Стр. 1
 

6 страниц

237.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной навеске пищевого продукта сульфитредуцирующих клостридий и два метода определения их количества: метод наиболее вероятного числа и метод посева в агаризованную среду

Данные о замене опубликованы в ИУС 10-2015

Действие завершено 01.01.2016
Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ 29185-91

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА СУЛЬФИТРЕДУЦИРУЮЩИХ КЛОСТРИДИЙ

Издание официальное

Страница 2

УДК 663/.664:543.9:006.354    Группа    1109

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Методы выявления и определения количества сульфитредуиирующих кл остри дни

ГОСТ

29185-91

Food products. Methods for detection and quantity determination of sulphite-reducing Clostridium

MKC 07.100.30 ОКСТУ 9109

Дата введения 01.01.93

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной навеске пищевого продукта сульфитредуиирующих клостридий и два метода определения их количества: метод наиболее вероятного числа (НВЧ) и метод посева в а гаризо ванную среду.

Методы основаны на высеве определенного количества продукта и (или) его разведений в желе-юсульфитсолержашие среды, инкубировании посевов при (37 ± 1) 1С не более 72 ч, подтверждении принадлежности выросших микроорганизмов по культуральным, морфологическим и биохимическим признакам к сульфитредуцируюшим клостридиям.

Метод определения количества сульфитредуиирующих клостридий посевом в а гаризо ванную среду предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г более 150 или в I см’ более 15 сульфитре-дуцирующих клостридий.

Метод определения НВЧ предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г менее 150. но в 10 г более 3 или в 1 см' менее 15, но в 100 см ’ более 3 сульфитредуиирующих клостридий. Требования настоящего стандарта являются обязательными.

I. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

Отбор и подготовка проб пищевых продуктов - по ГОСТ 26668. ГОСТ 26669.

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и пределом допускаемой погрешности ± 2 мг (дчя взвешивания реактивов);

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания до 1 кг и пределом допускаемой погрешности ± 10 мг (для взвешивания продукта); микроскоп световой биологический, обеспечивающий увеличение 900-1000”: стекла предметные по ГОСТ 9284; стекла покровные по ГОСТ 6672; железа (111) цитрат (C*H50rFe-5H,0);

железа (III) аммония цитрат Q.HjOTFe QtyCMNHj); или C6H507FeQH70jNH4; железо треххлористое. 6-водное (FeC IS-6H20).

* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008 (здесь и далее).

98

1

® Издательство стандартов, 1992 С» СТАНДАРТИНФОРМ, 2010

Страница 3

ГОСТ 29185-91 С. 2

3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

3.1.    Приготовление растворов и реактивов

3.1.1.    Раствор сульфата железа (FeSOj) концентрацией 80 г/дм3:8,0 г сульфата железа переносят в мерную колбу вместимостью 100 см5, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки. При использовании соли в виде кристаллогидратов проводят соответствующий пересчет на безводную соль.

3.1.2.    Раствор аммония железа (III) сульфата Fe(NH4) (S04), • 12Н,0 концентрацией 50г/дм1:

5.0    г аммония железа (111) сульфата переносят в мерную каабу вместимостью 100 см’, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки.

3.1.3.    Раствор железа (III) аммония цитрата концентрацией 50 г/дм3: 5,0 гжелеза (III) аммония нитрата переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки.

3.1.4.    Раствор железа треххлористого (FeCl,-6H,0) концентрацией 80 г/дм’: 8,0 г железа трех-хлорнстого гексапирата переносят в колбу вместимостью 100 cmj, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки.

3.1.5.    Раствор сульфита натрия (натрия сернистокислого). концентрацией 100 г/дм3:10,0 г натрия сернистокислого переносят в мерную каабу вместимостью 100 см ', растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки.

3.1.6.    Раствори, приготовленные по пп. 3.1.1—3.1.5, стерилизуют текучим паром в течение 1 ч.

3.1.7.    Раствор железа (111) цитрата (C6H,0,Fe-5H;0) концентрацией 50 г/дм3: 5,0 г железа (III) нитрата пентагилрата переносят в мерную колбу вместимостью 100 см ', растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки. Раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670.

3.1.8.    Растворы и реактивы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1.

3.1.9.    Растворы и реактивы для окраски бактериальных спор готовят по ГОСТ 10444.1.

3.1.10.    Реактив для определения каталазы готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2. Приготовление питательных сред

3.2.1.    Голодный агар готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.2.    Мясную воду готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.3.    Мясо-пептонный агар (бульон) с 0.1 % глюкозы и дрожжевым экстрактом готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.4.    Среду из сухого питательного агара с глюкозой готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.5.    Железосульфитная среда: к 1 дм5 дистиллированной воды доба&аяют 10.0 г триптона, 0.5 г сульфита натрия, 0.5 г железа (III) нитрата, 15,0 г агара (при приготовлении агаризованной среды) или 1,5 г агара (при приготовлении вязкой среды). Растворяют компоненты при нагревании, после этого смесь охлаждают до (50 ± 5) *С. Устанавливают pH среды таким образом, чтобы он составлял (7,1 ± 0.1) (в пересчете на (25 ± 1) ’С). Среду разливают в пробирки по 10-12 см1 или колбы и стерилизуют при (121 ± I) ’С в течение 15 мин.

Тритон может быть заменен на равноценную навеску сухого панкреатического гидролизата казеина или на десятикратный объем жидкого панкреатического гидраанзата казеина, а тритон и 1 дм3 воды мот быть заменены на 1 дм3 мясной воды, приготовленной по п. 3.2.2.

3.2.6.    Триптозо-сульфит-циклосериновый агар готовят по ГОСТ 10444.9.

3.2.7.    Дифференциальная улучшенная клостридиальная среда: в 800 см3 воды вносят 10.0 г пептона, 1,5 г дрожжевого экстракта или 7,5 см’дрожжевого экстракта, приготовленного по ГОСТ 10444.1,

5.0    г уксуснокислого натрия. Отдельно 1,0 г растворимого крахмааа вносят в небольшую порцию воды и при непрерывном помешивании переносят в кнпяшую воду, доводя объем до 200 см3 и получая крахмальный клейстер. Полученный клейстер смешивают с 800 см3 смеси, содержащей остальные компоненты, добапляют 15,0 г агара при приготовлении плотной среды или 1,5 г агара при приготовлении вязкой среды и кипятят 30 мин. Доводят объем среды до I дм3, добавляют 1.0 г глюкозы и 0.5 г /.-цисте и на гидрохлорида, охлаждают среду до (50 ± 5) "С. Устанавливают pH таким образом, чтобы он составлял (7,1 ± 0.1) (в пересчете на (25 ± I) *С). Среду разливают мерно в каабы и стерилизуют при температуре (121 ± I) *С в течение 15 мин. Перед испа1ьзованнем к 100 см3 среды добавляют 0,4 см3 раствора сульфита натрия, приготовленного по п. 3.1.5, и 2 см’ раствора железа (III) цитрата, приготовленного по п. 3.1.7. При необходимости среду разливают в пробирки по 10- 12 см3.

99

Страница 4

С. 3 ГОСТ 29185-91

3.2.S. Среда Вильсон-Блера (агаризованная), измененная для анаэробов: к I дм3 стерильного, расплавленного и охлажденного до (80 ± I) ‘С мясо-пептонного агара, приготовленного по п. 3.2.3. или среды, приготовленной по п. 3.2.4. добавляют 10 см3 раствора сульфита натрия, приготовленного по п. 3.1.5, и 1 см' раствора аммония железа (111) сульфата, приготовленного по п. 3.1.2. Среду хранят в защищенном от света месте при (6 ± 2) *С не более 7 сут.

Допускается заменять раствор аммония железа (III) сульфата раствором железа (111) аммония цитрата или раствором сульфата железа (FeS04*5H20), или раствором железа (111) цитрата, при этом также используют растворы концентрацией 50 г/дм1.

Если использовать раствор сульфата железа, приготовленный по п. 3.1.1, то на 1 дм3 среды его добавляют 0,4 см3.

3.2.8.1.    Среда Вильсон-Блера (вязкая), измененная для анаэробов: к 1 дм5 мясо-пептонного бульона с 0.1 % глюкозы и дрожжевым экстрактом, приготовленным по п. 3.2.3. добавляют 1,5 г агара. Нагревают до расплавления агара, затем охлаждают до (50 ± 5) "С. Устанавливают pH среды таким образом, чтобы он соответствовал (7,1 ± 0.1) (в пересчете на (25 ±1) *С). Среду разливают мерно в колбы н стерилизуют при (121 ±1) *С в течение 20 мин, затем к среде добавляют растворы, указанные в п. 3.2.8. для определения сульфитредуцирующей способности.

3.2.8.2.    При приготовлении среды Вильсон-Блера агарнзованной или вязкой допускается вместо растворов, указанных в п. 3.2.7. использовать на 100 см' среды для определения сульфитредуцирующей способности 4 см3 раствора сульфита натрия, приготовленного по п. 3.1.5, и I см3 раствора железа треххлористого, приготовленного по п. 3.1.4. В этом случае готовая среда не подлежит хранению.

3.2.9. Среду Китг-Тароцци без добавления агара, вазелинового масла готовят по ГОСТ 10444.1.

4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

4.1.    Определение количества сульфи1релуцирун>щих клостридий

4.1.1.    Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений по ГОСТ 26669 так, чтобы можно было определить в 1 г (см3) предполагаемое количество сульфитредуцирующих клостридий или их количество, указанное в нормативно-технической документации на конкретный продукт.

4.1.2.    При определении количества спор сульфитредуцируюших клостридий навеску продукта или его исходное разведение перед посевом или приготовлением десятикратных разведений прогревают при температуре (80 ± I) *С в течение 20 мин. Для прогрева 50 см' исходного разведения или жидкого продукта помещают в стерильную колбу вместимостью 100 см3 таким образом, чтобы анализируемая проба не размазывалась по стенкам колбы.

Колбу с продуктом или его исходным разведением помешают в предварительно нагретую до (80 ± 1) *С водяную баню. При этом уровень находящейся в колбе пробы должен быть на 2—3 см ниже, чем уровень воды в бане. Одновременно в водяную баню помещают контрольную колбу, содержащую 50 см’ исходного разведения или продукта, и термометр.

Время термообработки начинают отсчитывать с того момента, когда содержащееся в колбе исходное разведение или продукт достигнут указанной температу ры. 11осле термообработки колбу немедленно охлаждают под струей водопроводной воды.

4.1.3.    При определении количества сульфитредуцируюших клостридий по методу НВЧ высевают три последовательных навески продукта и (или) его разведения, отличающиеся друг от друга по количеству высеваемого продукта в 10 раз. Каждую навеску продукта и (или) его разведение высевают в пробирки с одной из вязких питательных сред, приготовленных по п. 3.2.5 или 3.2.7. или 3.2.8.1, или 3.2.8.2. Соотношение количества высеваемого продукта или его разведения к питательной среде 1:9.

4.1.4.    При определении количества сульфитредуцируюших клостридий методом посева в ага-рнзованные среды по 1 см ' навески продукта или его разведения вносят в две чашки Петри. Посевы заливают по ГОСТ 26670 одной из агаризованных сред, приготовленных по п. 3.2.5 или 3.2.7, или 3.2.8. или 3.2.8.2, или 3.2.6.

После затвердения среды в чашки Петри для образования второго слоя вливают еше 10 см3 голодного агара.

4.2. Определение присутствия (отсутствия) сулфнтредупирующих клостридий

При определении присутствия (отсутствия) сульфитредуцируюших клостридий в определенной

100

Страница 5

ГОСТ 29185-91 С. 4

навеске продукта или его эквивалентно*» разведении эту навеску или разведение вносят в одну из вязких питательных сред, приготовленных по п. 3.2.5 или 3.2.7, или 3.2.8.1, или 3.2.8.2.

4.3.    Посевы по пп. 4.1.3. 4.1.4 и 4.2 инкубируют при (37 ± 1) "С не более 72 ч. Посевы на чашках Петри инкубируют в анаэробных условиях по ГОСТ 30425. Ежедневно посевы просматривают для обнаружения признаков роста сульфитредупирующих микроорганизмов — почернения сульфитной среды.

4.4.    Из посевов в вязкие среды отбирают пробки с признаками роста - отдельными черными колониями или полностью почерневшей питательной средой на глубине свыше I см. Из отобранных пробирок проводят пересевы петлей в чашки Петри на поверхность одной из агаризованных сред, приготовленных по п. 3.2.5 или 3.2.6, или 3.2.7, или 3.2.8, или 3.2.8.2 так. чтобы получить рост изолированных колоний. Посевы инкубируют в анаэробных условиях при (37+ 1)'С в течение 24 -48 ч.

4.5.    Из посевов на агаризованные среды (см. п. 4.1.4) отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 характерных колоний.

4.6.    Не менее 5 овальных черных или окруженных черным или серым ореолом колоний диаметром 4-5 мм, отобранных по п. 4.4 или 4.5, высевают раздельно в свежерегенерированную по ГОСТ 30425 среду, приготоаченную по п. 3.2.9.

Посевы инкубируют при (37 ± 1) ‘С не более 48 ч.

4.7.    Подтверждение принадлежности выделенных сульфитредупирующих микроорганизмов к роду Clostridium

4.7.1.    Мнкроскопирование

Из культур выросших, как указано в п. 4.6, готовят два препарата и окрашивают по ГОСТ 30425, первый - по Граму. второй — дчя выявления бактериальных спор.

Сульфитредуцнруюшие клостридии представляют собой грамположительные палочки, располагающиеся в одиночку, попарно, в виде цепочек или скоплений параллельных клеток. При спорообразовании споры сульфитредупируюших клостридий овальные или сферические, субтерминальные или терминальные.

4.7.2.    Определение отсутствия каталазы

Отсутствие каталазы в культурах, выросших, как указано в п. 4.6, определяют по ГОСТ 30425.

Сульфитредуиируюшие клостридии катал азу не образуют.

4.7.3 Подтверждение анаэробного роста

Подтверждение анаэробного роста проводят посевом по ГОСТ 30425 культур, выросших, как указано в п. 4.6. в чашки Петри под стекло или в трубки Вейоиа. Для посева используют одну из агаризованных питательных сред, приготовленных по п. 3.2.5 или 3.2.6, или 3.2.7, или 3.2.8, или 3.2.8.2. Посевы инкубируют в аэробных условиях при (37 ± 1) *С в течение 18—72 ч.

Для сульфитредуцнруюших клостридий характерен анаэробный рост.

Допускается взамен подтверждения анаэробного роста проводить определение отсутствия роста в аэробных условиях. При этом культуры высевают в чашки Петри на поверхность агаризованной среды.

Посевы инкубируют в аэробных условиях при (37 ± 1) "С в течение 18—72 ч.

5. ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ

5.1.    Результаты испытания оценивают по каждой пробе отдельно.

5.2.    Если при изучении культуральных, морфологических и биохимических свойств обнаружены сульфитредуиируюшие грамположительные, каталазоотрипательные, способные расти в анаэробных условиях микроорганизмы, то дают заключение о том, что эти микроорганизмы относятся к сульфнт-редупируюшим клострилиям.

5.3.    Если при подтверждении характерных колоний в 80 % случаев, то есть не менее чем в 4 из 5 колоний подтвержден рост сульфитредупирующих клостридий, то считают, что все характерные колонии, выросшие на чашке Петри (см. п. 4.5), принадлежат к этой группе. В остальных случаях количество сульфитредупирующих клостридий определяют исходя из процеилюго отношения подтвержденных колоний к общему количеству характерных колоний, взятых для подтверждения.

5.4.    При определении НВЧ или при определении присутствия (отсутствия) сульфитредуиирую-IUих клостридий в определенной навеске продукта посевы в вязкие среды считают положительными.

101

Страница 6

С. 5 ГОСТ 29185-91

если при последующем пересеве и подтверждении характерных колоний хотя бы в одной колонии будут обнаружены сульфигредунирующие клостридни.

5.5.    Пересчет количества сульфитредуцирующих клострндий на I г (см') продукта проводят по ГОСТ 26670.

5.6.    НВЧ сульфитредуцирующих клострндий в I г (см3) продукта определяют по количеству положительных пробирок, пользуясь таблицей, приведенной в ГОСТ 291X4.

5.7.    Результаты определения количества сульфитредуцирующих клострндий записывают по ГОСТ 26670.

5.8.    Результаты выявления присутствия (отсутствия) сульфитредуцирующих клострндий с указанием навески продукта записывают следующим образом: сульфнтредуцирующие клостридни обнаружены (или не обнаружены).

ИНФОРМАЦИОНИ ЫЕ ДАНН ЫЕ

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом консервной и овощесушнлыюй промышленности (ВНИИКОП), ТК 93 «Продукты переработки плодов и овощей»

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Носгановлением Комитета стандарт ишии и метрологии СССР от 23.12.91 № 2050

3.    Настоящий стандарт соответствует ИСО 7937—85 в части выявления колоний, характерных для сульфитредуцирующих микрооргани jmob

4.    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД. ни которым дама ссылка

Номер paue.ts, пункта, подпункта

ГОСТ 6672-75

2

ГОСТ 9284-75

2

ГОСТ 10444.1-84

2:3.1.8: 3.1.9; 3.1.10; 3.2.1; 3.2.2; 3.2.3: 3.2.4; 3.2.7; 3.2.9

ГОСТ 10444.9-88

3.2.6

ГОСТ 24104-88

2

ГОСТ 26668-85

1

ГОСТ 26669-85

Г, 4.1.1

ГОСТ 26670-91

3.1.7:4.1.4; 5.5; 5.7

ГОСТ 29184-91

5.6

ГОСТ 30425-97

4.3:4.6: 4.7.1; 4.7.2:4.7.3

6. 11ЕРЕИЗДАН ИЕ. Апрель 2010 г.

102

Страница 7

С. 6 ГОСТ 29185-91

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП), ТК 93 «Продукты переработки плолов и «пошей»

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 23.12.91 № 2050

3.    Настоящий стандарт соответствует ИСО 7937—85 в части выявления колоний, характерных для сульфитредуцирующих микроорганизмов

4.    введен ВПЕРВЫЕ

5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД. на коюрмн лака ссылка

Номер раздела, пункта, подпункта

ГОСТ 6672-75

2

ГОСТ 9284-75

2

ГОСТ 10444.1-84

2; 3.1.8: 3.1.9; 3.1.10: 3.2.1; 3.2.2; 3.2.3: 3.2.4; 3.2.7; 3.2.9

ГОСТ 10444.9-88

3.2.6

ГОСТ 24104-88

2

ГОСТ 26668-85

1

ГОСТ 26669-85

1; 4.1.1

ГОСТ 26670-91

3.1.7; 4.1.4; 5.5; 5.7

ГОСТ 29184-91

5.6

ГОСТ 30425-97

4.3; 4.6: 4.7.1; 4.7.2; 4.7.3

6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Май 2006 г.

Редактор М.И. Максимова Технический редакюр В.Н. IIрусокоса Корректор Р.Л. Мектояа Компьютерная верстка И.Л. И алей хиной

Подписано в иешь 16.06.2006. Формат 60 х S4‘/x- Бумага офсетная. Гарнитура Таймс. Печать офссшан. Уел. иеч. л, 0.93. Уч. иза.л. 0.67. Тираж 34 экз. Зак. 184. С 2967.

ФГУП •Станаартинформ». I2399S Москва, Гранамшй пер.. 4. www.gostinro.ru    шГой goslinfo.ru.

Набрано и отпечатано ио ФГУП "Станяарпшформк