Стр. 1
 

8 страниц

244.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на биологические ветеринарные препараты и устанавливает метод бактериологического контроля стерильности.

Настоящий стандарт не распространяется на живые вакцины

Данные о замене опубликованы в ИУС 8-2014

Действие завершено 30.06.2014

Оглавление

1 Отбор проб

2 Аппаратура, материалы и питательны среды

3 Подготовка к испытанию

4 Проведение испытания

5 Оценка результатов

Приложение (обязательное) Методы контроля ростовых свойств питательных сред

Показать даты введения Admin

С ГОСТ 28085-89 покупают: МУК 4.2.2316-08

Страница 1

ГОСТ 28085-89

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРЕПАРАТЫ БИОЛОГИЧЕСКИЕ

МЕТОД БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ СТЕРИЛЬНОСТИ

Издание официальное

БЗ 1-2005


Uootm jg5J Стжмчтгаформ

Страница 2

УДК 615.37:619.001.006.354    Группа    Р31

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

11 PEIIАРАТЫ БИОЛОГИЧ ЕСКИ Е

Метод бактериологического контроля стерильности

ГОСТ

28085-89

Biological preparations.

Method for the bacteriological control of sterility

M КС 11.220 О КС ТУ 9291

Д;

Перепечатка висирешена

И манне офи

ое

© Издательство стандартов, 1989 <£> Стандартинформ. 2007

Страница 3

ГОСТ 28085-89 С. 2

Антисептол готовят следующим образом: раствор хлорной извести с массовой долей 50 % и раствор кальцинированной соды с массовой долей 5 % сливают в равных объемах и перед употреблением разбавляют водой в соотношении 1:50.

Известь хлорная с массовой долей активного хлора не менее 32 %.

Сода кальцинированная по ГОСТ 83.

Натрия гидроокись по ГОСТ 2263.

Фуксин основной.

Калий йодистый по ГОСТ 4232.

Йод кристаллический по ГОСТ 4159.

Порошок стиральный.

Среда тиогликолевая: готовят следующим образом: 15 г панкреатического гидролизата казеина; 5 г дрожжевого экстракта: 2,5 г хлористого натрия; 5.0 г глюкозы; 0,75 г цистина; раствора реза-зурина натрия 1:1000 свежеприготовленного 1 см3; 0.3 см3 тиогликолевой кислоты или 0,5 см3 тиогликолята натрия: 0,75 см3 агара доводят до 1000 см3 дистиллированной водой. Среду автоклави-руют при 120 *С в течение 20 мин, pH среды 7,0 i 0,2.

Бульон казеиновый питательный с массовой долей глюкозы 0,5 %. Готовят следующим образом: смешивают 15 г панкреатического гидролизата казеина или пептона Мартена, 5 г дрожжевого экстракта, 5 г хлористого натрия доводят до 1000 см3 дистиллированной водой. Смесь подщелачивают раствором гидроокиси натрия с массовой долей до 20 %. до pH 8,0—8,2, кипятят на открытом огне в течение 10—15 мин или автоклавируют при 110 *С в течение 30 мин. фильтруют, прибавляют 5 г глюкозы, устана&тнвают pH 7,3—7.5, разливают в стерильные пробирки и стерилизуют при 110 *С—112 ‘С в течение 30 мин.

Агар казеиновый питательный с массовой долей глюкозы 0,5 %. Готовят так же. как и казеиновый питательный бульон, и добавляют 10—20 г агар-агара.

Бульон казеиновый питательный с массовой долей глюкозы 0,5 %. агара 0.2 % и кусочками печени (мяса) под вазелиновым маслом. Готовят на основе казеинового питательного бульона с 0.5 % глюкозы, добавляя 0.2 % агар-агара и 0.5 см3 вазелинового масла. Готовую среду разливают в стерильные пробирки, добавляют 0.5 см3 стерильного вазелинового масла, 3—4 кусочка мяса или печени и стерилизуют при 110 *С—112 *С в течение 30 мин, pH среды — 7,2—7,4.

Бульон мясо-пептонный с массовой долей глюкозы 0.5 % (М11Б) но ГОСТ 20730.

Лгар мясо-пептоииый с массовой долей глюкозы 0.5 % (МПа).

Бульон мясо-пептонный печеночный под вазелиновым маслом с массовой долей глюкозы 0,5 %, агара 0,2 % (среда Тароцци).

Среда Сабуро: готовят следующим образом: в 1000 см3 дистиллированной воды добавляют К) г сухого ферме1гтативного пептона, кипятят в течение 10 мни, фильтруют, прибавляют 40 г глюкозы или мальтозы, устанавливают соляной кислотой с массовой долей 1—2 % pH 5,8. разливают в стерильные пробирки и стерилизуют при 110 *С в течение 30 мин.

Лгар микробиологический по ГОСТ 17206.

Пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805.

Казенна гидролизат панкреатический или пептон Мартена.

Экстракт дрожжевой.

Нагрий хлористый по ГОСТ 4233.

Глюкоза или мальтоза по ГОСТ 6038.

Цистин.

Кислота тиогликолевая.

Натрия тиогликолат.

Натрия резазурин.

3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

3.1.    Подготовка лабораторной посуды

3.1.1.    Новую лабораторную посуду кипятят в течение 15 мин в дистиллированной воде, подкисленной раствором соляной кислоты, а затем промывают водопроводной водой и моют ершом в растворе, содержащем на 1000 см3 дистиллированной воды 30 г стирального порошка и 50 см3 водного аммиака. После этого посуду тщательно промывают сначала водопроводной водой, а затем три раза дистиллированной водой, высушивают и стерилизуют.

Страница 4

С. 3 ГОСТ 28085-89

3.1.2.    Перед стерилизацией лабораторную посуду (чашки, пипетки, пробирки и т. п.) укладывают в металлические пеналы. Стерилизуют посуду в автоклаве при 0.15 МПа в течение 60 мин или в сушильном шкафу при (170 * 5) *С в течение 120 мин.

3.2.    Подготовка бокса

3.2.1.    Ежедневно бокс и предбоксник подвергают тщательной уборке и обеззараживанию раствором перекиси водорода или другими средствами аналогичного действия.

Готовят раствор и обрабатывают бокс и предбоксник с соблюдением требований техники безопасности.

Норма расхода дезинфицирующего раствора 70—100 см-Ум2 при влажной уборке. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.

3.2.2.    Допускается дезинфицировать бокс горячим 50 ”С—60 "С мыльно-содовым раствором (I % соды или стирального порошка и 0.5 % нашатырного спирта). После этого протирают стены, полы, мебель одним из дезинфицирующих растворов.

В каждом боксе должны быть установлены бактерицидные лампы из расчета 2—2,5 В на 1 м3. Лампы размещают на потолке и на стенах. Бокс облучают до начала проведения испытания в течение 1.5—2 ч. Во время проведения испытания лампы должны быть выключены.

Чистоту воздуха в боксе проверяют один раз в неделю, используя аппараты, предназначенные для этих целей (аппарат Кротова и др.).

3.3.    Испытание ростовых свойств питательных сред

Готовые питательные среды, проверенные на ростовые свойства, разливают по 6—8 см' (для определения анаэробов по 10—12 см3) в пробирки и по 50—60 см3 во флаконы вместимостью 100 см3.

Испытание проводят в соответствии с приложением.

3.4.    Подготовка проб испытуемых препаратов

Пробы сухих биологических препаратов предварительно растворяют стерильным растворителем (изотонический раствор хлорида натрия, дистиллированная вода и т. д.).

4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

4.1.    Проведение испытания на стерильность с использованием тиогликолевой среды

4.1.1.    Из каждого флакона (ампулы) препарата производят посев по 1 см3 в три пробирки, содержащие тноглнколевую среду.

Две засеянные пробирки выдерживают в термостате в течение 14 сут: одну — при (21 ± 1) *С, другую — при (37 ± 0,5) *С.

Третью пробирку выдерживают в течение 7 сут при (37 * 0,5) *С и затем делают из нее пересевы по 0.5 см3 по одной пробирке на следующие среды:

скошенный казеиновый питательный агар:

казеиновый питательный бульон;

среду Сабуро (жидкую);

по 1 см3 на казеиновый питательный бульон под вазелиновым маслом с кусочками мяса или печени.

Пересевы на казеиновый агар, мясо-пептонный бульон (МПБ) выдерживают еше в течение 7 сут при (37 ♦ 0,3) 'С. а пересев на среду Сабуро — при (21 ± 1) "С.

При испытании проб препаратов проводят контроль стерильности сред: три пробирки с каждой средой выдерживают в термостате в течение 14 с\т при (37 ±0,3) 'С. со средой Сабуро — при (21 ♦ 1)*С.

4.2. Проведение испытания на стерильность без тиогликолевой среды

Из каждой пробы биологического препарата производят посев на жидкую среду Сабуро, МПА и МПБ — по 3 пробирки; на среду Тароиии — по 2 пробирки и 2 флакона.

Для выявления аэробов высевают 0,5 см3 посевного материала в одну пробирку и 1—2 см3 в один флакон, а для выявления анаэробов — соответственно по 1 и 5 см3.

Пробирки и флаконы с посевами на всех средах, кроме среды Сабуро. выдерживают в термостате при (37 ± 0,5) 'С, на среде Сабуро — при (21 ± 1) ‘С в течение 7 сут (для анаэробных препаратов — 15 сут).

По истечении указанного срока делают пересев, за исключением посевов на МПА.

Пересевают пробы на те же питательные среды и в тех же объемах, что и при посеве. Вторичные посевы выдерживают 7 сут (для анаэробных препаратов — 15 cvr).

Одновременно проводят контроль стерильности сред по п. 4.1.1.

Страница 5

ГОСТ 28085-89 С. 4

5. ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ

Учитывают результаты первичного и повторного посевов путем макроскопического, а в случае роста микроорганизмов — микроскопического исследования всех посевов, через 14сут после первичного посева на тиогликолевой среде и через 7 сут после первичного посева без тиогликолевой среды.

Среду считают стерильной, если ни в одной из засеянных пробирок не наблюдается росга.

В случаях роста хотя бы в одной из засеянных пробирок контроль стерильности повторяют на том же количестве проб и проводят микроскопию выросших микробов. Мазки окрашивают по Гра-му, отмечая морфологию и окраску микробов по Граму.

При отсутствии роста в повторном контроле препарат считают стерильным. При наличии роста хотя бы в одной пробирке и идентичности микрофлоры при первичном и повторном посевах препарат считают нестерильным.

Если при первичном и повторном посевах выявлена рахтичная микрофлора, а также выявлен рост лишь в отдельных пробирках, проводят посев образцов в третий раз.

При отсутствии роста препарат считают стерильным. При обнаружении роста хотя бы в одной пробирке независимо от характера микрофлоры препарат считают нестерильным.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Обямтельное

МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ РОСТОВЫХ СВОЙСТВ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

I. Метод контроля ростовых свойств сред для вырашиваыия аэробов

1.1. Аппаратура, материалы, питательные среды Весы лабораторные 11 класса точности.

Центрифуга.

Микроскоп биологический но НТД.

Автоклав вертикальный. pH-метр электрометрический.

Дистиллятор.

Термостат, обеспечивающий температуру нагрева (37 ± 0.5) 'С н <21 ± I) "С.

Шкаф сушильный.

Бюксы стеклянные по ГОСТ 25336.

Воронки стеклянные по ГОСТ 25336.

Пробирки стеклянные бактериологические по ГОСТ 25336.

Пипетки мерные по НТД.

Кастрюли разные.

Груши резиновые.

Глюком медицинская по ГОСТ 975.

Лактола.

Пептон по ГОСТ 13805.

Калий двухромовокислый по ГОСТ 4220.

Натрий хлористый но ГОСТ 4233.

Натрий углекислый безводный по ГОСТ S3.

Гидроокись калия.

Кислота серная по ГОСТ 4204.

Страница 6

С. 5 ГОСТ 28085-89

Масло иммерсионное по ГОСТ 13739.

Спирт этиловый ректификованный 96 %-ныЙ по ГОСТ 5962.1

Эфир этиловый.

Гснцианвиолст. раствор с массовой долей I %.

Образец стандартный стеклянный для определения мутности бактериальных взвесей, мутность которого эквивалентна 10 международным единицам мутности.

Агар микробиологический по ГОСТ 17206.

Агар мясо-пептонный с массовой долей глюкозы 0,2 %.

Тест-культура С. Diphthcroides N 194.

Тест-культура Strcpt. hacmolyticus Dick !.

1.2.    Подготовка к испытанию

1.2.1.    Подготовку лабораторной посуды и бокса проводят по пп. 4.1 и 4.2 настоящего стандарта.

1.3.    Проведение испытания

Качество питательных сред проверяют путем выссвл на них специально подобранных тест-микробов: С. Diphthcroides, Strcpt. hacmolyticus Dick I.

Культуры дифтсроида или стрептококка, выращенные в течение 18 ч на скошенном мясо-псптонном агаре с массовой долей глюкозы 0,2 %. смывают изотоническим раствором хлористого натрия и тем же раствором доводят мутность по стандартному образцу до 10 единиц.

Из полученной суспензии переносят ! см' в пробирку, содержащую 9 см’ стерильного нейтрального изотонического раствора хлористого натрия — первое десятикратное разведение. 10"'. Затем делают последовательные десятикратные разведения, перенося по I см3 взвеси в 9 см3 изотонического раствора. При каждом новом разведении взвесь тщательно перемешивают, пользуясь отдельной стерильной пипеткой вместимостью I см3. Суспензию микробов разводят таким образом до восьмой пробирки (I0-*).

Для биологической оценки испытуемой мясо-псптонной питательной среды применяют четыре последовательных разведения 10-s, 10~ь. 10, 10“я. что соответствует, примерно. 10000. 1000, 100 и 10 микробным клеткам в I см3 взвеси. Из каждого указанного разведения, начиная с последнего, вносят по 0.5 см3 взвеси в три пробирки с испытуемой средой.

После инкубации при (37 г 0.5) ‘С в течение 24 ч посевы в пробирках со скошенным агаром увлажняют (при отсутствии роста) конденсационной жидкостью путем обкатывания пробирок и оставляют в термостате сшс на 24 ч при той же температуре.

1.4.    Оценка результатов

Испытуемые среды признают годными, если тест-культура стрептококка или дифтсроида даст рост через 48 ч не ниже чем в разведении I0-7 во всех трех засеянных пробирках.

Допускастся отсутствие роста в одной из пробирок, засеянной из разведения Ю-7, если отмечается рост тест-культуры в пробирках из разведения 10“*. При отсутствии роста тест-микроба в одной из пробирок, засеянных из разведения 10“7, а также во всех пробирках из разведения Ю-*, испытание среды повторяю! на удвоенном количестве пробирок из указанных разведений.

Испытуемая среда годна для применения, если при повторном посеве тест-культуры отмечается рост из разведения 10“7 не менее чем в пяти пробирках из шести засеянных.

2. Метод контрола ростовых свойств сред для выращивания анаэробов

2.1.    Аппаратура, материалы и питательные среды — по п. 1.1 приложения и указанные ниже:

Тест-культура Cl. Ocdcmaticns 198.

Раствор для разведения культуры: готовят следующим образом: в 1000 см3 дистиллированной воды растворяют 8,5 г хлорида натрия, добавляют 0.3 см3 тиотликолевой кислоты, устанавливают pH 7,2 ± 0,2 раствором гидроортофосфата натрия с массовой долей I %, разливаю! во флаконы, авгоклавируют при 120 'С в течение 20 мин. Раствор используют в течение 7 суг со дня приготовления. Если срок его хранения более 24 ч. регенерируют перед посевом путем выдерживания флаконов в кипяшей водяной бане в течение 10—15 мин с последующим охлаждением до 40 *С.

Среда для получения споровой культуры. Готовят следующим образом: в 1000 см3 воды растворяют 15 г панкреатического гидролизата казеина: 2 г глюкозы; 5,0 г хлорида натрия; I г агара; 0.3—0.5 г казеина хлор-кальцисвого и авгоклавируют при 120'С в течение 20 мин. После автоклавирования pH среды должен составлять 7.8 ±0.1. Перед применением среду регенерируют путем выдерживания флаконов в кипяшей водяной бане в течение 10—15 мин с последующим охлаждением до 40 'С.

Среда Таропни.

2.2.    Подготовка к испытанию

2.2.1.    Подготовку лабораторной посулы и бокса проводят по пп. 3.1 и 3.2 настоящего стандарта.

2.2.2.    Получение споровой культуры

Для биологического испытания тиогликолсвой среды и среды Тароцци. предназначенных для высева анаэробов, применяют тест-культуру Cl. Ocdcmaticns 198 (клостридиум).

Вскрывают ампулу с сухой культурой, добавляют 1 см3 мясо-псптонного бульона, перемешивают и полученную суспснзию переносят в две пробирки с предварительно регенерированной средой Тароции.

1

На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.

Страница 7

ГОСТ 28085-89 С. 6

Поссны инкубируют в течение 18 ч при (37 ± 0.5) 'С. Полученную культуру из обеих пробирок переносят но флакон вместимостью 20—30 см3 (кусочки мяса или печени не должны попадать но флакон) и иентрифути-руют в течение 20 мин частотой вращения 3000-*. Затем отсасывают надосадочиую жидкость, а в полученную биомассу добавляют раствор для разведения культуры, перемешивают и переносят в пробирку для подведения под единый оптический стандарт му-тности. соответствующий 10 единицам.

После этого суспензию культуры no I см-’ высевают на 10—15 пробирок с 10 см3 предварительно регенерированной питательной среды для получения споровой культуры.

Посевы инкубируют в течение 4S ч при (37 z 0.5) 'С. после чего содержимое пробирок перемешивают с помошью стерильной пипетки и делают мазки полученной культуры, мазки окрашивают I %-ным раствором гениианвиолста 30 и микроскопируют. Количество спор (.9) в процентах вычисляют по формуле

S = — 100.

yv

где я — число спор в трех—пяти полях зрения;

JV — обшее число (не менее 100) сосчитанных клеток (палочки и споры) в трех—пяти полях зрения:

100 — постоянный коэффициент.

Пробирки с культурой, содержащей не менее 5 % спор, хранят при 4 'С—8 ‘С.

Для получения рабочей культуры Cl. Ocdematiens 198 споровую культуру перемешивают пипеткой и по I см3 пересевают на 2—3 пробирки с 10 см3 среды Тароици. Посевы инкубируют в течение 24 — 48 ч при (37 z 0,5) ’С до обнаружения отчетливо видимого роста культуры в виде диффузного помутнения среды с четко выраженной верхней прозрачной зоной. После чего производят второй пересев тест-штамма на 2—3 пробирки с той же средой, инкубируют в течение 17—19 ч при (37 ± 0.5) ‘С и используют для оценки ростовых свойств тиогликолевой среды и МПБ под вазелиновым маслом.

2.3.    Проведение испытания

Рабочую культуру, выращенную в среде Тароцци (2-й пассаж), центрифугируют и подводят под единый оптический стандарт мутности.

Из полученной суспензии I см3 культуры пипеткой переносят в пробирку, содержащую 9 см3 раствора для разведения культуры (разведение 10“'). опуская пипетку в раствор. Таким же образом последовательно получают десятикратные разведения культуры до шесюй пробирки (10“6> включительно.

Не допускается выдерживание культуры в среде для разведения (до посева) более 30 мин.

Для посева на испытуемую пробу используют три последних разведения культуры (IО-4. I0“s, 10~6). Из каждого указанного разведения, начиная с последнего, по 0.5 см3 взвеси вносят в три пробирки с 10 см3 тиогликолевой среды или мясо-пептонного печеночного бульона под вазелиновым маслом (погружая пипетку в среду). Посевы инкубируют в течение 48 ч при (37 ± 0.5) 'С, после чего проводят учет результатов.

2.4.    Оценка результатов

Среду признают годной по ростовым свойствам, если не позднее чем через 48 ч инкубации посевов визуально обнаруживают рост Cl. Ocdomatiens 198 в разведении культуры Ю-5.

Допускается отсутствие роста в одной из пробирок, засеянной из разведения I0-S, если отмечается рост в пробирках из разведения 1О-4(рост культуры через 24 ч наблюдается в виде отдельных колоний шарообразной формы, через 48 ч — в виде диффузного помутнения среды с четко выраженной прозрачной зоной в верхней части столбика среды).

Страница 8

С. 7 ГОСТ 28085-89

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Госагропромом СССР

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 31.03.89 № 914

3.    Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 6280—88

4.    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5.    ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД. на который дана ссылка

Номер пункта, приложение

ГОСТ

83-79

2: приложение

ГОСТ

975-88

Приложение

ГОСТ

2263-79

2

ГОСТ

3118-77

2

ГОСТ

3164-78

2

ГОСТ

3760-79

2

гост

4159-79

2

гост

4204-77

Приложение

гост

4220-75

Приложение

гост

4232-74

2

гост

4233-77

2: приложение

гост

5962-67

Приложение

гост

6038-79

2

гост

6709-72

2

гост

12026-76

2

гост

13739-78

Приложение

гост

13805-76

2: приложение

гост

17206-96

2: приложение

гост

20730-75

2

гост

25336-82

2: приложение

6. Ограничение срока действия снято по протоколу № 4—93 Межгосударственного совета но стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 4—94)

7. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Май 2007 г.

Редактор М. II. Максимова Технический редактор В.И. Прусакова Корректор В.Е. Нестерова Компьютерная верстка И.Л. Налсыкикоа

Слано и набор 05.06.2007. Подписано п печать 25.06.2007. Формат 60 * S4 У*. Бумага офсетная. Гарнитура Таймс. Печать офсетная. Уел. яеч. л. 0,93. Уч.-изд. я. 0.80. Тираж 61 «г Ззк. 510.

ФГУП .СТАНДАРТНЫФОРМ». 123995 Москва. Гранатный пер.. 4. www.goxlinfo.ru mfo&gott info.ru Набрано по ФГУП «СТАНДАРТЫ НФОРМ» на ПЭВМ Отпечатано п филиале ФГУП «СТАНДАРТЫНФОРМ• — тип. «Москопский печатник*. 105062 Москва, Лялин пер., 6