Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

6 страниц

244.00 ₽

Купить ГОСТ 29185-91 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной навеске пищевого продукта сульфитредуцирующих клостридий и два метода определений их количества: метод наиболее вероятного числа и метод посева в агаризованную среду.

  Скачать PDF

Переиздание. Апрель 2010 г.

Действие завершено 01.01.2016

Оглавление

1 Отбор и подготовка проб

2 Аппаратура, материалы и реактивы

3 Подготовка к испытанию

4 Проведение испытания

5 Оценка результатов

Показать даты введения Admin

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА СУЛЬФИТРЕДУЦИРУЮЩИХ КЛОСТРИДИЙ

Издание официальное

Москва Стандарту нформ

2010

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

ГОСТ

29185-91

Методы выявления и определения количества сульфитредуцир\к)Н1и\ клостридий

F<xxl products. Methods Гог detection and quantity determination of sulphite-reducing Clostridium

МКС 07.100.30 ОКСТУ 9109

Дата введения 01.01.93

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной навеске пищевого продукта сульфитредуцирующих клостридий и два метода определения их количества: метод наиболее вероятною числа (НВЧ) и метод посева в авизованную среду.

Методы основаны на высеве определенного количества продукта и (или) его разведений в железосульфитсодержащие среды, инкубировании посевов при (37 ± I) 'С не более 72 ч. подтверждении принадлежности выросших микроорганизмов по культуральным, морфологическим и биохимическим признакам к сульфитредуцируютим клостридиям.

Метод определения количества сульфитредуцирующих кл остр ид и it посевом в а гари зо ванную среду предназначен для нишевых продуктов, содержащих в 1 г более 150 или в 1 см ' более 15 сульфитредуцирующих клостридий.

Метод определения НВЧ предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г менее 150. но в 10 г более 3 или в I см3 менее 15. но в 100 см3 более 3 сульфитредуцирующих клостридий. Требования настоящего стандарта являются обязательными.

I. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

Отбор и подготовка проб нишевых продуктов — по ГОСТ 26668. ГОСТ 26669.

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и пределом допускаемой погрешности ± 2 мг (для взвешивания реактивов):

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания до 1 KI и пределом допускаемой погрешности ± 10 mi (для взвешивания продукта): микроскоп световой биологический, обеспечивающий увеличение 900— 1(Х)()К: стекла предметные по ГОСТ 9284; стекла покровные по ГОСТ 6672; железа (III) цитрат (C6Hs07Fe-5H;0);

железа (III) аммония цитратC6H$67Fe C6H607(NH4)2 или C6H507FeC6H707NH4; железо треххлористое. 6-водное (FeCI ,-6HiO).

Ихтание официальное ★

• С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Фелсрации действует ГОСТ Р 53228-2008 (хлесь и далее).

Перепечатка воспрещена

1 И uaic.iiA. tHo сшнлартон. 1992 © СТАНДАРТИНФОРМ, 2010

ГОСТ 29185-91 С. 2

3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

3.1.    Приготовление растворов и реактивов

3.1.1.    Раствор сульфата железа (FeS04) концентрацией 80 г/дм': 8.0 г сульфата железа переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки. При использовании соли в виде кристаллогидратов проводят соответствующий пересчет на безводную соль.

3.1.2.    Раствор аммония железа (III) сульфата Fe(NH4) (S04)2 • 12НЮ концентрацией 50г/дм3:

5.0    г аммония железа (III) сульфата переносят в мерную колбу вместимостью 100 см', растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки.

3.1.3.    Раствор железа (III) аммония цитрата концентрацией 50 г/дм3: 5.0 г железа (III) аммония цитрата переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки.

3.1.4.    Раствор железа треххлористого (FeClj-6H20) концентрацией 80 г/дм3: 8.0 г железа треххлористого гексагидрата переносят в колбу вместимостью 100 см', растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки.

3.1.5.    Раствор сульфита натрия (натрия сернистокислого), концентрацией 100 г/дм3: 10.0 г натрия сернистокислого переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в диспилирован ной иоде. Раствор доводят до метки.

3.1.6.    Растворы, приготовленные по ни. 3.1.1—3.1.5. стерилизуют текучим паром в течение 1 ч.

3.1.7.    Раствор железа (III) цитрата (C6H<;07Fe-5H;0) концентрацией 50 г/дм3: 5.0 г железа (III) цитрата пентагидрата переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки. Раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670.

3.1.8.    Распоры и реактивы для окраски но Граму готовят но ГОСТ 10444.1.

3.1.9.    Растворы и реактивы для окраски бактериальных спор готовят по ГОСТ 10444.1.

3.1.10.    Реактив для определения каталазы готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2. Приготовление питательных сред

3.2.1.    Голодный агар готовят но ГОСТ 10444.1.

3.2.2.    Мясную воду готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.3.    Мясо-пептонный агар (бульон) с 0.1 % глюкозы и дрожжевым экстрактом готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.4.    Среду из сухого питательного агара с глюкозой готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.5.    Желеэосульфитная среда: к I дм3 дистиллированной воды добавляют 10,0 г тритона. 0.5 г сульфита натрия. 0.5 г железа (III) цитрата. 15.0 г агара (при приготовлении авизованной среды) или 1,5 г агара (при приготовлении вязкой среды). Растворяют компоненты при нагревании, после этого смесь охлаждают до (50 ± 5) *С. Устанавливают pH среды таким образом, чтобы он составлял (7.1 ± 0.1) (в пересчете на (25 ± I) *С). Среду разливают в пробирки по 10—12 см3 или колбы и стерилизуют при (121 ± 1) *С в течение 15 мин.

Тритон может быть заменен на равноценную навеску сухого панкреатического гидролизата казеина или на десятикратный объем жидкого панкреатического гидролизата казеина, а триптон и I дм' воды могут быть заменены на 1 дм3 мясной воды, приготовленной по п. 3.2.2.

3.2.6.    Триптоэо-сульфит-циклосериновый агар готовят по ГОСТ 10444.9.

3.2.7.    Дифференциальная улучшенная клостридиальная среда: в 800 см' воды вносят 10.0 г пептона. 1.5 г дрожжевого экстракта или 7.5 см3 дрожжевого экстракта, приготовленного по ГОСТ 10444.1.

5.0    г уксуснокислого натрия. Отдельно 1.0 г растворимого крахмала вносят в небольшую порцию воды и при непрерывном помешивании переносят в кипящую воду, доводя объем до 200 см3 и получая крахмальный клейстер. Полученный клейстер смешивают с 800 см' смеси, содержащей остальные компоненты, добавляют 15.0 г агара при приготовлении плотной среды или 1.5 г агара при приготовлении вязкой среды и кипятят 30 мин. Доводят объем среды до I дм', добавляют 1.0 г глюкозы и

0.5 г /.-цистеина гидрохлорида, охлаждают среду до (50 ± 5) ’С. Устанавливают pH таким образом, чтобы он составлял (7.1 ± 0.1) (в пересчете на (25 ± I) °С). Среду рахливают мерно в колбы и стерилизуют при температуре (121 ± I) *С в течение 15 мин. Перед использованием к 100 см3 среды добавляют 0.4 см3 раствора сульфита натрия, приготовленного по н. 3.1.5. и 2 см* раствора железа (III) цитрата, приготовленного по п. 3.1.7. При необходимости среду рахливают в пробирки по 10—12 см3.

С. 3 ГОСТ 29185-91

3.2.8.    Среда Вильсон-Блера (агаризованнаи). измененная для анаэробов: к I дм1 стерильного, расплавленного и охлажденного до (80 ± 1) *С мясо-нептонного агара, приготовленного по и. 3.2.3. или среды, приготовезенной по и. 3.2.4. добавляют 10 см! раствора сульфита натрия, приготовленного по н. 3.1.5. и 1 см' раствора аммония железа (III) сульфата, приготовленного по п. 3.1.2. Среду хранят в защищенном от света месте при (6 ± 2) *С не более 7 сут.

Допускается заменять раствор аммония железа (III) сульфата раствором железа (III) аммония цитрата или раствором сульфата железа (FeS04-5H20). или раствором желез;! (Ill) цитрата, при этом также используют растворы концентрацией 50 г/дм3.

Если использовать раствор сульфата железа, приготовленный но п. 3.1.1. то на 1 дм3 среды его добавляют 0.4 см3.

3.2.8.1.    Среда Вильсон-Блера (вязкая), измененная для анаэробов: к 1 дм' мясо-нептонного бульона с 0.1 % глюкозы и дрожжевым экстрактом, приготовленным но и. 3.2.3, добавляют 1.5 г агара. Нагревают до расплавления агара, затем охлаждают до (50 ± 5) *С. Устанавливают pH среды таким образом, чтобы он соответствовал (7.1 ±0.1) (в пересчете на (25 ±1) ’С). Среду разливают мерно в колбы и стерилизуют при (121 ±1) 'С в течение 20 мин. затем к среде добавляют растворы, указанные в п. 3.2.8, для определения сульфитредупирующей способности.

3.2.8.2.    При приготовлении среды Вильсон-Блера агаризованной или вязкой допускается вместо растворов, указанных в н. 3.2.7. использовать на 100 см3 среды для определения сульфигредуцируюшей способности 4 см3 раствора сульфита натрия, приготовленного но п. 3.1.5. и 1 см3 раствора желез;! треххлористого, приготовленного по п. 3.1.4. В этом случае готовая среда не подлежит хранению.

3.2.9.    Среду Ки гг-Тароцци без добавления агара, вазелинового масла готовят по ГОСТ 10444.1.

4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

4.1.    Определение количества сульфитредуцирующих клостридий

4.1.1.    Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений по ГОСТ 26669 так. чтобы можно было определить в 1 г (см3) предполагаемое количество сульфитредуцирующих клостридий или их количество, указанное в нормативно-технической документации на конкретный продукт.

4.1.2.    При определении количества спор сульфитредуцирующих клостридий навеску продукта или его исходное разведение перед посевом или приготовлением десятикратных разведений npoipe-вают при температуре (80 ± I) 'С в течение 20 мин. Для прогрева 50 см' исходного разведения или жидкого продукта помещают в стерильную колбу вместимостью 100 см' таким образом, чтобы анализируемая проба не размазывалась по стенкам колбы.

Колбу с продуктом или его исходным разведением помещают в предварительно нагретую до (80 ± I) °С водяную баню. При этом уровень находящейся в колбе пробы должен быть на 2—3 см ниже, чем уровень воды в бане. Одновременно в водяную баню помещают контрольную колбу, содержащую 50 см' исходного разведения или продукта, и термометр.

Время термообработки начинают отсчитывать с того момента, когда содержащееся в колбе исходное разведение или продукт достигнут указанной температуры. После термообработки колбу немедленно охлаждают под струей водопроводной воды.

4.1.3.    При определении количества сульфитредуцирующих клостридий по методу НВЧ высевают три последовательных навески продукта и (или) его разведения, отличающиеся друг от друга по количеству высеваемого продукта в 10 раз. Каждую навеску продукта и (или) его разведение высевают в пробирки с одной из вязких питательных сред, приготовленных но п. 3.2.5 или 3.2.7. или 3.2.8.1. или 3.2.8.2. Соотношение количества высеваемого продукта или его разведения к питательной среде 1:9.

4.1.4.    При определении количества сульфитредуцирующих клостридий методом посева в ага-ризованные среды по 1 см' навески продукта или его разведения вносят в две чашки Петри. Посевы заливают но ГОСТ 26670 одной из агаризоваиных сред, приготовленных по и. 3.2.5 или 3.2.7, или 3.2.8. или 3.2.8.2. или 3.2.6.

После затвердения среды в чашки Петри для образования второго слоя вливают еще 10 см’ голодного агара.

4.2. Определение присутствия (отсутствия) сульфитредуцирующих к.юстрилии

При определении присутствия (отсутствия) сульфитредуцирующих клостридий в определенной

ГОСТ 29185-91 С. 4

навеске продукта или его эквивалентном разведении эту навеску иди разведение вносят в одну из вязких питательных сред, приготовленных по и. 3.2.5 или 3.2.7. или 3.2.8.1. или 3.2.8.2.

4.3.    Посевы по пп. 4.1.3.4.1.4 и 4.2 инкубируют при (37 ± I) *С не более 72 ч. Посевы на чашках Петри инкубируют в анаэробных условиях но ГОСТ 30425. Ежедневно посевы просматривают для обнаружения признаков роста сульфитредуцируюших микроорганизмов — почернения сульфитной среды.

4.4.    Из посевов в вязкие среды отбирают пробки с признаками роста — отдельными черными колониями или полностью почерневшей питательной средой на глубине свыше I см. Из отобранных пробирок проводят пересевы петлей в чашки Петри на поверхность одной из агаризованных сред, приготовленных по н. 3.2.5 или 3.2.6. или 3.2.7. или 3.2.8. или 3.2.8.2 так. чтобы получить рост изолированных колоний. Посевы инкубируют в анаэробных условиях при (37 ± 1)*С в течение 24-48 ч.

4.5.    Из посевов на агаризованные среды (см. и. 4.1.4) отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 характерных колоний.

4.6.    Не менее 5 овальных черных или окруженных черным или серым ореолом колоний диаметром 4—5 мм. отобранных по п. 4.4 или 4.5, высевают раздельно в свежерегенерированную по ГОСТ 30425 среду, приготовленную по п. 3.2.9.

Посевы инкубируют при (37 ± I) *С не более 48 ч.

4.7.    Подтверждение принадлежности выделенных суд ьфитредуцирующи\ микроорганизмов к род) Clostridium

4.7.1.    Микроскопирование

Из культур выросших, как указано в п. 4.6, готовят два препарата и окрашивают по ГОСТ 30425. первый — по Граму. второй — для выявления бактериальных спор.

Сульфитредуцируюшие кл остр иди и представляют собой грамноложительные палочки, располагающиеся в одиночку, попарно, в виде цепочек или скоплений параллельных клеток. При спорообразовании споры сульфитредуцируюших кл острили й овальные или сферические, субтерминальные или терминальные.

4.7.2.    Определение отсутствия каталазы

Отсутствие каталазы в культурах, выросших, как указано в п. 4.6. определяют по ГОСТ 30425.

Сульфитредуцируюшие кл остр иди и каталазу нс образуют.

4.7.3 Подтверждение анаэробного роста

Подтверждение анаэробного роста проводят посевом по ГОСТ 30425 культур, выросших, как указано в п. 4.6. в чашки Петри под стекло или в гр\бки Всйона. Для посева используют одну из агаризованных питательных сред, приготовленных по и. 3.2.5 или 3.2.6. или 3.2.7, или 3.2.8. или

3.2.8.2. Посевы инкубируют в аэробных условиях при (37 ± 1) *С в течение 18—72 ч.

Для сульфитредуцируюших клостридий характерен анаэробный рост.

Допускается взамен подтверждения анаэробною росга проводить определение отсутствия роста в аэробных условиях. При этом культуры высевают в чашки Петри на поверхность агаризованной среды.

Посевы инкубируют в аэробных условиях при (37 ± I) ’С в течение 18—72 ч.

5. ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ

5.1.    Результаты испытания оценивают по каждой пробе отдельно.

5.2.    Есж при изучении культуральных, морфологических и биохимических свойств обнаружены сульфитредуцируюшие грамноложительные. каталазоотрицательные, способные расти в анаэробных условиях микроорганизмы, то даюг заключение о том. что эти микроорганизмы относятся к сульфит-редуцируюшим клостридиям.

5.3.    Если при подтверждении характерных колоний в 80 % случаев, то есть не менее чем в 4 из 5 колоний подтвержден рост сульфитредуцируюших клостридий, то считают, что все характерные колонии. выросшие на чашке Петри (см. п. 4.5). принадлежат к этой группе. В остальных случаях количество сульфитредуцируюших клостридий определяют исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству характерных колоний, взятых для подтверждения.

5.4.    При определении НВЧ или при определении присутствия (отсутствия) сул ьфитредуци рую-ших клостридий в определенной навеске продукта посевы в вязкие среды считают положительными.

101

С. 5 ГОСТ 29185-91

если при последующем пересеве и подтверждении характерных колоний хотя бы и одной колонии будут обнаружены сульфитредуцирующие клостридии.

5.5.    Пересчет количества сульфитредуцируюших клостридии на I г (см ) продукта проводят по ГОСТ 26670.

5.6.    НВЧ сульфитредуцируюших клостридии в 1 г (см3) продукта определяют по количеству положительных пробирок, пользуясь таблицей, приведенной в ГОСТ 29184.

5.7.    Результаты определения количества сульфитредуцируюших клостридии записывают по ГОСТ 26670.

5.8.    Результаты выявления присутствия (отсутствия) сульфитредуцируюших клостридий с указанием навески продукта записывают следующим образом: сульфитредуцирующие клостридии обнаружены (или не обнаружены).

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП), ТК 93 «Продукты переработки плодов и овощей»

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 23.12.91 № 2050

3. Настоящий стандарт соответствует ИСО 7937—85 в части выявлении колоний, характерных для сульфитредуцирукнцих микроорганизмов

4.    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Обозначение НТД. на который дана ссыпка

5.    ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУ VIЕНТЫ

Номер раисла. пункта, подпункта

2

2

2; 3.1.8; 3.1.9; 3.1.10; 3.2.1; 3.2.2; 3.2.3; 3.2.4; 3.2.7; 3.2.9

3.2.6 2

1

1; 4.1.1

3.1.7; 4.1.4; 5.5; 5.7

5.6

4.3; 4.6; 4.7.1; 4.7.2; 4.7.3

6. 11К РЕ ИЗДАН И Е. Апрель 2010 г.

102