Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

11 страниц

304.00 ₽

Купить ГОСТ 31663-2012 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на растительные масла и животные жиры и дает общее руководство по применению газовой хроматографии с использованием насадочной колонки или капиллярной колонки для определения качественного и количественного состава смеси жирных кислот в виде метиловых эфиров, полученных по ГОСТ 31665.

Данный метод не распространяется на полимеризованные жирные кислоты

  Скачать PDF

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Условия проведения измерений

4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы, материалы

5 Подготовка к измерению

6 Выполнение измерения

7 Обработка результатов измерений

8 Метрологические характеристики

9 Требования безопасности при проведении работ

10 Требования к квалификации оператора

Приложение А (обязательное) Подготовка колонки и определение ее эффективности

Показать даты введения Admin

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

МАСЛА РАСТИТЕЛЬНЫЕ И ЖИРЫ ЖИВОТНЫЕ

Метод определения состава жирных кислот в положении 2 в молекулах триглицеридов

(ISO 6800:1997, NEQ)

Издание официальное

ГОСТ

31664-

2012

Москва

Стандартинформ

2013


Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ    1.2—2009    «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты

межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт жиров» Российской Академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИЖРоссельхоз-академии)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 20 июля 2012 г. № 50-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004—97

Код страны по МК (ИСО 3166) 004—97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарт

Узбекистан

uz

Узстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 июня 2013 г. № 348-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31664-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2014 г.

5    В настоящем стандарте учтены основные нормативные положения международного стандарта ISO 6800:97 Animal and vegetable fats and oils. Determination of the composition of fatty acids in the 2-position of the triglyceride molecules (Животные и растительные жиры и масла. Определение состава жирных кислот в положении 2 в молекулах триглицеридов).

Перевод с английского языка (еп).

Степень соответствия — неэквивалентная (NEQ).

Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 51484-99

6    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ, 2013

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агенства по техническому регулированию и метрологии

УДК 664.34.001.4:006.354    МКС    67.200.10    Н69    NEQ

Ключевые слова: масла растительные, жиры животные, газовая хроматография, метод испытания, условия определения, обработка результатов

Редактор М.И. Максимова Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор В.Е. Нестерова Компьютерная верстка А.Н. Золотаревой

Сдано в набор 22.11.2013. Подписано в печать 27.11.2013. Формат 60x84X-    Гарнитура Ариап.

Уел. печ. л. 1,40. Уч.-изд. л. 1,00. Тираж 113 экз. Зак. 1407.

ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru    info@gostinfo.ru

Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ.

Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник», 105062 Москва, Лялин пер., 6.

ГОСТ 31664-2012

Содержание

1    Область применения...................................................1

2    Нормативные ссылки..................................................1

3    Сущность метода.....................................................2

4    Условия проведения измерений............................................2

5    Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы..............2

6    Подготовка к измерению................................................3

7    Выполнение измерения.................................................4

8    Обработка результатов измерений..........................................5

9    Метрологические характеристики метода......................................5

10    Требования безопасности при проведении работ................................6

11    Требования к квалификации оператора......................................6

Приложение А (обязательное) Приготовление липазы и проверка ее активности..............7

III

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МАСЛА РАСТИТЕЛЬНЫЕ И ЖИРЫ ЖИВОТНЫЕ Метод определения состава жирных кислот в положении 2 в молекулах триглицеридов

Vegetable oils and animal fats. Method for determination of the composition of fatty acids in the position 2

of the triglyceride molecules

Дата введения —2014—01—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на растительные масла и животные жиры и устанавливает метод определения состава жирных кислот, которые находятся в положении 2 (р или среднем положении) в молекулах триглицеридов в растительных маслах и животных жирах.

В силу природных свойств активности панкреатической липазы метод применим только для жиров с температурой плавления ниже 45 °С.

Этот метод не может без ограничений применяться для всех жиров и масел, в частности, содержащих значительные количества:

-    жирных кислот с 12 и менее атомами углерода (например, кокосовое масло, пальмоядровое масло, молочный жир);

-    жирных кислот с 20 и более атомами углерода и высокой степенью ненасыщенное™ (более четырех двойных связей) (например, рыбные жиры и жиры морских млекопитающих);

-    жирных кислот, имеющих вторичные группы, содержащие кислород.

Примечан ие — Жирные кислотысдвойнымисвязямивположенииот(Д-16)до(Д-11)(напримерпетро-зелиновая кислота) лишь в слабой степени подвергаются воздействию панкреатической липазы. Это может привести к искажению результатов.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 450-77 Кальций хлористый технический. Технические условия

ГОСТ 976-81 Маргарин, жиры для кулинарии, кондитерской и хлебопекарной промышленности. Правила приемки и методы испытаний

ГОСТ 2603-79 Ацетон. Технические условия

ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 5471-83 Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 5848-73 Кислота муравьиная. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 8285-91 Жиры животные топленые. Правила приемки и методы испытания

ГОСТ 9293-74 (ИСО 2435—73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 9805-84 Спирт изопропиловый. Технические условия

ГОСТ 18270-72 Кислота уксусная особой чистоты. Технические условия

Издание официальное

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 31663-2012 Масла растительные и жиры животные. Определение методом газовой хроматографии массовой доли метиловых эфиров жирных кислот

ГОСТ 31665-2012 Масла растительные и жиры животные. Получение метиловых эфиров жирных кислот

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регоулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Сущность метода

Метод включает нейтрализацию свободныхжирных кислот, очистку испытуемой пробы с помощью колоночной хроматографии, частичный энзиматический гидролиз глицеридов, отделение 2-моноглицеридов с помощью тонкослойной хроматографии и определение их жирнокислотного состава с помощью газовой хроматографии.

4    Условия проведения измерений

При подготовке и выполнении измерений в помещении лаборатории должны быть соблюдены следующие условия:

-    температура окружающей среды, °С...............................от    15    до    30;

-    относительная влажность воздуха, %..............................не    более    80;

-    напряжение питающей сети, В..................................... 220    ±    15;

-    частота переменного тока, Гц.......................................50    ±    2.

5    Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

Спирт изопропиловый по ГОСТ 9805, с объемной массой 95 % и 50 %.

Спирт этиловый по ГОСТ 18300, с объемной массой 95 % и 50 %.

Гексан по нормативному документу, действующему на территории государства, принявшего стандарт.

Эфир петролейный с температурой кипения 30 °С—60 °С.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, раствор молярной концентрации c(NaOH) = 0,1 моль/дм3 и c(NaOH) = 0,5 моль/дм3.

Фенолфталеин, спиртовой раствор массовой долей 1 %.

Алюминия окись активированная нейтральная для хроматографии I степени активности, активированная перед использованием в течение 2 ч при 260 °С и хранящаяся в эксикаторе.

Азот по ГОСТ 9293, ос. ч.

Эфир этиловый, не содержащий перекисей.

Кислота соляная по ГОСТ 3118 концентрации с(НС1) = 6 моль/дм3.

Натрия холат, раствор массовой долей 0,1 %, пригодный для энзимов.

Кальций хлористый по ГОСТ 450, раствор концентрации 220 г/дм3.

Раствор буферный, 2-амино-2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диол* молярной концентрации 1 моль/дм3; раствор доводят соляной кислотой до pH 8 по pH-метру. Раствор хранят при температуре 0 °С——4 °С и используют в течение 14 дней. 1 2

ГОСТ 31664-2012

Липаза панкреатическая активностью 8—20 ед/мг. Липазу хранят сухой в холодильнике. Перед использованием доводят порцию порошка до комнатной температуры.

Примечание — Липаза необходимой активности имеется в продаже. При необходимости она может быть получена и испытана в соответствии с методикой, приведенной в приложении А.

Ацетон по ГОСТ2603.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Силикагель порошкообразный со связующим веществом для тонкослойной хроматографии.

21, 71- Дихлорфлуоресцеин, спиртовой раствор индикатора массовой долей 0,2 %. Слабощелочная реакция достигается добавлением одной капли гидроокиси натрия молярной концентрации 1 моль/дм3 на 100 см3 раствора.

Кислота муравьиная по ГОСТ 5848 или Кислота уксусная по ГОСТ 18270.

Реактивы по ГОСТ 31663 и ГОСТ31665.

Весы лабораторные по ГОСТ 24104.

Баня водяная с терморегулятором, обеспечивающая нагрев до (40 ± 0,5) °С.

Колонка стеклянная для хроматографии внутренним диаметром 13 мм и длиной 400 мм, снабженная стеклянным пористым фильтром и пробкой.

Испаритель ротационный с колбой вместимостью 250 см3.

Трубка для пробулькивания азота.

Воронка делительная ВД-1 (3)-500 ХС по ГОСТ 25336.

Колба К-1-25-14/23 ТС по ГОСТ 25336 с воздушным холодильником длиной приблизительно 1 м. Колба Кн-2-50-18(22) ТС по ГОСТ 25336.

Колба Кн-1-250-29/32 ТС по ГОСТ 25336.

Колба К-1-100-29/32 ТС по ГОСТ 25336.

Центрифуга.

Пробирки центрифужные стеклянные вместимостью 10 см3 со шлифом.

Встряхиватель вибрационный электрический.

Шприц для подкожных инъекций вместимостью 1 см3 с тонкой иглой.

Секундомер.

Камера хроматографическая для тонкослойной хроматографии с притертой стеклянной крышкой, пригодная для размещения стеклянных пластинок размером (200 х 200) мм.

Устройство для нанесения адсорбента на стеклянные пластинки и аппликатор.

Пластинки стеклянные размером (200 х 200) мм.

Микрошприц, обеспечивающий нанесение капель объемом 3—4 мм3.

Приспособление для опрыскивания пластинок раствором индикатора.

Микрошпатель.

Термостат, обеспечивающий температуру (103 + 2) °С.

Лампа ультрафиолетовая для определения положения пятен на хроматографических пластинках, например, при длине волны 254 нм.

Фильтр стеклянный пористый 16 мкм—40 мкм.

Эксикатор, содержащий эффективный осушитель.

Аппаратура по ГОСТ 31663 и ГОСТ31665.

Допускается применение другой аппаратуры и реактивов, по качеству и техническим характеристикам не уступающих перечисленным выше.

6 Подготовка к измерению

6.1 Отбор проб

Отбор проб

-    растительного масла — поГОСТ 5471;

-    жиров животных топленых — по ГОСТ 8285;

-    маргаринов, жиров для кулинарии, кондитерской и хлебопекарной промышленности, спредов и топленых смесей — по ГОСТ 976.

6.2    Подготовка испытуемой пробы

Если кислотность пробы не более 3,0 %, пробу очищают, пропуская ее через окись алюминия по 7.2. Если кислотность более 3,0 %, вначале нейтрализуют пробу гидроокисью натрия в присутствии растворителя по 7.1, затем очищают ее, пропуская через окись алюминия.

6.3    Приготовление проявляющего растворителя

Готовят смесь, состоящую из 70 см3 гексана или петролейного эфира, 30 см3 этилового эфира и 1 см3 муравьиной кислоты с объемной массой не менее 98 % или уксусной кислоты.

7 Выполнение измерения

7.1    Нейтрализация пробы гидроокисью натрия

Растворяют (10 + 1) г испытуемой пробы в 100 см3 гексана или легкого петролейного эфира и переносят раствор в делительную воронку. Добавляют 50 см3 изопропилового или этилового спирта, несколько капель раствора фенолфталеина и объем раствора гидроокиси натрия c(NaOH) = 0,5 моль/дм3, эквивалентный содержанию свободных жирных кислот жира или масла, с избытком 0,5 %. Тщательно перемешивают в течение 1 мин и добавляют 50 см3 воды, вновь перемешивают и дают отстояться. После разделения слоев сливают нижний слой, содержащий мыло, и промежуточные слои (слизистые и нерастворимые вещества). Нейтрализованный раствор в воронке промывают последовательными порциями по 25 см3 50 %-ного раствора изопропилового или этилового спирта до тех пор, пока розовый цвет фенолфталеина не исчезнет. Переносят раствор в колбу ротационного испарителя и выпаривают большую часть растворителя под вакуумом. Высушивают масло при 30 °С—40 °С под вакуумом в токе азота до тех пор, пока растворитель не будет удален полностью.

7.2    Очистка пробы пропусканием через окись алюминия

Готовят суспензию 15 г активированной окиси алюминия в 50 см3 гексана или легкого петролейного эфира и заполняют ею при постукивании хроматографическую колонку. Убедившись, что окись алюминия ровно заполнила колонку, оставляют слой растворителя на 1—2 мм выше верхнего уровня адсорбента. Растворяют 5 г испытуемой пробы в 25 см3 гексана или легкого петролейного эфира, нейтрализуют раствор, если необходимо, и осторожно приливают его в колонку. Собирают весьэлюат в круглодонную колбу вместимостью 100 см3. Удаляют большую часть растворителя выпариванием в ротационном испарителе под вакуумом, затем высушивают остаток при 30 °С—40 °С под вакуумом в токе азота до тех пор, пока растворитель не будет удален полностью.

7.3    Гидролиз триглицеридов

7.3.1    Взвешивают (0,1 + 0,01) гочищенной испытуемой пробы в пробирке для центрифугирования вместимостью 10 см3. Если проба не является жидкой при комнатной температуре, помещают пробирку в ячейку водяной бани при температуре 60 °С—65 °С. Если при этом проба не расплавится полностью, ее продолжают выдерживать в бане, но не более 10 с. Вынимают пробирку из водяной бани и продолжают выполнять в быстрой последовательности испытания в соответствии с 7.3.2—7.3.5.

7.3.2    Добавляют кжидкой пробе предварительно взвешенные 20 мг липазы и 2 см3 буферного раствора. Осторожно встряхивают и добавляют последовательно 0,5 см3 раствора холата натрия и 0,2 смраствора хлорида кальция.

Закрывают пробирку пробкой, осторожно встряхивают и сразу же помещают пробирку в ячейку водяной бани при 40 °С, выполняя ручное встряхивание в течение (60 + 2) с. Все операции до начала ручного встряхивания должны быть выполнены за 30 с.

7.3.3    Извлекают пробирку из водяной бани и интенсивно встряхивают при 40 °С в течение (120 ± 2)с, используя встряхиватель.

7.3.4    Немедленно после встряхивания приливают 1 см3 соляной кислоты и 1 см3 этилового эфира. Закрывают пробкой и интенсивно встряхивают на встряхивателе.

7.3.5    Центрифугируют содержимое пробирки и переносят органическую фазу в пробирку для испытания с помощью шприца. Если проба была твердой при комнатной температуре, повторяют экстракцию с еще 1 см3 этилового эфира и объединяют экстракты в пробирке для испытания.

7.4 Отделение 2-моноглицеридов

7.4.1 Подготовка пластинок

Тщател ьно очищают стеклянные пластинки 95 %-ным этиловым спиртом, гексаном или легким пет-ролейным эфиром и ацетоном до тех пор, пока жировые вещества не будут удалены полностью. 4

ГОСТ 31664-2012

Взвешивают 30 г силикагеля в конической колбе вместимостью 250 см3. Добавляют 60 см3 дистиллированной воды. Закрывают пробкой и интенсивно встряхивают в течение 1 мин. Сразу же вносят суспензию в аппликатор. Наносят на очищенные пластинки слой толщиной 0,25 мм. Оставляют пластинки высыхать не менее чем на 1 ч на воздухе. В любом случае, подготовлены ли пластинки способом, описанным выше, или приобретены готовыми, активируют пластинки в термостате при 103 °С в течение 1 ч. Перед использованием пластинки охлаждают до комнатной температуры в эксикаторе. Для уменьшения скорости продвижения кислот пластинки с силикагелем пропитывают борной кислотой. Испытуемую смесь разделяют с помощью тонкослойной хроматографии как можно скорее. В связи с тем, что некоторые силикагели содержат органические вещества, которые могут оказывать влияние на результаты в процессе хроматографического анализа, очищают подготовленные пластинки. Для этого пластинки помещают в хроматографическую камеру с растворителем и дают растворителю подняться до верха пластинки. Допускается применение других хроматографических пластинок, по техническим характеристикам не хуже указанных.

7.4.2 Отделение 2-моноглицеридов

С помощью микрошприца на подготовленную пластинку наносят экстракт (7.3.5) каплями в виде сплошной полосы, проходящей на расстоянии 15 мм от нижнего края пластинки. Устанавливают пластинку в хроматографическую камеру, которую предварительно насыщают парами разделяющего растворителя. Закрывают камеру крышкой и осуществляют хроматографирование веществ на пластинке до тех пор, пока фронт растворителя не достигнет уровня на расстоянии 10 мм от верхнего края пластинки. Хроматографическое разделение проводят при температуре приблизительно 20 °С. Высушивают пластинку на воздухе при температуре 20 °С и опрыскивают ее раствором индикатора, используя приспособление для опрыскивания. Отмечают полосу моноглицеридов (Rf= 0,035 приблизительно) в ультрафиолетовом свете и соскребают ее микрошпателем, избегая попадания в нее компонентов с линии старта. Если очищенные испытуемые пробы (7.2) были жидкими при комнатной температуре, помещают собранный силикагель в колбу для метилирования вместимостью 25 см3 и выполняют операции, описанные в 7.5. Если очищенные испытуемые пробы (7.2) были твердыми при комнатной температуре, переносят силикагель в коническую колбу вместимостью 50 см3, содержащую 15 см3 этилового эфира. Интенсивно встряхивают и переносят содержимое на стеклянный пористый фильтр. Промывают фильтр троекратно, используя каждый раз порцию по 15 см3 этилового эфира, и собирают фильтрат в колбу для выпаривания. Выпаривают эфирный раствор до объема 4 см3—5 см3 и переносят его в предварительно взвешенную круглодонную колбу вместимостью 25 см3. Затем выпаривают растворитель в токе азота. Взвешивают остаток. Полученное количество моноглицеридовдолжноколебатьсяот10%до 30 % от массы испытуемой пробы. Если результат иной, повторяют гидролиз триглицеридов (7.3) или проверяют активность липазы (см. приложение А).

7.5 Анализ 2-моноглицеридов с помощью газовой хроматографии

Готовят метиловые эфиры жирных кислот из моноглицеридов, подвергая собранный силикагель (или экстракт моноглицеридов из силикагеля) процедуре, установленной ГОСТ 31665, используя метод, пригодный для нейтральных жиров и масел. Проводят газохроматографический анализ метиловых эфиров по ГОСТ 31663.

8    Обработка результатов измерений

Рассчитывают отношение массы метилового эфира каждой жирной кислоты в положении 2, выраженное в процентах, кобщей массе метиловых эфиров жирных кислот в 2-моноглицеридах.

Результаты записывают с точностью до первого десятичного знака.

9    Метрологические характеристики метода

9.1 Повторяемость

Расхождение между результатами двух независимых единичных определений, выполненных при использовании одного метода, на идентичном испытуемом материале, в одной лаборатории, одним аналитиком, на одном оборудовании, за короткий промежуток времени, не должно превышать при доверительной вероятности 0,95:

-    0,2 % (абс.) — при содержании определяемых компонентов менее 5 %;

-    3 % (отн.) от полученного значения, но не более 1 % (абс.) — при содержании определяемых компонентов, равном или более 5 %. 5

9.2 Воспроизводимость

Расхождение между результатами двух единичных определений, выполненных одним методом, на идентичном испытуемом материале, в разных лабораториях, разными аналитиками, на различном оборудовании, не должно превышать при доверительной вероятности 0,95:

- 0,5 % (абс.) — при содержании определяемых компонентов менее 5 %;

-10 % (отн.) от полученного значения, но не более 3 % (абс.) — при содержании определяемых компонентов, равном или более 5 %.

10    Требования безопасности при проведении работ

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и быть оснащено средствами пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009.

11    Требования к квалификации оператора

Выполнение измерений, обработку и оформление результатов должен проводить специалист, имеющий высшее или среднее специальное образование, навыки работы на хроматографе и освоивший настоящий метод. 6

Приложение A (обязательное)

Приготовление липазы и проверка ее активности

А.1 Приготовление липазы

Охлаждают 5 кг свежей свиной поджелудочной железы до 0 °С. Удаляют твердый жир и соединительную ткань, ее окружающую, и измельчают железу до получения жидкой пасты. Перемешивают эту пасту с 2,5 дм3 безводного ацетона в течение 4—6 ч на холоде и затем центрифугируют. Экстрагируют остатокеще трижды таки м же объемом ацетона; дважды — смесью ацетона и этилового эфира в соотношении 1 : 1 по объему и дважды — этиловым эфиром. Высушивают остаток в течение 48 ч под вакуумом до образования порошка. Порошок хранят в холодильнике.

А.2 Проверка активности липазы

Г отовят масляную эмульсию, встряхивая смесь 165 см3 гуммиарабика концентрации 100 г/дм3,15 г дробленого льда и 20 см3 предварительно нейтрализованной пробы в течение 10 мин на пригодном для этой цели миксере. Наливают последовательно 10 см3 эмульсии, 0,3 см3 раствора холата натрия (200 г/дм3) и 20 см3 дистиллированной воды в стакан вместимостью 50 см3. Помещают стакан в водяную баню при 37 °С (см. примечание 1). В стакан опускают электроды pH-метра и пропеллерную мешалку и, используя бюретку вместимостью 5 см3, приливают по каплям раствор гидроокиси натрия с (NaOH) = 0,1 моль/дм3 до тех пор, пока не будет достигнуто значение pH 8,5. Приливают соответствующий (см. примечание 2) и точно отмеренный объем 0,1 %-ной водной суспензии анализируемого порошка липазы. Как только pH достигнет значения 8,3 по шкале pH-метра, включают секундомер и добавляют раствор NaOH так, чтобы значение pH 8,3 сохранялось. Записывают объем раствора щелочи, приливаемого каждую минуту в течение 10 мин. Наносят полученные данные на график, откладывая наосиХвремяв минутах и на оси У объем в сантиметрах кубических раствора щелочи, использованного для поддержания постоянного значения pH. Результат должен выражаться в виде прямой линии.

Примечания

1    Когда используют жидкое масло, гидролиз проводят при 37 °С. Однако для испытания устанавливают температуру 40 °С, позволяющую проанализировать жиры, имеющие температуру плавления до 45 °С.

2    Для испытания образцов используют такое количество суспензии липазы, при котором потребляется 1 смраствора щелочи за4—5 мин. Такой результатобычно достигается при использовании 2 см3—5 см3 суспензии липазы, то есть от 1 до 5 мг порошка.

Единица липазы определяется как количество энзима, которое требуется для высвобождения 1 мкмоль кислоты в минуту при 37 °С и pH 8,3.


Vc

Активность липазы А, выраженную в единицах липазы на миллиграмм использованного порошка, определяют по формуле

(А.1)

т

где V—объем израсходованного раствора гидроокиси натрия, разделенный на время, рассчитанный по графику, см3/мин;

с — концентрация раствора гидроокиси натрия, ммоль/дм3(с= 100);

т — масса испытуемой пробы порошка липазы; используемая липаза должна иметь активность от 8 до 20 единиц липазы на миллиграмм. 7

1

Синонимы: трис(гидроксиметил)метиламин, трис(гидроксиметил)аминометан.

2

3

4

5

6

7