 см3 фильтрата отбрасывают и получают раствор В.

В две пробирки (см. 3.2.1.9) пипеткой вносят по 5,0 см3 раствора В. В первую пробирку добавляют 5 см3 дистиллированной воды и тщательно перемешивают (анализируемый раствор). Во вторую пробирку добавляют 5 см3 0,2 %-ного раствора бисульфита натрия, приготовленного по 3.2.3.2, и тщательно перемешивают (раствор сравнения).

Приготовление анализируемого раствора и раствора сравнения проводят в соответствии с таблицей 4.

Таблица 4

Растворы

Анализируемый раствор, см3

Раствор сравнения, см3

Раствор В

5,0

5,0

Вода дистиллированная

5,0

0,2 %-ный раствор бисульфата натрия

5,0

3.2.4.2 Измерение оптической плотности

В течение часа измеряют оптическую плотность анализируемой пробы меда относительно раствора сравнения при длинах волн 284 и 336 нм. Если оптическая плотность при длине волны 284 нм превышает значение 0,6, то для получения более низкого значения оптической плотности и повышения точности измерения анализируемый раствор разбавляют дистиллированной водой, а раствор сравнения — бисульфитом натрия в равных объемах.

В случае разбавления применяют формулу

q - Конечный объект исследуемого раствора 10


(4)


где D — фактор разбавления;

10 — коэффициент разбавления.


3.2.4.3 Обработка результатов измерений

Содержание гидроксиметилфурфураля в анализируемом меде А4ГМФ, мг/кг, рассчитывают по формуле

Л4гмф = (^284 — >4ззб) • 149,7 • D ■ 5//7?меда,    (5)

где Л284 — оптическая плотность при 284 нм;

А336 — оптическая плотность при 336 нм;

14д 7 _126-1000-1000 ’    16830-10-5    ’

где 126 — молекулярный вес ГМФ, г/моль;

16830 — коэффициент молярной экстинкции водного раствора при 1= 284 нм, см2/ммоль;

10 — перевод 5 см3 в 50 см3;

1000 — перевод г в мг;

1000 — перевод г меда в кг;

5 — объем раствора В, см3;

D — фактор разбавления;

5 — теоретическая номинальная масса пробы, г; m а — масса анализируемой пробы меда, г.

Вычисления проводят с записью результата до второго десятичного знака.

Окончательный результат записывают с точностью до первого десятичного знака.

За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, если выполняется условие приемлемости

|Л4Гмф,1 - Л4Гмф,2 \^г, г = 2,8 аг 0,01 МгмфСр.

3.2.5 Точность метода

Статистический анализ результатов испытаний по оценке точности метода проводят в соответствии с требованиями ГОСТ ISO 5725-1 и ГОСТ ISO 5725-6.

3.2.5.1    Повторяемость результатов

Абсолютное расхождение между результатами двух измерений МШФ1 иЛ4ГМФ2, которые получены в условиях повторяемости (одна и та же методика, идентичный объект испытания, одна и та же лаборатория, один и тот же оператор, одно и то же оборудование, короткий промежуток времени), не должно превышать предела повторяемости г=2,8 аг 0,01 Мгмфср. Значения ги ^представлены в таблицах 5 и 6.

3.2.5.2    Воспроизводимость результатов

Абсолютное расхождение между результатами двух независимых измерений Л4ГМФ1 иМгаф 2, которые получены в условиях воспроизводимости (одна и та же методика, идентичный объект испытания, разные лаборатории, разные операторы, различное оборудование), не должно превышать предела воспроизводимости

|Л4гмф,1 - Л4гмФ,г| £R, R - 2,8 or 0,01 Л//ГмФср.

Значения R и aR представлены в таблицах 5 и 6.

3.2.5.3 При соблюдении всех регламентируемых методикой условий проведения измерений характеристики погрешности результата измерения с вероятностью Р= 0,95 не должны превышать значений, приведенных в таблицах 5 и 6.

Таблица 5 — Диапазон измерений, значения характеристик погрешности и ее составляющих при доверительной вероятности Р = 0,95

Диапазон измерений содержания ГМФ, мг/кг

Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости) аг, %

Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости) gr, %

Показатель точности (границы относительной погрешности) + 8, %

1,0—85,0

5,0

11,0

27,0